инструкцию к набору

(812) 412-8380
www.olvex-d.ru
АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА
Кат. №: 002.004 - 50 мл
Кат. №: 002.024 - 200 мл
Кат. №: 002.034 - 500 мл
Количество определений зависит
от характеристик используемого анализатора
и минимального рабочего объема кюветы.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор
«АСТ-4-ОЛЬВЕКС»
предназначен
для
количественного определения активности аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке или плазме
крови человека энзиматическим кинетическим методом
с использованием альфа-кетоглутарата в качестве
стартового реагента в клинической лабораторной
диагностике.
Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан
на проведение 50, 200 или 500 определений при расходе 1
мл рабочего реагента на один анализ.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА
Перед проведением анализа содержимое одного
флакона с Реагентом 2 растворить в содержимом одного
флакона с Реагентом 1 при аккуратном перемешивании.
Рабочий реагент готов к применению через 20 мин после
растворения.
Полученный рабочий реагент стабилен при +2-8 °С в
защищенном от света месте в плотно закрытом флаконе не
менее 14 дней.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Под действием фермента аспартатаминотрансферазы
(АСТ) в результате переаминирования происходит
перенос аминогруппы с аспартата на α-кетоглутарат.
Образующийся в данной реакции оксалоацетат при участии
фермента малатдегидрогеназы (МДГ) и кофермента
НАДН2 превращается в малат. Скорость окисления НАДН2
в ходе второй реакции определяется по уменьшению
оптической плотности реакционной среды при 340 нм и
пропорциональна активности аспартатаминотрансферазы.
СХЕМА РЕАКЦИИ
АСТ
L-аспартат + α-кетоглутарат ___> оксалоацетат + L-глутамат
МДГ
оксалоацетат + НАДН + Н+ _________> малат + НАД
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1 (буфер-субстратный раствор).
Реагент 2 (фермент-кофакторная смесь (лиофилизат).
Реагент 3 (стартовый реагент).
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Реакция линейна в течение 3-х мин в диапазоне активности
АСТ от 5 до 190 Е/л.
Отклонение от линейности не превышает 5%.
Чувствительность не более 3 Е/л.
Коэффициент вариации не более 5%.
Качество набора может проверяться на отечественных или
зарубежных контрольных сыворотках с аттестованным по
данному методу показателем.
Нормальные величины активности АСТ в сыворотке или
плазме крови у мужчин – от 10 до 37 Е/л, у женщин – от 10
до 31 Е/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон
нормальных величин для обследуемого контингента.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка или плазма крови.
Активность АСТ в сыворотке или плазме крови снижается
после 3-х дней хранения: при +2-8 °С на 10%, при +18-25 °С
на 17%.
Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после
каждого использования!
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Исследование проводить непосредственно в термостатируемой при +37 °С фотометрической кювете с длиной
оптического пути 1 см при длине волны 340 нм против
воздуха или воды.
Смешать 1 мл рабочего реагента и 0,1 мл анализируемого
материала. Через 1 минуту добавить 0,1 мл стартового
реагента, тщательно перемешать и через 1 минуту считать
величины экстинкции с интервалом в 1 минуту в течение
3-х минут. Вычислить среднее изменение экстинкции за 1
минуту (&Е/мин).
РАСЧЕТ
Активность фермента АСТ рассчитать по формуле:
Ед/л=1905 х ΔЕ340нм/мин
где: 1905 - фактор пересчета;
ΔЕ340нм/мин - изменение оптической плотности в минуту.
Если &Е/мин при запуске реакции образцом превышает
0,100 Abs разведите исследуемый образец физиологическим раствором в 10 раз и повторите анализ; результат
умножьте на фактор разведения 10.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятияизготовителя при +2-8 °С в защищенном от света месте в
течение всего срока годности.
Срок годности набора – 18 месяцев.
Реагенты 1 и 3 после вскрытия флаконов стабильны не
менее 3-х мес. при +2-8 °С в защищенном от света месте.
Рабочий реагент стабилен при +2-8 °С не менее 14 дней и
хранении в плотно закрытом флаконе.