ÑÏÅÖÈÔÈ×ÍÛÅ È ÍÅÑÏÅÖÈÔÈ×ÍÛÅ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈß ÀÍÒÈÒÅË È ÈÌÌÓÍÎÃËÎÁÓËÈÍÎÂ Ñ ÀÍÒÈÃÅÍÀÌÈ

ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
ÓÄÊ 577.27
ÑÏÅÖÈÔÈ×ÍÛÅ È ÍÅÑÏÅÖÈÔÈ×ÍÛÅ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈß
ÀÍÒÈÒÅË È ÈÌÌÓÍÎÃËÎÁÓËÈÍÎÂ Ñ ÀÍÒÈÃÅÍÀÌÈ
È ÑÏÎÑÎÁÛ ÀÍÀËÈÇÀ ÝÒÈÕ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈÉ
Ñ. À. ÁÎÁÐÎÂÍÈÊ
Èíñòèòóò áèîõèìèè èì. À. Â. Ïàëëàäèíà ÍÀÍ Óêðàèíû, Êèåâ;
e-mail: [email protected]
Ðîçãëÿíóòî ïðîáëåìó ñïåöèô³÷íî¿ òà íåñïåöèô³÷íî¿ âçàºìî䳿 ñèðîâàòêîâèõ ³ìóíîãëîáóë³í³â òà
àíòèò³ë ç àíòèãåíàìè. Ïîêàçàíî, ùî âèñîêà ÷óòëèâ³ñòü ìåòîä³â, ùî âèêîðèñòîâóþòüñÿ äëÿ âèâ÷åííÿ
âçàºìî䳿 àíòèãåí–àíòèò³ëî, äîçâîëÿº ñïîñòåð³ãàòè íèçüêîàô³ííó íåñïåöèô³÷íó âçàºìîä³þ ³ìóíîãëîáóë³í³â ç àíòèãåíàìè.  òîìó âèïàäêó, ÿêùî êîíöåíòðàö³ÿ ñïåöèô³÷íèõ àíòèò³ë ó äîñë³äæóâàíèõ çðàçêàõ
º íåçíà÷íîþ, íåñïåöèô³÷íà âçàºìîä³ÿ ³ìóíîãëîáóë³í³â ç àíòèãåíàìè ìîæå çíà÷íî ïåðåâèùóâàòè ñïåöèô³÷íó ðåàêö³þ çà ³íòåíñèâí³ñòþ ³, ÿê íàñë³äîê, îäåðæàí³ ðåçóëüòàòè ìîæóòü áóòè íåâ³ðíî ³íòåðïðåòîâàí³.
Ó çâ’ÿçêó ç öèì ðîáèòüñÿ âèñíîâîê ïðî íåîáõ³äí³ñòü áðàòè äî óâàãè ìîæëèâ³ñòü íåñïåöèô³÷íî¿ âçàºìî䳿
³ìóíîãëîáóë³í³â ç àíòèãåíàìè òà íåîáõ³äí³ñòü ðîçðîáêè ìåòîä³â, ùî äîçâîëÿþòü â³äð³çíÿòè ñïåöèô³÷íó
òà íåñïåöèô³÷íó âçàºìîä³þ.
Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: âçàºìîä³ÿ àíòèãåí–àíòèò³ëî, ïîë³ðåàêòèâí³ñòü, ñïåöèô³÷í³ñòü, àô³íí³ñòü,
ELISA.
Í
åîáõîäèìîñòü âûÿâëåíèÿ íåçíà÷èòåëüíûõ
êîëè÷åñòâ àíòèòåë â ñûâîðîòêå èëè äðóãèõ áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ ñòèìóëèðóåò ïðèìåíåíèå äëÿ ýòèõ öåëåé ìåòîäîâ, îáëàäàþùèõ âûñîêîé ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ, òàêèõ êàê
ðàäèîèììóíîàíàëèç èëè èììóíîôåðìåíòíûå ìåòîäû, â ÷àñòíîñòè ELISA. Èñïîëüçîâàíèå ïîäîáíûõ ìåòîäîâ ïîçâîëÿåò îáíàðóæèòü íå òîëüêî
ìèêðîêîëè÷åñòâà àíòèòåë, íî è âûÿâèòü íèçêîàôôèííûå íåñïåöèôè÷íûå âçàèìîäåéñòâèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ ðàçíîîáðàçíûìè àíòèãåíàìè,
êîòîðûå íåâîçìîæíî áûëî îáíàðóæèòü ïðè ïîìîùè òàêèõ íèçêî÷óâñòâèòåëüíûõ ìåòîäîâ, êàê
àããëþòèíàöèÿ, ïðåöèïèòàöèÿ è äð. Âûñîêî÷óâñòâèòåëüíûå ìåòîäû, íåñîìíåííî, ïîçâîëÿþò çíà÷èòåëüíî ðàñøèðèòü äèàïàçîí èññëåäîâàíèé èììóíîõèìè÷åñêèõ ðåàêöèé. Âìåñòå ñ òåì, âûÿâëÿåìûå ïðè ïîìîùè ïîäîáíûõ ìåòîäîâ îòíîñèòåëüíî “ñëàáûå” âçàèìîäåéñòâèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ
ñ àíòèãåíàìè ñòàâÿò âîïðîñ î âçàèìîñâÿçè ýòèõ
ñëàáûõ âçàèìîäåéñòâèé ñ êëàññè÷åñêèìè, âûñîêîñïåöèôè÷íûìè ðåàêöèÿìè àíòèãåí–àíòèòåëî.
Îñîáåííî âàæíî óìåòü ðàçëè÷àòü âûñîêîàôôèííîå ñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå àíòèòåë
è íèçêîàôôèííîå íåñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå
èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè â ñëó÷àå ðàáîòû ñ ñûâîðîòêàìè æèâîòíûõ èëè ÷åëîâåêà. Äåëî
â òîì, ÷òî ñûâîðîòêè ñîäåðæàò îãðîìíîå êîëè÷åñòâî ðàçíîîáðàçíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ, â òîì
÷èñëå è òåõ, êîòîðûå ñïîñîáíû ñâÿçûâàòüñÿ íåñïåöèôè÷íî ñ ðàçíûìè àíòèãåíàìè. Ïîñêîëüêó
êîëè÷åñòâî ïîäîáíûõ, òàê íàçûâàåìûõ ïîëèðåàê-
òèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ [1–4] â èññëåäóåìîì
îáðàçöå ñûâîðîòêè ìîæåò çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàòü
êîíöåíòðàöèþ ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë, òî ïîëó÷àåìûé ñóììàðíûé ðåçóëüòàò ñïåöèôè÷íîãî è íåñïåöèôè÷íîãî âçàèìîäåéñòâèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè èíîãäà äîâîëüíî ñëîæíî èíòåðïðåòèðîâàòü.  ñâÿçè ñ ýòèì âîçíèêàåò ïðîáëåìà îòûñêàíèÿ ñïîñîáîâ ðàçëè÷èÿ ìåæäó âûñîêîñïåöèôè÷íûì è íèçêîñïåöèôè÷íûì âçàèìîäåéñòâèåì èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè.
 íàñòîÿùåé ñòàòüå ìû ðàññìàòðèâàåì èìåþùèåñÿ âîçìîæíîñòè, ïîçâîëÿþùèå äèôôåðåíöèðîâàòü ñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå êëàññè÷åñêèõ àíòèòåë ñ àíòèãåíîì, è íåñïåöèôè÷íîå,
òàê íàçûâàåìîå ïîëèðåàêòèâíîå âçàèìîäåéñòâèå
ñ àíòèãåíîì ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ.
Ðàññìàòðèâàþòñÿ òàêæå âîçìîæíîñòè áëîêèðîâàíèÿ ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ, ÷òî ïîçâîëÿåò àíàëèçèðîâàòü ðåàêòèâíîñòü ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë, íàõîäÿùèõñÿ â èññëåäóåìîé ñûâîðîòêå.
132
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
 ðàáîòå èñïîëüçîâàëè â êà÷åñòâå àíòèãåíîâ
àëüáóìèí êóðèíûõ ÿèö (îâàëüáóìèí), áû÷èé
ñûâîðîòî÷íûé àëüáóìèí (ÁÑÀ) èëè ìèîãëîáèí
ñåðäöà ëîøàäè («Sigma», ÑØA). Àíòèãåíû èììîáèëèçîâàëè íà 96-ëóíî÷íûõ ïëîñêîäîííûõ ïëàòàõ äëÿ èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà äâóìÿ ñïîñîáàìè.  ïåðâîì ñëó÷àå èñïîëüçîâàëè îáùåïðèíÿòûé ìåòîä èíêóáàöèè ðàñòâîðà àíòèãåíà (20–
30 ìêã/ìë) â ôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 8,5–9,0) â
Ñ. À. ÁÎÁÐÎÂÍÈÊ
òå÷åíèå 2 ÷àñ ïðè 37 °Ñ èëè 18–20 ÷àñ ïðè 4 °Ñ.
Âî âòîðîì ñëó÷àå àíòèãåíû èììîáèëèçîâàëè íà
ïëàòàõ ñ ïîìîùüþ ðàçðàáîòàííîãî íàìè ðàíåå
ìåòîäà âûñóøèâàíèÿ ðàñòâîðà àíòèãåíà (1–2 ìêã/ìë)
â 1,5%-ì ðàñòâîðå NH4HCO3 ïðè 37 °Ñ [5]. Íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì ïëàòû ñ
èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè òùàòåëüíî ïðîìûâàëè âíà÷àëå ïðîòî÷íîé, à çàòåì äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé.
Ìûøåé ëèíèè ÑÂÀ ïåðâîíà÷àëüíî èììóíèçèðîâàëè âíóòðèâåííî 0,1 ìë ðàñòâîðà îâàëüáóìèíà (10 ìã/ìë â ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå
NaCl), çàòåì, ñïóñòÿ òðè è øåñòü íåäåëü, ïîâòîðíî èììóíèçèðîâàëè ïîëîâèííîé äîçîé óêàçàííîãî àíòèãåíà. ×åðåç 10 ñóòîê ïîñëå òðåòüåé èììóíèçàöèè ìûøåé çàáèâàëè äèñëîêàöèåé øåéíûõ ïîçâîíêîâ, ñûâîðîòêó ñîáèðàëè è õðàíèëè
çàìîðîæåííîé ïðè –20 °Ñ âïëîòü äî èñïîëüçîâàíèÿ. Êðîâü ëþäåé ïîëó÷àëè èç ëîêòåâîé âåíû
ó äîáðîâîëüöåâ, íå èìåþùèõ âèäèìûõ çàáîëåâàíèé, çàòåì äåôèáðèëëèðîâàëè è ïîëó÷åííûå ñûâîðîòêè õðàíèëè çàìîðîæåííûìè.
×òîáû îïðåäåëèòü ðåàêòèâíîñòü ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ â èññëåäóåìûõ îáðàçöàõ ñûâîðîòîê, èñïîëüçîâàëè ñòàíäàðòíûé èììóíîôåðìåíòíûé ìåòîä ELISA. Èññëåäóåìûå îáðàçöû èíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 1 ÷ ïðè 37 °Ñ â
ëóíêàõ ïëàò ñ ñîðáèðîâàííûì îïðåäåëåííûì àíòèãåíîì. Àíòèòåëà èëè ïîëèðåàêòèâíûå èììóíîãëîáóëèíû, ñâÿçàííûå ñ èììîáèëèçîâàííûìè
íà ïëàøêå àíòèãåíàìè, âûÿâëÿëè ñ ïîìîùüþ
êîçüèõ àíòèòåë ê IgG ìûøè, ìå÷åííûõ ïåðîêñèäàçîé õðåíà («Sigma», ÑØÀ).  êà÷åñòâå ñóáñòðàòà
ïåðîêñèäàçû èñïîëüçîâàëè ñìåñü îðòîôåíèëåíäèàìèíà ñ 0,03% Í2Î2. Ðàçâèòèå öâåòíîé ðåàêöèè îñòàíàâëèâàëè äîáàâëåíèåì 8,0 Ì Í2SO4,
ïîñëå ÷åãî èíòåíñèâíîñòü îêðàñêè ëóíîê ïëàò
èçìåðÿëè íà ìèêðîôîòîêîëîðèìåòðå ïðè äëèíå
âîëíû 490 íì.
BrCN-àêòèâèðîâàííóþ ñåôàðîçó 4Â («Sigma»,
ÑØÀ) êîâàëåíòíî ñâÿçûâàëè ñ ìèîãëîáèíîì
ñåðäöà ëîøàäè, êàê îïèñàíî â ðóêîâîäñòâå ïî
èñïîëüçîâàíèþ ñåôàðîçû, è äàííûé ñîðáåíò, ïîìåùåííûé â ïëàñòèêîâóþ êîëîíêó (äèàìåòð 1 ñì,
âûñîòà 1 ñì), èñïîëüçîâàëè äëÿ èñòîùåíèÿ ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ñûâîðîòêè
ìûøåé, ïðåäâàðèòåëüíî ðàçâåäåííîé â ôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 7,2) ñ äîáàâëåíèåì 0,01% òâèíà 20.
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Íà ðèñ. 1 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ ïðè ïîìîùè ELISA ñïîñîáíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ èíòàêòíîé ñûâîðîòêè ìûøè è ÷åëîâåêà ñâÿçûâàòüñÿ ñ îâàëüáóìèíîì, èììîáèëèçîâàííûì íà ïëàòàõ äëÿ èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà. ×àñòü ýòîé ðåàêòèâíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ ñâÿçàíà ñ íàëè÷èåì â ñûâîðîòêå òàê íàçûâàåìûõ íîðìàëüíûõ àíòèòåë, ñïåöèôè÷íûõ ê äàííîìó àíòèãåíó. Èíàÿ ÷àñòü ðåàêòèâíîñòè ÿâëÿåòñÿ íåñïåöèôè÷íîé è îáóñëîâëåíà ñïîñîáíîñòüþ
èììóíîãëîáóëèíîâ ñâÿçûâàòüñÿ ñ ðàçëè÷íûìè
àíòèãåíàìè, â òîì ÷èñëå è ñ àóòîàíòèãåíàìè.
Ñõîäíûå ðåçóëüòàòû ïîëó÷àþòñÿ è â òîì ñëó÷àå,
åñëè âìåñòî îâàëüáóìèíà èñïîëüçóþòñÿ èíûå àíòèãåíû.
Ðàíåå íàìè áûëî ïîêàçàíî [6, 7], ÷òî íåñïåöèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü ñûâîðîòîê â îòíîøåíèè ðàçíîîáðàçíûõ àíòèãåíîâ ìîæíî ïîâûñèòü,
åñëè ýêñïåðèìåíòàëüíûì æèâîòíûì ââåñòè âíóòðèâåííî ñìåñü FeSO4-ÝÄÒÀ (êîíöåíòðàöèÿ
60 ìÌ è 30 ìÌ ñîîòâåòñòâåííî). Îäíàêî íåñïå-
Á
A490
A490
À
Ðèñ. 1. Ðåàêòèâíîñòü ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G ÷åëîâåêà (À) è ìûøè (Á) äî è ïîñëå
èíêóáàöèè ñûâîðîòîê ïðè ðÍ 3,0 â òå÷åíèå 5 ìèí ïðè 25 °Ñ: – ðÍ 3,0;
– êîíòðîëü.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
133
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
öèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ â îòíîøåíèè ðàçíîîáðàçíûõ àíòèãåíîâ ìîæíî ïîâûñèòü íàìíîãî áîëüøå, åñëè
âîçäåéñòâèå íà èììóíîãëîáóëèíû ðàçëè÷íûìè ðåàãåíòàìè, â òîì ÷èñëå è ñìåñüþ FeSO4-ÝÄÒÀ,
ïðîâåñòè íå in vivo, à in vitro. Òàêîå æå ïîâûøåíèå íåñïåöèôè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ ìîæíî èíäóöèðîâàòü ñ ïîìîùüþ îáðàáîòêè èììóíîãëîáóëèíîâ âûñîêîé êîíöåíòðàöèåé
õàîòðîïíûõ èîíîâ, èíêóáàöèåé èììóíîãëîáóëèíîâ ïðè íèçêèõ èëè âûñîêèõ çíà÷åíèÿõ ðÍ è
íåêîòîðûìè äðóãèìè ñïîñîáàìè.
Íà ðèñ. 1 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû òèòðîâàíèÿ ñûâîðîòîê äî è ïîñëå èíêóáàöèè èõ ïðè
ðÍ 3,0 â òå÷åíèå 5 ìèí ïðè 25 °Ñ. Ïîêàçàíî, ÷òî
èíêóáàöèÿ ñûâîðîòêè ïðè ðÍ 3,0 ïðèâîäèò ê ñóùåñòâåííîìó óâåëè÷åíèþ íåñïåöèôè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ. Åùå
áóëüøåå óñèëåíèå íåñïåöèôè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ âûçûâàåò
èíêóáàöèÿ ñûâîðîòêè ñ KSCN (ïðè êîíöåíòðàöèÿõ
ñîëè 3,0–4,0 Ì).
Êàê èçâåñòíî, äëÿ àôôèííîé î÷èñòêè àíòèòåë, ñâÿçàâøèõñÿ ñ èììîáèëèçîâàííûì íà êîëîíêå àíòèãåíîì, ÷àùå âñåãî èñïîëüçóþò îáðàáîòêó êîëîíîê áóôåðàìè ñ íèçêèì ðÍ èëè ñîëÿìè, îáðàçóþùèìè õàîòðîïíûå èîíû SCN—. Ñëåäîâàòåëüíî, ñòàíîâèòñÿ î÷åâèäíûì, ÷òî èçâåñòíûå ìåòîäû àôôèííîé î÷èñòêè àíòèòåë, ïðåäïîëàãàþùèå ïðèìåíåíèå ýêñòðåìàëüíûõ çíà÷åíèé
ðÍ èëè õàîòðîïíûõ èîíîâ, íåèçáåæíî ïðèâîäÿò
ê óñèëåíèþ ïîëèðåàêòèâíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ.
Ïðèìåðîì òàêîãî óñèëåíèÿ àêòèâíîñòè ìî-
2,02
À
æåò áûòü àôôèííîå âûäåëåíèå èììóíîãëîáóëèíîâ íà êîëîíêå ñ èììîáèëèçîâàííûì íà ñåôàðîçå ïðîòåèíîì À èëè G. Íà ðèñ. 2 ïðåäñòàâëåíû
ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ ñïîñîáíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ ñûâîðîòêè èíòàêòíûõ ìûøåé âçàèìîäåéñòâîâàòü ñ èììîáèëèçîâàííûì îâàëüáóìèíîì
äî è ïîñëå î÷èñòêè íà ïðîòåèí-À-êîëîíêå. Âûÿâëåíî, ÷òî èììóíîãëîáóëèíû ñûâîðîòêè ìûøåé,
ýëþèðîâàííûå ñ êîëîíêè áóôåðîì ïðè ðÍ 2,95,
îáëàäàþò çíà÷èòåëüíî áîëüøåé ñïîñîáíîñòüþ
ñâÿçûâàòüñÿ ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè,
÷åì èììóíîãëîáóëèíû èñõîäíîé ñûâîðîòêè. Ïðè
ýòîì ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî êîíöåíòðàöèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ â îáðàçöå, ýëþèðîâàííîì ñ êîëîíêè,
áûëà ïðèìåðíî â òðè ðàçà íèæå, ÷åì â èñõîäíîé
ñûâîðîòêå. Òàêèì îáðàçîì, óäåëüíàÿ ðåàêòèâíîñòü
î÷èùåííûõ íà ïðîòåèí-À-êîëîíêå èììóíîãëîáóëèíîâ áîëåå ÷åì â äåñÿòü ðàç ïðåâûøàåò ïîëèðåàêòèâíûå ñâîéñòâà èììóíîãëîáóëèíîâ èíòàêòíîé ñûâîðîòêè. Àíàëîãè÷íûå ðåçóëüòàòû áûëè
ïîëó÷åíû è ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðîòåèí-G-êîëîíêè.
Î÷åâèäíî, ÷òî ïîñêîëüêó äëÿ àôôèííîé
î÷èñòêè àíòèòåë èñïîëüçóþò îáû÷íî áîëåå æåñòêóþ îáðàáîòêó ñâÿçàâøèõñÿ ñ êîëîíêîé àíòèòåë,
÷åì âîçäåéñòâèå áóôåðà ñ ðÍ 2,95 (íàïðèìåð àíòèòåëà ñ êîëîíîê ÷àñòî ýëþèðóþò ïðè ðÍ 2,20–
2,80), òî ÷àñòü ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ â ïðåïàðàòàõ î÷èùåííûõ àíòèòåë ìîæåò áûòü
âåñüìà ñóùåñòâåííîé.  òîì ñëó÷àå, êîãäà ñïåöèôè÷íîñòü ïîëó÷åííîãî ïðåïàðàòà àíòèòåë ÿâëÿåòñÿ âàæíîé äëÿ èõ ïðèìåíåíèÿ â äàëüíåéøåé
ðàáîòå èëè íóæíî õàðàêòåðèçîâàòü ïóë ïîëó÷åííûõ ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë, íåîáõîäèìî íàéòè êàê
Á
2,5
Сыворот ка
Сыворот ка
Очищенные Igs
Очищенные Igs
2,0
A 490
A 490
1,5
1,0
1,5
1,0
0,5
0
0,0
0,0
0,5
0,0
0,25
0,5
Ðàçâåäåíèå (×100)
0,75
1,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×100)
Ðèñ. 2. Ðåçóëüòàòû òèòðîâàíèÿ ìåòîäîì ELISA èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G ñûâîðîòêè ÷åëîâåêà (À) è
ñûâîðîòêè èíòàêòíûõ ìûøåé (Á) äî è ïîñëå èõ î÷èñòêè íà ïðîòåèí-À-êîëîíêå.  êà÷åñòâå àíòèãåíà
èñïîëüçîâàëè îâàëüáóìèí, èììîáèëèçîâàííûé íà ïëàòàõ ìåòîäîì âûñóøèâàíèÿ:
– ñûâîðîòêà, –
î÷èùåííûå IgG.
134
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
Ñ. À. ÁÎÁÐÎÂÍÈÊ
Àêòèâíîñòü ñâÿçûâàíèÿ, %
120
100
80
Иммунноглобулины
60
Антитела
40
20
0
0,0
0,0004
0,002
0,01
0,05
0,25
Êîíöåíòðàöèÿ òâèí 20, %
Ðèñ. 3. Âëèÿíèå êîíöåíòðàöèè òâèí 20 â ôîñôàòíîì áóôåðå, ðÍ 7,2, íà ñâÿçûâàíèå ñïåöèôè÷íûõ
àíòèòåë èëè íåñïåöèôè÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ
èììîáèëèçîâàííûì íà ïëàòàõ îâàëüáóìèíîì: –
èììóíîãëîáóëèíû, – àíòèòåëà.
ñïîñîá îöåíêè ðåàêòèâíîñòè ïðèìåñè ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ, òàê è ñïîñîáû èõ óäàëåíèÿ èëè áëîêèðîâàíèÿ.
Ðàíåå íàìè áûëî ïîêàçàíî [8, 9], ÷òî ïîëèðåàêòèâíûå èììóíîãëîáóëèíû íåñïåöèôè÷åñêè
ñâÿçûâàþòñÿ ñ àíòèãåíàìè âî ìíîãîì áëàãîäàðÿ
îáîþäíîìó ãèäðîôîáíîìó âçàèìîäåéñòâèþ. Ïîýòîìó ìîæíî îæèäàòü, ÷òî ðàçëè÷íûå äåéñòâèÿ,
íàïðàâëåííûå íà îñëàáëåíèå èëè áëîêèðîâàíèå
ãèäðîôîáíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ ìàêðîìîëåêóë ïðèâåäóò, ñëåäîâàòåëüíî, è ê îñëàáëåíèþ âçàèìîäåéñòâèÿ ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ
àíòèãåíàìè. Îäíèì èç ýôôåêòèâíûõ ñïîñîáîâ
ïîäàâëåíèÿ ãèäðîôîáíîãî âçàèìîäåéñòâèÿ ÿâëÿåòñÿ ïðîâåäåíèå ðåàêöèè â ïðèñóòñòâèè ïîâåðõ-
íîñòíî àêòèâíûõ âåùåñòâ, íàïðèìåð òâèíà 20. Â
ñâÿçè ñ ýòèì ìû èññëåäîâàëè âëèÿíèå ðàçëè÷íûõ êîíöåíòðàöèé òâèíà 20 íà íåñïåöèôè÷íîå
ñâÿçûâàíèå èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè, èììîáèëèçîâàííûìè íà ïëàòàõ ìåòîäîì âûñóøèâàíèÿ.
Íà ðèñ. 3 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ çàâèñèìîñòè âçàèìîäåéñòâèÿ ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë èëè ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ îâàëüáóìèíîì, âûñóøåííûì íà ïëàòàõ,
îò êîíöåíòðàöèè òâèíà 20 â èññëåäóåìîì ðàñòâîðå àíòèòåë èëè èììóíîãëîáóëèíîâ. Ïîêàçàíî, ÷òî
òâèí 20 äåéñòâèòåëüíî ýôôåêòèâíî ïîäàâëÿåò
íåñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå èììóíîãëîáóëèíîâ è èììîáèëèçîâàííîãî àíòèãåíà, òîãäà êàê
ïðàêòè÷åñêè íå âëèÿåò íà âçàèìîäåéñòâèå ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ñ àíòèãåíîì. Òàêèì îáðàçîì,
òâèí 20 ÿâëÿåòñÿ ðåàãåíòîì, êîòîðûé ìîæåò ñïîñîáñòâîâàòü ïîäàâëåíèþ íåñïåöèôè÷íîãî ñâÿçûâàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè è, ñëåäîâàòåëüíî, âûÿâëåíèþ ðàçëè÷èé ìåæäó ñïåöèôè÷íûì è íåñïåöèôè÷íûì âçàèìîäåéñòâèåì àíòèòåë è èììóíîãëîáóëèíîâ ñ àíòèãåíàìè.
Ïîñêîëüêó ñòåïåíü ãèäðîôîáíîñòè èììîáèëèçîâàííîãî íà ïëàòàõ àíòèãåíà çàâèñèò îò ìåòîäà èììîáèëèçàöèè, òî ïðåäñòàâëÿëîñü öåëåñîîáðàçíûì èññëåäîâàòü âîïðîñ î òîì, êàê ñïîñîá
èììîáèëèçàöèè àíòèãåíà âëèÿåò íà íåñïåöèôè÷íîå ñâÿçûâàíèå èììóíîãëîáóëèíîâ. Íàìè áûëî
óñòàíîâëåíî, ÷òî ìåòîä âûñóøèâàíèÿ àíòèãåíà
íà ïëàòàõ ïðèâîäèò ê çíà÷èòåëüíî áîëåå ñèëüíîìó íåñïåöèôè÷íîìó ñâÿçûâàíèþ èììóíîãëîáóëèíîâ, ÷åì ïðè ñîðáöèè àíòèãåíà èç ðàñòâîðà
(ðèñ. 4). Îñîáåííî ñèëüíî ñ âûñóøåííûì íà ïëàòàõ àíòèãåíîì ñâÿçûâàëèñü èììóíîãëîáóëèíû
ñûâîðîòêè ìûøè, àôôèííî î÷èùåííûå íà ïðîòåèí-À-êîëîíêå.
2,5
À
0,5
Á
À 490
Сыворотка
2,0
0,3
1,5
À 490
0,4
Иммуноглобулины
1,0
0,2
Сыворотка
0,5
Иммуноглобулины
0,1
0,0
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×50)
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×50)
Ðèñ. 4. Çàâèñèìîñòü íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâÿçûâàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G ñûâîðîòêè ìûøè ñ îâàëüáóìèíîì, èììîáèëèçîâàííûì íà ïëàòàõ è ïðè ïîìîùè ñîðáöèè èç ðàñòâîðà (À), è ìåòîäîì âûñóøèâàíèÿ
(Á): – ñûâîðîòêà,
– èììóíîãëîáóëèíû.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
135
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
À
0,6
0,8
Конт роль
0,5
0,7
Желат ин
Á
0,9
0,4
À 490
À 490
0,6
0,5
0,3
0,4
0,2
0,3
0,2
0,1
Конт роль
0,1
Ж елат ин
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
0,0
0,0
1,0
0,25
0,5
2,0
Â
0,8
Конт роль
0,7
Желат ин
Ã
1,5
0,6
0,5
À 490
À 490
1,0
Ðàçâåäåíèå (×400)
Ðàçâåäåíèå (×50)
0,9
0,75
0,4
1,0
0,3
Контроль
0,5
0,2
Желат ин
0,1
0,0
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×50)
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×400)
Ðèñ. 5. Âëèÿíèå îáðàáîòêè 1%-ì ðàñòâîðîì æåëàòèíû ïëàò ñ ñîðáèðîâàííûì èç ðàñòâîðà îâàëüáóìèíîì
(À) è (Á) èëè îâàëüáóìèíîì, èììîáèëèçîâàííûì ìåòîäîì âûñóøèâàíèÿ (Â) è (Ã), íà ñïîñîáíîñòü äàííîãî
àíòèãåíà íåñïåöèôè÷åñêè ñâÿçûâàòü èììóíîãëîáóëèíû èíòàêòíîé ñûâîðîòêè ìûøè (À) è (Â) èëè òå æå
èììóíîãëîáëèíû, ïðåäâàðèòåëüíî î÷èùåííûå íà ïðîòåèí-À-êîëîíêå (Á) è (Ã): – êîíòðîëü, – æåëàòèí.
Ñëåäîâàòåëüíî, â òîì ñëó÷àå, åñëè íåîáõîäèìî îïðåäåëÿòü àêòèâíîñòü ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë â èññëåäóåìîì îáðàçöå, èììîáèëèçàöèþ àíòèãåíà ñëåäóåò ïðîâîäèòü ïðè ïîìîùè ñîðáöèè
èç ðàñòâîðà, à ñàìó ðåàêöèþ âçàèìîäåéñòâèÿ àíòèòåë ñ àíòèãåíîì – â ïðèñóòñòâèè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèé òâèíà 20. È, íàîáîðîò, åñëè íåîáõîäèìî ñäåëàòü âûâîä î íàëè÷èè ïîëèðåàêòèâíûõ
èììóíîãëîáóëèíîâ â èññëåäóåìîì îáðàçöå, àíòèãåí ñëåäóåò èììîáèëèçîâàòü ïðè ïîìîùè âûñóøèâàíèÿ, à ðåàêöèþ ïðîâîäèòü ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ òâèíà 20.
Èçâåñòíî, ÷òî ãèäðîôîáíûå ó÷àñòêè íà èììóíîëîãè÷åñêèõ ïëàòàõ, à, âîçìîæíî, è íà èì-
ìîáèëèçîâàííûõ ìàêðîìîëåêóëàõ ìîæíî äî íåêîòîðîé ñòåïåíè áëîêèðîâàòü ïðè ïîìîùè ðàñòâîðà æåëàòèíû. Â ñâÿçè ñ ýòèì ìû èññëåäîâàëè âëèÿíèå îáðàáîòêè ïëàò ñ èììîáèëèçîâàííûì àíòèãåíîì ðàñòâîðîì æåëàòèíû íà èõ ñïîñîáíîñòü ñâÿçûâàòü ïîëèðåàêòèâíûå èììóíîãëîáóëèíû. Áûëî óñòàíîâëåíî (ðèñ. 5), ÷òî îáðàáîòêà ïëàò ñ èììîáèëèçîâàííûì àíòèãåíîì 1%-ì
ðàñòâîðîì æåëàòèíû (1 ÷ ïðè 25 °Ñ) íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì ïëàò, ïðèâîäèò ê
ñíèæåíèþ íåñïåöèôè÷íîãî ñâÿçûâàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ íåçàâèñèìî îò ñïîñîáà èììîáèëèçàöèè àíòèãåíà.
È, íàêîíåö, êàê áûëî ïîêàçàíî ðàíåå [4, 10],
136
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
Ñ. À. ÁÎÁÐÎÂÍÈÊ
íåñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå èììóíîãëîáóëèíîâ ñ èììîáèëèçîâàííûì àíòèãåíîì ìîæåò áûòü
â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè ñíèæåíî, åñëè â ðàñòâîð
èññëåäóåìûõ èììóíîãëîáóëèíîâ äîáàâèòü âûñîêóþ êîíöåíòðàöèþ ñåðîëîãè÷åñêè íåðîäñòâåííîãî
àíòèãåíà, à òàêæå ïðîâîäèòü ðåàêöèþ ïðè íèçêèõ çíà÷åíèÿõ òåìïåðàòóðû (0–4 °Ñ). Íåðîäñòâåííûé àíòèãåí äëÿ áëîêèðîâàíèÿ ïîëèðåàêòèâíûõ
èììóíîãëîáóëèíîâ ìîæíî èñïîëüçîâàòü ïî òîé
ïðè÷èíå, ÷òî îí íå ñïîñîáåí çàáëîêèðîâàòü ñïåöèôè÷íûå àíòèòåëà, íî â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè
ñíèçèò íåñïåöèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü èììóíîãëîáóëèíîâ.
Âàæíûì ìîìåíòîì âñåõ îïèñàííûõ âûøå
äåéñòâèé, íàïðàâëåííûõ íà ïîäàâëåíèå íåñïåöèôè÷íîãî ñâÿçûâàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ àíòèãåíàìè, ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìîñòü òîãî, ÷òîáû ýòè
äåéñòâèÿ íå ïðèâåëè ê ñóùåñòâåííîìó ñíèæåíèþ ðåàêòèâíîñòè ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë. Òàêèì
òðåáîâàíèÿì îòâå÷àþò îïèñàííûå âûøå ïîäõîäû, íàïðàâëåííûå íà áëîêèðîâàíèå íåñïåöèôè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè èììóíîãëîáóëèíîâ, ïîñêîëüêó îíè ìàëî âëèÿþò íà ñïåöèôè÷íîå âçàèìîäåéñòâèå àíòèòåë è àíòèãåíà (ðèñ. 6, À è Á).  òî æå
âðåìÿ îæèäàåìûé íàìè ýôôåêò áëîêèðîâàíèÿ
ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ñ ïîìîùüþ
1%-ãî ðàñòâîðà æåëàòèíû, íàõîäÿùåéñÿ â èñïûòóåìîì îáðàçöå àíòèòåë, îêàçûâàåò ñóùåñòâåííîå
ïîäàâëåíèå ðåàêòèâíîñòè íå òîëüêî ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ, íî è ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë (ðèñ. 6, Â). Åñëè ê 1%-ìó ðàñòâîðó æåëàòèíû äîáàâèòü ðàñòâîð ïîðîøêà îáåçæèðåííîãî
ìîëîêà (êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ 5%), òî ñóïðåññèÿ ñâÿçûâàíèÿ ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë óâåëè÷èâàåòñÿ åùå áîëüøå. Ñëåäîâàòåëüíî, 1%-é ðàñòâîð
æåëàòèíû ìîæíî èñïîëüçîâàòü äëÿ ïðåäâàðèòåëüíîé îáðàáîòêè ïëàò ñ èììîáèëèçîâàííûì àíòèãåíîì, íî íåæåëàòåëüíî èñïîëüçîâàòü äëÿ ïîäàâëåíèÿ ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ íåïîñðåäñòâåííî â èõ ñìåñè ñî ñïåöèôè÷íûìè àíòèòåëàìè.
Óñòðàíèòü çíà÷èòåëüíóþ ÷àñòü ïðèìåñè ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ èç îáðàçöà ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ìîæíî, î÷åâèäíî, ïðè ïîìîùè ñîðáöèè íà êîëîíêå ñ èììîáèëèçîâàííûì
àíòèãåíîì, ñ êîòîðûì äàííûå àíòèòåëà ñïåöèôè÷íî íå âçàèìîäåéñòâóþò. Òàê, íåñïåöèôè÷åñêàÿ ðåàêòèâíîñòü èììóíîãëîáóëèíîâ â àíòèñûâîðîòêå ìûøåé ê îâàëüáóìèíó çíà÷èòåëüíî ñíèæàëàñü ïîñëå ñîðáöèè äàííîé ñûâîðîòêè íà êîëîíêå ñ èììîáèëèçîâàííûì ìèîãëîáèíîì (ðèñ. 7)
èëè ÁÑÀ (äàííûå íå ïîêàçàíû). Ê ñîæàëåíèþ,
êàê âèäíî èç ðèñ. 7, ïðè ýòîì ïðîèñõîäèò òàêæå
ïîòåðÿ ÷àñòè ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ê îâàëüáóìèíó èç-çà òîãî, ÷òî îíè, ïî-âèäèìîìó, ìîãóò
íåñïåöèôè÷íî ñîðáèðîâàòüñÿ íà êîëîíêå.
Òàêèì îáðàçîì, ïðåäñòàâëåííûå â íàñòîÿùåé ðàáîòå äàííûå ïîêàçûâàþò, ÷òî íå òîëüêî
ñûâîðîòêè, íî è àôôèííî î÷èùåííûå àíòèòåëà
ìîãóò ñîäåðæàòü ïðèìåñü òàê íàçûâàåìûõ ïîëè-
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
137
2,0
À
Êîíòðîëü
Ко
нтроль
0,1%Т2
Ò20
0,1%
0
1,5
À 490
5% П
ÏÌ
5%
М
1,0
0,5
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
À 490
Ðàçâåäåíèå (×50)
2,0
Контроль
Êîíòðîëü
0,1%Т20
Ò20
0,1%
1,5
5%
5%ПМ
ÏÌ
Á
1,0
0,5
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×250000)
Â
1,4
Êîíòðîëü
Ко
нтроль
1,2
1%ЖеÆåëàòèí
1%
ла тин
1,0
1%Æ
1%
Ж +5 5%
%ПÏÌ
М
À 490
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×250000)
Ðèñ. 6. Âëèÿíèå 0,1%-ãî òâèíà 20 èëè 5%-ãî ïîðîøêà ìîëîêà (ÏÌ) íà ñâÿçûâàíèå ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ (À) è ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ñûâîðîòêè ìûøè (Á) ñ ñîðáèðîâàííûì íà ïëàòàõ îâàëüáóìèíîì, à òàêæå âëèÿíèå 1%-ãî ðàñòâîðà æåëàòèíû (Æ) èëè 1%-íîãî ðàñòâîðà æåëàòèíû + 5%-ãî ïîðîøêà ìîëîêà íà ñâÿçûâàíèå
ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ñ îâàëüáóìèíîì (Â).
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
2,0
Контроль
Истощенная
1,5
Контроль Á
Истощенная
1,5
1,0
A 490
A 490
2,0
À
0,5
1,0
0,5
0,0
0,0
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×500)
0,0
0,25
0,5
0,75
1,0
Ðàçâåäåíèå (×30000)
Ðèñ. 7. Ýôôåêò èñòîùåíèÿ àíòèñûâîðîòêè ìûøè ê îâàëüáóìèíó íà êîëîíêå ñ èììîáèëèçîâàííûì ìèîãëîáèíîì íà íåñïåöèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ (À) è ðåàêòèâíîñòü ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë (Á) ñ èììîáèëèçîâàííûì îâàëüáóìèíîì: – êîíòðîëü, – èñòîùåíèå.
ðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ, ñïîñîáíûõ íåñïåöèôè÷íî ñâÿçûâàòüñÿ ñ ðàçíîîáðàçíûìè àíòèãåíàìè. Î÷åâèäíî, ÷òî äëÿ òîãî, ÷òîáû àíàëèçèðîâàòü àôôèííîñòü ïîäîáíûõ îáðàçöîâ àíòèòåë èëè èçìåðÿòü êîíöåíòðàöèþ àíòèòåë â îáðàçöå è ïð., íåîáõîäèìî ó÷èòûâàòü, ÷òî ïðèìåñü
ïîëèðåàêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ ìîæåò ñóùåñòâåííûì îáðàçîì âëèÿòü íà ïîëó÷àåìûå ýêñïåðèìåíòàòîðîì îöåíêè.  òîì ñëó÷àå, åñëè åñòü
íåîáõîäèìîñòü àíàëèçèðîâàòü ïîëèðåàêòèâíûå
èììóíîãëîáóëèíû ñ ïîìîùüþ ELISA, òî, ñîãëàñíî ïðèâåäåííûì âûøå äàííûì, èììîáèëèçàöèþ
àíòèãåíà íà èììóíîëîãè÷åñêèõ ïëàòàõ æåëàòåëüíî âûïîëíÿòü ïðè ïîìîùè ìåòîäà âûñóøèâàíèÿ
[5]. Èììóíîôåðìåíòíûé àíàëèç ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë, íàõîäÿùèõñÿ â ñìåñè ñ ïîëèðåàêòèâíûìè
èììóíîãëîáóëèíàìè, æåëàòåëüíî îñóùåñòâëÿòü
ïðè ïîíèæåííûõ òåìïåðàòóðàõ â ïðèñóòñòâèè
âûñîêèõ êîíöåíòðàöèé êàê òâèíà 20, òàê è ñåðîëîãè÷åñêè íåðîäñòâåííûõ àíòèãåíîâ, êîòîðûå ìàëî
âëèÿþò íà âçàèìîäåéñòâèå ñïåöèôè÷íûõ àíòèòåë ñ àíòèãåíîì, íî â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè ïîäàâëÿþò íåñïåöèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü èììóíîãëîáóëèíîâ.
 çàêëþ÷åíèå ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî èñïîëüçîâàíèå ïðåäëîæåííûõ â äàííîé ñòàòüå ïîäõîäîâ
ïîçâîëÿåò äèôôåðåíöèðîâàííî îöåíèòü êàê ñïåöèôè÷åñêóþ àêòèâíîñòü àíòèòåë, òàê è íåñïåöèôè÷åñêóþ ðåàêòèâíîñòü èììóíîãëîáóëèíîâ ê ðàçíîîáðàçíûì àíòèãåíàì.
138
SPECIFIC AND NONSPECIFIC
INTERACTIONS OF ANTIBODIES
AND IMMUNOGLOBULINES
WITH ANTIGENS AND THE METHODS
OF ANALYSIS OF THESE
INTERACTIONS
S. A. Bobrovnik
Palladin Institute of Biochemistry, National Academy
of Sciences of Ukraine, Kyiv;
e-mail: [email protected]
Summary
The problem of specific and nonspecific interaction of serum immunoglobulins and antigens was
considered. It was shown that high-sensitive methods allow to reveal low-affinity non-specific interaction of immunoglobulins and antigens. If the concentration of the specific antibodies in a studied sample
of serum is low, the non-specific interaction of serum immunoglobulins may exceed substantially the
effect of specific reaction. In this case the obtained
results could be misinterpreted. In this connection
the conclusion has been done that in such a case it
is necessary to take into account the capability of
serum immunoglobulins to interact non-specifically
with antigens and to discriminate between specific
and non-specific interaction. The methods of the
diminishing the non-specific interaction are suggested.
K e y w o r d s: antigen–antibody interaction,
polyreactivity, specificity, affinity, ELISA.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
Ñ. À. ÁÎÁÐÎÂÍÈÊ
1. Avrameas S. // Immunol. Today. 1991. 12.
Ð. 154–159.
2. Bouvet J. P., Stahl D., Rose S. et al. // J.
Autoimmun. 2001. 16. P. 163–172.
3. Áîáðîâíèê Ñ. À., Ìàðèíåö À. Â. // Óêð. áèîõèì. æóðí. 1993. 65, ¹ 5. C. 21–26.
4. Bobrovnik S. A. // Comments Molec. & Cellular
Biophys. 1999. 9. P. 323–356.
5. Áîáðîâíèê Ñ. À., Ñòàðîäóá Í. Ô. // Èììóíîëîãèÿ. 1988. ¹ 5. C. 83–85.
6. Áîáðîâíèê Ñ. À. // Óêð. á³îõ³ì. æóðí. 1999.
71, ¹ 3. C. 129–135.
7. Áîáðîâíèê Ñ. À. // Òàì ñàìî. 2002. 74, ¹ 3.
C. 133–141.
8. Áîáðîâíèê Ñ. À. // Òàì ñàìî. 2001. 73, ¹ 2.
C. 116–122.
9. Áîáðîâíèê Ñ. À. // Òàì ñàìî. 2002. 74, ¹ 2.
Ñ. 26–33.
10. Áîáðîâíèê Ñ. À. // Òàì ñàìî. 1990. 62, ¹ 5.
Ñ. 86–89.
Ïîëó÷åíî 25.06.2004
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 5
139