Insert NDVC_ver 0913_RU_doc4064

Общая информация
Перечень компонентов
Набор реагентов предназначен для выявления
антител к вирусу болезни Ньюкасла в сыворотке
крови и яичном желтке птицы.
Компоненты*
Описание и принцип действия
Положительный контроль
Лунки микропланшета адсорбированы антигеном
вируса болезни Ньюкасла (БН). При внесении в лунки
микропланшета образцов исследуемых сывороток,
антитела, специфичные к вирусу БН, связываются на
твердой фазе с антигеном, образуя комплексы антиген –
антитело, закрывая эпитопы антигена.
Отрицательный контроль
После этапа промывки в лунки вносится конъюгат,
меченный пероксидазой, который связывается со
свободными эпитопами вируса БН, образуя комплексы
антиген – конъюгат. После отмывки микропланшета в
лунки добавляют субстратный раствор (ТМБ). Реакцию
останавливают, добавляя стоп-реагент.
Концентрат коньюгата (10 х)
Все реагенты набора перед использованием
2.
Субстратный
раствор
может
вызвать
раздражение кожи в случае контакта.
3.
Стоп-реагент (0,5 M) может быть опасным при
глотании. Избегать контакта с кожей (S24-37).
При
контакте
с
кожей
возможна
чувствительность (R22-43).
Буферный раствор для разведения 3
Концентрат промывочного раствора
(20 х)
5.
Субстратный раствор
Стоп реагент
* Поставляемые количества компонентов
обозначены на этикетке комплекта
2.
Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.
3.
Все компоненты, имеющие одинаковые
наименования
(промывочный
раствор,
растворители) могут применяться ко всей
гамме продукции IDvet.
Коньюгат,
контрольные
сыворотки
и
субстратный раствор хранят при Т +5°C (±
3°C).
6.
должны иметь комнатную температуру (21 ± 5)°C и
перемешаны.
1.
Внести 100 мкл Положительного контроля в
лунки А1 и В1 и 100 мкл Отрицательного
контроля в лунки С1 и D1.
2.
Внести в остальные лунки:
Не оставлять субстратный раствор под
действием прямого солнечного света и не
допускать его окисления.
Для сыворотки крови:
- 40 мкл Буферного раствора 14;
- 10 мкл неразведенной сыворотки крови
(образцы) в лунки, тщательно смешать.
Все одноразовые материалы, используемые в
работе, необходимо продезинфицировать в 5%
растворе натрия гипохлорида за 1 час до
начала работы или автоклавировать при
температуре +1200С.
Дезактивировать
уничтожением.
все
реагенты
Для яичного желтка:
- 80 мкл Промывочного раствора 1x;
- 20 мкл яичного желтка.
Тщательно смешать перед внесением в лунки
микропланшета (100 мкл/лунку).
перед
3.
Закрыть
микропланшет
пленкой
и
инкубировать в течение 30 минут (±3 мин)
при комнатной температуре +210С (±50С).
4.
Приготовить Коньюгат 1X разведением
концентрата коньюгата 10X в соотношении
1:10 в Буферном растворе 3.
5.
Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
6.
Внести по 100 мкл Коньюгата 1X в каждую
лунку.
7.
Закрыть
микропланшет
пленкой
и
инкубировать в течение 30 минут (±3 мин)
при комнатной температуре +210С (±50С).
8.
Промыть микропланшет 3 раза промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку.
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
Подготовка образцов
При наличии антител раствор не окрашивается.
измеряют
Дополнительные материалы и
1.
Пипетки одноканальные и 8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и
200µl.
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности
луночного микропланшета.
4.
Дистиллированная и деонизированная вода.
5.
Ручная или
установка.
автоматическая
Во избежание разницы во времени инкубации
образцов, рекомендуется предварительно внести
все образцы и контроли в отдельный 96-луночный
микропланшет, затем внести многоканальным
дозатором в рабочий микропланшет.
Подготовка промывочного раствора
оборудование
Страница 2
NDVC версия 0913 RU
Не пипетировать растворы ртом.
4.
При отсутствии антител раствор имеет синий
цвет, который становится желтым после
добавления стоп-реагента;
Оптическую
плотность
раствора
фотометрически на длине волны 450 нм.
1.
Буферный раствор для разведения 14
1.
-
Процедура анализа
Микропланшет, с адсорбированным в
лунках очищенным антигеном вируса
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
антител против вируса БН:
-
Меры предосторожности
для
96-
промывочная
Доведите концентрат промывочного раствора (20х)
до комнатной температуры перед разведением.
При наличии кристаллов необходимо тщательно
перемешать.
Для приготовления промывочного раствора (1X)
необходимо развести концентрат промывочного
раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
Страница 3
NDVC версия 0913 RU
9.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в
Интерпретация результатов
каждую лунку. Инкубировать 10 минут (±2
мин) при комнатной температуре +210С (±50С)
в темноте.
Для каждого образца рассчитывается значение
10. Внести 50 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для
остановки
реакции,
тщательно
перемешивая. Стоп-реагент вносить в том же
порядке, как вносили Субстратный раствор.
11. Измерить оптическую плотность (ОП) при 450
нм.
Валидация
Результаты теста считаются достоверными, если:
среднее значение оптической плотностии
Отрицательного контроля (ОПк-) больше 0,6.
ОПK- > 0,6
Значение процента ингибирования (PI) для
Положительного контроля больше, чем 40
PIK+ > 40%*
Certified
management
system
процента ингибирования (PI%):
ОПK- — ОПобразца
PI % =
x 100%
ОПK-
Значение PI
Интерпретация
результата
PI % > 40%
положительный
30 % ≤ PI % ≤ 40 %
сомнительный
PI % < 30 %
отрицательный
Важно: образцы, у которых PI находится
между
значениями
30-40%
интерпретируются как сомнительные и
должны быть протестированы снова. При
получении сомнительных результатов
повторно, образцы
должны быть
протестированы через 10-14 дней.
ID Screen®
Newcastle Disease Competition
Тест-система для выявления антител к вирусу болезни Ньюкасла
конкурентным иммуноферментным методом (ELISA) в сыворотке
крови и яичном желтке птицы
Для диагностики in vitro
Сентябрь 2013: новый протокол
*Равносильно:
ОПК+/ОПК- < 0.6
NDVC ver 0913 RU
Страница 4
NDVC версия 0913 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: info@id-vet.com