ME BLVS_ver 0413_RU_doc3094

Общая информация
Компоненты
Меры предосторожности
Тест-система предназначена для выявления антител
против вируса лейкоза (BVL) в индивидуальных
образцах сыворотки крови, а также в пуле из 10
сывороток крови КРС.
Компоненты*
Описание и принцип действия
Положительный контроль
Микропланшет, с адсорбированным в лунках BLV
1.
Не пипетировать растворы ртом.
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
кожи в случае контакта.
3.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M) может вызвать серьезные
ожоги кожи (R35). При попадании на кожу и в глаза
следует немедленно промыть их большим
количеством воды и обратиться за медицинской
помощью(S26).
Концентрат коньюгата (10 х)
Отрицательный контроль
Лунки микропланшета адсорбированы BVL антигеном.
Буферный раствор 2
При внесении в лунки микропланшета образцов и
контролей
исследуемых
сывороток,
Буферный раствор 3
Концентрат промывочного раствора (20 х)
твердой фазе с антигеном, образуя комплексы антиген –
4.
Субстратный раствор
5.
После этапа промывки в лунки вносится конъюгат,
пероксидазой,
который
связывается
* Поставляемые количества компонентов обозначены на
этикетке комплекта
хранят при Т +5°C (± 3°C).
раствор
(ТМБ).
Реакцию
2. Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.
останавливают, добавляя стоп-реагент.
3. Все компоненты, имеющие одинаковые наименования
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
(промывочный раствор, растворители) могут применяться
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
ко всей гамме продукции IDvet.
Дополнительные материалы и
оборудование не поставляемые с наборами
цвет, который становится желтым после
1.
отсутствии
антител
Пипетки
одноканальные
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
добавления стоп-реагента;
раствор
окрашивается.
±
5)°C
и
90 мкл Буфера для разведения 2 в каждую
лунку.
1.
2.
Внести:
-
10 мкл Отрицательного контроля в лунки A1 и
B1.
Дезактивировать все реагенты перед уничтожением.
-
10 мкл Положительного контроля в лунки C1
и D1.
Подготовка образцов
-
10 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
Инкубировать 45 мин ± 4 мин при температуре
21°C (± 5°C).
3.
Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
рекомендуется предварительно внести все образцы и
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
внести
многоканальным
дозатором
в
рабочий
микропланшет.
Ночная инкубация (индивидуальные
сыворотки крови и пул сывороток)
1.
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
не
комнатной
температуры
(+21С°
(±5°C)
перед
разведением. При наличии кристаллов необходимо
тщательно перемешать.
-
190 мкл Буфера для разведения 2 в каждую
лунку.
-
10 мкл Отрицательного контроля в лунки
A1 и B1.
-
10 мкл Положительного контроля в лунки C1
и D1.
Для приготовления промывочного раствора
(1X)
необходимо развести концентрат промывочного раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
2.
образцы
Внести:
Подготовка промывочного раствора
При наличии антител раствор имеет синий
При
(21
Внести:
Доведите концентрат промывочного раствора (20х) до
антител специфичных к вирусу лейкоза :
-
Не оставлять субстратный раствор под действием
прямого солнечного света и не допускать его
окисления.
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный раствор
конъюгат. После отмывки микропланшета в лунки
субстратный
температуру
Короткая инкубация (индивидуальные образцы
сыворотки крови и пул сывороток)
с
антителами , образуя комплексы антиген – антитело –
-
иметь комнатную
перемешаны.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5M)
антитело.
добавляют
Все реагенты набора перед использованием должны
антитела,
специфичные к вирусу лейкоза (BVL) связываются на
меченный
Процедура анализа
10 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
Инкубировать от 16 до
температуре +4С°C (± 2°C).
20
часов
при
Дальнейшие операции одинаковы как для дневной,
так и для ночной инкубации
микропланшета.
Оптическую плотность раствора измеряют
фотометрически при длине волны 450 нм.
Страница 2
BLVS версия 0413 RU
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
5.
Ручная или автоматическая промывочная установка.
3.
Подготовить коньюгат (1Х) разведением
концентрата
коньюгата
(10Х)
буферным
раствором 3 в соотношении 1:10
4.
Промыть микропланшет 3 раза Промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
Страница 3
BLVS версия 0413 RU
5.
Внести 100 мкл Конъюгата (1X) в каждую лунку.
6.
Инкубировать 30 мин ± 3 мин при 21°C (± 5°C).
7.
Промыть микропланшет 3 раза Промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
Интерпретация результатов
Для каждого образца рассчитывается значение S/P:
ОПобразца - ОПКS/P % =
8.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в каждую
лунку.
9.
Инкубировать 15 мин ± 2 мин при 21°C (± 5°C) в
темноте.
10.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для остановки реакции.
11.
Измерить оптическую плотность (ОП) при 450
нм.
Валидация
Результаты теста считаются достоверными, если:
среднее
значение
оптической
плотности
X 100%
ID Screen® BLV Indirect
ОПК+ - ОПК-
Для ночной и дневной инкубации:
......
Значение S/P
Интерпретация
результата
S/P % < 50%
отрицательный
S/P % ≥ 50%
положительный
Тест-система диагностическая иммуноферментная для выявления
антител против вируса лейкоза (BVL) в индивидуальных образцах
сыворотки крови или в пулах из 10 сывороток крови крупного рогатого
скота, непрямым методом иммуноферментного анализа ELISA
положительного контроля (ОПк+) больше 0,350:
ОПк+ > 0,350
Короткая или ночная инкубация
отношение между средними значениями ОП
положительного контроля (ОПК+) и отрицательного
Для применения in vitro
контроля (ОПк-) больше 3:
ОПК+ / ОПК- > 3
BLVS версия 0413 RU
Страница 4
BLVS версия 0413 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: [email protected]