gpt / alt liquid - ооо нпк «глакор

Аспартатаминотрансфераза
Кинетический метод для определения Аспартатаминотрансферазы
(АСТ) в сыворотке или плазме, рекомендуемый Международной
Федерацией Клинических Химиков (IFCC)
ООО НПК «ГЛАКОР» (Каталожный номер 102500)
Принцип метода:
Принцип определения уровня АСТ в сыворотке или плазме, реализованный в диагностическом наборе, представлен на схеме:
АСТ
α-кетоглутаровая кислота + L-аспартат ≡≡≡≡≡≡► L-глутамат + оксалоацетат
МДГ
оксалоацетат + NADH+ + Н+ ≡≡≡≡≡≡≡≡► L-малат + NAD+
Как следует из представленной схемы, АСТ образует оксалоацетат и
L-глутамат, катализируя обратимый перенос аминогрупп. Далее малатдегидрогеназа (МДГ) образует L-малат, при этом NADH+ переходит
в окисленную форму NAD+, что изменяет оптическую плотность раствора при 340 нм. Активность АСТ зависит от скорости образования
NAD+.
Состав набора
Диагностический набор содержит следующие компоненты:
Реагент 1 (4 x 100 мл). Ферментный раствор;
Реагент 2 (1 x 100 мл). Раствор с субстратом.
Концентрации субстанций в растворе монореагента:
Tрис-HCl буфер, pH=7,8 80 ммоль/л;
L-Аспартат, 240 ммоль/л;
α-Keтоглутаровая кислота, 12 ммоль/л;
NADH, 0,18 ммоль/л;
МДГ ≥ 600 Ед./л;
ЛДГ ≥ 1200 Ед./л;
Стабилизаторы и консерванты.
Приготовление реактивов
Реагент 1 и реагент 2 готовы к применению. В том случае, если пользователь предпочитает использовать монореагент, реагенты должны
быть смешаны в отношении 4R1+1R2 (4 объёма реагента 1 + 1 объём
реагента 2; например: 400 мл реагента 1 смешать с 100 мл реагента 2).
Образец для исследования
Диагностический набор предназначен для определения АСТ в
сыворотке или плазме с ЭДТА или гепарином. Пробирки с кровью
следует держать закрытыми в вертикальном положении. Сыворотку и
плазму необходимо тщательно отделить от клеточных элементов
крови, желательно не позднее, чем через два часа после взятия крови
у пациента. Образцы не должны содержать признаков гемолиза. В том
случае, если исследование по каким-то причинам не было
завершено в течение 24 часов или есть необходимость сохранять
образцы дольше, то их следует заморозить до температуры от -15…20°C. Размораживать образцы можно только один раз. Сыворотка
также может храниться при +2…+8оC с потерей активности 10% в
течение 3-х суток.
Ход определения
Для определения АСТ возможно использовать одну из двух представленных ниже процедур:
Процедура с монореагентом
25/30оC
37 оC
Рабочий реагент, мл
1,0
1,0
Образец, мл
0,2
0,1
Смешать и через минуту определите начальное поглощение и
запустите секундомер. Определите поглощение через 1, 2 и 3
минуты. Длина волны 340 нм, оптический путь 1 см, в качестве
бланка следует использовать воду.
37 оC
Процедура с двумя реагентами
25/30оC
Реагент 1, мл
1,0
1,0
Образец, мл
0,2
0,1
Инкубировать смесь в течение минуты, затем следует добавить
Реагент 2, мл
0,25
0,25
Смешать и через минуту определите начальное поглощение и
запустите секундомер. Определите поглощение через 1, 2 и 3
минуты. Длина волны 340 нм, оптический путь 1 см, в качестве
бланка следует использовать воду.
Вычисление результатов
Определите ΔА/мин для каждого считывания и вычислите среднее значение. Активность АСТ вычисляется в ед./л. Вычислите по формуле из
таблицы активность АСТ для разных процедур:
Процедура с монореагентом
Длина волны
25/30оC
340 нм
(ΔА/мин)x 952=Ед./л
334 нм
(ΔА/мин)x 971= Ед./л
365 нм
(ΔА/мин)x1765= Ед./л
Процедура с двумя реагентами
Длина волны
25/30оC
340 нм
(ΔА/мин)x1151= Ед./л
334 нм
(ΔА/мин)x1173= Ед./л
365 нм
(ΔА/мин)x2132= Ед./л
37 оC
(ΔА/мин)x1745=Ед./л
(ΔА/мин)x1780= Ед./л
(ΔА/мин)x3235= Ед./л
37 оC
(ΔА/мин)x2143= Ед./л
(ΔА/мин.x2184= Ед./л
(ΔА/мин)x3971= Ед./л
Интерпретация
Нормальные значения АСТ кинетическим методом представлены в
таблице ниже:
Нормальные значения
Температура
Мужчины
Женщины
25оC
≤18 Ед./л
≤15 Ед./л
30 оC
≤25 Ед./л
≤21 Ед./л
37 оC
≤37 Ед./л
≤31 Ед./л
Аспартатаминотрансфераза (AСAT/AСT), ранее называвшаяся Глутамат-оксалоацетаттрансаминаза (GOT), в большом количестве присутствует сердце, скелетных мышцах, печени. Повышение уровня AСT
может происходить при повреждениях миокарда или скелетных
мышц, а также при повреждении паренхимы печени. Следовательно,
параллельное измерение AСT и AЛT применяется для дифференциации повреждения печени от повреждения сердечной или скелетных мышц.
Аналитические характеристики
Аналитические характеристики продукта зависят от реагента, используемого оборудования и техники выполнения.
Следующие данные получены при использовании мануальной техники
определения:
Коэффициент вариации внутри одной серии = 1,93%;
Межсерийный коэффициент вариации = 2,14%;
Чувствительность при определении АСТ составляет 5 Ед./л.
Линейность при длине волны 340 нм достигается когда ΔА/мин<0,16. В
тех случаях, когда исследуются образцы с высокой активностью, следует развести образец физиологическим раствором в 10 раз, повторить исследование еще раз, а результат необходимо умножить на 10.
Хранение и стабильность
Все компоненты набора следует хранить при температуре 2-8оC, в
этом случае они стабильны до даты, указанной на флаконе. После
приготовления монореагент стабилен в течение пяти недель при
+2…+8оC и одну неделю при комнатной температуре в затемнённом
месте.
Контроль качества
Следует использовать ежедневный контроль качества. Для этой цели
следует применять следующие контрольные образцы:
Control normal Diacon N 12 x 5 ml;
Control abnormal Diacon P 12 x 5 ml.
Литература:
1. Tietz, N. W., Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1995).
2. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Procedures for the Handling and Processing of
Blood Specimens, Approved Guideline, NCCLS publication H18-A, Villanova, PA (1995).
3. National Committee for Clinical Laboratory Standards, How to Define, Determine, and Utilize
Reference Intervals in the Clinical Laboratory, Approved Guideline, NCCLS publication C28-A, Villanova,
PA (1994).
4. Tietz, N. W., ed., Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA
(1987).
5. Henry, J. B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 18th Edition, W. B. Saunders
Company, Philadelphia, PA (1991).
6. Young, D. S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th Edition, AACC Press, Washington, D. C.
(1995).
7. Friedman, R. B., Young, D. S., Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests, 3rd Edition, AACC Press,
Washington, D.C. (1997).
8. Young, D. S., Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests, 2nd Edition, AACC Press,
Washington, D. C. (1997).
9. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Precision Performance of Clinical Chemistry
Devices, Tentative Guideline, 2nd Edition, NCCLS publication EP5-T2, Villanova, PA (1992).
Диагностический набор для определения АСТ отличается от аналогичных
реагентов надёжностью, а также высокими стабильностью и
воспроизводимостью
Производитель DIALAB GmbH (Austria) по заказу ООО НПК «ГЛАКОР»
ООО НПК «ГЛАКОР»; 656031, Россия, Барнаул, Шевченко, 152; тел./факс (3852)62-24-04 ; www.glacor.com; e-mail: [email protected]