Тест-система предназначена для выявления антител против

5.
Общая информация
Тест-система предназначена для выявления антител
против белка вируса Шмаленберга .
Может использоваться для контроля
сыворотки или плазмы крови быков,
овец и коз.
Компоненты
Компоненты*
Лунки микропланшета покрыты рекомбинированным
анти- SBV –NP-HRP конъюгат (готовый к использованию)
(SBV) антигеном нуклепротеина вируса Шмаленберга.
Положительный контроль
на твердой фазе с антигеном, образуя комплексы
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M)
нуклепротеиновыми эпитопами.
1. Внести:
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
3.
конъюгат,
меченный
пероксидазой,
связывается с свободными
эпитопами , образуя
комплексы антиген – антитело – конъюгат.
4.
* Поставляемые количества компонентов обозначены на
этикетке комплекта
субстратный раствор хранят при Т +5°C ( 3°C).
ко всей гамме продукции ID VET.
добавляя стоп-реагент.
4.
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
антител против Brucella abortus:
Если необходимо, IDvet
2.

50 мкл каждого образца в оставшиеся
лунки.
Инкубировать 45 мин  4 мин при температуре
37°C ( 2°C).
Не оставлять субстратный раствор под действием
3.
Вылить
содержимое
микропланшет
окисления.
3
лунок.
раза
Промыть
Промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
Дезактивировать все реагенты перед уничтожением.
промывки.
Подготовка образцов
4.
При наличии антител раствор имеет синий
Дополнительные материалы и
1.
Внести 100 мкл готового к использованию
одноканальные
и
8-канальные,
3
лунок.
раза
Промыть
Промывочным
Если необходимо, доведите концентрат промывочного
Избегать высыхания лунок между этапами
раствора (20х) до комнатной температуры (21°C  5°C)
промывки.
перед разведением. При наличии кристаллов тщательно
перемешайте
до
полного
растворения.
развести концентрат промывочного раствора (20X) в
3.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
1:20
дистиллированной/деионизированной воде.
микропланшета.
Процедура анализа
7.
Для
Одноразовые наконечники к пипеткам.
Дистиллированная и деонизированная вода.
содержимое
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
2.
4.
Вылить
Подготовка промывочного раствора
соотношении
не
6.
микропланшет
приготовления промывочного раствора (1X) необходимо
окрашивается.
Инкубировать 30 мин  3 мин при температуре
21°C ( 5°C).
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
цвет, который становится желтым после
добавления стоп-реагента;
Пипетки
5.
рекомендуется предварительно внести все образцы и
предоставит дополнительные
оборудование не поставляемые с наборами
раствор
большим
внести многоканальным дозатором в рабочий микропланшет.
объемы реагентов.
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
антител
50 мкл Отрицательного контроля в лунки
C1 и D1.
конъюгата в каждую лунку.
субстратный раствор (ТМБ). Реакцию останавливают,
отсутствии

Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
(промывочный раствор, растворители) могут применяться
При
их
2. Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.
3. Все компоненты, имеющие одинаковые наименования
-
промыть
1. Коньюгат, микропланшет, контрольные сыворотки и
После отмывки микропланшета в лунки добавляют
-
немедленно
прямого солнечного света и не допускать его
который
50 мкл Положительного контроля в лунки
A1 и B1.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M) может вызвать серьезные
помощью(S26).
5.
В лунки микропланшета добавляется анти- SBV –NP-HRP

кожи в случае контакта.
количеством воды и обратиться за медицинской
Субстратный раствор
маскируются
Не пипетировать растворы ртом.
следует
сывороток, антитела, специфичные к SBV связываются
которые
1.
Отрицательный контроль
Концентрат промывочного раствора (20 х)
антитело,
перемешаны.
ожоги кожи (R35). При попадании на кожу и в глаза
микропланшета. образцов и контролей исследуемых
–
Меры предосторожности
фотометрически при длине волны 450 нм.
Микропланшет, с адсорбированным в лунках SBV
антиген
Важно: Все реагенты набора перед использованием
должны иметь комнатную температуру (21  5)°C и
Оптическую плотность раствора измеряют
Описание и принцип действия
Исследуемые образцы и контроли добавляются в лунки
Ручная или автоматическая промывочная установка.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в
каждую лунку.
8.
Инкубировать 15 мин  2 мин при 21°C ( 5°C) в
темноте.
в
9.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для остановки реакции.
Страница 3
SBVC версия 1112GB RU
10.
Измерить оптическую плотность (ОП) при 450
нм.
* Примечание. Качество промывания влияет на
результат. Если желательно улучшить результат,
результаты, рассчитанные по формуле и полученные:
- менее или равные 40% считаются положительными
- более 40% и менее или равные 50% считаются
сомнительными
- более 50% считаются отрицательными
первое на что следует обратить внимание это
увеличение количество промывок с 3 до 5 раз после
каждой
операции
инкубирования
сыворотки
и
коньюгата.
Валидация
Результаты теста считаются достоверными, если:
 наименьшее значение
оптической плотности
отрицательного контроля (ОП-) больше , чем 0,7:
Результат
Статус
% ≤ 40%
положительный
40% < % ≤ 50%
сомнительный
% > 50%
отрицательный
ID Screen®
Schmallenberg virus Competition
Multi-species
ОП- > 0,70
 наименьшее значение
оптической плотности
положительного контроля (ОП+) меньше, чем 30%
от оптической плотности отрицательного контроля
(ОП-):
Тест-система для выявления антител против вируса Шмалленберга в
сыворотке или плазме жвачных животных методом иммуноферментного
ОП+ / ОП- < 0.3
Интерпретация результатов
Для каждого образца рассчитывается процентное
анализа ELISA
Для диагностики in vitro
соотношение (%):
ОПобразца
Февраль 2013: советы по стадии промывки, указаны в процедуре тестирования
Соотношение % =
X 100%
ОП-
SBVC версия 1112 GB RU
IDvet, France
Tel :+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: [email protected]
Страница 4
SBVC версия 1112GB
RU