Insert NCS-MS_ver 0214_RU_doc4384

Общая информация
Компоненты
Меры предосторожности
Процедура анализа
Данная тест-система предназначена для выявления
антител к Neospora caninum в сыворотке и плазме
крови КРС, МРС и собак, а также в молоке КРС. По
вопросам использования биологического материала
от разных животных, пожалуйста, обращайтесь в
ООО ИнтерЛабСервис.
Компоненты*
1.
Не пипетировать растворы ртом.
Сыворотка и плазма крови
Микропланшет, с адсорбированным в лунках
антигеном P30 Toxoplasma gondii
2.
Субстратный
раствор
может
вызвать
раздражение кожи в случае контакта.
Концентрат коньюгата (10 х)
3.
Описание и принцип действия
Отрицательный контроль
Стоп-реагент (0,5 M) может быть опасным при
глотании. Избегать контакта с кожей (S24-37).
При
контакте
с
кожей
возможна
чувствительность (R22-43).
Все реагенты набора перед использованием
должны иметь комнатную температуру (21 ± 5)°C и
перемешаны.
Лунки
микропланшета
покрыты
очищенным
экстрактом Neospora caninum. При внесении в лунки
микропланшета образцов исследуемых сывороток,
антитела, специфичные к N. caninum, связываются
на твердой фазе с антигеном, образуя комплексы
антиген – антитело.
После этапа промывки в лунки вносится конъюгат,
меченный пероксидазой, который связывается с
антителами к N. caninum, образуя комплексы антиген
– антитело – конъюгат – пероксидаза. После отмывки
микропланшета в лунки добавляют субстратный
раствор (ТМБ). Реакцию останавливают, добавляя
стоп-реагент.
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
антител, специфичных к N. caninum:
-
-
При наличии антител раствор имеет синий
цвет, который становится желтым после
добавления стоп-реагента;
При
отсутствии
окрашивается.
антител
раствор
не
Оптическую
плотность
раствора
измеряют
фотометрически при длине волны 450 нм.
Страница 2
NCS-MS версия 0214 RU
Положительний контроль
Буферный раствор 2
4.
Буферный раствор 3
Концентрат промывочного раствора (20 х)
5.
Субстратный раствор
Стоп реагент (0,5 M)
*
Поставляемые
количества
обозначены на этикетке комплекта
компонентов
Не оставлять субстратный раствор под
действием прямого солнечного света и не
допускать его окисления.
Все одноразовые материалы, используемые в
работе, необходимо продезинфицировать в
5% растворе натрия гипохлорида за 1 час до
начала работы или автоклавировать при
температуре +1200С.
Дезактивировать
уничтожением.
все
реагенты
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный
раствор хранят при Т +5°C (± 3°C).
6.
2. Другие реактивы хранят при Т от +2°C до +26°C.
Подготовка образцов
3. Все
компоненты,
имеющие
одинаковые
наименования
(промывочный
раствор,
растворители) могут применяться ко всей гамме
продукции IDvet.
Дополнительные
оборудование
материалы
и
1.
Пипетки
одноканальные
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности
луночного микропланшета.
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
5.
Ручная или
установка.
автоматическая
для
96-
промывочная
1.
Внести:
-
90 мкл Буферного раствора 2 в каждую
лунку.
10 мкл Отрицательного контроля в лунки
A1 и B1.
10 мкл Положительного контроля в лунки
C1 и D1.
10 мкл каждого исследуемого образца в
оставшиеся лунки.
-
2.
Инкубировать (45±4) мин при (21 ± 5)°C.
3.
Промыть
микропланшет
3
раза
Промывочным раствором, внося 300 мкл в
каждую лунку. Избегать высыхания лунок
между этапами промывки.
4.
Подготовить Конъюгат (1X) разведением
концентрата
конъюгата
(10X)
в
соотношении 1:10 в Буферном растворе 3.
5.
Внести 100 мкл конъюгата (1X) в каждую
лунку.
перед
Во избежание разницы во времени инкубации
образцов, рекомендуется предварительно внести
все образцы и контроли в отдельный 96-луночный
микропланшет, затем внести многоканальным
дозатором в рабочий микропланшет.
6.
Инкубировать (30±3) мин при (21± 5)°C.
Подготовка промывочного раствора
7.
Доведите концентрат промывочного раствора (20х)
до комнатной температуры перед разведением.
При наличии кристаллов необходимо тщательно
перемешать.
Промыть
микропланшет
3
раза
промывочным раствором, внося 300 мкл в
каждую лунку. Избегать высыхания лунок
между этапами промывки.
8.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в
каждую лунку.
9.
Инкубировать (15±2) мин при (21±5)°C в
темноте.
10.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую
лунку для остановки реакции.
11.
Измерить оптическую плотность (ОП) при
450 нм.
Для приготовления промывочного раствора (1X)
необходимо развести концентрат промывочного
раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
Страница 3
NCS-MS версия 0214 RU
Молоко
Валидация
Центрифугировать каждый образец молока или просто
оставить на время образцы, чтобы сливки отделились
от сыворотки молока (сливки сверху, сыворотка снизу):
Осторожно пипетировать сыворотку под сливками так,
чтобы только сыворотка попала в наконечник (антитела
присутствуют в сыворотке молока).
1.
2.
Подготовить Положительный и Отрицательный
контроли разведением в отношении 1:40 в
Промывочном растворе 1х.
Внести:
- -100
мкл
разведенного
Отрицательного
контроля в лунки A1 и B1.
- 100
мкл
разведенного
Положительного
контроля в лунки C1 и D1.
- 50 мкл Промывочного раствора 1X и 50 мкл
образца молока для исследования в оставшиеся
лунки.
3.
Инкубировать (45±4) мин при (21 ± 5°C).
4.
Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки. Обратите внимание на то, чтобы не
оставался белый след от молока в лунках после
промывки. Во избежание этого можно оставить
промывочный раствор на 2 - 5 минут между
промывками.
5.
Подготовить
конъюгат
(1X)
разведением
концентрата конъюгата (10X) в соотношении
1:10 в Буферном растворе 3.
6.
Внести 100 мкл конъюгата (1X) в каждую лунку.
7.
Инкубировать (30±3) мин при (21± 5)°C.
8.
Certified
management
system
Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
9.
Внести 100 мкл
каждую лунку.
Субстратного
10.
Инкубировать (15±2) мин при (21±5)°C в темноте.
11.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для остановки реакции.
12.
Измерить оптическую плотность (ОП) при 450 нм.
Страница 4
NCS-MS версия 0214 RU
раствора
в
Результаты теста считаются достоверными, если:
среднее
значение
оптической
плотности
положительного контроля (ОПк+) больше, чем 0,35:
ОПк+ > 0,35
отношение между средними значениями ОП
положительного контроля (ОПК+) и отрицательного
контроля (ОПк-) больше 3:
ОПК+ / ОПК- > 3
ID Screen®
Neospora caninum Indirect
Multi-species
Интерпретация результатов
Для каждого образца рассчитывается значение S/P
(S/P%):
ОПобразца - ОПКS/P % =
X 100%
ОПК+ - ОПК-
Тест-система для выявления антител к N. caninum непрямым
иммуноферментным методом (ELISA) в сыворотке и плазме крови
КРС, МРС и собак и молоке КРС
Сыворотка/плазма крови
Для диагностики in vitro
Значение S/P
Интерпретация
результата
S/P % ≤ 40%
отрицательный
40%< S/P % < 50%
сомнительный
S/P % ≥ 50%
положительный
Май 2012: микропланшеты могут храниться при комнатной
температуре.
Молоко
S/P % ≤ 25%
отрицательный
25%< S/P % <30%
сомнительный
S/P % ≥ 30%
положительный
NCS-MS версия 0214 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: [email protected]