роль no-синтазы в стимуляции опиатных рецепторов и

ÓÄÊ: 546.-21:591.461.1/.2:616-092.4
ÐÎËÜ NO-ÑÈÍÒÀÇÛ Â ÑÒÈÌÓËßÖÈÈ
ÎÏÈÀÒÍÛÕ ÐÅÖÅÏÒÎÐÎÂ È ÓÑÒÎÉ×ÈÂÎÑÒÈ ÏÎ×ÅÊ
Ê ÎÊÑÈÄÀÒÈÂÍÎÌÓ ÑÒÐÅÑÑÓ
Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ
Ëóãàíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò, Óêðàèíà;
e-mail: KVN@ñci.lg.ua
Áóëî âñòàíîâëåíî, ùî ââåäåííÿ â îðãàí³çì äàëàðã³íó äî ôîðìóâàííÿ ãîñòðîãî íèðêîâîãî äåô³öèòó
ïîïåðåäæຠ³íòåíñèô³êàö³þ ó íèðêîâ³é òêàíèí³ ïðîòåîë³çó, çá³ëüøåííÿ âì³ñòó NO2 òà NO3 ³ çíèæåííÿ
àêòèâíîñò³ ñóïåðîêñèääèñìóòàçè. Àíòèîêñèäàíòíèé åôåêò àãîí³ñòà îï³àòíèõ ðåöåïòîð³â ïîâí³ñòþ
ë³êâ³äóºòüñÿ çà ïîïåðåäíüî¿ ³í’ºêö³¿ ùóðàì àíòàãîí³ñòà – íàëîêñîíà. Ââåäåííÿ ¿ì ³íã³á³òîðà ³íäóöèáåëüíî¿ NO-ñèíòàçè òàêîæ óñóâຠïîâí³ñòþ ïîçèòèâíèé åôåêò ñòèìóëÿö³¿ îï³àòíèõ ðåöåïòîð³â. Òàêèì
÷èíîì, ñòèìóëÿö³ÿ îñòàíí³õ ï³äâèùóº òîëåðàíòí³ñòü íèðîê äî îêñèäàòèâíîãî ñòðåñó âíàñë³äîê àêòèâàö³¿ NO-ñèíòàçè òà ñóïåðîêñèääèñìóòàçè.
ñòðåñ.
Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: äàëàðã³í, ñóïåðîêñèääèñìóòàçà, ïðîòåîë³ç, NO-ñèíòàçà, îêèñëþâàëüíèé
Ï
îâðåæäàþùèå ôàêòîðû âûçûâàþò óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ â îðãàíèçìå àêòèâíûõ
ôîðì êèñëîðîäà, íàðóøåíèå ðàâíîâåñèÿ ñèñòåìû àíòèîêñèäàíòû–ïðîîêñèäàíòû è àêòèâàöèþ ñâîáîäíîðàäèêàëüíîãî îêèñëåíèÿ, âñëåäñòâèå ÷åãî ìîäèôèöèðóþòñÿ êàê îòäåëüíûå êîìïîíåíòû êëåòêè, òàê è íàäìîëåêóëÿðíûå êîìïëåêñû. Íà ñåãîäíÿ èìåþòñÿ ìíîãî÷èñëåííûå ïóáëèêàöèè ïî èçó÷åíèþ ìåõàíèçìîâ ïåðîêñèäíîãî
îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ êëåòî÷íûõ ìåìáðàí â íîðìå
è ïðè ïàòîëîãèè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî àêòèâíûå
ôîðìû êèñëîðîäà ïðåæäå âñåãî îáóñëîâëèâàþò
îêñèäàòèâíóþ äåñòðóêöèþ áåëêîâ [1], ÷òî ìîæåò
íåïîñðåäñòâåííî ïðèâåñòè ê èõ ôðàãìåíòàöèè èëè
äåíàòóðàöèè. Ôðàãìåíòèðîâàííûå è äåíàòóðèðîâàííûå áåëêè ÿâëÿþòñÿ ñóáñòðàòàìè äëÿ âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîòåàç [2]. Ïîýòîìó àêòèâàöèÿ ïðîòåîëèçà âíîñèò îïðåäåëåííûé âêëàä â ïàòîãåíåç
çàáîëåâàíèé ïðàêòè÷åñêè âñåõ ñèñòåì îðãàíèçìà,
â ò.÷. è ìî÷åâûäåëèòåëüíîé. Îñîáåííî ñóùåñòâåííîå çíà÷åíèå èìåþò àêòèâíûå ôîðìû êèñëîðîäà
â ïàòîãåíåçå ïî÷å÷íûõ ðåïåðôóçèîííûõ ïîâðåæäåíèé [3].
Ñèíòåòè÷åñêèå àíòèîêñèäàíòû ñïîñîáíû
ýôôåêòèâíî ïðåäóïðåæäàòü ïîâðåæäåíèÿ, âîçíèêàþùèå ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé èøåìèè è ðåïåðôóçèè òêàíè. Ìû ïîëàãàåì, ÷òî îäíèì èç
ôàêòîðîâ, ïîâûøàþùèõ àêòèâíîñòü ñèñòåìû ýíäîãåííûõ àíòèîêñèäàíòîâ, ìîæåò áûòü àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ.
Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ è êëèíè÷åñêèé îïûò ðÿäà èññëåäîâàòåëåé ïîçâîëÿþò ñäåëàòü âûâîä îá àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòè äàëàðãèíà, êîòîðûé êîððåãèðóåò ìî÷åâûäåëèòåëü-
íóþ ôóíêöèþ ó êðûñ ïðè îñòðîé ïî÷å÷íîé íåäîñòàòî÷íîñòè (ÎÏÍ) âñëåäñòâèå ïîâûøåíèÿ
ôèëüòðàöèîííîé çàãðóçêè êëóáî÷êîâ. Ïðè ýòîì
îòìå÷àåòñÿ ïîëîæèòåëüíàÿ òåíäåíöèÿ â ïåðåðàñïðåäåëåíèè âîäû è ýëåêòðîëèòîâ ìåæäó ðàçëè÷íûìè îðãàíàìè [4]. Âêëþ÷åíèå äàëàðãèíà â êîìïëåêñ òåðàïèè â óñëîâèÿõ òðàâìàòè÷åñêîãî øîêà
è ÎÏÍ óñèëèâàåò èíãèáèðîâàíèå ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ è íîðìàëèçóåò ãåìîäèíàìèêó
[5]. Òàê, ðàíåå íàìè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñìåøàííûé àãîíèñò µ- è δ-ðåöåïòîðîâ äàëàðãèí ñïîñîáåí ñíèæàòü àêòèâíîñòü ëàêòàòäåãèäðîãåíàçû è
ñòèìóëèðîâàòü àíòèîêñèäàíòíóþ ñèñòåìó [6].
Âûøåïðèâåäåííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íåôðîïðîòåêòîðíîì äåéñòâèè ïðåïàðàòà.
Îäíàêî îñòàåòñÿ íåèçó÷åííûì âîïðîñ, ìîæåò ëè àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ óâåëè÷èâàòü òîëåðàíòíîñòü êëåòîê ïî÷åê ê îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó. Åñëè òàê, òî ñâÿçàí ëè ýòîò çàùèòíûé ýôôåêò ñ àêòèâàöèåé àíòèîêñèäàíòíîãî ôåðìåíòà ñóïåðîêñèääèñìóòàçû? Ïðåäñòàâëÿåò òàêæå èíòåðåñ âûÿñíèòü, êàêîå âëèÿíèå îêàçûâàþò
èçìåíåíèå ñèíòåçà îäíîãî èç âíóòðèêëåòî÷íûõ
ìåññåíäæåðîâ NO íà ðåàëèçàöèþ ïðîòåêòîðíîãî
äåéñòâèÿ îïèîèäîâ.
Ïîýòîìó öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ðîëè îêñèäà àçîòà, àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà â êëåòêàõ ïî÷åê ó êðûñ ïðè îêñèäàíòíîì ñòðåññå è ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1
97
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
Ýêñïåðèìåíò ïðîâîäèëè íà áåëûõ êðûñàõ
16–18-íåäåëüíîãî âîçðàñòà. Ýêñïåðèìåíòàëüíóþ
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
ÎÏÍ, âñëåäñòâèå êîòîðîé ðàçâèâàåòñÿ îêñèäàòèâíûé ñòðåññ ó æèâîòíûõ âûçûâàëè ïóòåì âíóòðèìûøå÷íîãî ââåäåíèÿ èì 50%-ãî âîäíîãî ðàñòâîðà ãëèöåðîëà â äîçå 1 ìë/100 ã. ×åðåç îäíè, äâîå
è òðîå ñóòîê æèâîòíûõ äåêàïèòèðîâàëè.  îáðàçöàõ ïî÷å÷íîé òêàíè îïðåäåëÿëè ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü, àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO.
Êîíòðîëåì ñëóæèëè èíòàêòíûå áåëûå êðûñû òàêîãî æå âîçðàñòà, êîòîðûõ ñîäåðæàëè â àíàëîãè÷íûõ óñëîâèÿõ ñ îïûòíûìè.
Ó÷àñòèå δ- è µ-îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â ðåãóëÿöèè óñòîé÷èâîñòè ïî÷åê ê ïîâðåæäàþùåìó
äåéñòâèþ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà îöåíèâàëè
ñ ïîìîùüþ äàëàðãèíà (D-Ala-Leu-Arg6-enkephalin,
ÇÀÎ «Á³îë³ê», Óêðàèíà), êîòîðûé èíúåêöèðîâàëè æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî â äîçå 100 ìêã/êã
çà 20 ìèí äî ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ [5]. Àíòàãîíèñò îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ñìåøàííîãî òèïà –
íàëîêñîí (Õàðüêîâñêîå ãîñóäàðñòâåííîå ïðåäïðèÿòèå “Çäîðîâ’ÿ íàðîäó”, Óêðàèíà) – ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî (3 ìêã/êã ìàññû òåëà) çà 30 ìèí äî
ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ èëè çà 20 ìèí äî èíúåêöèè
äàëàðãèíà.
Äëÿ âûÿñíåíèÿ ýôôåêòà èíãèáèðîâàíèÿ
NO-ñèíòàçû íà ïðîÿâëåíèå àíòèîêñèäàíòíûõ
ñâîéñòâ àãîíèñòîâ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî ââîäèëè èíãèáèòîð èíäóöèáåëüíîé
NO-ñèíòàçû (iNO-ñèíòàçû) – àìèíîãóàíèäèí
íèòðàò – â äîçå 10 ìã/êã («Sigma», ÑØÀ). Èíúåêöèþ èíãèáèòîðà êðûñàì îñóùåñòâëÿëè ëèáî çà
30 ìèí äî íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà, ëèáî çà 20 ìèí
äî ââåäåíèÿ èì äàëàðãèíà.
Ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü òêàíåé ïî÷åê
îïðåäåëÿëè â åä. àáñîðáöèè /÷ íà 1 ã òêàíè ïî
ëèçèñó àçîêîëà è àçîêàçåèíà (Ltd «Simko», Ëüâîâ)
è âûñâîáîæäåíèþ àçîêðàñèòåëÿ, èìåþùåãî ìàêñèìóì ïîãëîùåíèÿ ïðè äëèíå âîëíû 440 íì [7].
Òêàíü ãîìîãåíèçèðîâàëè â áîðàòíîì áóôåðå
(ðÍ 9,0). Ïðîáèðêè, ñîäåðæàùèå 1,5 ìë áîðàòíîãî áóôåðà, 1 ìã àçîêàçåèíà èëè àçîêîëà è 0,5 ìë
ãîìîãåíàòà, èíêóáèðîâàëè íà âîäÿíîé áàíå ïðè
37 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí. Ïîñëå èíêóáàöèè â íèõ
äîáàâëÿëè 2 ìë äèñòèëëÿòà è çàùåëà÷èâàëè ñðåäó 50 ìêë 5 Ì ðàñòâîðà NaOH. Ñîäåðæèìîå ïðîáèðîê ôèëüòðîâàëè äëÿ óäàëåíèÿ íåïðîðåàãèðîâàâøèõ àçîñîåäèíåíèé è îïðåäåëÿëè âåëè÷èíó
àáñîðáöèè íà ÑÔ-46 (λ = 440 íì).
Îäíîâðåìåííî â îáðàçöàõ ïî÷åê îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû (ÊÔ
1.15.1.1), êîòîðóþ îöåíèâàëè ïî ñïîñîáíîñòè
ôåðìåíòà èíãèáèðîâàòü íàêîïëåíèå ïðîäóêòà
àóòîîêèñëåíèÿ àäðåíàëèíà â ùåëî÷íîé ñðåäå
(ðÍ 10,65), ïîãëîùàþùåãî ïðè äëèíå âîëíû
347 íì [8]. Ìåòîäîì äèôôåðåíöèàëüíîãî öåíò-
ðèôóãèðîâàíèÿ (14 000 g, 10 ìèí) èç ãîìîãåíàòà
âûäåëÿëè ìèòîõîíäðèàëüíóþ ôðàêöèþ. Ïðîìûòûé îñàäîê ðàçðóøàëè 0,1%-ì ðàñòâîðîì òðèòîíà Õ-100, ïðèãîòîâëåííîãî íà áèêàðáîíàòíîì áóôåðå. Çàòåì â ïðîáàõ ðåãèñòðèðîâàëè àêòèâíîñòü
ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïî ñòåïåíè èíãèáèðîâàíèÿ
ñêîðîñòè àóòîîêèñëåíèÿ àäðåíàëèíà (â % èíãèáèðîâàíèÿ èëè åä. àêò.) Ê 2 ìë áèêàðáîíàòíîãî
áóôåðà (0,2 Ì Na2CO3, 0,2 Ì NaHCO3, ðH 10,65)
äîáàâëÿëè 100 ìêë 0,1%-ãî ðàñòâîðà àäðåíàëèíà
è 10 ìêë ïðîáû, ïîñëå ÷åãî ñìåñü òùàòåëüíî è
áûñòðî ïåðåìåøèâàëè. Ïðîáû ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàëè â òå÷åíèå 3–5 ìèí ïðè λ = 347 íì íà
ÑÔ-46. Ïî ôîðìóëå ðàññ÷èòûâàëè ñòåïåíü èíãèáèðîâàíèÿ ôåðìåíòîì ñêîðîñòè àóòîîêèñëåíèÿ
àäðåíàëèíà.
Óðîâåíü NO â êëåòêàõ ïî÷åê îïðåäåëÿëè ñ
ïîìîùüþ ðåàêòèâà Ãðèññà, ó÷èòûâàÿ ñòàáèëüíûå
ìåòàáîëèòû – íèòðèò- è íèòðàò-àíèîíû, ïðåäâàðèòåëüíî âîññòàíîâèâ ïîñëåäíèå äî íèòðèòà [9].
Ãîìîãåíàò òêàíè ãîòîâèëè â ñðåäå âûäåëåíèÿ,
ñîäåðæàùåé 0,25 Ì ñàõàðîçû è 1 ìÌ ÝÄÒÀ â
ñîîòíîøåíèè 1 : 9. Äàëåå ïðîâîäèëè äèàëèç â
òå÷åíèå 1,5–2,0 ÷ ïðîòèâ äèñòèëëÿòà. Ïîñëå åãî
îêîí÷àíèÿ îòáèðàëè îáðàçöû ïðîá è èçìåðÿëè
îáúåì äèàëèçàòà. Ïåðåä àíàëèçîì íà íèòðèòû è
íèòðàòû â äèàëèçàòå îñàæäàëè áåëêè ñìåñüþ 0,5 í.
ÊÎÍ è 5%-ãî ZnSO4 â îáúåìíîì ñîîòíîøåíèè
2 : 5. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèòîâ ê
10 ìë ïðîáû äîáàâëÿëè 1 ìë ðåàêòèâà Ãðèññà
(ïðè t 5 °Ñ). ×åðåç 15 ìèí ïîñëå èíòåíñèâíîãî
âñòðÿõèâàíèÿ ïðîáèðîê ðàçâèâàëàñü îêðàñêà. Äàëåå ïðîâîäèëè ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàíèå ïðè
λ = 540 íì, êîíòðîëåì ñëóæèë äèñòèëëÿò. Ïîñêîëüêó ðåàêöèÿ äèàçîòèðîâàíèÿ ÿâëÿåòñÿ ñïåöèôè÷íîé òîëüêî íà íèòðèòû, òî äëÿ îïðåäåëåíèÿ íèòðàòîâ íåîáõîäèìî áûëî èõ ïðåäâàðèòåëüíî
âîññòàíîâèòü.  êà÷åñòâå âîññòàíîâèòåëÿ èñïîëüçîâàëè öèíêîâóþ ïûëü. Ïðîöåññ âîññòàíîâëåíèÿ
è äèàçîòèðîâàíèÿ ïðîèñõîäèë îäíîâðåìåííî ïðè
t = 5 °Ñ. ×åðåç 10 ìèí ïðîáèðêè öåíòðèôóãèðîâàëè, îòáèðàëè ñóïåðíàòàíò è ïðîâîäèëè ñïåêòðîôîòîìåòðèðîâàíèå ïðè λ = 540 íì ïðîòèâ
“õîëîñòîé ïðîáû” (îáðàáîòàííîé àíàëîãè÷íî).
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèò- è íèòðàòèîíîâ (ìêã/ã) èñïîëüçîâàëè êàëèáðîâî÷íóþ êðèâóþ, ïîñòðîåííóþ ïî íèòðèòó íàòðèÿ è íèòðàòó
êàëèÿ ñîîòâåòñòâåííî.
Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì t-êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà.
98
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Äàííûå, ïðåäñòàâëåííûå â òàáëèöå, ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî ìîäåëèðîâàíèå îêñèäàòèâíîãî
ñòðåññà in vivo ñîïðîâîæäàåòñÿ èíòåíñèôèêàöèåé
Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ
ïðîöåññîâ ïðîòåîëèçà â òêàíÿõ ïî÷åê ïðè èñïîëüçîâàíèè â êà÷åñòâå ñóáñòðàòà êàê àçîêîëà,
òàê è àçîêàçåèíà. Êðîìå òîãî, ðàçâèòèå ñâîáîäíîðàäèêàëüíîé àêòèâàöèè ïðîòåîëèçà ïðèâîäèò
ê äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû îòíîñèòåëüíî èíòàêòíûõ æèâîòíûõ. Ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà íà
ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè â 2,0 è 1,5 ðàçà
ñîîòâåòñòâåííî.
Ïðåäâàðèòåëüíàÿ ñòèìóëÿöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ äàëàðãèíîì äî ôîðìèðîâàíèÿ ÎÏÍ
èíãèáèðóåò ëèçèñ âûñîêîìîëåêóëÿðíûõ áåëêîâ
è êîëëàãåíàçíîé àêòèâíîñòè â òêàíè ïî÷åê æèâîòíûõ, ïîäâåðãøèõñÿ ÎÏÍ.
Ïðèìåíåíèå äàëàðãèíà òàêæå ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîâûøåíèåì àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû îòíîñèòåëüíî çíà÷åíèé ó æèâîòíûõ ñ ÎÏÍ
íà ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè ýêñïåðèìåíòà – â 1,8, 2, 8 è 2,0 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî. Ïðè
ýòîì áûëî îòìå÷åíî íåêîòîðîå ñíèæåíèå óðîâíÿ
îêñèäà àçîòà ó êðûñ âñåõ ãðóïï, ïîäâåðãøèõñÿ
îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó, íà ôîíå àêòèâàöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ äàëàðãèíîì.
Èç ðåçóëüòàòîâ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå,
ñëåäóåò, ÷òî ñìåøàííàÿ áëîêàäà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè èíúåêöèè æèâîòíûì íàëîêñîíà ñóùåñòâåííî íå îòðàæàåòñÿ (êàê ïî àçîêîëó, òàê è ïî
àçîêàçåèíó) íà ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ãîìîãåíàòà ïî÷åê ó æèâîòíûõ ñ ÎÏÍ. Ââåäåíèå
èì íàëîêñîíà íå èçìåíÿåò â ïî÷å÷íîé òêàíè ñîäåðæàíèå íèòðèò- è íèòðàò-àíèîíîâ.
Ïðè ïðåäâàðèòåëüíîì èíãèáèðîâàíèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïîëíîñòüþ óñòðàíÿåòñÿ àíòèîêñèäàíòíûé ýôôåêò äàëàðãèíà, îòìå÷åííûé íàìè
ïðè àêòèâàöèè ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññîâ
âñëåäñòâèå ðàçâèòèÿ ÎÏÍ. Òàê, ó ýòèõ æèâîòíûõ íå óäàåòñÿ îáíàðóæèòü ñíèæåíèÿ ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïî àçîêàçåèíó è àçîêîëó íà
ââåäåíèå èì äàëàðãèíà. Êðîìå òîãî, èíúåêöèÿ
êðûñàì àíòàãîíèñòà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðåïÿòñòâóåò îïîñðåäîâàííîé ïîñëåäíèìè àêòèâàöèè
ñóïåðîêñèääèñìóòàçû. Ââåäåíèå èì íàëîêñîíà â
ñî÷åòàíèè ñ äàëàðãèíîì íà ôîíå ðàçâèòèÿ ÎÏÍ
òàêæå íå âëèÿåò íà èçìåíåíèå óðîâíÿ îêñèäà àçîòà
â êëåòêàõ ïî÷å÷íîé òêàíè.
 ñëåäóþùåé ñåðèè ýêñïåðèìåíòîâ ìû ïîïûòàëèñü îöåíèòü âêëàä îêñèäà àçîòà â ðåàëèçàöèþ àíòèîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà äàëàðãèíà, îïîñðåäîâàííîãî îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè, â óñëîâèÿõ ðàçâèòèÿ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ÎÏÍ.
Ââåäåíèå â îðãàíèçì èíãèáèòîðà èíäóöèáåëüíîé NO-ñèíòàçû íèòðîàìèíîãóàíèäèíà íå
îòðàæàåòñÿ íà àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû
ïî ñðàâíåíèþ ñ êðûñàìè, íàõîäÿùèìèñÿ â ñî-
ñòîÿíèè ÎÏÍ. Ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà â òêàíè ïî÷åê îïûòíûõ æèâîòíûõ íå îòëè÷àåòñÿ îò òàêîâûõ ïîêàçàòåëåé ó
êîíòðîëüíûõ. Íå îòìå÷åíî òàêæå èçìåíåíèé â
àêòèâàöèè ñèñòåìû îãðàíè÷åííîãî ïðîòåîëèçà ïî
ñðàâíåíèþ ñ êðûñàìè, ó êîòîðûõ îòìå÷åíî ðàçâèòèå ÎÏÍ.
Ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå æèâîòíûì íèòðîàìèíîãóàíèäèíà óñòðàíÿåò ïîçèòèâíûé ýôôåêò
äàëàðãèíà â ñëó÷àå àêòèâàöèè ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ïðîöåññîâ è ðàçâèòèè ÎÏÍ. Àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïðàêòè÷åñêè íå îòëè÷àåòñÿ îò
òàêîâîé ïðè ÎÏÍ. Íàêîïëåíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â êëåòêàõ ïî÷åê äîñòîâåðíî íå ïîâûøàåòñÿ îòíîñèòåëüíî êîíòðîëÿ. Êðîìå òîãî, ó
ýòèõ æèâîòíûõ íà ïåðâûå, âòîðûå è òðåòüè ñóòêè íå óäàåòñÿ îáíàðóæèòü ñíèæåíèå àêòèâàöèè
ïðîòåîëèçà ïî àçîêîëó è àçîêàçåèíó ïîñëå èíúåêöèè èì äàëàðãèíà.
Ïðè “ãëèöåðèíîâîé” ìîäåëè ÎÏÍ âñëåäñòâèå ãèïîêñèè ðàçâèâàåòñÿ îêñèäàòèâíûé ñòðåññ,
÷òî ñîïðîâîæäàåòñÿ èíòåíñèôèêàöèåé ñâîáîäíîðàäèêàëüíûõ ðåàêöèé è çà÷àñòóþ àêòèâàöèåé ïðîòåîëèçà. Îòìå÷åííûå íàìè èçìåíåíèÿ ïðîòåîëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè óêàçûâàþò íà òî, ÷òî âîçðàñòàåò îêñèäàòèâíàÿ ìîäèôèêàöèÿ áåëêîâ â êëåòêàõ ïî÷åê, êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ ñóáñòðàòàìè äëÿ
âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîòåàç. Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ
ðåçóëüòàòàìè èññëåäîâàíèé B. C. Yang è J. L. Mechta [10], êîòîðûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ÷óâñòâèòåëüíîñòè áåëêîâ ê äåéñòâèþ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà.
Ìîäåëèðîâàíèå îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà â òêàíè ïî÷åê ñîïðîâîæäàåòñÿ ñíèæåíèåì àêòèâíîñòè
ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è âñëåäñòâèå ýòîãî íàêîïëåíèåì Î2- è àêòèâàöèåé ïðîòåîëèçà. Òàê, ñîãëàñíî äàííûì, ïðèâåäåííûì â ñòàòüå [2], îêñèäàòèâíàÿ ìîäèôèêàöèÿ ôåðìåíòà ïåðåâîäèò åãî
â êàòàëèòè÷åñêè íåàêòèâíûå èëè ìåíåå àêòèâíûå
ôîðìû, ÷òî âûçûâàåò èíãèáèðîâàíèå àíòèîêñèäàíòíîé ñèñòåìû. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðèíöèïîì îáðàòíîé ñâÿçè, ñíèæåíèå
àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïîä âëèÿíèåì
ðàçëè÷íûõ ôàêòîðîâ ìîæåò ïðèâåñòè ê íàêîïëåíèþ â êëåòêàõ îêèñëåííûõ áåëêîâ.
Îáíàðóæåííîå íàìè ïîâûøåííîå ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà íà ðàííåé ñòàäèè ðàçâèòèÿ
ÎÏÍ ÿâëÿåòñÿ, âåðîÿòíî, çâåíîì êîìïåíñàòîðíîé ðåàêöèè. Òàê, âî-ïåðâûõ, ïðè ãèïîêñèè íàðóøàåòñÿ êðîâîñíàáæåíèå ïî÷åê, ÷òî ñòèìóëèðóåò ãåíåðàöèþ NO êàê ìîùíîãî âàçîäèëàòàòîðà.
Îäíàêî äëèòåëüíàÿ (â òå÷åíèå òðåõ ñóòîê) óìåðåííàÿ ãèïåðïðîäóêöèÿ NO ñâÿçàíà ñ ñèíòåçîì
iNO-ñèíòàçû. Âî-âòîðûõ, èçâåñòíî, ÷òî â óñëîâèÿõ ãèïîêñèè óñèëèâàåòñÿ ñèíòåç îêñèäà àçîòà
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1
99
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
Âëèÿíèå ïðåäâàðèòåëüíîãî ââåäåíèÿ ëèãàíäîâ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ è áëîêàòîðà iNO-ñèíòàçû íà ïðîòåîëèç,
àêòèâíîñòü ñóïåðîêñèääèñìóòàçû è ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO â òêàíè ïî÷åê êðûñ ïðè
ýêñïåðèìåíòàëüíîé ÎÏÍ (M ± m, n = 7)
Âðåìÿ ï îñëå
äåêàï è òàö è è
êðûñ, ñóò
Èí òàêòí ûå
êðûñû
Ïðîòåîëè ç
Ïðîòåîëèç
ï î àçîêàçåèíó,
àçîêàçåè í ó,
ïî
(λÀ440
= 4/÷40íàí ì
1 )ã ñ
Ïðîòåîëè ç
Ïðîòåîëèç
ï î àçîêîëó,
ïî àçîêîëó,
àáñîðáö è è /÷
À440 /÷ íà 1 ã
(lλ= 440 í ì)
Ñóï åðîêñè ääè ñìóòàçà,
% è í ãè áè ðîâ àí è ÿ
îòí îñè òåëüí î
êîí òðîëÿ
N O 2- + N O 3-, ìêã/ã
1 5 ,8 ± 0 ,3
8 ,3 ± 0 ,4
1 0 0 ± 0 ,8
3 4 ± 1 ,6
Ïåðâ ûå
Âòîðûå
Òðåòüè
22,9 ± 1,4 (ð1 < 0,05)
31,9 ± 0,5 (ð1 < 0,05)
24,7 ± 0,4 (ð1 < 0,05)
ÎÏÍ
10,5 ± 0,3 (ð1 < 0,05) 36,9 ± 1,8 (ð1 < 0,05) 67,83 ± 10,0 (ð1 < 0,05)
10,8 ± 0,3 (ð1 < 0,05) 22,1 ± 1,1 (ð1 < 0,05) 82,24 ± 6,8 (ð1 < 0,05)
10,3 ± 0,2 (ð1 < 0,05) 43,7 ± 1,0 (ð1 < 0,05) 51,87 ± 11,3 (ð1 < 0,05)
Äàëàðãèí + ÎÏÍ
Ïåðâ ûå
2 0 ,9 ± 0 ,3
(ð1 < 0,05)
2 3 ,3 ± 0 , 6
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
1 6 ,2 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
9 ,3 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05, ð2 < 0,05)
9 ,6 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
9 ,1 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
6 9 ,1 ± 1 ,2 5
(ð1 < 0,05, ð2 < 0,05)
5 0 ,9 ± 1 ,3
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
7 7 ,4 ± 1 ,6
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
4 4 ,8 ± 6 ,0
(ð1 < 0,05, ð2 < 0,05)
4 7 ,8 ± 8 ,7
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
4 3 ,9 ± 7 ,3
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
2 1 , 3 ± 0 ,3
(ð1 < 0,05)
2 4 ,3 ± 0 , 6
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
2 0 ,7 ± 0 ,9
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
9 ,8 ± 0 ,3
(ð1 < 0,05)
1 0 ,3 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05)
1 0 ,2 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05)
5 3 ,8 ± 1 ,3
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
4 3 ,5 ± 1 ,8
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
5 7 ,5 ± 1 ,8
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
5 8 ,0 ± 3 ,1
(ð1 < 0,05)
5 8 ,6 ± 3 ,1
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
4 4 ,8 ± 6 ,7
(ð1 < 0,05)
1 0 ,3 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05)
10,3 ± 0,2 (ð1 < 0,05)
1 7 ,9 ± 1 ,8
(ð1 < 0,05)
41,2 ± 1,6 (ð1 < 0,05)
68,7 ± 8,3 (ð1 < 0,05)
8 3 ,1 ± 7 ,5
(ð1 < 0,05)
53,5 ± 9,1 (ð1 < 0,05)
2 2 , 1 ± 0 ,4
(ð1 < 0,05)
2 9 ,3 ± 0 , 4
(ð1 < 0,05)
2 0 ,1 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
1 0 ,0 ± 0 ,4
(ð1 < 0,05)
1 0 ,4 ± 0 ,4
(ð1 < 0,05)
1 0 ,1 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05)
3 9 ,9 ± 1 ,5
(ð1 < 0,05)
2 4 ,3 ± 2 ,1
(ð1 < 0,05)
4 4 ,8 ± 0 ,8
(ð1 < 0,05)
3 2 ,6 ± 2 ,8
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
3 1 ,3 ± 1 ,9
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
3 9 ,7 ± 2 ,1
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
2 3 ,3 ± 0 ,6
(ð1 < 0,05)
3 1 ,1 ± 0 , 5
(ð1 < 0,05)
2 3 ,4 ± 1 ,4
(ð1 < 0,05)
1 0 ,1 ± 0 ,3
(ð1 < 0,05)
1 0 ,5 ± 0 ,3
(ð1 < 0,05)
1 0 ,0 ± 0 ,2
(ð1 < 0,05)
4 4 ± 1 ,2
(ð1 < 0,05)
3 0 ,5 ± 1 ,8
(ð1 < 0,05)
4 6 ,3 ± 1 ,5
(ð1 < 0,05)
3 4 ,8 ± 2 ,1
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
3 7 ,0 ± 2 ,2
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
3 7 ,9 ± 2 ,9
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
Âòîðûå
Òðåòüè
Ïåðâ ûå
Âòîðûå
Òðåòüè
Ïåðâ ûå
Âòîðûå
Òðåòüè
Ïåðâ ûå
Âòîðûå
Òðåòüè
Íàëoêñîí + ÎÏÍ
Íàëîêñîí + äàëàðãèí + ÎÏÍ
24,8 ± 0,3 (ð1 < 0,05)
9,8 ± 0,2 (ð1 < 0,05) 32,9 ± 1,75 (ð1 < 0,05)
2 6 ,5 ± 0 , 4
(ð1 < 0,05; ð2 < 0,05)
23,3 ± 0,8 (ð1 < 0,05)
Íèò ðîàìèíîãóàíèäèí + ÎÏÍ
Íèò ðîàìèíîãóàíèäèí + äàëàðãèí + ÎÏÍ
Ïåðâ ûå
Âòîðûå
Òðåòüè
Ïðèìå÷àíèå: ð1 – äîñòîâåðíîñòü îòíîñèòåëüíî èíòàêòíûõ êðûñ, ð2 – äîñòîâåðíîñòü îòíîñèòåëüíî æèâîòíûõ
ñ ÎÏÍ.
100
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1
Å. À. ÎÐËÎÂÀ, È. À. ÊÎÌÀÐÅÂÖÅÂÀ
è èîíîâ NO3- è NO2-. Èñõîäÿ èç ýëåêòðîííîàêöåïòîðíîé ïðèðîäû èîíîâ NO2-, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðè äåôèöèòå êèñëîðîäà âîçìîæåí ïåðåõîä êëåòîê íà íèòðàòíî (íèòðèòíîå) äûõàíèå [11].
Àíàëèç àêòèâíîñòè ñìåøàííîãî àãîíèñòà µ- è
δ-îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ â óñëîâèÿõ îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà ñâèäåòåëüñòâóåò î åãî àíòèîêñèäàíòíîì âîçäåéñòâèè. Äàííîå ïðåäïîëîæåíèå ïîäòâåðæäàåòñÿ ðåçóëüòàòàìè îïûòîâ ïðè ñîâìåñòíîì ââåäåíèè æèâîòíûì àíòàãîíèñòà è àãîíèñòà
îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ. Òàê, ïðåäâàðèòåëüíàÿ áëîêàäà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè ïîìîùè íàëîêñîíà ïîëíîñòüþ íèâåëèðóåò ïîçèòèâíûé ýôôåêò
äàëàðãèíà ïðè ìîäåëèðîâàíèè îêñèäàòèâíîãî
ñòðåññà. Ñëåäîâàòåëüíî, ðåãóëÿöèÿ óñòîé÷èâîñòè
íåôðîíîâ ê öèòîòîêñè÷åñêîìó äåéñòâèþ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ îñóùåñòâëÿåòñÿ ïðè ó÷àñòèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ.
Ââåäåíèå êðûñàì äàëàðãèíà, íà íàø âçãëÿä,
èíãèáèðóåò ïðîöåññû ïðîòåîëèçà. Äàííûå ýêñïåðèìåíòîâ ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî îí óìåíüøàåò
ïðîòåîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü êàê ïî îòíîøåíèþ
ê àçîêîëó, òàê è àçîêàçåèíó. À áëîêàäà òàêîãî
òèïà îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ íàëîêñîíîì, ïðåäøåñòâóþùàÿ èíúåêöèè æèâîòíûì äàëàðãèíà, ñîïðîâîæäàåòñÿ äîñòîâåðíûì óâåëè÷åíèåì ëèçèñà âûñîêîìîëåêóëÿðíûõ áåëêîâ è êîëëàãåíà. Èñõîäÿ
èç ïîëó÷åííûõ íàìè ðåçóëüòàòîâ, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïîäàâëåíèå ïðîòåîëèçà ðåàëèçóåòñÿ âñëåäñòâèå îïîñðåäîâàííîé îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè ñòèìóëÿöèè àíòèîêñèäàíòíûõ ôåðìåíòîâ.
Ó æèâîòíûõ ñ ïðåäâàðèòåëüíûì ââåäåíèåì
èì ñèíòåòè÷åñêîãî ëåéýíêåôàëèíà íàáëþäàåòñÿ
òåíäåíöèÿ ê âîññòàíîâëåíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû. Óâåëè÷åíèå åå ïðè îêñèäàòèâíîì ñòðåññå ïîñëå ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ îáåñïå÷èâàåò óòèëèçàöèþ àêòèâíûõ ôîðì
êèñëîðîäà è òåì ñàìûì ñïîñîáñòâóåò ñíèæåíèþ
â òêàíÿõ óðîâíÿ NO. Èçâåñòíî, ÷òî äàëàðãèí õàðàêòåðèçóåòñÿ ìîäóëèðóþùèì âëèÿíèåì íà ñèíòåç ïðîñòàíîèäîâ. Òàê, àâòîðû ðàáîòû [12] îòìå÷àþò, ÷òî äàëàðãèí ñïîñîáñòâóåò âîññòàíîâëåíèþ
ñèíòåçà ïðîñòàöèêëèíà, îáëàäàþùåãî êàðäèîïðîòåêòîðíûìè ñâîéñòâàìè.
Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðîÿâëåíèå àíòèîêñèäàíòíîãî äåéñòâèÿ äàëàðãèíà íàáëþäàåòñÿ âñëåäñòâèå ñóììèðîâàíèÿ åãî ïîëîæèòåëüíîãî âëèÿíèÿ íà ñèíòåç ïðîñòàãëàíäèíîâ è àêòèâíîñòü àíòèîêñèäàòèâíûõ ôåðìåíòîâ.
Ðåãóëÿòîðíîå âëèÿíèå NO íà àêòèâíîñòü
ñóïåðîêñèääèñìóòàçû â óñëîâèÿõ èøåìèè – ðåïåðôóçèè [13], íàáëþäàåòñÿ è ïðè îêñèäàòèâíîì
ñòðåññå. Èìåþòñÿ ñâåäåíèÿ, ÷òî ìîëåêóëà NO ñïîñîáíà íåïîñðåäñòâåííî èíàêòèâèðîâàòü íåêîòîðûå ñâîáîäíûå ðàäèêàëû [10].
Äàííûå íàøèõ ýêñïåðèìåíòîâ ïîêàçûâàþò,
÷òî ïðåäâàðèòåëüíîå ââåäåíèå êðûñàì íèòðîàìèíîãóàíèäèíà ñíèìàåò ýôôåêò áëîêàäû iNOS-ñèíòàçû íà èíòåíñèâíîñòü ïðîòåîëèçà è àêòèâíîñòü
ñóïåðîêñèääèñìóòàçû ïðè ñðàâíåíèè ñ êðûñàìè,
ïîäâåðãíóòûìè ÎÏÍ. Ïðè ýòîì ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà ñíèæàåòñÿ äî
óðîâíÿ çíà÷åíèé ó èíòàêòíûõ êðûñ. Áëîêàäà
iNO-ñèíòàçû, ïðåäøåñòâóþùàÿ ââåäåíèþ èì äàëàðãèíà, îáåñïå÷èâàåò ïîëíîå óñòðàíåíèå àíòèîêñèäàíòíîãî ýôôåêòà îïèîèäà ïðè ìîäåëèðîâàíèè îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà. Ýòî äàåò îñíîâàíèå
ïðåäïîëîæèòü ó÷àñòèå NO â ðåàëèçàöèè çàùèòíîãî ýôôåêòà îïèîèäíûõ ïåïòèäîâ.
Îäíàêî â íàøèõ èññëåäîâàíèÿõ íå íàáëþäàëîñü çíà÷èòåëüíîãî óâåëè÷åíèÿ ñîäåðæàíèÿ íèòðèò- è íèòðàò-èîíîâ ïîñëå ñòèìóëÿöèè îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ, à, íàîáîðîò, ïðîèñõîäèëî íåêîòîðîå ñíèæåíèå óðîâíÿ ýòèõ àíèîíîâ â êëåòêàõ
ïî÷å÷íîé òêàíè. Ìû ñêëîííû îáúÿñíèòü ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû àêòèâàöèåé öèêëà îêñèäà àçîòà.
Óâåëè÷åíèå ñèíòåçà NO â îòâåò íà ñòèìóëÿöèþ
îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ïðè ãèïîêñèè âëå÷åò çà
ñîáîé îäíîâðåìåííîå ïîâûøåíèå àêòèâíîñòè
ôåðìåíòîâ, ó÷àñòâóþùèõ â âîññòàíîâëåíèè íèòðèò- è íèòðàò-èîíîâ â NO [14]. Íåîáõîäèìî òàêæå
ó÷èòûâàòü, ÷òî âàæíóþ ðîëü ïðè ãèïîêñèè ìîæåò èãðàòü íèòðèòðåäóêòàçíàÿ àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèé.
Ñëåäîâàòåëüíî, ïðè ââåäåíèè êðûñàì äàëàðãèíà íà ôîíå ÎÏÍ öèêë îêñèäà àçîòà ìîæíî
ðàññìàòðèâàòü êàê ïåðâîå çâåíî çàùèòû êëåòîê
îò èçáûòêà NO è ïîâûøåííîãî ñîäåðæàíèÿ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà, à èçìåíåíèå èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà è àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû, î÷åâèäíî, ÿâëÿåòñÿ ñëåäñòâèåì ñíèæåíèÿ óðîâíÿ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ.
Òàêèì îáðàçîì, ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå
ïîêàçûâàþò, ÷òî àêòèâàöèÿ îïèàòíûõ ðåöåïòîðîâ ñïîñîáñòâóåò ñíèæåíèþ èíòåíñèâíîñòè ïðîòåîëèçà è óâåëè÷åíèþ àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû, ÷òî ïîâûøàåò òîëåðàíòíîñòü ïî÷åê ê
îêñèäàòèâíîìó ñòðåññó. Ýòè çàùèòíûå ýôôåêòû
îïîñðåäîâàííû îïèàòíûìè ðåöåïòîðàìè è çàâèñÿò îò àêòèâàöèè NO-ñèíòàçû â êëåòêàõ ïî÷å÷íîé òêàíè.
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1
101
ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ
ROLE OF NO-SYNTHASE
IN STIMULATION OF OPIATE
RECEPTOR AND KIDNEY OXIDATIVE
STRESS RESISTANCE
Ye. A. Orlova, I. A. Komarevtseva
Lugansk State Medical University;
e-mail: [email protected]
Summary
It was established that dalarginum injection before ARI (acute renal insufficiency) formation prevented an increases of proteolysis, decrease of SOD
(superoxide dismutase), increase of NO2- / NO3- content in kidney tissue. Antioxidant effect of opiate
receptor agonist was completely abolished by preliminary injection of OR antagonist – naloxone.
Aminoguanidine nitrate (inducible NO-synthase inhibitor) injection removed positive effect of OR stimulation too. Thus OR stimulation increases kidney
oxidative stress resistance due to NO-synthase and
SOD activation.
K e y w o r d s: dalarginum, superoxide dismutase, proteolysis, NO-synthase, oxidative stress.
1. Oliver C. N., Ahn B.-W., Moermann E. J. // J.
Biol. Chem. 1997. 262, N 12. P. 5488–5491.
2. Ìåùèøåí ². Ô ., Ïîëüîâèé Â. Ï. // Áóêîâ.
ìåä. â³ñíèê. 1999. 3, ¹ 1. Ñ. 196–205.
102
3. Áèëåíêî Ì. Â. Èøåìè÷åñêèå è ðåïåðôóçèîííûå ïîâðåæäåíèÿ îðãàíîâ (ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû, ïóòè ïðåäóïðåæäåíèÿ è ëå÷åíèÿ).
1989. Ì.: Ìåäèöèíà.
4. Ïàøóòèí Ñ. Á. // Áþë. ýêñïåðèì. áèîë. 1991.
113, ¹ 11. Ñ. 505–507.
5. Àëåêñàíäðîâà Â. À., Ðû÷êîâà Ñ. Â. // Ïåäèàòðèÿ. 1993. ¹ 3. Ñ. 101–104.
6. Îðëîâà Å. À. // Ìåä. àëüìàíàõ. 2002. 5, ¹ 4.
Ñ. 96–98.
7. Îðëîâà Å. À. // Ìåä. àëüìàíàõ. 2002. 5, ¹ 5.
Ñ. 98–100.
8. Ñèðîòà Ò. Â. // Âîïðîñû ìåä. õèìèè. 1999.
¹ 3. Ñ. 43–53.
9. Îðëîâà Å. À. // Óêð. æóðí. åêñòðåì. ìåäèöèíè. 2002. 3, ¹ 1. Ñ. 79–83.
10. Davies K. J. A., Delsignore M. E., Lin S. W. //
J. Biol. Chem. 1987. 262, N 20. P. 9902–9907.
11. Ðåóòîâ Â. Ï. // Óñïåõè áèîë. õèìèè. 1995.
35. Ñ. 189–228.
12. Ëèøìàíîâ Þ. Á., Ðåáðîâà Ò. Þ., Àôàíàñüåâ Ñ. À., Êðàâ÷åíêî À. È. // Áþë. ýêñïåðèì.
áèîë. è ìåä. 1992. 11. Ñ. 88–91.
13. Yang B. C., Mechta J. L. // Life Sciences. 1997.
61, N 1. P. 229–236.
14. Ðåáðîâà Ò. Þ., Ìàñëîâ Ë. Í., Ëèøìàíîâ À. Þ.,
Òàì Ñ. Â. // Áèîõèìèÿ. 2001. 66, ¹ 4. Ñ. 520–
528.
Ïîëó÷åíî 15.05.2003
ISSN 0201 — 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 1