Динамика иммунологического фенотипа лейкоцитов под

3
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
THE INFLUENCE OF THERAPY WITH METHOTREXATE ON
PHENOTYPE OF PERIPHERAL BLOOD LEUKOCYTES IN
RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS
I.R. Kolosova1, E.R. Polosukhina2, A.Yu. Baryshnikov2, G.V. Loukina1, Ya.A. Sigidin1
1
Institute of Rheumatology RAMS
2
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS*
ABSTRACT
Objective. To examine the influence of therapy with methotrexate on phenotype of peripheral blood leukocytes in
rheumatoid arthritis (RA) patients.
Methods. Peripheral blood samples were obtained from 20 patients with active RA. All patients were treated with
methotrexate in dosage of 7,5-15 mg/week.
Fluorescent flow cytometry on FACScan (Becton Dickinson) was used to assess the expression of antigens CD3,
CD4, CD5, CD7, CD8, CD11b, CD16, CD18, CD20, CD25, CD26, CD50, CD54, CD56, CD71, CD95, HLA-DR,
Pgp-170 on peripheral blood leukocytes before and after therapy.
Results. The therapy with methotrexate led to the decrease of expression of the antigens CD50 (from 75,2±15,0% to
58,7±24,5%, P<0,05), CD26 (from 24,3±14,6% to 15,7±12,2%, P<0,05) in lymphocytes and CD50 (from 71,7±(24,6%
to 56,2±24,3%, P<0,05) in granular leukocytes. The expression of other antigens remained unchanged.
Conclusion. The therapy with methotrexate led to the decrease of percentage of activated leukocytes.
ÄÈÍÀÌÈÊÀ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÔÅÍÎÒÈÏÀ
ËÅÉÊÎÖÈÒΠÏÎÄ ÂËÈßÍÈÅÌ ÒÅÐÀÏÈÈ
ÌÅÒÎÒÐÅÊÑÀÒÎÌ ÏÐÈ ÐÅÂÌÀÒÎÈÄÍÎÌ ÀÐÒÐÈÒÅ
È.Ð. Êîëîñîâà1, Å.Ð. Ïîëîñóõèíà2, À.Þ. Áàðûøíèêîâ2, Ã.Â. Ëóêèíà1, ß.À. Ñèãèäèí1
1
Èíñòèòóò ðåâìàòîëîãèè ÐÀÌÍ,
2
Ðîññèéñêèé îíêîëîãè÷åñêèé íàó÷íûé öåíòð èì. Í.Í. Áëîõèíà ÐÀÌÍ
ÐÅÇÞÌÅ
Öåëüþ äàííîãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëàñü îöåíêà äèíàìèêè ìåìáðàííîãî ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (ÏÊ) ó áîëüíûõ ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì (ÐÀ) ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì (ÌÒ).
 èññëåäîâàíèå áûëè âêëþ÷åíû 20 áîëüíûõ ÐÀ ñ âûñîêîé è óìåðåííîé êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîé àêòèâíîñòüþ
çàáîëåâàíèÿ.  êà÷åñòâå áàçèñíîé òåðàïèè âñåì áîëüíûì áûë íàçíà÷åí ÌÒ â äîçå 7,5-15ìã â íåäåëþ.
Íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ ÑD3, ÑD4, ÑD5,
ÑD7, CD8, CD16, CD20; àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ CD25, CD26, CD71, HLA-DR, CD95; ìîëåêóë àäãåçèè
CD11b, CD18, CD50, CD54, CD56; ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè Pgp-170. Íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè àíòèãåíîâ CD11b, CD18, CD50, CD54, ÑD95, Pgp-170.
Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè èññëåäóåìûõ àíòèãåíîâ íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ ïðîâîäèëîñü èììóíîôëþîðåñöåíòíûì
ìåòîäîì äî ëå÷åíèÿ è ÷åðåç 6 ìåñÿöåâ òåðàïèè.
Ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ îòìå÷àëîñü ñíèæåíèå ïðîöåíòà ëèìôîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ àíòèãåíû CD50
(ñ 75,2±15,0% äî 58,7±24,5%, P<0,05) è CD26 (24,3±14,6% äî 15,7±12,2, P<0,05) è ãðàíóëîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ àíòèãåí CD50 (ñ 71,7±24,6% äî 56,2±24,3%, P<0,05). Íå áûëî âûÿâëåíî ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîé äèíàìèêè ýêñïðåññèè îñòàëüíûõ èññëåäóåìûõ àíòèãåíîâ. Òàêèì îáðàçîì, òåðàïèÿ ÌÒ óìåíüøàåò ïðèòîê àêòèâèðîâàííûõ ëåéêîöèòîâ ÏÊ â ñèíîâèþ, áëàãîäàðÿ èçìåíåíèþ èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ýòèõ êëåòîê.
¹4/ ÒÎÌ 1/2002
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
4
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
Ââåäåíèå. Ðåâìàòîèäíûé àðòðèò (ÐÀ) - õðîíè÷åñêîå ñèñòåìíîå âîñïàëèòåëüíîå çàáîëåâàíèå, õàðàêòåðèçóþùååñÿ ðàçâèòèåì ñèììåòðè÷íîãî äåñòðóêòèâíîãî ïîëèñèíîâèòà.  îñíîâå ïàòîãåíåçà ëåæèò ïðîèñõîäÿùàÿ â ñèíîâèàëüíîé ìåìáðàíå ñóñòàâà èììóííàÿ
ðåàêöèÿ ëèìôîèäíûõ êëåòîê íà àóòîàíòèãåíû ñóñòàâíûõ òêàíåé [3]. Íà íà÷àëüíûõ ýòàïàõ èììóííîé ðåàêöèè ïðè ÐÀ îòìå÷àåòñÿ ïðåîáëàäàíèå CD4+-êëåòîê è
ïîâûøåíèå èíäåêñà CD4+/CD8+ â ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè è ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (ÏÊ). Êîìïëåêñ àêòèâíûõ àíòèãåííûõ ïåïòèäîâ è ìîëåêóë HLA 2 êëàññà ñ
ðåöåïòîðîì CD4+- Ò - ëèìôîöèòà ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëîì,
«çàïóñêàþùèì» âñþ ïîñëåäóþùóþ èììóííóþ ðåàêöèþ ñ âûðàáîòêîé öèòîêèíîâ, àêòèâèðîâàíèåì íîâûõ
êîëè÷åñòâ ìàêðîôàãîâ è ëèìôîöèòîâ, ìîáèëèçàöèåé
íåéòðîôèëîâ, ïðîäóêöèåé ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë.
Ôîðìèðîâàíèå êîìïëåêñà ðåöåïòîðà ëèìôîöèòà (TCRCD3) ñ àíòèãåííûìè ïåïòèäàìè è ìîëåêóëîé ãëàâíîãî
êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè ñëóæèò îäíèì èç îñíîâíûõ ñòèìóëîâ äëÿ äàëüíåéøèõ àêòèâàöèîííûõ ïðîöåññîâ â èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòêàõ. ×àñòü èç àêòèâàöèîííûõ ìîëåêóë èñõîäíî îòñóòñòâóåò íà ïîâåðõíîñòè
ëèìôîöèòîâ, è èõ ýêñïðåññèÿ èíäóöèðóåòñÿ â ïðîöåññå
îáìåíà ñèãíàëàìè. Âàæíûìè ìàðêåðàìè àêòèâàöèè
ëèìôîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ ýêñïðåññèÿ ðåöåïòîðîâ èíòåðëåéêèíà-2 (CD25), òðàíñôåððèíà (CD71), àíòèãåíà CD95,
îïîñðåäóþùåãî àïîïòîç. Ïîñëåäíèé ïîÿâëÿåòñÿ íà ïîâåðõíîñòè êëåòîê, ñâèäåòåëüñòâóÿ î ïðåäñòîÿùåì óäàëåíèè ëèìôîöèòîâ, âûïîëíèâøèõ ñâîþ ôóíêöèþ.
Íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíà ðîëü ôåðìåíòà äèïåïòèäèëïåïòèäàçû-4 (CD26), îòíîñÿùåãîñÿ ê ñåðèíîâûì ýêçîïðîòåàçàì. Èçâåñòíî, ÷òî ïðè ÐÀ âûÿâëÿåòñÿ çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå ýêñïðåññèè CD26 [13], êîððåëèðóþùåå ñ êîëè÷åñòâîì ñûâîðîòî÷íîãî èíòåðôåðîíà-ãàììà (IFN-γ), êîòîðûé ñïîñîáåí çíà÷èòåëüíî óñèëèâàòü
àóòîèììóííûå ïðîöåññû.
Âàæíàÿ ðîëü â ôîðìèðîâàíèè èììóííî-âîñïàëèòåëüíîãî îòâåòà ïðè ÐÀ ïðèíàäëåæèò ìåæêëåòî÷íûì
âçàèìîäåéñòâèÿì, êîòîðûå îñóùåñòâëÿþòñÿ ïðè ó÷àñòèè ìîëåêóë àäãåçèè (ñåëåêòèíîâ, èíòåãðèíîâ, èõ ðåöåïòîðîâ).
Áëàãîäàðÿ óñòàíîâëåíèþ ñëàáûõ è îáðàòèìûõ ñâÿçåé ñ ñåëåêòèíàìè, îñóùåñòâëÿåòñÿ ïåðâûé ýòàï ïåðåÒàáëèöà 1
Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà áîëüíûõ
×èñëî áîëüíûõ
Ïîë
Ñðåäíèé âîçðàñò áîëüíûõ (ãîäû)
Ñðåäíÿÿ äëèòåëüíîñòü çàáîëåâàíèÿ (ãîäû)
Àêòèâíîñòü ÐÀ, ñòåïåíü (n)
Ðåíòãåíîëîãè÷åñêàÿ
ñòàäèÿ (n)
Ôóíêöèîíàëüíàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü (n)
Íàëè÷èå ÐÔ (n)
Ñèñòåìíûå ïðîÿâëåíèÿ ÐÀ (n)
Ì
Æ
2
3
2
3
4
1
2
20
3
17
51±12
9,9±8,6
16
4
12
5
3
8
12
13
9
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
ìåùåíèÿ ëåéêîöèòîâ â î÷àã âîñïàëåíèÿ èç êðîâîòîêà.
Ìîëåêóëû β1-β2-èíòåãðèíîâ (â íàøåì èññëåäîâàíèè
CD18, êîòîðàÿ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé β2 èíòåãðèíîâ è
CD11b - α-ñóáúåäèíèöà β2 èíòåãðèíîâ), âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ðåöåïòîðàìè èíòåãðèíîâ CD54 (ICAM-1), CD50
(ICAM-3) è äð., îáåñïå÷èâàþò ïðî÷íóþ àäãåçèþ ëåéêîöèòîâ ñ äðóãèìè êëåòêàìè [4]. Ïðè èñïîëüçîâàíèè
èììóíîôåðìåíòíîãî ìåòîäà èññëåäîâàíèÿ, â ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè ïðè ÐÀ îáíàðóæèâàþòñÿ ïîâûøåííûå óðîâíè ðàñòâîðèìûõ ôîðì ìîëåêóë ICAM-1, ÷òî,
âåðîÿòíî, îáóñëàâëèâàåò àêòèâíîñòü ëèìôîöèòîâ ñèíîâèè è âûñîêèé óðîâåíü êîíòàêòíûõ âçàèìîäåéñòâèé
êëåòîê, ïðèâîäÿùèõ, â êîíå÷íîì èòîãå, ê ðàçâèòèþ
äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ. Èììóíîôëþîðåñöåíòíûì
ìåòîäîì, â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè âûÿâëÿåòñÿ êàê ïîâûøåííàÿ [8, 20], òàê è ïîíèæåííàÿ ýêñïðåññèÿ ICAM1 ëèìôîöèòàìè [19, 28]. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî
ðàçëè÷èÿ â ðåçóëüòàòàõ, ñ îäíîé ñòîðîíû, ÿâëÿþòñÿ
ñëåäñòâèåì ðàçíîðîäíîñòè èññëåäóåìûõ ãðóïï áîëüíûõ
ÐÀ. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, âåðîÿòíî, ïîâûøåííûé óðîâåíü
ýêñïðåññèè ICAM-1 ëèìôîöèòàìè ÏÊ îòðàæàåò íàëè÷èå ñèñòåìíîñòè ðåâìàòîèäíîãî ïðîöåññà âñëåäñòâèå
ìèãðàöèè àêòèâèðîâàííûõ ëèìôîöèòîâ èç ñóñòàâíîé
ïîëîñòè â êðîâÿíîå ðóñëî ïðè âûñîêîé àêòèâíîñòè çàáîëåâàíèÿ.  ïîëüçó ýòîãî çàêëþ÷åíèÿ ñâèäåòåëüñòâóåò çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè öèðêóëèðóþùèõ ìîëåêóë ICAM-1 è ICAM-3 â ÏÊ ïðè ðåâìàòîèäíîì âàñêóëèòå [30].
Àíòèðåâìàòè÷åñêàÿ òåðàïèÿ îêàçûâàåò ìîäóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ìåìáðàííûé ôåíîòèï ëèìôîöèòîâ. Â
êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå èç áàçèñíûõ ïðåïàðàòîâ ïðåäïî÷òåíèå îòäàåòñÿ ìåòîòðåêñàòó (ÌÒ). Ýòî îáóñëîâëåíî êàê óäîáñòâîì ïðèìåíåíèÿ, òàê è â áîëüøåé ñòåïåíè
åãî âûñîêîé êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòüþ [3]. Îí ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé àíàëîã ôîëèåâîé êèñëîòû è îòíîñèòñÿ
ê ãðóïïå àíòèìåòàáîëèòîâ, òî åñòü âåùåñòâ, áëèçêèõ
ïî õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðå ê åñòåñòâåííûì ìåòàáîëèòàì
îðãàíèçìà è êîíêóðèðóþùèõ c íèìè çà ó÷àñòèå â áèîõèìè÷åñêèõ ïðîöåññàõ [3].  ðåàëèçàöèè ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ÌÒ è åãî ìåòàáîëèòîâ âàæíîå
ìåñòî çàíèìàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà äèãèäðîôîëàòðåäóêòàçó (ÄÃÔ). Îäíàêî â äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ìåõàíèçì äåéñòâèÿ ìàëûõ
äîç ÌÒ â áîëüøåé ñòåïåíè îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ, êîòîðîå ðåàëèçóåòñÿ
ïîñðåäñòâîì ñâÿçûâàíèÿ àäåíîçèíîâûõ (ÀÇ) ðåöåïòîðîâ. Ñâÿçûâàíèå ñ À3 ðåöåïòîðîì ïðèâîäèò ê èíãèáèðîâàíèþ ñèíòåçà îñíîâíûõ ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ IFN-γ è ÔÍÎ-α [10], ñìåùåíèþ ñîîòíîøåíèÿ Th1/ Th-2 â ïðîâîñïàëèòåëüíóþ ñòîðîíó [14].  ðàíåå ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ íå îòìå÷àåòñÿ èçìåíåíèÿ êîëè÷åñòâà îñíîâíûõ ïîïóëÿöèé ëèìôîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè [1], à â ñèíîâèè ïîêàçàíî ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà CD3+, ÑD4+, CD8+, CD38+, CD68+-êëåòîê [27].
Êðîìå òîãî, íàáëþäàåòñÿ óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè îòäåëüíûõ ìîëåêóë àäãåçèè (E-ñåëåêòèí è VCAM-1) [11]
è àêòèâàöèè (HLA-DR) [7].
Îòäåëüíîé ïðîáëåìîé ëå÷åíèÿ ÐÀ ÿâëÿåòñÿ âòîðè÷íàÿ íåýôôåêòèâíîñòü òåðàïèè, êîòîðàÿ ðàçâèâàåòñÿ
ïîñëå ëå÷åíèÿ íåñêîëüêèìè áàçèñíûìè ïðåïàðàòàìè [3].
¹4/ ÒÎÌ1/2002
5
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
 1995ã. Jorgensen et al. [16] ïðåäëîæèë ãèïîòåçó ó÷àñòèÿ ãëèêîïðîòåèíà-Ð (Pgp-170), ïðîäóêòà ãåíà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè, â ðàçâèòèè
ëåêàðñòâåííîé íåýôôåêòèâíîñòè ïðè ÐÀ ïóòåì àêòèâèðîâàíèÿ ïîâûøåííîãî âûáðîñà õèìè÷åñêèõ âåùåñòâ
èç êëåòîê. Â ñâÿçè ñ ýòèì ìû ðåøèëè èññëåäîâàòü ýêñïðåññèþ Pgp-170 íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ, à òàêæå ïðîàíàëèçèðîâàòü âîçìîæíîå âëèÿíèå ÌÒ íà ýêñïðåññèþ ýòîãî
ãëèêîïðîòåèíà.
Òàêèì îáðàçîì, èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ÌÒ íà ôóíêöèîíàëüíî ñóùåñòâåííûå ïîâåðõíîñòíûå ìîëåêóëû ëåéêîöèòîâ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ ïðåäñòàâëÿåò îïðåäåëåííûé
èíòåðåñ. Îíî ïîçâîëèò ðàñøèðèòü ïðåäñòàâëåíèÿ î ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ÌÒ è ïîëó÷èòü äîïîëíèòåëüíûå
äàííûå î ïàòîãåíåçå ÐÀ.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû.  îòêðûòîå êîíòðîëèðóåìîå èññëåäîâàíèå ýêñïðåññèè àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ ïðè ÐÀ áûëè âêëþ÷åíû 20 áîëüíûõ ñ äîñòîâåðíûì ÐÀ, ñîãëàñíî êðèòåðèÿì Àìåðèêàíñêîé êîëëåãèè ðåâìàòîëîãîâ, ñ âûñîêîé è óìåðåííîé êëèíèêîëàáîðàòîðíîé àêòèâíîñòüþ çàáîëåâàíèÿ. Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà áîëüíûõ, âêëþ÷åííûõ â èññëåäîâàíèå, ïðåäñòàâëåíà â òàáëèöå 1. Âñå áîëüíûå íå ìåíåå 3 ìåñÿöåâ äî íà÷àëà è â ïåðèîä íàáëþäåíèÿ ïðîäîëæàëè ïîëó÷àòü ôîíîâóþ íåñòåðîèäíóþ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíóþ òåðàïèþ, ïðåèìóùåñòâåííî äèêëîôåíàê â ñðåäíèõ òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ. Ïðåäøåñòâóþùàÿ áàçèñíàÿ òåðàïèÿ îòìåíÿëàñü íå ïîçæå ÷åì çà 1
ìåñÿö äî íà÷àëà èññëåäîâàíèÿ âñëåäñòâèå íåýôôåêòèâíîñòè èëè íåïåðåíîñèìîñòè.
Âñåì áîëüíûì â êà÷åñòâå áàçèñíîé òåðàïèè áûë
íàçíà÷åí ìåòîòðåêñàò â äîçå 7,5-15ìã â íåäåëþ. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 18 çäîðîâûõ äîíîðîâ (ñðåäíèé âîçðàñò 53±16 ëåò). Äëÿ îöåíêè ýôôåêòèâíîñòè ïðîâîäèìîé òåðàïèè èñïîëüçîâàëè ñëåäóþùèå êðèòåðèè:
âûðàæåííîñòü áîëè â ñóñòàâàõ ïî 10-ñàíòèìåòðîâîé
âèçóàëüíîé àíàëîãîâîé øêàëå (ÂÀØ), âûðàæåííîñòü
óòîìëÿåìîñòè ïî ÂÀØ, äëèòåëüíîñòü óòðåííåé ñêîâàííîñòè (â ìèí.), ÷èñëî ïðèïóõøèõ ñóñòàâîâ, ÷èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ, èíäåêñ ïðèïóõëîñòè, ñèëà ñæàòèÿ
êèñòè (â êÏà), ðàçäåëüíàÿ îöåíêà òÿæåñòè ñîñòîÿíèÿ
âðà÷îì è ïàöèåíòîì ïî ãðàäàöèÿì 1 - ïðàêòè÷åñêè çäîðîâ, 2- ìèíèìàëüíûå èçìåíåíèÿ, 3 - óìåðåííûå, 4- ñðåäíåé òÿæåñòè, 5 - òÿæåëîå ñîñòîÿíèå, ÑÎÝ, óðîâíè ôèáðèíîãåíà, ñåðîìóêîèäà è Ñ-ðåàêòèâíîãî áåëêà, ðåâìàòîèäíûé ôàêòîð ïî äàííûì ëàòåêñ-òåñòà, ðàçäåëüíàÿ
îöåíêà ëå÷åáíîãî ýôôåêòà âðà÷îì è ïàöèåíòîì ïî ñëåäóþùèì ãðàäàöèÿì: çíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå, óëó÷øåíèå, íåçíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå, áåç ïåðåìåí, óõóäøåíèå. Äëÿ îöåíêè ïåðåíîñèìîñòè èñïîëüçóåìûõ ïðåïàðàòîâ îïðåäåëÿëè óðîâåíü ãåìîãëîáèíà, êîëè÷åñòâî
ëåéêîöèòîâ è òðîìáîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ëåéêîöèòàðíóþ ôîðìóëó, ñîäåðæàíèå â ñûâîðîòêå êðîâè
áèëèðóáèíà, àñïàðàãèíîâîé è àëàíèíîâîé òðàíñàìèíàç, êðåàòèíèíà; ïðîâîäèëè òàêæå îáùèå àíàëèçû
ìî÷è.
Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè ïîâåðõíîñòíûõ àíòèãåíîâ
ëåéêîöèòîâ íà ïîâåðõíîñòè ëåéêîöèòîâ îñóùåñòâëÿëîñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë ñåðèè
ICO (ÍÏÖ «ÌåäáèîÑïåêòð») ïðè ïîìîùè ïðÿìîé è
¹4/ ÒÎÌ 1/2002
íåïðÿìîé ðåàêöèé èììóíîôëþîðåñöåíöèè. Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè àíòèãåíà Pgp-170 ïðîâîäèëîñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë UIC2
(«Immunotech»).
Íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ ÑD3, ÑD4,
ÑD5, ÑD7, CD8, CD16, CD20; àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ CD25, CD26, CD71, HLA-DR, CD95; ìîëåêóë àäãåçèè CD11b, CD18, CD50, CD54, CD56; ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè Pgp-170. Íà
ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè:
àíòèãåíîâ CD11b, CD18, CD50, CD54, ÑD95, Pgp-170.
Ðåãèñòðàöèÿ êëèíè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé è çàáîð êðîâè ïðîâîäèëèñü äî íà÷àëà ëå÷åíèÿ è ïîñëå ïðåäïîëàãàåìîé ïîëíîé ðåàëèçàöèè êëèíè÷åñêîãî ýôôåêòà ìåòîòðåêñàòà - ÷åðåç 6 ìåñÿöåâ òåðàïèè.
Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäèëàñü íà ïåðñîíàëüíîì êîìïüþòåðå ñ èñïîëüçîâàíèåì
ïðîãðàììíîãî ïàêåòà Statisica 5.1. Ïðèìåíÿëèñü íåïàðàìåòðè÷åñêèå ìåòîäû (ðàíãîâàÿ êîððåëÿöèÿ ïî Ñïèðìåíó, òåñò Ìàííà-Óèòíè, Óèëêîêñîíà, òî÷íûé êðèòåðèé Ôèøåðà), äëÿ îïèñàíèÿ ðàñïðåäåëåíèÿ äàííûõ
áûëè èñïîëüçîâàíû ñðåäíÿÿ âåëè÷èíà (Ì) è ñòàíäàðòíîå îòêëîíåíèå (SD).
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå. Íà ïåðâîì ýòàïå ìû èññëåäîâàëè îñîáåííîñòè ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé çäîðîâûõ äîíîðîâ.
Ïðè îöåíêå èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ëèìôîöèòîâ
ìû îáíàðóæèëè çíà÷èìîå óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà
ÑD8+ëèìôîöèòîâ (áîëüíûå - 22,4±6,5% è çäîðîâûå 29,0±9,0%, Ð<0,05) (òàáëèöà 3) è òåíäåíöèþ ê óâåëè÷åíèþ èììóíîðåãóëÿòîðíîãî èíäåêñà (CD4/CD8) ó áîëüíûõ ÐÀ.
Êðîìå òîãî, íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ âûÿâëåíî óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè β2-èíòåãðèíîâ, àíòèãåíà CD18 (áîëüíûå -71,0±19,0%, çäîðîâûå 81,0±13,0%, Ð<0,05). Êîëè÷åñòâî CD11b+-ëèìôîöèòîâ îñòàâàëîñü â ïðåäåëàõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé, îäíàêî íàáëþäàëîñü óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè àíòèãåíà
Òàáëèöà 2
Äèíàìèêà êëèíè÷åñêèõ è ëàáîðàòîðíûõ ïîêàçàòåëåé
àêòèâíîñòè ÐÀ ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì
Êëèíè÷åñêèå è ëàáîðàòîðíûå
ïîêàçàòåëè
Áîëü, ïî ÂÀØ (0-10 ñì).
Óòðåííÿÿ ñêîâàííîñòü (ìèí.)
×èñëî ïðèïóõøèõ ñóñòàâîâ
×èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ
Èíäåêñ ïðèïóõëîñòè
Ñèëà ñæàòèÿ ïðàâîé êèñòè (êÏà)
Ñèëà ñæàòèÿ ëåâîé êèñòè (êÏà)
Óòîìëÿåìîñòü, ïî ÂÀØ (0-10 ñì).
Òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ
(îöåíêà áîëüíîãî)
Òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ (îöåíêà âðà÷à)
Ôèáðèíîãåí (ììîëü/ë)
Ñåðîìóêîèä (Åä)
ÑÎÝ (ìì/÷)
Ñ- ðåàêòèâíûé áåëîê (ìã%)
Ðåâìàòîèäíûé ôàêòîð (lîg òèòðà)
6,5±1,3
117,0±160,9
7,4±4,1
15,8±7,8
9,0±4,1
64,7±37,7
70,6±50,2
6,7±2,0
Ïîñëå
ëå÷åíèÿ
4,3±2,8**
86,9±118,8
2,7±2,8***
7,1±7,2***
2,7±2,8***
96,0±47,5**
92,0±50,5
5,6±2,2
3,5±0,6
2,4±1,0**
3,5±0,6
4,1±1,3
0,46±0,2
34,8±12,4
1,7±1,6
2,0±0,5
2,4±1,0***
4,0±0,8
0,35±0,1*
25,0±13,5
1,0±1,0*
1,7±0,9
Äî ëå÷åíèÿ
*Ð < 0,05, **Ð < 0,01 , ***Ð< 0,001.
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
6
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
CD50 (áîëüíûå - 75,2±15,0% , çäîðîâûå - 83,5±11,3%
Ð<0,05) è òåíäåíöèÿ ê ñíèæåíèþ ýêñïðåññèè àíòèãåíà
ÑD54 (òàáëèöà 3).
Íàøè ðåçóëüòàòû ñîâïàäàþò ñ äàííûìè áîëüøèíñòâà èññëåäîâàòåëåé [5, 19, 28], êîòîðûå îáíàðóæèëè
óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè ýòèõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë ëèìôîöèòàìè ÏÊ ó áîëüíûõ ÐÀ [5, 19] èëè íå âûÿâèëè çíà÷èìûõ îòëè÷èé ïî ñðàâíåíèþ ñ äîíîðàìè [28]. Îäíàêî, â ðàíåå ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ñ èñïîëüçîâàíèåì èììóíîôåðìåíòíîãî ìåòîäà, áûëà îáíàðóæåíà
ïîâûøåííàÿ êîíöåíòðàöèÿ öèðêóëèðóþùèõ ìîëåêóë
àäãåçèè ICAM-1 â ÏÊ. Ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ÷àñòü ðàñòâîðåííûõ ôîðì ìîëåêóë àäãåçèè èìååò ýíäîòåëèàëüíîå ïðîèñõîæäåíèå.
Ïðè èññëåäîâàíèè ôåíîòèïà ãðàíóëîöèòîâ â ãðóïïàõ áîëüíûõ ÐÀ è çäîðîâûõ äîíîðîâ çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé íå áûëî âûÿâëåíî. Ïî äàííûì ëèòåðàòóðû, ýêñïðåññèÿ àíòèãåíîâ CD11b, CD18 íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ
ïðè ÐÀ íå èçìåíåíà. Êðîìå òîãî, îáíàðóæèâàåòñÿ ïîâûøåíèå óðîâíåé ýêñïðåññèè ýòèõ àíòèãåíîâ íà ãðàíóëîöèòàõ, âûäåëåííûõ èç ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè [12].
Ïðè ñðàâíåíèè óðîâíåé ýêñïðåññèè ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ è çäîðîâûõ äîíîðîâ áûëè ïîëó÷åíû ñëåäóþùèå ðåçóëüòàòû. Ìû îáíàðóæèëè òåíäåíöèþ
ê ïðåîáëàäàíèþ ëèìôîöèòîâ è ãðàíóëîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ ìîëåêóëó Pgp-170, ó áîëüíûõ ÐÀ. Êîððåëÿöèîííûé àíàëèç íå âûÿâèë ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûõ
ñâÿçåé ýêñïðåññèè Pgp-170 ñ äðóãèìè ëåéêîöèòàðíûìè
àíòèãåíàìè. Íå áûëî îáíàðóæåíî ñâÿçåé óðîâíÿ ýêñïðåññèè Pgp-170 ñ êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûìè îñîáåííîñòÿìè ÐÀ, ïðåäøåñòâóþùåé òåðàïèåé, äåìîãðàôè÷åñêèìè îñîáåííîñòÿìè áîëüíûõ. Î âîçìîæíîì ó÷àñòèè
Òàáëèöà 3
Õàðàêòåðèñòèêà èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ëèìôîöèòîâ
çäîðîâûõ ëèö è áîëüíûõ ÐÀ (äî è ïîñëå ëå÷åíèÿ ÌÒ)
ÑDìàðêåð
ÑD3
ÑD4
CD5
CD7
ÑD8
CD4/8
ÑD11b
ÑD16
ÑD18
ÑD20
ÑD25
CD26
ÑD50
ÑD54
ÑD56
ÑD71
ÑD95
HLA-DR
Pgp170
Çäîðîâûå
N=18
65,6±11,4
35,2±10,2
61,3±10,8
58,6±14,1
29,0±9,0
1,3±0,6
20,2±9,9
11,1±6,2
81,0±13,0
8,1±3,2
4,9±5,1
25,2±12,2
83,5±11,3
9,3±6,6
5,8±3,5
3,7±3,4
25,6±12,3
9,1±2,9
2,5±1,9
Áîëüíûå ÐÀ
äî ëå÷åíèÿ
61,8±11,7
36,0±10,7
55,5±14,1
51,7±14,8
22,4±6,5
1,6±1,0
22,2±11,2
13,0±1,9
71,0±19,0
7,1±5,7
4,9±4,6
24,3±14,6
75,2±15,0
8,2±8,0
5,1±4,7
4,6±4,7
27,2±17,4
9,1±4,2
17,1±24,8
Áîëüíûå ÐÀ
ïîñëå ëå÷åíèÿ
58,7±15,6
31,9±11,3
46,1±18,4
48,3±13,4
20,3±8,6
2,1±1,0
22,3±18,9
12,0±9,4
55,9±25,1
6,6±3,2
3,4±3,7
15,7±12,2*
58,7±24,5*
6,5±4,6
5,3±5,0
3,8±4,3
15,0±15,7
8,2±4,7
23,3±27,3
*Ð < 0,05 – ïðè ñðàâíåíèè ðåçóëüòàòîâ äî è ïîñëå òåðàïèè
ìåòîòðåêñàòîì.
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
Pgp-170 â ïàòîëîãè÷åñêîì ïðîöåññå ïðè ÐÀ ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü îáíàðóæåíèå ïðÿìîé ñâÿçè ìåæäó óðîâíåì ýêñïðåññèè Pgp-170 ëèìôîöèòàìè ÏÊ è óðîâíåì
ôèáðèíîãåíà (R=0,54). Íàøè ðåçóëüòàòû ñîâïàäàþò ñ
äàííûìè äðóãèõ ó÷åíûõ [16, 18], êîòîðûå ïîëó÷èëè
ïîäîáíûå ðåçóëüòàòû. Íå áûëî íàéäåíî ëèòåðàòóðíûõ
äàííûõ îá ýêñïðåññèè Pgp-170 ãðàíóëîöèòàìè ÏÊ.
Èçâåñòíî, ÷òî áàçèñíûå ïðåïàðàòû, îäíèì èç êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ ìåòîòðåêñàò, èíäóöèðóþò êëèíè÷åñêóþ
ðåìèññèþ è ïðåäóïðåæäàþò ïîâðåæäåíèå ñóñòàâîâ è
òêàíåé ïðè ÐÀ. Íàðÿäó ñ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûìè, ÌÒ
îáëàäàåò èììóíîñóïðåññèâíûìè ñâîéñòâàìè, îäíàêî
òîíêèå ìåõàíèçìû åãî äåéñòâèÿ îñòàþòñÿ íåÿñíûìè. Â
ñâÿçè ñ ýòèì, íà ñëåäóþùåì ýòàïå íàøåé ðàáîòû, ìû
èññëåäîâàëè äèíàìèêó ëåéêîöèòàðíîãî ôåíîòèïà ïîä
âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ. Ìû íàáëþäàëè ñòàòèñòè÷åñêè
çíà÷èìóþ ïîëîæèòåëüíóþ äèíàìèêó áîëüøèíñòâà îñíîâíûõ êëèíè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé (áîëü â ñóñòàâàõ,
÷èñëî ïðèïóõøèõ, ÷èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ, èíäåêñ
ïðèïóõëîñòè, ñèëà ñæàòèÿ ïðàâîé êèñòè, òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ ïî îöåíêå âðà÷à è áîëüíîãî) è ëàáîðàòîðíûõ
(ñåðîìóêîèä, Ñ-ðåàêòèâíûé áåëîê) ïîêàçàòåëåé àêòèâíîñòè ÐÀ (òàáëèöà 2). Òåðàïèÿ îêàçàëàñü ýôôåêòèâíîé
ó 60% ïàöèåíòîâ: çíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå íàáëþäàëîñü ó 40%, óëó÷øåíèå - ó 10%, íåçíà÷èòåëüíîå - ó
10%. Ýôôåêò îò ëå÷åíèÿ îòñóòñòâîâàë ó 25% áîëüíûõ,
óõóäøåíèå çàôèêñèðîâàíî ó 15% áîëüíûõ. Ïåðåíîñèìîñòü ìåòîòðåêñàòà áûëà óäîâëåòâîðèòåëüíîé. Ñïåêòð
è ÷àñòîòà ïîáî÷íûõ ðåàêöèé â íàøåì èññëåäîâàíèè íå
îòëè÷àëèñü îò òàêîâûõ â äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [1].
Ìû ïîêàçàëè, ÷òî òåðàïèÿ ÌÒ íå îêàçûâàåò âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ,
òàêèõ êàê ÑD3+, ÑD4+, CD8+, ÑD16+, CD20+, ÷òî êîððåëèðóåò ñ äàííûìè ëèòåðàòóðû [17]. À ïðè èññëåäîâàíèè áèîïòàòîâ ñèíîâèè Balsa A. et al. [7] è Dolhain
R.et al. [11] âûÿâèëè óìåíüøåíèå èíôèëüòðàöèè ñèíîâèàëüíîé òêàíè ÑD4+- CD8+- ëèìôîöèòàìè íà ôîíå
òåðàïèè ÌÒ.
Òàêæå ìû îáíàðóæèëè, ÷òî ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè
ÌÒ îòìå÷àåòñÿ çíà÷èìîå ñíèæåíèå ïðîöåíòà ëèìôîöèòîâ ÏÊ, ýêñïðåññèðóþùèõ ìîëåêóëó àäãåçèè ICAM3 (CD50) ñ 75,2±15,0% äî 58,7±24,5%, Ð<0,05. Ðàíåå
áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÌÒ ïîäàâëÿåò ýêñïðåññèþ Å-ñåëåêòèíà è VCAM-1 [10]. Òàêèì îáðàçîì, íà ôîíå ëå÷åíèÿ
ÌÒ óìåíüøàåòñÿ ïðèòîê íîâûõ ïîðöèé ëèìôîöèòîâ â
âîñïàëåííóþ ñèíîâèþ, çà ñ÷åò åãî âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ îòäåëüíûõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë.
Êðîìå òîãî, ìû îáíàðóæèëè, ÷òî ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì óìåíüøàåòñÿ ýêñïðåññèÿ àêòèâàöèîííîãî àíòèãåíà CD26 ñ 24,3±14,6% äî
15,7±12,2%, Ð<0,05 (òàáëèöà 3). Ìû ïðåäïîëàãàåì, ÷òî
ñïîñîáíîñòü ÌÒ ìîäóëèðîâàòü öèòîêèíîâûé ïðîôèëü
îñóùåñòâëÿåòñÿ îò÷àñòè ïîñðåäñòâîì âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ ôåðìåíòà äèïåïòèäèëïåïòèäàçû 4 (ÑD26).
Ïðè èçó÷åíèè âëèÿíèÿ òåðàïèè ÌÒ íà ýêñïðåññèþ
îòäåëüíûõ àíòèãåíîâ íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ ó èññëåäóåìîé ãðóïïû áîëüíûõ ÐÀ ìû âûÿâèëè çíà÷èòåëüíîå
óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà äëÿ èíòåãðèíîâ, àíòèãåíà CD50 (ICAM-3) c 71,7±24,6% äî 56,2±24,3%,
Ð<0,05. Ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîé äèíàìèêè ýêñïðåñ¹4/ ÒÎÌ1/2002
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
Òàáëèöà 4
Õàðàêòåðèñòèêà ôåíîòèïà ãðàíóëîöèòîâ çäîðîâûõ ëèö è
áîëüíûõ ÐÀ (äî è ïîñëå ëå÷åíèÿ ÌÒ)
ÑDìàðêåð
Çäîðîâûå
N=18
Áîëüíûå ÐÀ äî
ëå÷åíèÿ
Áîëüíûå ÐÀ
ïîñëå ëå÷åíèÿ
ÑD11b
65,2±20,1
62,3±25,2
57,7±25,1
ÑD16
ÑD18
ÑD50
ÑD54
ÑD95
Pgp170
77,6±16,7
78,9±17,3
83,3±10,9
1,7±1,2
4,6±5,9
2,2±1,8
70,5±20,7
74,9±19,7
71,7±24,6
4,3±8,8
8,4±10,6
6,8±7,2
68,6±21,1
59,0±21,7
56,2±24,3*
3,8±4,5
3,3±3,8
16,1±22,7
*- P<0,05 â ãðóïïå áîëüíûõ ÐÀ ïðè ñðàâíåíèè ïîêàçàòåëåé
äî è ïîñëå òåðàïèè ÌÒ.
ñèè äðóãèõ èññëåäóåìûõ ìîëåêóë àäãåçèè âûÿâëåíî íå
áûëî (Òàáëèöà4). Íàøè ðåçóëüòàòû äîïîëíÿþò äàííûå
Storgaard M è ñîàâò. [27], êîòîðûå ïîêàçàëè, ÷òî òåðàïèÿ ÌÒ íå âëèÿåò íà ýêñïðåññèþ àíòèãåíîâ CD18,
CD11b íà íåéòðîôèëàõ ÏÊ ïðè ÐÀ.
Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî â ðåçóëüòàòå
òåðàïèè ÌÒ óìåíüøàåòñÿ èíòåíñèâíîñòü ìåæêëåòî÷íûõ âçàèìîäåéñòâèé ëåéêîöèòîâ è èõ ïðèòîê â ñèíîâèþ. Âîçìîæíî, ýòîò ïðîöåññ îñóùåñòâëÿåòñÿ îïîñðåäîâàííî, ïóòåì èçìåíåíèÿ öèòîêèíîâîãî áàëàíñà, òàê
êàê èçâåñòíî, ÷òî ÌÒ îêàçûâàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà ñèíòåç òàêèõ öèòîêèíîâ, êàê èíòåðëåéêèí-1,
ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè àëüôà, IFN-γ è äð.
Äàëåå ðåçóëüòàòû òåðàïèè ÌÒ áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû â çàâèñèìîñòè îò ïîêàçàòåëÿ ñèñòåìû ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè Pgp-170. Â
ãðóïïå áîëüíûõ ÐÀ íàáëþäàëàñü òåíäåíöèÿ ê óâåëè÷åíèþ ýêñïðåññèè Pgp-170 íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ è â áîëüøåé ñòåïåíè íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ, îäíàêî, ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîé äèíàìèêè ýòîãî àíòèãåíà ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ íå áûëî âûÿâëåíî. Áûëà îáíàðóæåíà
îòðèöàòåëüíàÿ êîððåëÿöèîííàÿ ñâÿçü ìåæäó ýêñïðåññèåé Pgp-170 ãðàíóëîöèòàìè ÏÊ ïîñëå ëå÷åíèÿ è ýôôåêòîì òåðàïèè ÌÒ(R=-0,50, P<0,05). Ðàíåå ïðîâîäèâøèåñÿ èññëåäîâàíèÿ âëèÿíèÿ ÌÒ íà ýêñïðåññèþ Pgp170 âûäåëåííûìè ëèìôîöèòàìè in vitro [33] òàêæå íå
îáíàðóæèëè çíà÷èìîé äèíàìèêè óðîâíÿ ýêñïðåññèè
ýòîãî àíòèãåíà. Ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ÌÒ íå ÿâëÿåòñÿ
ñóáñòðàòîì äëÿ Ðgp - òðàíñïîðòíîãî êàíàëà, à ðåçèñòåíòíîñòü ê ëå÷åíèþ ýòèì ïðåïàðàòîì ïðè ÐÀ îáóñëîâëåíà äðóãèìè ôàêòîðàìè.
Ìû ïîïûòàëèñü âûÿâèòü ïðè÷èíû îòñóòñòâèÿ òåðàïåâòè÷åñêîãî ýôôåêòà ó ÷àñòè áîëüíûõ ÐÀ. Ïðîâåäåííûé êîîðåëÿöèîííûé àíàëèç ïîçâîëèë âûÿâèòü îáðàòíóþ êîððåëÿöèþ ìåæäó óðîâíåì ýêñïðåññèè ìîëåêóëû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè HLADR íà ëèìôîöèòàõ äî ëå÷åíèÿ è ýôôåêòîì òåðàïèè
ÌÒ (R=-0,47, P<0,05). Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ïîâûøåííûå óðîâíè ýêñïðåññèè HLA-DR ÿâëÿþòñÿ ïðîãíîñòè÷åñêè íåáëàãîïðèÿòíûì ôàêòîðîì
ïðè íàçíà÷åíèè òåðàïèè ÌÒ.
¹4/ ÒÎÌ 1/2002
7
Âûâîäû. Îñîáåííîñòüþ ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè áîëüíûõ ÐÀ ÿâëÿåòñÿ áîëåå íèçêîå ïî ñðàâíåíèþ ñî çäîðîâûìè êîëè÷åñòâî CD8+ ïîçèòèâíûõ ëèìôîöèòîâ è îòíîñèòåëüíîå ïðåîáëàäàíèå ÑD4+ êëåòîê. Áûëî âûÿâëåíî óìåíüøåíèå ïðîöåíòà ÑD18+ è CD50+ -ïîçèòèâíûõ ëèìôîöèòîâ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñîîòâåòñòâóþò èìåþùèìñÿ ïðåäñòàâëåíèÿìè î ïàòîãåíåçå çàáîëåâàíèÿ è ìîãóò áûòü îáúÿñíåíû òåì, ÷òî ëèìôîöèòû, ýêñïðåññèðóþùèå ìîëåêóëû àäãåçèè, àêòèâíî ìèãðèðóþò â çîíû ðåâìàòîèäíîãî
âîñïàëåíèÿ, â ðåçóëüòàòå ÷åãî îáíàðóæèâàåòñÿ îòíîñèòåëüíîå óìåíüøåíèå ïðîöåíòà ýòèõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè.
Íàøå èññëåäîâàíèå ïîçâîëèëî äîïîëíèòü çíàíèÿ î
ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ìåòîòðåêñàòà. Ìû îáíàðóæèëè,
÷òî òåðàïèÿ ýòèì ïðåïàðàòîì îêàçûâàåò âëèÿíèå íà
ìåæêëåòî÷íûå âçàèìîäåéñòâèÿ ïîñðåäñòâîì óìåíüøåíèÿ ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà äëÿ èíòåãðèíà ICAM-3,
óìåíüøàÿ òåì ñàìûì ó÷àñòèå ëåéêîöèòîâ â èììóíîâîñïàëèòåëüíûõ ðåàêöèÿõ. Âàæíîé íàõîäêîé ÿâèëîñü
ñíèæåíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè äèïåïòèäèëïåïòèäàçû-4
(ÑD26) íà ëèìôîöèòàõ ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ.
Êðîìå òîãî, áûëî âûÿâëåíî, ÷òî èñõîäíûé óðîâåíü
ýêñïðåññèè ìîëåêóëû HLA-DR íà ëèìôîöèòàõ ìîæåò
îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ðåçóëüòàòû òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì ïðè ÐÀ. Ïðè íàèáîëåå âûñîêîé ýêñïðåññèè ýòèõ
ìîëåêóë, ñâèäåòåëüñòâóþùåé îá àêòèâíîì ïðåäñòàâëåíèè àíòèãåíîâ (è àóòîàíòèãåíîâ) èììóíîêîìïåòåíòíûì êëåòêàì, êëèíè÷åñêèé ýôôåêò áûë íàèìåíüøèì.
Íå áûëî îïðåäåëåíî ÷åòêîé çàâèñèìîñòè ðåçóëüòàòîâ òåðàïèè ÌÒ îò ïîêàçàòåëÿ ñèñòåìû ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè - Pgp-170. Ìîæíî
ïðåäïîëîæèòü, ÷òî, ëèáî ÌÒ íå ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì
äëÿ ýòîãî òðàíñïîðòíîãî êàíàëà, ëèáî åãî ôóíêöèÿ
ïðîÿâëÿåòñÿ ïðè íàëè÷èè äåôåêòîâ äðóãèõ òðàíñïîðòåðîâ, ó÷àñòâóþùèõ â âûáðîñå ðàçëè÷íûõ âåùåñòâ.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Íàñîíîâ Å.Ë. 50 ëåò ïðèìåíåíèÿ ìåòîòðåêñàòà â ðåâìàòîëîãèè. // Ðóññêèé Ìåäèöèíñêèé æóðíàë, 2000, ¹ 8-9, C.
372-376.
2. Íàñîíîâ Å.Ë., Ñàìñîíîâ Ì.Þ. è ñîàâò. Ðàñòâîðèìûå ìîëåêóëû àäãåçèè (Ð-ñåëåêòèí, ICAM-1 è ICAM-3) ïðè ðåâìàòîèäíîì àðòðèòå. // Òåð. àðõèâ, 1999, ¹ 5, C. 17-20.
3. Ñèãèäèí ß.À., Ëóêèíà Ã.Â. Áàçèñíàÿ (ïàòîãåíåòè÷åñêàÿ)
òåðàïèÿ ðåâìàòîèäíîãî àðòðèòà. Novartis pharma
services Inc., Ìîñêâà, 2000 - 100 ñ.
4. ßðèëèí À.À. Îñíîâû èììóíîëîãèè: Ó÷åáíèê. - «Ìåäèöèíà», Ìîñêâà,1999 - 608 ñ.
5. ßðèëèíà À.À. Ðîëü ìîëåêóë àäãåçèè â ïàòîãåíåçå ðåâìàòîèäíîãî àðòðèòà. // Íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêàÿ ðåâìàòîëîãèÿ,
2000, ¹ 1, Ñ. 61-69.
6. Afeltra A., Galeazzi M., Sebastiani G. et al. Coexpression of
CD69 and HLA-DR activation markers on synovial fluid T
lymphocytes of patients affected by rheumatoid arthritis: a
three-color cytometric analysis. // Int. J.Exp.Pathol. 1997,
78, ¹ 5, P. 331-336.
7. Balsa A., Gamallo C., Martin-Mola E. et al. Histologic changes
in rheumatoid synovitis induced by naproxen and
methotrexate. // J. Rheumatol., 1993, 20, ¹ 9, P. 1472-1477.
8. Carthy D., Taylor M.J., Bernhagen J. et al. Leucocytes integrin
and CR1 expression on peripheral blood leucocytes of
patients with rheumatoid arthritis. // Ann. Rheum. Dis., 1992,
51, ¹ 3, P. 307-312.
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
8
ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ
9. Cogalgil S, Taysi S. Sialic acid, intercellular adhesion
molecule-1 and rheumatoid arthritis: a study on the
erythrocyte membrane. // Clin. Chem. Lab. Med., 2002, 40,
¹ 4, P. 356-360.
10. Cutolo Ì., Sulli A., Pizzorni C. et al. Anti-inflammatory
meñhanisms of methotrexate in rheumatoid arthritis. // Ann.
Rheum.Dis., 2001, 60, P. 729-735.
11. Dolhain R., Tak P., Dijkmans B. et al. Methotrexate reduces
inflammatory cell numbers, expression of monokines and
of adhesion molecules in synovial tissue of patients with
rheumatoid arthritis. // Br. J. Rheumatol., 1998, 37, ¹ 5, P.
502-508.
12. Gendt C., Clerck L., Bridts C. et al. Relationship between
interleukin-8 and neutrophil adhesion molekyles in
rheumatoid arthritis. // Rheumatol. Int., 1996, ¹ 16, P. 169173.
13. Gerli R., Muscat C., Bertotto A. et al. CD26 surface molecule
involvement in T cell activation and lymphokine synthesis
in rheumatoid and other inflammatory synovitis. // Clin.
Immunol. Immunopathol., 1996, 80, ¹ 1, P. 31-37.
14. Hildner K., Finotto S, Becker C. et al. Tumor necrosis factor
(TNF) production by Tcell receptor-primed T lymphocytes
is a target for low dose methotrexate in rheumatoid arthritis.
// Clin. Exp. Immunol., 1999, 118, ¹ 1, P. 137-146.
15. Isomaki Ð., Aversa G., Cocks B. et al. Increased expression
of signaling lymphocytic activation molecule in patients with
rheumatoid arthritis and its role in the regulation of cytokine
production in rheumatoid synovium. // J. Immunol., 1997,
159, ¹ 6, P. 2986-2993.
16. Jorgensen C., Sun. R., Rossi J.F. et al. Expression of
multidrug resistance gene in human rheumatoid synovium.
// Rheumatol. Int., 1995, 15, ¹ 2, P. 83-86.
17. Lacki J., Mackiewicz S., Wiktorowicz U. et al. Lymphocyte
phenotype studies of rheumatoid arthritis patients treated
with methotrexate. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz),
1994, 42, ¹ 4, P. 287-290.
18. Llorente L., Richaud-Patin Y., Diaz-Borjon A., et al. Increased
P-glycoprotein activity in lymphocytes from rheumatoid
arthritis patients might influence disease outcome. // Joint
Bone Spine, 2000, 67, P. 30-39.
19. Macey M., Wilton J., Carbon R. et al. Leucocyte activation
and function-associated in inflammatory disease. // Agent
Action, 1993, 38, P.39-40.
20. Mason J.C. Karahi P., Hascard D.O. Detection of increased
levels of circulating intercellular adhesion molecule 1 in some
patients with rheumatoid arthritis but not in patients with
ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË
systemic lupus erythematosus. // Arthritis Rheum., 1993, 36,
P. 519-527.
21. Masuco-Hongo K., Sekine T., Ueda S. et al. Long-term
persistent accumulation of CD8+ T cells in synovial fluid of
rheumatoid arthritis. // Ann. Rheum. Dis., 1997, 56, ¹ 10, P.
613-621.
22. Mizokami A., Eguchi K., Kawakami A. et al. Increased
population of high fluorescence 1F7 (CD26) antigen on T
cells in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis.
// J. Rheumatol., 1996, 23, ¹ 12, P. 2022-2026.
23. Muscat C., Bertotto A., Agea E. et al. Expression and
functional role of 1F7 (CD26) antigen on peripheral blood
and synovial fluid T cells in rheumatoid arthritis patients. /
/ Clin. Exp. Immunol., 1994, 98, ¹ 2, P. 252-256.
24. Panayi G.S. T-cell-dependent pathways in rheumatoid
arthritis. // Current opinion in Rheumatology., 1997, ¹ 9,
P. 236-240.
25. Paulus H., Egger M., Ward J. et al. Analisis of improvment
in individal rheumatoid arthritis patients treated with diseasemodifyng antirheumatic drugs, based on the findings in
patients treated with placebo. // Arthritis Rheum., 1990, 33,
P. 477- 484.
26. Sfikakis P., Charalambopoulos D., Vaiopoulos G. et al.
Circulating P- and L-Selectin and T-Lymphocyte Activation
in Patients with Autoimmune Rheumatic Diseases. // Clin.
Rheumatol.,1999, 18, P. 28-32.
27. Storgaard M., Jensen M., Stengaard-Pedersen K. et al.Effects
of methotrexate, sulphasalazine and aurothiomalate on
polymorphonuclear leucocytes in rheumatoid arthritis. //
Scand. J. Rheum., 1996, 25, P. 168-173.
28. Takahashi H., Soderstrom K., Nilsson E. et al. Integrins and
other adhesion molecules on lymphocytes from synovial
fluid and peripheral blood of rheumatoid arthritis patients.
// Eur.J.Immunol., 1992, 22, ¹ 11, P. 2879-2885.
29. Tanaka S., Murakami T., Horikawa H. et al. Suppression of
arthritis by inhibitors of dipeptidylpeptidase 4. // Int. J.
Immunopharmacol., 1997, 19, P. 15-24.
30. Voskuyl A., Martin S., Melchers I. et al. Levels of circulating
intercellular adhesion molecule-1 and -3 but not circulating
endothelial leucocytes adhesion molecule are increased in
patients with rheumatoid vasculitis. // Br. J. of Rheumatol.,
1995, 34, P. 311-315.
31. Yudoh K., Matsuno H., Nakazawa F. et al. Increased
expression of multidrug resistance of P-glycoprotein on Th1
cells correlates with drug resistance in rheumatoid arthritis.
// Arthritis Rheum., 1999, 42, ¹ 9, P. 2014-2018.
¹4/ ÒÎÌ1/2002