Insert MG_ver 0913_RU_doc4141

Общая информация
Компоненты
Меры предосторожности
Процедура анализа
Все реагенты набора перед использованием должны
Тест-система предназначена для выявления антител к
M. gallisepticum в образцах сыворотки крови кур и
индеек.
Компоненты*
1.
Не пипетировать растворы ртом.
Микропланшет, покрытый антигеном Mycoplasma
gallisepticum
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
кожи в случае контакта.
Описание и принцип действия
Концентрат коньюгата (10 х)
3.
Лунки
микропланшета
адсорбированы
рекомбинантным антигеном M. gallisepticum.
Положительный контроль
Стоп-реагент (0,5 M) может вызвать серьезные ожоги
кожи (R22-43). Избегать контакта с кожей (S24-37)
4.
При внесении в лунки микропланшета образцов и
контролей
исследуемых
сывороток,
антитела,
специфичные к M. gallisepticum связываются на твердой
фазе с антигеном, образуя комплексы антиген –
антитело.
Буферный раствор 14
Не оставлять субстратный раствор под действием
прямого солнечного света и не допускать его
окисления.
5.
Все одноразовые материалы, используемые в
работе, необходимо продезинфицировать в 5%
растворе натрия гипохлорида за 1 час до начала
работы или автоклавировать при температуре
+1200С.
После этапа промывки в лунки вносится конъюгат,
меченный пероксидазой, который связывается с
антителами, образуя комплексы антиген – антитело –
конъюгат. После отмывки микропланшета в лунки
добавляют субстратный раствор (ТМБ). Реакцию
останавливают, добавляя стоп-реагент.
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
антител специфичных к M. gallisepticum:
-
-
При наличии антител раствор имеет синий
цвет, который становится желтым после
добавления стоп-реагента;
При отсутствии
окрашивается.
антител
раствор
Оптическую
плотность
раствора
фотометрически при длине волны 450 нм.
Отрицательный контроль
Буферный раствор 3
Концентрат промывочного раствора (20 х)
Субстратный раствор
Стоп-реагент ( 0,5M)
* Поставляемые количества компонентов обозначены на
этикетке комплекта
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный раствор
хранят при Т +5°C (± 3°C).
2. Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.
1. Исследуемые образцы необходимо предварительно
развести в Буферным растворе 14 в обычном
планшете. Внести:
-
(промывочный раствор, растворители) могут применяться
ко всей гамме продукции IDvet.
Внести по 100 мкл разведенных образцов, как
описано выше, в каждую лунку
рабочего
микропланшета.
3.
Закрыть микропланшет и инкубировать 30 мин ± 3
мин при температуре 21°C (± 5°C).
Подготовка образцов
Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
рекомендуется предварительно внести все образцы и
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
внести
многоканальным
дозатором
в
рабочий
микропланшет.
Дополнительные материалы и
1.
Пипетки
одноканальные
Подготовка промывочного раствора
Доведите концентрат промывочного раствора (20х) до
оборудование не поставляемые с наборами
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
245 мкл Буфера для разведения 14 в каждую лунку.
5 мкл Отрицательного контроля в лунки A1 и B1.
5 мкл Положительного контроля в лунки C1 и D1.
5 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
2.
4.
Подготовить
конъюгат
(1X)
разведением
концентрата конъюгата (10X) в соотношении 1:10 в
Буферном растворе 3.
5.
Опустошить лунки. Промыть микропланшет 3 раза
Промывочным раствором, внося 300 мкл в каждую
лунку. Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
6.
Внести 100 мкл Конъюгата (1X) в каждую лунку.
3. Все компоненты, имеющие одинаковые наименования
не
измеряют
иметь комнатную температуру (21 ± 5°C) и однородность
(встряхнуть флакон перед применением).
комнатной
температуры
(+21С°
(±5°C)
перед
разведением. При наличии кристаллов необходимо
тщательно перемешать.
Для приготовления промывочного раствора
(1X)
необходимо развести концентрат промывочного раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
7.
Закрыть микропланшет и инкубировать 30 мин ± 3
мин при 21°C (± 5°C).
8.
Опустошить лунки. Промыть три раза Промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку. Избегать
высыхания лунок между этапами промывки.
9.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в каждую
лунку.
10. Инкубировать 15 мин ± 2 мин при 21°C (± 5°C) в
темноте.
микропланшета.
Страница 2
MG версия 0913 RU
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
11. Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку для
остановки реакции.
5.
Ручная или автоматическая промывочная установка.
12. Измерить оптическую плотность (ОП) при 450 нм.
Страница 3
MG версия 0913 RU
Certified
management
system
Валидация
Интерпретация результатов
Результаты теста считаются достоверными, если:
Для каждого образца рассчитывается значение S/P и титр
антител:
среднее
значение
оптической
плотности
положительного контроля (ОПк+) больше 0,250:
1) Значение S/P
ОПк+ > 0,250
S
отношение между средними значениями ОП
P
=
ID Screen®
Mycoplasma gallisepticum
Indirect
ОП пробы − ОП к −
ОП к + − ОП к −
положительного контроля (ОПК+) и отрицательного
контроля (ОПк-) больше 3:
2) Титр антител
ОПК+ / ОПК- > 3
log
10
( титр) = 0.91× log ( S ) + 3.200
P
10
ТИТР = 10log10 (ТИТР )
Тест-система для выявления антител к Mycoplasma gallisepticum в
сыворотке крови кур и индеек непрямым иммуноферментным методом
(ELISA)
Интерпретация результатов:
S/P
Титр антител
Иммунный
статус
S/P < 0.5
Титр < 843
Отрицательный
S/P ≥ 0.5
Титр ≥ 843
Положительный
Примечание: положительные образцы могут
быть подтверждены другими методами,
например, реакцией агглютинации.
Для применения in vitro
Декабрь 2013:
- Формула для расчета титра антител
Сентябрь 2013:
- новый протокол и значения cut-off
MG ver 0913 RU
Страница 4
MG версия 0913 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: [email protected]