Тест-система предназначена для выявления антител против gB

Перечень компонентов
Общая информация
Тест-система предназначена для выявления антител
против gB гликопротеина BHV-1 вируса методом
иммуноферментного анализа (ELISA).
Компоненты*
Может применяться для контроля сыворотки и
плазмы крови крупного рогатого скота и быков
(короткая и ночная инкубация)
Концентрат коньюгата анти-gB-HRP (10 х)
Микропланшет, с адсорбированным в лунках BHV-1
очищенным лизатом (12*8 луночных стриппов )
Положительный контроль
Описание и принцип действия
Буфер для разведения 19
Лунки микропланшета адсорбированы очищенным
Буфер для разведения 2
BHV-1 лизатом.
Концентрат промывочного раствора (20 х)
При внесении в лунки микропланшета образцов и
Субстратный раствор
исследуемых
сывороток,
антитела-gB,
связываются на твердой фазе с антигеном, образуя
комплексы антиген – антитело. которые маскируют gB
Не пипетировать растворы ртом.
2.
Субстратный раствор может вызвать раздражение
кожи в случае контакта.
3.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5 M) может вызвать серьезные
ожоги кожи (R35). При попадании на кожу и в глаза
следует немедленно промыть их большим
количеством воды и обратиться за медицинской
помощью(S26).
4.
5.
* Поставляемые количества компонентов обозначены на
этикетке комплекта
эпитопы.
1. Коньюгат, контрольные сыворотки и субстратный раствор
фиксирует выделение свободных gB эпитопов
и
иметь комнатную
перемешаны.
хранят при Т +5°C ( 3°C).
дезактивированы
5%
быть
прежде
свежеприготовленным
3. Все компоненты, имеющие одинаковые наименования
субстратный раствор (ТМБ). Реакцию останавливают,
(промывочный раствор, растворители) могут применяться
добавляя стоп-реагент.
ко всей гамме продукции IDvet.
Окрашивание раствора в лунках свидетельствует об
Дополнительные материалы и
отсутствии или наличии в исследуемых образцах
оборудование не поставляемые с наборами
специфичных антител :
1.
Пипетки
одноканальные
и
8-канальные,
откалиброванные к объемам 10 µl, 100 µl и 200µl.
-
При наличии антител раствор имеет синий
цвет, который становится желтым после
добавления стоп-реагента;
2.
Одноразовые наконечники к пипеткам.
3.
Фотометр оптической плотности для 96-луночного
микропланшета.
-
При
отсутствии
антител
раствор
окрашивается.
Оптическую плотность раствора измеряют
фотометрически при длине волны 450 нм.
Страница 2
IBRGBC версия 0513 RU
не
4.
5.
-
50 мкл Отрицательного контроля в лунки C1
и D1.
Дистиллированная и деонизированная вода.
Ручная или автоматическая промывочная установка.
50 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
Инкубировать 60 мин  3 мин при температуре
37°C ( 3°C).
раствором гипохлоридом соды в течение 1 ч или
Образцы разводятся в 5 раз следующим образом:
автоклавированием при 120гр.С.
Внести:
Во избежание разницы во времени инкубации образцов,
рекомендуется предварительно внести все образцы и
контроли в отдельный 96-луночный микропланшет, затем
внести
многоканальным
дозатором
в
рабочий
микропланшет.
1.
Подготовка промывочного раствора
Доведите концентрат промывочного раствора (20х) до
комнатной температуры перед разведением.
При
наличии кристаллов необходимо тщательно перемешать.
Для приготовления промывочного раствора
(1X)
необходимо развести концентрат промывочного раствора
(20X)
в
соотношении
1:20
в
дистиллированной/деионизированной воде.
и
Ночная инкубация
образует комплексы антиген – антитело – конъюгат.
После отмывки микропланшета в лунки добавляют
5)°C
50 мкл Положительного контроля в лунки A1 и
B1.
-
Подготовка образцов
2. Другие реактивы хранят при Т +2°C и +26°C.

-
Все использованные для анализа материалы перед
должны
(21
Внести:
Не оставлять субстратный раствор под действием
прямого солнечного света и не допускать его
окисления.
ликвидацией
температуру
Короткая инкубация
2.
Стоп-реагент (H2SO4 0,5M)
Внесение в лунки конъюгата, меченного пероксидазой,
Все реагенты набора перед использованием должны
1.
Отрицательный контроль
контролей
Процедура анализа
Меры предосторожности
-
80 мкл Буфера для разведения 19 в каждую
лунку.
-
20 мкл Положительного контроля в лунки
A1 и B1.
-
20 мкл Отрицательного контроля в лунки C1
и D1.
-
20 мкл каждого образца в оставшиеся лунки.
Инкубировать от 16 до
температуре +4С°C ( 2°C).
20
часов
при
Дальнейшие операции одинаковы как для дневной,
так и для ночной инкубации
2.
Подготовить коньюгат (1Х) разведением
концентрата коньюгата (10Х) буфером для
разведения 2 в соотношении 1:10
3.
Внести 100 мкл Конъюгата (1X) в каждую лунку.
4.
Инкубировать 30 мин  3 мин при 37°C ( 3°C).
5.
Промыть микропланшет 3 раза Промывочным
раствором, внося 300 мкл в каждую лунку
Избегать высыхания лунок между этапами
промывки.
Страница 3
IBRGBC версия 0513
RU
6.
Внести 100 мкл Субстратного раствора в каждую
лунку.
Интерпретация результатов
7.
Инкубировать 15 мин  2 мин при 21°C ( 5°C) в
темноте.
Для каждого образца рассчитывается значение S/P:
8.
Внести 100 мкл Стоп-реагента в каждую лунку
для остановки реакции.
9.
Измерить оптическую плотность (ОП) при 450
нм.
Валидация
ОПобразца
S/P % =
X 100%
ID Screen® BLV Indirect
ОП-
Для ночной и дневной инкубации:
полученное и рассчитанное значение:
Результаты теста считаются достоверными, если:

среднее
значение
оптической
плотности
- меньше либо равно 50% считается положительным
- больше чем 50% и меньше 60% считается сомнительным
- больше или равное 60% считается отрицательным
......
отрицательного контроля (ОП -) больше 0,7:
ОП- > 0,7

среднее
значение
оптической
плотности
положительного контроля (ОП +) меньше , чем 30%
Значение S/P
Интерпретация
результата
S/P % ≤ 50%
положительный
50% < S/P < 60%
сомнительный
S/P% ≥ 60%
отрицательный
Тест-система диагностическая иммуноферментная для выявления
антител anti-gB BHV-1 против вируса инфекционного ринотрахеита в
образцах сыворотки и плазме крови крупного рогатого скота и быков
методом иммуноферментного анализа ELISA
отрицательного контроля ОП-:
ОП+ / ОП- < 0,3
Короткая или ночная инкубация
Для применения in vitro
Май 2013: Для ночной инкубации температурный режим
был модифицирован (4грС вместо 21гр.С)
IBRGBC версия 0513 RU
IDvet, 310, rue Louis Pasteur – Grabels - FRANCE
Tel:+ 33 (0)4 67 41 49 33 - Fax: + 33 (0)4 67 45 36 95
www.id-vet.com - E-mail: info@id-vet.com
Страница 4
IBRGBC версия 0513 RU