ГОСТ 21237-75 Мясо. Методы бактериологического

Ãðóïïà Í19
Ì
Å
Æ
Ã
Î
Ñ
Ó
Ä
À
Ð
Ñ
Ò
Â
Å
Í
Í
Û
É
ÌßÑÎ
Ìåòîäû áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî àíàëèçà
Ñ
Ò
À
Í
Ä
À
Ð
Ò
ÃÎÑÒ
21237—75
Meat.
Methods of bacteriological analysis
ÎÊCÒÓ 9209
Äàòà ââåäåíèÿ 01.01.77
Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà ìÿñî è ñóáïðîäóêòû îò âñåõ âèäîâ óáîéíîãî ñêîòà è
óñòàíàâëèâàåò ìåòîäû áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ äëÿ âûÿâëåíèÿ â íèõ àýðîáíûõ áàêòåðèé
(áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû, áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë, áàêòåðèé èç ðîäà êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèé, áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ, áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, áàêòåðèé ëèñòåðèîçà, áàêòåðèé ïàñòåðåëëåçà,
áàêòåðèé èç ãðóïïû êîêêîâ) è àíàýðîáíûõ áàêòåðèé (ïàòîãåííûõ è òîêñèãåííûõ êëîñòðèäèé).
Áàêòåðèîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ìÿñà è ñóáïðîäóêòîâ ïðîèçâîäÿò âî âñåõ ñëó÷àÿõ, ïðåäóñìîòðåííûõ äåéñòâóþùåé íîðìàòèâíî-òåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèåé, ïðàâèëàìè âåòåðèíàðíî-ñàíèòàðíîé
ýêñïåðòèçû ìÿñà è ìÿñîïðîäóêòîâ è äðóãèìè íîðìàòèâíûìè àêòàìè, à òàêæå ïî òðåáîâàíèþ îðãàíîâ,
îñóùåñòâëÿþùèõ âåòåðèíàðíûé èëè ñàíèòàðíûé íàäçîð.
(Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2).
1. ÌÅÒÎÄÛ ÎÒÁÎÐÀ ÎÁÐÀÇÖÎÂ
1.1.  çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà çàáîëåâàíèÿ íà áàêòåðèîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå íàïðàâëÿþò îò
òóøè:
- ÷àñòü ìûøöû ñãèáàòåëÿ èëè ðàçãèáàòåëÿ ïåðåäíåé è çàäíåé êîíå÷íîñòåé òóøè äëèíîé íå ìåíåå
8 ñì èëè êóñîê äðóãîé ìûøöû ðàçìåðîì íå ìåíåå 8×6×6 ñì;
- ëèìôàòè÷åñêèå óçëû — ïîâåðõíîñòíûé øåéíûé èëè ñîáñòâåííî ïîäêðûëüöîâûé è íàðóæíûé
ïîäâçäîøíûé âìåñòå ñ îêðóæàþùåé èõ ñîåäèíèòåëüíîé è æèðîâîé òêàíüþ, à îò ñâèíåé — ïîâåðõíîñòíûé øåéíûé äîðçàëüíûé (ïðè îòñóòñòâèè ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â îáëàñòè ãîëîâû è øåè) èëè
ïîäêðûëüöîâûé ïåðâîãî ðåáðà è íàäêîëåííûé;
- äîëþ ïå÷åíè ñ ïå÷åíî÷íûì ëèìôàòè÷åñêèì óçëîì èëè æåë÷íûì ïóçûðåì, îñâîáîæäåííûì îò
æåë÷è, ïî÷êó è ñåëåçåíêó.
Äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ íà ëèñòåðèîç íàïðàâëÿþò: ãîëîâíîé ìîçã, äîëþ ïå÷åíè è
ïî÷êó.
Äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ íà âîçáóäèòåëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû íàïðàâëÿþò ëèìôàòè÷åñêèé óçåë ïîðàæåííîãî îðãàíà èëè ëèìôàòè÷åñêèé óçåë, ñîáèðàþùèé ëèìôó ñ ìåñòà ëîêàëèçàöèè
ïîäîçðèòåëüíîãî ôîêóñà, îòå÷íóþ òêàíü, óõî, à ó ñâèíåé, êðîìå òîãî, ïîä÷åëþñòíîé ëèìôàòè÷åñêèé
óçåë.
Ïðè èññëåäîâàíèè ïîëóòóø èëè ÷åòâåðòèí òóø áåðóò êóñîê ìûøöû, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû è
òðóá÷àòóþ êîñòü.
Ïðè èññëåäîâàíèè ñîëåíîãî ìÿñà, íàõîäÿùåãîñÿ â áî÷å÷íîé òàðå, áåðóò îáðàçöû ìÿñà è èìåþùèåñÿ ëèìôàòè÷åñêèå óçëû ñâåðõó, èç ñåðåäèíû è ñî äíà áî÷êè, à òàêæå, ïðè íàëè÷èè, òðóá÷àòóþ êîñòü
è ðàññîë.
Ï ð è ì å ÷ à í è å. Åñëè áåðóò ÷àñòü ïå÷åíè, ïî÷êè, ñåëåçåíêè, òî ïîâåðõíîñòü ðàçðåçà ïðèæèãàþò.
1.2. Îáðàçöû çàâåðòûâàþò êàæäûé â îòäåëüíîñòè â ïîëèýòèëåíîâóþ ïëåíêó ïî ÃÎÑÒ 10354 èëè
ïåðãàìåíò ïî ÃÎÑÒ 1341, ïîìåùàþò â áóìàæíûé ïàêåò, íà êîòîðîì ñòàâÿò äàòó îòáîðà îáðàçöà, íîìåð
òóøè è íàïðàâëÿþò â ëàáîðàòîðèþ â îáùåé òàðå (ÿùèêå).
«
69
Ñ. 2 ÃÎÑÒ 21237—75
1.3. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïåðåñûëêè îáðàçöîâ â ëàáîðàòîðèþ, ðàñïîëîæåííóþ çà ïðåäåëàìè ïðåäïðèÿòèÿ èëè õîçÿéñòâà, ãäå îòáèðàþò îáðàçöû, òàðó ñ îáðàçöàìè îïå÷àòûâàþò èëè ïëîìáèðóþò.
 ñîïðîâîäèòåëüíîì äîêóìåíòå óêàçûâàþò:
- íàèìåíîâàíèå ïðîäóêòà ñ óêàçàíèåì âèäà ìÿñà, îò êîòîðîãî âçÿò îáðàçåö, è åãî êîëè÷åñòâî;
- íàèìåíîâàíèå ïðåäïðèÿòèÿ èëè õîçÿéñòâà, ãäå îòîáðàí îáðàçåö, è åãî àäðåñ;
- íîìåðà îáðàçöîâ;
- ïðè÷èíó íàïðàâëåíèÿ îáðàçöîâ íà èññëåäîâàíèå;
- êðàòêèå ïàòîëîãîàíàòîìè÷åñêèå äàííûå è ïðåäïîëàãàåìûé äèàãíîç;
- äàòó âçÿòèÿ îáðàçöîâ è ïîäïèñü ëèöà, íàïðàâèâøåãî èõ íà èññëåäîâàíèå.
2. ÀÏÏÀÐÀÒÓÐÀ, ÌÀÒÅÐÈÀËÛ, ÐÅÀÊÒÈÂÛ È ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÅ ÑÐÅÄÛ
2.1. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ïðèìåíÿþò:
àâòîêëàâ;
àïïàðàò Êîõà;
áàíþ âîäÿíóþ ñ òåðìîðåãóëÿòîðîì;
âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ïî ÃÎÑÒ 24104;
âåñû òîðçèîííûå;
ãîìîãåíèçàòîð áàêòåðèîëîãè÷åñêèé èëè àïïàðàò äëÿ èçìåëü÷åíèÿ òêàíåé ñ ÷èñëîì îáîðîòîâ íå
ìåíåå 8000 îá/ìèí è íå áîëåå 45000 îá/ìèí;
ãîðåëêè ãàçîâûå;
äèñòèëëÿòîð;
êîòëû ñ ïàðîâîé ðóáàøêîé;
êîìïàðàòîð;
ëóïó ñ óâåëè÷åíèåì 3—5× ïî ÃÎÑÒ 25706;
ìèêðîñêîï òèïà ÌÁÈ èëè ÌÁÐ èëè äðóãèõ àíàëîãè÷íûõ ìàðîê;
ìÿñîðóáêó áûòîâóþ ïî ÃÎÑÒ 4025;
íîæè;
íîæíèöû ìåäèöèíñêèå ïî ÃÎÑÒ 21239;
îñâåòèòåëü ÎÈ-19;
ïèíöåòû ìåäèöèíñêèå ïî ÃÎÑÒ 21241;
ïîòåíöèîìåòð èëè ðÍ-ìåòð;
ñïèðòîâêè ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336;
òåðìîñòàò ýëåêòðè÷åñêèé ñ àâòîìàòè÷åñêèì ðåãóëÿòîðîì;
óëüòðàòåðìîñòàò;
ôëàêîíû Ñîêñëåòà (áóòûëêè äëÿ äåòñêîãî ïèòàíèÿ);
õîëîäèëüíèê ýëåêòðè÷åñêèé áûòîâîé ïî ÃÎÑÒ 16317;
÷àñû ïåñî÷íûå ïî ÎÑÒ 25—11—38 íà 1, 2, 5 è 15 ìèí;
øêàô ñóøèëüíûé ýëåêòðè÷åñêèé ëàáîðàòîðíûé;
áóìàãó ôèëüòðîâàëüíóþ ïî ÃÎÑÒ 12026;
áóòûëêè ñòåêëÿííûå;
âàòó ìåäèöèíñêóþ ãèãðîñêîïè÷åñêóþ ïî ÃÎÑÒ 5556;
âîäó áðîìíóþ;
âîäó äèñòèëëèðîâàííóþ ïî ÃÎÑÒ 6709;
âîäó ïèòüåâóþ ïî ÃÎÑÒ 2874*;
âîðîíêè ñòåêëÿííûå ïî ÃÎÑÒ 25336, êîíóñîîáðàçíûå, âìåñòèìîñòüþ 250, 500 ñì3;
äðîææè ïðåññîâàííûå ïî ÃÎÑÒ 171;
æåë÷ü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ñâåæóþ èëè ñóõóþ îáåçâîæåííóþ;
êàñòðþëè;
êîëáû ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336;
êðîâü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, îâåö, ëîøàäåé;
ìàðëþ ìåäèöèíñêóþ ïî ÃÎÑÒ 9412;
ìàñëî âàçåëèíîâîå ìåäèöèíñêîå ïî ÃÎÑÒ 3164;
ìàñëî èììåðñèîííîå äëÿ ìèêðîñêîïèè ïî ÃÎÑÒ 13739;
* Íà òåððèòîðèè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äåéñòâóåò ÃÎÑÒ Ð 51232—98.
70
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 3
ìåë õèìè÷åñêè îñàæäåííûé ïî ÃÎÑÒ 6253;
ìÿñî-ãîâÿäèíó ïî ÃÎÑÒ 779;
ïàíêðåàòèí ïèùåâîé ñóõîé;
ïåíèöèëëèí;
ïåïòîí âåíãåðñêîé ôèðìû «Ðèõòåð»;
ïåïòîí ñóõîé ôåðìåíòàòèâíûé äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ öåëåé ïî ÃÎÑÒ 13805;
ïåïòîí ÷åøñêîé ôèðìû «Ñïîôà»;
ïåòëåäåðæàòåëè;
ïå÷åíü ãîâÿæüþ;
ïèïåòêè âìåñòèìîñòüþ 1, 2 ñì3 ñ öåíîé äåëåíèÿ 0,05 è 0,1 ñì3 è âìåñòèìîñòüþ 10 ñì3;
ïëàçìó öèòðàòíóþ êðîëè÷üþ ñóõóþ;
æåëåçó ïîäæåëóäî÷íóþ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà;
ïîïëàâêè äëÿ ïðîáèðîê è êîëá äëèíîé 20, 45 è 75 ìì, äèàìåòðîì ñîîòâåòñòâåííî 2, 5 è 10 ìì;
ïîñóäó ìåðíóþ ñòåêëÿííóþ ïî ÃÎÑÒ 1770;
íàáîð àããëþòèíèðóþùèõ àäñîðáèðîâàííûõ ñàëüìîíåëëåçíûõ ñûâîðîòîê: ïîëèâàëåíòíîé Î-ñûâîðîòêè ãðóïï À, Â, Ñ, D è Å è ìîíîâàëåíòíûõ Î- è Í-ñûâîðîòîê;
ïðîáèðêè ñòåêëÿííûå áàêòåðèîëîãè÷åñêèå ïî ÃÎÑÒ 25336;
ïðîáêè êîðêîâûå ïî ÃÎÑÒ 5541;
ïðîáêè ðåçèíîâûå;
ïðîâîëîêó èç íèêåëåâûõ ñïëàâîâ äèàìåòðîì 0,3—0,5 ìì ïî ÃÎÑÒ 1791;
ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèôèêîâàííûé ïî ÃÎÑÒ 5962* èëè ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèôèêîâàííûé òåõíè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 18300.
ñïèðò äåíàòóðèðîâàííûé;
ñòåêëà ïîêðîâíûå ïî ÃÎÑÒ 6672;
ñòåêëà ïðåäìåòíûå ïî ÃÎÑÒ 9284;
ñòóïêè ôàðôîðîâûå ñ ïåñòèêàìè ïî ÃÎÑÒ 9147;
õëîðîôîðì òåõíè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 20015;
öèëèíäðû âìåñòèìîñòüþ 100, 250, 500 ñì3 ïî ÃÎÑÒ 1770;
÷àøêè ñ êðûøêàìè ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336 (÷àøêè Ïåòðè);
øòàòèâû äëÿ ïðîáèðîê;
øóìîâêó;
ýîçèí áàêòåðèîëîãè÷åñêèé;
ÿéöà êóðèíûå;
áðèëëèàíòîâûé çåëåíûé;
áðîìòèìîëîâûé ñèíèé;
ãåíöèàí ôèîëåòîâûé (ãåíöèàíâèîëåò);
ãëèöåðèí ïî ÃÎÑÒ 6259, õ.÷.;
Ä-ãëþêîçó ïî ÃÎÑÒ 6038, Ä (+), õ.÷.;
æåëàòèí ïî ÃÎÑÒ 11293;
éîä ìåòàëëè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 4159, õ.÷.;
êàëèé éîäèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4232, õ.÷.;
êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 2493, õ.÷.;
êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 4198, õ.÷.;
êèñëîòó êàðáîëîâóþ êðèñòàëëè÷åñêóþ;
êèñëîòó ôîñôîðíóþ ïî ÃÎÑÒ 6552;
êðèñòàëëè÷åñêèé ôèîëåòîâûé (êðèñòàëëâèîëåò);
ëàêòîçó, õ.÷.;
ìàãíèé ñåðíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4523, õ.÷.;
ìàãíèé õëîðèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4209, õ.÷.;
ìàííèò (ìàííèòîë) ïî ÃÎÑÒ 8321, õ.÷., Ä (—);
ñèíü ìåòèëåíîâóþ;
ìåòèëîâûé êðàñíûé ïî ÒÓ 6—09—5169;
ìåòèëîâûé ôèîëåòîâûé ìåäèöèíñêèé (ìåòèëâèîëåò);
ìî÷åâèíó ïî ÃÎÑÒ 6691, õ.÷.;
* Íà òåððèòîðèè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äåéñòâóåò ÃÎÑÒ Ð 51652—2000.
71
Ñ. 4 ÃÎÑÒ 21237—75
íàáîð óãëåâîäîâ äëÿ èññëåäîâàíèÿ ôåðìåíòàöèè ìèêðîáîâ êèøå÷íîé ãðóïïû (áîëüøîé);
íàòðèé-àììîíèé ôîñôîðíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4170;
íàòðèÿ ãèäðîîêèñü ïî ÃÎÑÒ 4328;
íàòðèé äâóóãëåêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4201, õ.÷.;
íàòðèé êèñëûé ñåëåíèñòîêèñëûé (áåç òåëëóðà);
íàòðèé ëèìîííîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 22280;
íàòðèé ñåðíèñòîêèñëûé (ñóëüôèò íàòðèÿ) áåçâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 195, õ.÷.;
òèîñóëüôàò íàòðèÿ ïî ÃÎÑÒ 27068, õ.÷.;
íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé áåçâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 11773, õ.÷.;
íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 245, õ.÷.;
íàòðèé õëîðèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4233, õ.÷.;
ïàðàäèìåòèëàìèäîáåíçàëüäåãèä;
ñàôðàíèí;
ñàõàðîçó ïî ÃÎÑÒ 5833, õ.÷.;
ñâèíåö óêñóñíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 1027;
ñîëü çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ äâîéíóþ ñåðíîêèñëóþ (ñîëü Ìîðà) ïî ÃÎÑÒ 4208;
ôåíîë;
ôåíîëîâûé êðàñíûé ïî ÒÓ 6—09—5170, õ.÷.;
ôóêñèí êèñëûé äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ öåëåé;
ôóêñèí îñíîâíîé äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ öåëåé;
àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 17206;
àãàð ñóõîé ïèòàòåëüíûé;
àãàð Ïëîñêèðåâà ñóõîé áàêòåðèîëîãè÷åñêèé;
àãàð ñóõîé âèñìóò-ñóëüôèò;
àãàð ñóõîé ñ ýîçèí-ìåòèëåíîâûì ñèíèì (ñðåäà Ëåâèíà);
âîäó ìÿñíóþ ïî ÃÎÑÒ 20729;
áóëüîí ìÿñî-ïåïòîííûé ïî ÃÎÑÒ 20730;
äèàëèçàò èëè ýêñòðàêò äðîææåâîé;
ðàñòâîð Õåíêñà;
ñàëüìîíåëëåçíûé Î-áàêòåðèîôàã;
ñèáèðåÿçâåííûé ôàã «ãàììà ÌÂÀ».
(Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 1, 2).
3. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ Ê ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÞ
3.1. Ïðèãîòîâëåíèå ïèòàòåëüíûõ ñðåä, ðåàêòèâîâ, êðàñîê
3.1.1. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì ÿ ñ î-ï å ï ò î í í î ã î à ã à ð à
Ê 1000 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî áóëüîíà ïåðåä ñòåðèëèçàöèåé äîáàâëÿþò 20 ã àãàðà è êèïÿòÿò íà
ñëàáîì îãíå ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ.
Ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð, îõëàæäåííûé äî òåìïåðàòóðû 50—55 °Ñ, îñâåòëÿþò ÿè÷íûì áåëêîì (èç
ðàñ÷åòà îäèí áåëîê íà 1000 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà), ïîìåùàþò â àâòîêëàâ, íå çàâèí÷èâàÿ êðûøêó
àâòîêëàâà, èëè â àïïàðàò Êîõà íà 1 ÷, ÷òîáû áåëîê ñâåðíóëñÿ è, îñåäàÿ, óâëåê çà ñîáîé âçâåøåííûå
÷àñòèöû. Ãîðÿ÷èé ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð, óñòàíàâëèâàþò â
íåì ðÍ 7,0—7,4, ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè è 20 ìèí ñòåðèëèçóþò â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
3.1.2. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å î ñ í î â í î ã î ð à ñ ò â î ð à Õ î ò ò è í ã å ð à
1000 ã ìÿñà, îñâîáîæäåííîãî îò æèðà è ñóõîæèëèé, íàðåçàþò êóñêàìè ðàçìåðîì 1—2 ñì è
îïóñêàþò íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè â êàñòðþëþ ñ äâîéíûì êîëè÷åñòâîì êèïÿùåé âîäîïðîâîäíîé âîäû.
Êèïÿòÿò â òå÷åíèå 15—20 ìèí, ïîêà öâåò ìÿñà íå ñòàíåò ñåðûì; ýòî óêàçûâàåò íà òî, ÷òî áåëêè
ñâåðíóëèñü. Ìÿñî âûíèìàþò øóìîâêîé è èçìåëü÷àþò íà ìÿñîðóáêå. Îñòàâøóþñÿ æèäêîñòü ôèëüòðóþò
è â íåé óñòàíàâëèâàþò ðÍ 8,0. Ôàðø îïóñêàþò â îòôèëüòðîâàííóþ æèäêîñòü è îõëàæäàþò äî òåìïåðàòóðû 40 °Ñ â îòêðûòîé êàñòðþëå, çàòåì äîáàâëÿþò î÷èùåííóþ îò æèðà, ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè è
äâàæäû èçìåëü÷åííóþ ïîäæåëóäî÷íóþ æåëåçó â êîëè÷åñòâå 10 % ê ïîëó÷åííîé âçâåñè (íà 1000 ñì3
æèäêîñòè 100 ã æåëåçû) èëè ñóõîé ïàíêðåàòèí â êîëè÷åñòâå 0,5—1,0 % (â çàâèñèìîñòè îò åãî àêòèâíîñòè). Ïîëó÷åííóþ ñìåñü õîðîøî ðàçìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî ñíîâà ïîäùåëà÷èâàþò 10 %-íûì ðàñòâîðîì
ãèäðîîêèñè íàòðèÿ äî ðÍ 7,8—8,0 è ïîâòîðÿþò òàêîå æå ïîäùåëà÷èâàíèå ÷åðåç 30 ìèí. Îòñóòñòâèå
ñäâèãà ðåàêöèè ñìåñè óêàçûâàþò íà åãî äîáðîêà÷åñòâåííîñòü.
72
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 5
Ïîñëå óñòàíîâëåíèÿ ðÍ ñìåñü ïåðåëèâàþò â áóòûëü ñ õîðîøî ïîäîáðàííîé ðåçèíîâîé ïðîáêîé ñ
òàêèì ðàñ÷åòîì, ÷òîáû 1/3 ÷àñòü áóòûëêè îñòàâàëàñü ñâîáîäíîé. Çàòåì äîáàâëÿþò â êîëè÷åñòâå 1—3 % îò
îáúåìà õëîðîôîðìà (â õîëîäíîå âðåìÿ ãîäà — ìåíüøå, ÷åì â òåïëîå), çàêðûâàþò áóòûëü ïðîáêîé è
íåñêîëüêî ðàç âñòðÿõèâàþò, ïîñëå ÷åãî âûíèìàþò ïðîáêó äëÿ óäàëåíèÿ èçáûòêà õëîðîôîðìà è òóò æå
ñíîâà çàêðûâàþò.
×åðåç 1—2 ÷ ïîñëå äîáàâëåíèÿ ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû èëè ïàíêðåàòèíà ïðîâåðÿþò ðåàêöèþ,
óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,4—7,6 è îñòàâëÿþò ñìåñü äëÿ ïåðåâàðèâàíèÿ íà 7—16 ñóòîê ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå äî îáðàçîâàíèÿ àìîðôíîãî îñàäêà.
Ïåðâûå 3—4 ñóòîê ïåðåâàðèâàíèÿ åæåäíåâíî ïðîâåðÿþò ðåàêöèþ ñðåäû è ïîääåðæèâàþò ðÍ íà
óðîâíå 7,4—7,6.  òå÷åíèå ýòîãî âðåìåíè âñòðÿõèâàþò æèäêîñòü íå ìåíåå òðåõ ðàç â ñóòêè òàê æå, êàê
óêàçàíî âûøå. Â äàëüíåéøåì âñòðÿõèâàòü ìîæíî ðåæå.
Çà 1—2 ñóòîê äî îêîí÷àíèÿ ïåðåâàðèâàíèÿ âñòðÿõèâàíèå ïðåêðàùàþò, ÷òîáû ãèäðîëèçàò îòñòîÿëñÿ. Êîíåö ïåðåâàðèâàíèÿ õàðàêòåðèçóåòñÿ ñëåäóþùèìè ïðèçíàêàìè: íà äíå áóòûëêè ñîáèðàåòñÿ àìîðôíûé îñàäîê; æèäêîñòü íàä îñàäêîì ïðîñâåòëÿåòñÿ è ïðèíèìàåò ñîëîìåííî-æåëòûé öâåò; ãèäðîëèçàò
ëåãêî ôèëüòðóåòñÿ; ðåàêöèÿ íà òðèïòîôàí ñ áðîìíîé âîäîé äîëæíà áûòü ïîëîæèòåëüíîé (â ïðîáèðêó
íàëèâàþò 3—4 ñì3 ôèëüòðîâàííîãî ãèäðîëèçàòà, äîáàâëÿþò òðè-÷åòûðå êàïëè áðîìíîé âîäû); ïðè
íàëè÷èè òðèïòîôàíà æèäêîñòü ïðèíèìàåò ðîçîâî-ôèîëåòîâûé öâåò, â òî âðåìÿ êàê êîíòðîëüíàÿ ïðîáèðêà ñ ãèäðîëèçàòîì áåç áðîìíîé âîäû èìååò æåëòîå îêðàøèâàíèå. 5 %-íûé ãèäðîëèçàò äîëæåí
ñîäåðæàòü 1,1—1,2 % îáùåãî àçîòà. Ïîñëå ãèäðîëèçà æèäêîñòü ôèëüòðóþò ÷åðåç ïîëîòíÿíûé èëè áóìàæíûé ôèëüòð, ñëèâàþò â áóòûëü è ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
Ïðèãîòîâëåííóþ ñðåäó ìîæíî õðàíèòü ïÿòü ìåñÿöåâ. Ïåðåä óïîòðåáëåíèåì æèäêîñòü ôèëüòðóþò.
(Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2).
3.1.3. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å á ó ë ü î í à Õ î ò ò è í ã å ð à
Ê 100 ñì3 îñíîâíîãî ðàñòâîðà äîáàâëÿþò 500 ñì3 âîäîïðîâîäíîé âîäû, 3 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ è
0,12 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ. Ïîëó÷åííûé ðàñòâîð êèïÿòÿò â òå÷åíèå 10 ìèí, ôèëüòðóþò, óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2—7,4 è ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
3.1.4. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ô è ç è î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î ð à ñ ò â î ð à
 1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 8,5 ã õèìè÷åñêè ÷èñòîãî õëîðèñòîãî íàòðèÿ. Ðàñòâîð äîâîäÿò äî êèïåíèÿ, îõëàæäàþò, ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð, ðàçëèâàþò â êîëáû èëè
ïðîáèðêè è ñòåðèëèçóþò 20 ìèí â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
3.1.5. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ë å â è í à
Ê 100 ñì3 ðàñïëàâëåííîãî ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà ñ ðÍ 7,0—7,4, ïðèãîòîâëåííîãî ïî ï. 3.1.1,
äîáàâëÿþò 2 ñì3 0,5 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà ïðåäâàðèòåëüíî ïîäîãðåòîé íà âîäÿíîé áàíå ìåòèëåíîâîé
ñèíè, 1,5 ñì3 2 %-íîãî ðàñòâîðà ýîçèíà (áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî), 2 ã ëàêòîçû è 0,2 ã äâóçàìåùåííîãî
ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ. Ðàñòâîðû êðàñîê ãîòîâÿò íà äèñòèëëèðîâàííîé âîäå è ñòåðèëèçóþò 1 ÷ ïðè
òåìïåðàòóðå 100 °Ñ. Ïîñëå äîáàâëåíèÿ âñåõ êîìïîíåíòîâ â óêàçàííîì ïîðÿäêå ñðåäó òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ðàçëèâàþò â ÷àøêè è ïîäñóøèâàþò. Ñðåäà äîëæíà èìåòü êðàñíî-ôèîëåòîâûé öâåò.
Ñðåäà Ëåâèíà ìîæåò áûòü ïðèãîòîâëåíà èç ñóõîé ñòàíäàðòíîé ñðåäû ïî ïðîïèñè, óêàçàííîé íà
ýòèêåòêå.
3.1.6. Ñðåäû ôóêñèí-ñóëüôèòíûé àãàð (ñðåäà Ýíäî), áàêòîàãàð Ïëîñêèðåâà, âèñìóò-ñóëüôèò àãàð
(ñðåäà Âèëüñîí-Áëåðà) ìîãóò áûòü ïðèãîòîâëåíû èç ñóõèõ ñòàíäàðòíûõ ñðåä ïî ïðîïèñè, óêàçàííîé íà
ýòèêåòêå.
3.1.7. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ì þ ë ë å ð à
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñðåäû Ìþëëåðà âíà÷àëå ãîòîâÿò ðàñòâîðû ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ è
Ëþãîëÿ.
 ìåðíûé öèëèíäð ñ 50 ã ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ äîáàâëÿþò äî 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé
âîäû. Ðàñòâîð ïåðåëèâàþò â áóòûëü è ñòåðèëèçóþò òåêó÷èì ïàðîì â òå÷åíèå 30 ìèí.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà Ëþãîëÿ â 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 25 ã ìåòàëëè÷åñêîãî éîäà, 20 ã éîäèñòîãî êàëèÿ.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñðåäû Ìþëëåðà â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû ïîìåùàþò ïî 4,5 ã ìåëà è ñòåðèëèçóþò èõ ñóõèì ïàðîì â òå÷åíèå 1 ÷. Çàòåì íàëèâàþò â êàæäûé ôëàêîí ïî 90 ñì3 áóëüîíà èç ïåðåâàðà
Õîòòèíãåðà, ñîäåðæàùåãî 0,13—0,15 % àìèííîãî àçîòà, óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2—7,4 è ñòåðèëèçóþò ïðè
òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. Ïîñëå ñòåðèëèçàöèè âíîâü óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2—7,4, äëÿ ÷åãî ïðîâåðÿþò â îäíîì
èç ôëàêîíîâ è îïðåäåëÿþò íåîáõîäèìûé äëÿ ïîäòèòðîâêè äàííîãî êîëè÷åñòâà ñðåäû îáúåì ñîëÿíîé
êèñëîòû èëè ãèäðîîêèñè íàòðèÿ. Çàòåì â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ ïåðåä óïîòðåáëåíèåì äîáàâëÿþò ïî
2 ñì3 ðàñòâîðà Ëþãîëÿ è ïî 10 ñì3 ðàñòâîðà ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ.
(Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2).
4-1—1106
73
Ñ. 6 ÃÎÑÒ 21237—75
3.1.8. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê à ó ô ì à í à
Ê 500 ñì3 ñòåðèëüíîé ñðåäû Ìþëëåðà, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.7, äîáàâëÿþò 25 ñì3 ñòåðèëüíîé
æåë÷è êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà è 5 ñì3 0,1 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè. Ñìåñü
õîðîøî âçáàëòûâàþò, ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû, íî íå ñòåðèëèçóþò.
3.1.9. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ å ë å í è ò î â î ã î Ô-á ó ë ü î í à
Ñðåäó ãîòîâÿò èç äâóõ îñíîâíûõ ðàñòâîðî⠗ À è Á.
Ðàñòâîð À ñîñòîèò èç 5 ã ïåïòîíà ÷åøñêîé ôèðìû «Ñïîôà» èëè âåíãåðñêîé ôèðìû «Ðèõòåð», 7 ã
áåçâîäíîãî äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ, 3 ã îäíîçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ,
4 ã õ.÷. ëàêòîçû, 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ðÍ ðàñòâîðà 6,9—7,1. Ðàñòâîð ñòåðèëèçóþò 30 ìèí
ïðè òåìïåðàòóðå 112 °Ñ.
Ðàñòâîð Á ñîñòîèò èç 10 %-íîãî ðàñòâîðà êèñëîãî ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ, ïðèãîòîâëåííîãî íà
ñòåðèëüíîé âîäå. Ðàñòâîð ãîòîâÿò íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì.
Ïðè èçìåíåíèè ñåðèè ëþáîãî èç âõîäÿùèõ â ñðåäó êîìïîíåíòîâ (ïåïòîíà, êèñëîãî ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ, ôîñôàòîâ) ïðîâîäÿò ïðåäâàðèòåëüíî ïîäòèòðîâêó, äëÿ ÷åãî ýêñïåðèìåíòàëüíî îïðåäåëÿþò òî÷íóþ ïðîïîðöèþ ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî áåçâîäíîãî íàòðèÿ è ôîñôîðíîêèñëîãî
îäíîçàìåùåííîãî íàòðèÿ, êîòîðàÿ ñ èñïîëüçóåìûìè îáðàçöàìè ïåïòîíà è ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ
äàåò ðÍ íå âûøå 6,9—7,1, ÷òî ðåãóëèðóåòñÿ èçìåíåíèåì ñîîòíîøåíèÿ ôîñôàòîâ.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñåëåíèòîâîé ñðåäû ê 50 ñì3 ðàñòâîðà À ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 2 ñì3 ðàñòâîðà Á.
Ñðåäó ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû èëè êîëáû, íî íå ñòåðèëèçóþò.
3.1.10. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å õ ë î ð è ñ ò î ì à ã í è å â î é ñ ð å ä û «Ì» (ì î ä è ô èö è ð î â à í í î é)
Ñðåäó ãîòîâÿò èç òðåõ îñíîâíûõ ðàñòâîðîâ À, Á è Â.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà À â 90 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 0,42 ã ñóõîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ïåïòîíà, 0,7 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, 0,15 ã îäíîçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ, 4 ñì3
äðîææåâîãî äèàëèçàòà.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà Á â 9 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 3,6 ã êðèñòàëëè÷åñêîãî
õëîðèñòîãî ìàãíèÿ.
Ðàñòâîð Â ñîñòîèò èç 0,09 ñì3 5 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ õëîðèñòîìàãíèåâîé ñðåäû «Ì» (ìîäèôèöèðîâàííîé) ðàñòâîðû À, Á è Â ñìåøèâàþò è ñòåðèëèçóþò 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 112,5 °Ñ.
Êîíöåíòðèðîâàííóþ ñðåäó ãîòîâÿò, óäâàèâàÿ ñîäåðæàíèå âñåõ êîìïîíåíòîâ, êðîìå äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
Ïðè îòñóòñòâèè äðîææåâîãî äèàëèçàòà äîïóñêàåòñÿ ïðèìåíÿòü äðîææåâîé ýêñòðàêò.
3.1.11. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ä ð î æ æ å â î ã î ý ê ñ ò ð à ê ò à
 2000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 1000 ã ïðåññîâàííûõ õëåáîïåêàðíûõ äðîææåé.
Ïîëó÷åííóþ ñóñïåíçèþ ñòåðèëèçóþò 30 ìèí òåêó÷èì ïàðîì, çàòåì îòñòàèâàþò â õîëîäèëüíèêå ïðè
òåìïåðàòóðå 4 °Ñ â òå÷åíèå 5—6 ñóòîê.
Æèäêîñòü íàä îñàäêîì äåêàíòèðóþò, ïðèëèâàþò 2,5 ñì3 0,01 %-íîãî ðàñòâîðà êðèñòàëëè÷åñêîãî
ôèîëåòîâîãî, ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè è âíîâü ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå 100 °Ñ â
òå÷åíèå 30 ìèí. Ýêñòðàêò õðàíÿò â õîëîäèëüíèêå ïðè òåìïåðàòóðå 4—6 °Ñ äî äâóõ íåäåëü.
3.1.12. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê è ë ë è à í à
Ê 100 ñì3 ñòåðèëüíîãî ïèòàòåëüíîãî áóëüîíà (ðÍ 6,8—6,9) ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 1 ñì3 0,1 %-íîãî
ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè. Ðàñòâîð áðèëëèàíòîâîé çåëåíè ãîòîâÿò ñëåäóþùèì îáðàçîì: 0,1 ã
áðèëëèàíòîâîé çåëåíè çàëèâàþò 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ïîìåùàþò âî ôëàêîíû ñ ðåçèíîâîé
èëè êîðêîâîé ïðîáêîé è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà ñóòêè.
3.1.13. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å
òðåõñàõàðíîãî
àãàðà
ñ
ìî÷åâèíîé
(Ê ð ó ì â è ä å-Î ë ü ê å í è ö ê î ã î â ì î ä è ô è ê à ö è è Ê î â à ë ü ÷ ó ê à)
 1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 2 ã ãëþêîçû, 3,5 ã ñàõàðîçû, 15 ã ëàêòîçû, 0,6 ã
ñîëè Ìîðà, 1 ã ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ è 10 ã ìî÷åâèíû. Ñîëü Ìîðà è ñåðíîâàòèñòîêèñëûé íàòðèé
ïðåäâàðèòåëüíî ðàñòâîðÿþò â 5—7 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû â ïðîáèðêàõ. Óãëåâîäû è ìî÷åâèíó
òàêæå ðàñòâîðÿþò â 10 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû â êîëáå íà âîäÿíîé áàíå. Äî ñòåðèëèçàöèè óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,4—7,6 è äîáàâëÿþò 46 ã ñóõîé ñðåäû ñ ñàõàðîçîé è èíäèêàòîðîì «Âл. Ðàñòâîð ðàçìåøèâàþò è êèïÿòÿò äî ðàñïëàâëåíèÿ àãàðà, ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè ïî 5—6 ñì3 â êàæäóþ. Ñðåäó, ðàçëèòóþ
â ïðîáèðêè, ñòåðèëèçóþò òåêó÷èì ïàðîì 2 äíÿ ïî 30 ìèí èëè ïðè òåìïåðàòóðå 112 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí.
Ïîñëå ñòåðèëèçàöèè ñðåäó ñêàøèâàþò òàê, ÷òîáû îñòàëñÿ íåáîëüøîé ñòîëáèê (íå ìåíåå 3 ñì).
74
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 7
3.1.14. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï å ï ò î í í î-ó ã ë å â î ä í û õ ñ ð å ä (ñ ð å ä û Ã è ñ ñ à)
Ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ïðèáàâëÿþò 1 ã ñóõîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ïåïòîíà, 0,5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ è íàãðåâàþò äî ðàñòâîðåíèÿ, çàòåì ôèëüòðóþò äî òåõ ïîð, ïîêà ðàñòâîð íå ñòàíåò ñîâåðøåííî ïðîçðà÷íûì. Óñòàíàâëèâàþò ðÍ 0,7, ïðèáàâëÿþò 0,5 ã óãëåâîäà è 1 ñì3 èíäèêàòîðà Àíäðåäå.
Ñðåäó ðàçëèâàþò ïî 5 ñì3 â ïðîáèðêè ñ ïîïëàâêàìè è ñòåðèëèçóþò 20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå
110 °Ñ. Ñðåäà äîëæíà áûòü áåñöâåòíîé èëè ñîëîìåííî-æåëòîãî öâåòà, áåç ðîçîâîãî îòòåíêà. Ìîæíî
èñïîëüçîâàòü ãîòîâûå ñðåäû Ãèññà.
Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ èíäèêàòîðà Àíäðåäå ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 16,4 ñì3
1 ìîëü/äì3 ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè íàòðèÿ è 0,5 ã êèñëîãî ôóêñèíà. Ðàñòâîð ñòåðèëèçóþò 5 ìèí ïðè
òåìïåðàòóðå 110—112 °Ñ. Èíäèêàòîð õðàíÿò â ñêëÿíêå èç òåìíîãî ñòåêëà.
(Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2).
3.1.15. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï å ï ò î í í î é â î ä û
Ê 1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 10 ã ïåïòîíà è 5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, êèïÿòÿò äî
ðàñòâîðåíèÿ ïåïòîíà, ôèëüòðóþò è óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2—7,4, ïîñëå ÷åãî ñòåðèëèçóþò 30 ìèí ïðè
òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
3.1.16. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï ë à ç ì û ê ð î â è
 ïðîáèðêó âíîñÿò 2 ñì3 5 %-íîãî ðàñòâîðà ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ è 8 ñì3 òîëüêî ÷òî ïîëó÷åííîé
êðîâè êðîëèêà. Öèòðàòíóþ êðîâü ñòàâÿò íà 18—20 ÷ â õîëîäèëüíèê ïðè òåìïåðàòóðå 4—6 °Ñ èëè
ïîäâåðãàþò öåíòðèôóãèðîâàíèþ ïðè 3000 îá/ìèí â òå÷åíèå 15 ìèí.  ðåçóëüòàòå ÷åãî íàä îñàäêîì
ýðèòðîöèòîâ îáðàçóåòñÿ ïðîçðà÷íûé ñëîé æèäêîñòè æåëòîâàòîãî öâåòà — ïëàçìû, êîòîðóþ ðàçâîäÿò
ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì 1:4.
3.1.17. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ä å ô è á ð è í è ð î â à í í î é ê ð î â è
 êîëáó ñî ñòåêëÿííûìè áóñàìè ñëèâàþò 8 ñì3 òîëüêî ÷òî âçÿòîé êðîâè êðîëèêà, áàðàíà, ëîøàäè
è íåïðåðûâíî âñòðÿõèâàþò â òå÷åíèå 10—15 ìèí, â ðåçóëüòàòå ÷åãî íàõîäÿùèéñÿ â êðîâè ôèáðèí
âûïàäàåò â îñàäîê, îáâîëàêèâàåò áóñû. Äåôèáðèíèðîâàííóþ êðîâü ñëèâàþò â äðóãóþ êîëáó èëè ïðîáèðêó. Ñëèòàÿ äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü óòðà÷èâàåò ñïîñîáíîñòü ñâåðòûâàòüñÿ.
3.1.18. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê ð î â ÿ í î ã î à ã à ð à
Ê 100 ñì3 ðàñïëàâëåííîãî ñòåðèëüíîãî ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà, ïðèãîòîâëåííîãî ïî ï. 3.1.1 è
îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòóðû 45 °Ñ, ñòåðèëüíî ïðèáàâëÿþò 5—10 ñì3 ñòåðèëüíî âçÿòîé äåôèáðèíèðîâàííîé êðîâè. Ãîòîâóþ ñðåäó ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè, äàþò åé çàñòûòü è ïîäñóøèâàþò â
òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ñëîé àãàðà äîëæåí áûòü ðàâíîìåðíî îêðàøåí â êðàñíûé öâåò.
3.1.19. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å à ã à ð à Ñ è ì ì î í ñ à
 1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, 0,2 ã ñåðíîêèñëîãî ìàãíèÿ,
1,5 ã ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ-àììîíèÿ, 2 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ, 5 ã íåéòðàëüíîãî ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ, 20 ã àãàðà. Ðàñòâîð ôèëüòðóþò, äîáàâëÿþò 40 ñì3 ðàñòâîðà áðîìòèìîëîâîãî
ñèíåãî (1:500). Ñðåäó ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè ïî 5—6 ñì3 â êàæäóþ, ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ
â òå÷åíèå 20 ìèí, ïîñëå ÷åãî ñêàøèâàþò. Ãîòîâàÿ ñðåäà äîëæíà áûòü îëèâêîâîãî öâåòà.
3.1.20. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ã î ñ ó ä à ð ñ ò â å í í î ã î ê î í ò ð î ë ü í î ã î
è í ñ ò è ò ó ò à (ÃÊÈ)
 ñòåðèëüíóþ êîëáó íàëèâàþò 60 ñì3 ðàñòâîðà Õåíêñà è äîáàâëÿþò ñòåðèëüíî 40 ñì3 ñûâîðîòêè
êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, ïðîãðåòîé ïðè òåìïåðàòóðå 56 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. Ïîñëå òùàòåëüíîãî
ïåðåìåøèâàíèÿ óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2 ðàñòâîðîì äâóóãëåêèñëîãî íàòðèÿ è ðàçëèâàþò ñðåäó ïî 2 ñì3 â
ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè, êîòîðûå çàêðûâàþò ñòåðèëüíûìè ðåçèíîâûìè ïðîáêàìè. Ñðåäó ìîæíî õðàíèòü
ïðè òåìïåðàòóðå 4 °Ñ äî ÷åòûðåõ ìåñÿöåâ.
3.1.21. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ä ð î æ æ å â ê è í î é
Ê 10 ñì3 ñòåðèëüíîãî æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà äîáàâëÿþò 90 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà, òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò. Ñìåñü ðàçëèâàþò ïî 8 ñì3 â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè. Ïåðåä óïîòðåáëåíèåì ïðîâåðÿþò ñòåðèëüíîñòü ñðåäû, ïîìåñòèâ åå â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà 48 ÷.
3.1.22. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê è ò ò-Ò à ð î ö ö è
Ñâåæóþ ïå÷åíü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ðàçðåçàþò íà êóñêè ìàññîé ïî 50—60 ã, çàëèâàþò
ðàâíûì êîëè÷åñòâîì âîäû è êèïÿòÿò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè. Ïå÷åíî÷íûé
ýêñòðàêò ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð è ñìåøèâàþò ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì èç
ðàñ÷åòà îäíà ÷àñòü ïå÷åíî÷íîãî ýêñòðàêòà íà òðè ÷àñòè áóëüîíà. Ñìåñü íàãðåâàþò äî êèïåíèÿ, äîáàâëÿþò õëîðèñòûé íàòðèé èç ðàñ÷åòà 1,25 ã íà 1000 ñì3 ñðåäû è óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,6—7,8, ïîñëå ÷åãî
êèïÿòÿò â òå÷åíèå 15 ìèí è ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð.
4-1*
75
Ñ. 8 ÃÎÑÒ 21237—75
 ïðîáèðêè êëàäóò ìåëêî íàðåçàííûå êóñî÷êè ïå÷åíè ïî 1,5—2 ã è çàëèâàþò ñìåñüþ ïå÷åíî÷íîãî
ýêñòðàêòà ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì. Íà ïîâåðõíîñòü ñðåäû íàñëàèâàþò 0,5—1 ñì3 âàçåëèíîâîãî
ìàñëà. Ñðåäó ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ.
3.1.23. Ð à ç â å ä å í è å ï å í è ö è ë ë è í à
Íà êàæäûå 100 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà äîáàâëÿþò 1 ñì3 ñòåðèëüíîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäû è
ïîëó÷àþò îñíîâíîå ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 100 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3. Íàïðèìåð, âî ôëàêîí,
ñîäåðæàùèé 500 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà, íóæíî âíåñòè 5 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
 ïÿòü ïðîáèðîê íàëèâàþò ïî 4,5 ñì3 â êàæäóþ ñòåðèëüíîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.  ïåðâóþ
ïðîáèðêó ñòåðèëüíîé ïèïåòêîé âíîñÿò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà îñíîâíîãî ðàçâåäåíèÿ è ïîëó÷àþò â ïåðâîé
ïðîáèðêå ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 10 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Íîâîé ïèïåòêîé èç ïåðâîé
ïðîáèðêè, òùàòåëüíî ïåðåìåøàâ ñîäåðæèìîå, ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 ðàñòâîðà âî âòîðóþ ïðîáèðêó è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 1000 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Òàêèì æå îáðàçîì èç âòîðîé
ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò â òðåòüþ 0,5 ñì3 è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 100 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3
ðàñòâîðà. Èç òðåòüåé ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 â ÷åòâåðòóþ è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 10 åä.
â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Èç ÷åòâåðòîé ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 â ïÿòóþ è ïîëó÷àþò â ïÿòîé ïðîáèðêå
ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 1 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà.
3.1.24. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì ÿ ñ î-ï å ï ò î í í î ã î à ã à ð à ñ ï å í è ö è ë ë è í î ì
 òðè êîëáî÷êè èëè áîëüøèå ïðîáèðêè, ñîäåðæàùèå ïî 20 ñì3 ñòåðèëüíîãî ðàñïëàâëåííîãî è
îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòóðû 45—50 °Ñ ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà (ðÍ 7,2), äîáàâëÿþò â ïåðâóþ êîëáó
1 ñì3 ïåíèöèëëèíà èç ÷åòâåðòîé ïðîáèðêè (ñì. ï. 3.1.23), ñîäåðæàùåé â 1 ñì3 10 åä. ïåíèöèëëèíà,
òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ïîëó÷àþò àãàð, ñîäåðæàùèé 0,5 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3, âî âòîðóþ êîëáó
âíîñÿò 1 ñì3 èç ïÿòîé ïðîáèðêè (ñì. ï. 3.1.23), ñîäåðæàùåé â 1 ñì3 1 åä. ïåíèöèëëèíà, ïîëó÷àþò àãàð,
êîòîðûé ñîäåðæèò â 1 ñì3 0,05 åä. ïåíèöèëëèíà; òðåòüþ êîëáî÷êó îñòàâëÿþò áåç ïåíèöèëëèíà äëÿ
êîíòðîëÿ. Ñîäåðæèìîå âñåõ òðåõ êîëáî÷åê ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ïî 5 ñì3 â êàæäóþ è
ñêàøèâàþò.
3.1.25. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å è í ä è ê à ò î ð í î é á ó ì à ã è ä ë ÿ î ï ð å ä å ë å í è ÿ
èíäîëà
5 ã ïàðàäèìåòèëàìèäîáåíçàëüäåãèäà, 10 ñì3 î÷èùåííîé êîíöåíòðèðîâàííîé ôîñôîðíîé êèñëîòû
ðàñòâîðÿþò â 50 ñì3 96 ° ñïèðòà.  òåïëîâàòîì ðàñòâîðå ñìà÷èâàþò ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó, âûñóøèâàþò, íàðåçàþò óçêèìè ïîëîñêàìè. Öâåò áóìàãè — æåëòûé. Ïðè íàëè÷èè èíäîëà öâåò áóìàãè ìåíÿåòñÿ îò
ñèðåíåâàòî-ðîçîâîãî äî èíòåíñèâíî ìàëèíîâîãî. Ïîÿâëåíèå äðóãèõ öâåòîâ íà èíäèêàòîðíîé áóìàãå íå
ó÷èòûâàþò.
3.1.26. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å è í ä è ê à ò î ð í î é á ó ì à ã è ä ë ÿ î ï ð å ä å ë å í è ÿ
ñåðîâîäîðîäà
 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 20 ã óêñóñíîêèñëîãî ñâèíöà è 1 ã äâóóãëåêèñëîãî
íàòðèÿ. Ýòèì ðàñòâîðîì ïðîïèòûâàþò ïîëîñêè ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè, âûñóøèâàþò èõ ïðè òåìïåðàòóðå 18—23 °Ñ è íàðåçàþò íà óçêèå ïîëîñêè. Ïîñëå ïðèãîòîâëåíèÿ áóìàãà îñòàåòñÿ áåëîé: ïðè íàëè÷èè
ñåðîâîäîðîäà ÷åðíååò.
3.1.27. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å í à ñ û ù å í í î ã î ñ ï è ð ò î â î ã î ð à ñ ò â î ð à ì åòèëåíîâîé ñèíè
 100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà ðàñòâîðÿþò 8—9 ã ìåòèëåíîâîé ñèíè. Ðàñòâîð ôèëüòðóþò.
3.1.28. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å â î ä í î-ñ ï è ð ò î â î ã î
ð à ñ ò â î ð à ì å ò è ë å í îâîé ñèíè
Ê 30 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 1 ñì3 íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ìåòèëåíîâîé
ñèíè, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.27.
3.1.29. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì å ò è ë å í î â î é ñ è í è Ë å ô ô ë å ð à
Ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 30 ñì3 íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ìåòèëåíîâîé ñèíè è 1 ñì3 1 %-íîãî ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè êàëèÿ.
3.1.30. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å í à ñ û ù å í í î ã î ñ ï è ð ò î â î ã î ð à ñ ò â î ð à ô ó êñèíà
8—9 ã îñíîâíîãî êðèñòàëëè÷åñêîãî ôóêñèíà âûñûïàþò âî ôëàêîí, çàëèâàþò 100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà è ñòàâÿò íà 18—24 ÷ â òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé 37 °Ñ. Ôëàêîí ïåðèîäè÷åñêè âçáàëòûâàþò.
 òå÷åíèå óêàçàííîãî âðåìåíè çíà÷èòåëüíàÿ ÷àñòü êðàñêè ðàñòâîðÿåòñÿ, è íà äíå ôëàêîíà îñòàåòñÿ
îñàäîê, ñâèäåòåëüñòâóþùèé î íàñûùåíèè ðàñòâîðà.
Íàñûùåííûé ðàñòâîð õðàíÿò âî ôëàêîíàõ èç òåìíîãî ñòåêëà. Èç íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ãîòîâÿò âîäíî-ñïèðòîâîé ðàñòâîð ôóêñèíà. Äëÿ ýòîãî ê 1 ñì3 íàñûùåííîãî ðàñòâîðà äîáàâëÿþò 9 ñì3
äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
76
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 9
3.1.31. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê à ð á î ë î â î ã î ô ó ê ñ è í à Ö è ë ÿ
1 ã îñíîâíîãî êðèñòàëëè÷åñêîãî ôóêñèíà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñ 5 ã êðèñòàëëè÷åñêîé êàðáîëîâîé
êèñëîòû (ôåíîëà) è 0,5 ñì3 ãëèöåðèíà. Âî âðåìÿ ðàñòèðàíèÿ íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè ïðèáàâëÿþò 10 ñì3
96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà. Ïîñëå òîãî, êàê êðàñêà ïîëíîñòüþ ðàçîòðåòñÿ, ïðèáàâëÿþò ïðè ïîñòîÿííîì
ïîìåøèâàíèè 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð êðàñêè ôèëüòðóþò. Ôóêñèí Öèëÿ ñòîéêèé è åãî
õðàíÿò âî ôëàêîíàõ èç òåìíîãî ñòåêëà ñ ïðèòåðòîé ïðîáêîé.
3.1.32. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê à ð á î ë î â î ã î ê ð è ñ ò à ë ë è ÷ å ñ ê î ã î ô è î ë åòîâîãî,
ã å í ö è à í-ô è î ë å ò î â î ã î è ë è ì å ò è ë î â î ã î ô è î ë å ò î â î ã î
äëÿ îêðàñêè ïî Ãðàìó
1 ã êðèñòàëë-, ãåíöèàí- èëè ìåòèëâèîëåòà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñ 2 ã êðèñòàëëè÷åñêîé êàðáîëîâîé
êèñëîòû (ôåíîëà). Âî âðåìÿ ðàñòèðàíèÿ íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè ïðèáàâëÿþò 10 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî
ñïèðòà. Ïîñëå òîãî, êàê êðàñêà ïîëíîñòüþ ðàñòâîðèòñÿ, ïðèáàâëÿþò ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè
100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð êðàñêè ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð. Ðàñòâîðû íåñòîéêèå.
3.1.33. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê ð à ñ ÿ ù å é á ó ì à ã è ï î Ñ è í å â ó
 100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà ðàñòâîðÿþò 1 ã êðèñòàëëâèîëåòà è 1 ñì3 ãëèöåðèíà. Êðàñêó
íàëèâàþò â ëîòîê. Áóìàãó íàðåçàþò ïîëîñêàìè øèðèíîé 2,0—2,5 ñì è äëèíîé 30—50 ñì. Ïîëîñêó
ïîãðóæàþò íà íåñêîëüêî ñåêóíä â êðàñêó òàê, ÷òîáû îíà îêðàñèëàñü ñ îáåèõ ñòîðîí. Îêðàøåííûå
ïîëîñêè âûíèìàþò ïèíöåòîì, äàþò êðàñêå ñòå÷ü è ïîäâåøèâàþò íà øïàãàòå äëÿ âûñóøèâàíèÿ. Áóìàãó
ñóøàò íà âîçäóõå ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå 18—23 °Ñ. Âûñóøåííûå ïîëîñêè áóìàãè ðàçðåçàþò íà
êóñî÷êè ðàçìåðîì 2×2 ñì è õðàíÿò â áàíêå èç òåìíîãî ñòåêëà.
3.1.34. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ð à ñ ò â î ð à Ë þ ã î ë ÿ
 10 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 2 ã éîäèñòîãî êàëèÿ. Çàòåì ïðèáàâëÿþò 1 ã êðèñòàëëè÷åñêîãî éîäà. Ðàñòâîð âûäåðæèâàþò 5—6 ÷ äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ éîäà, ïîñëå ÷åãî ïðèáàâëÿþò
290 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Õðàíÿò ðàñòâîð â ñêëÿíêå èç òåìíîãî ñòåêëà.
3.2. Îêðàñêà ïðåïàðàòîâ
3.2.1. Î ê ð à ñ ê à ì à ç ê î â ï î Ã ð à ì ó (î á ù å ï ð è í ÿ ò à ÿ ì î ä è ô è ê à ö è ÿ)
Íà ôèêñèðîâàííûé ìàçîê ïîìåùàþò ïîëîñêó ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè è íàëèâàþò êàðáîëîâûé
ãåíöèàíâèîëåò. Âûäåðæèâàþò 1—2 ìèí, ïîñëå ÷åãî ñíèìàþò áóìàæêó, ñëèâàþò êðàñêó, ìàçîê ïðîìûâàþò âîäîé è íàëèâàþò íà íåãî ðàñòâîð Ëþãîëÿ (ìàçîê ÷åðíååò). ×åðåç 1—2 ìèí ðàñòâîð ñëèâàþò è
íàëèâàþò ýòèëîâûé ñïèðò íà 0,5—1 ìèí. Çàòåì ìàçîê ïðîìûâàþò âîäîé è äîïîëíèòåëüíî îêðàøèâàþò
âîäíûì ôóêñèíîì èëè âîäíûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà â òå÷åíèå 1—2 ìèí. Çàòåì ïðîìûâàþò âîäîé è
ïðîñóøèâàþò ìàçîê ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé.
Îêðàñêó ïî Ãðàìó ìîæíî ïðèìåíÿòü â âîäîèçìåíåíèè Ñèíåâà, ñîãëàñíî êîòîðîìó âìåñòî êàðáîëîâîãî ãåíöèàíâèîëåòà ïðèìåíÿþò îêðàøåííûå ïîëîñêè ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè, ïðèãîòîâëåííîé ïî
ï. 3.1.33. Äëÿ îêðàøèâàíèÿ ìàçêîâ íà ôèêñèðîâàííûé ìàçîê íàêëàäûâàþò ïîëîñêó ôèëüòðîâàëüíîé
áóìàãè, ïðîïèòàííîé ñïèðòîâûì ðàñòâîðîì êðèñòàëëâèîëåòà, è íàíîñÿò äâå-òðè êàïëè âîäû, êîòîðûå
ïîëíîñòüþ âïèòûâàþòñÿ áóìàãîé, ïîñëåäíÿÿ ïëîòíî ïðèëåãàåò ê ñòåêëó. Âûäåðæèâàþò 2 ìèí, çàòåì
áóìàãó óäàëÿþò ïèíöåòîì è äàëüíåéøóþ îêðàñêó ïðîèçâîäÿò ïî Ãðàìó.
3.2.2. Î ê ð à ñ ê à ê à ï ñ ó ë ì å ò î ä î ì Î ë ü ò à
Ìàçêè îêðàøèâàþò 2 %-íûì âîäíûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà â òå÷åíèå 1—3 ìèí (ëó÷øå ïðè
ïîäîãðåâàíèè) è áûñòðî ñìûâàþò âîäîé. Ðàñòâîð ñàôðàíèíà ãîòîâÿò ïåðåä óïîòðåáëåíèåì: ñàôðàíèí
ðàñòâîðÿþò â âîäå, äîâåäåííîé äî êèïåíèÿ è ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð.
3.2.3. Î ê ð à ñ ê à ê à ï ñ ó ë ì å ò î ä î ì Ð å á è ã å ð à
Ìàçêè îêðàøèâàþò è ôèêñèðóþò îäíîâðåìåííî. Ãîòîâÿò ðàñòâîð: 15—20 ã ãåíöèàíâèîëåòà ðàñòâîðÿþò â 100 ñì3 40 %-íîãî ôîðìàëèíà. Ðàñòâîð îñòàâëÿþò íà 8—10 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 20 °Ñ,
ôèëüòðóþò, ïîñëå ÷åãî îí ãîòîâ ê óïîòðåáëåíèþ. Îêðàøèâàþò íåôèêñèðîâàííûå ìàçêè â òå÷åíèå
15—20 ñ, áûñòðî ïðîìûâàþò âîäîé è âûñóøèâàþò ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé.
3.3. Ïîäãîòîâêà îáðàçöîâ ê èññëåäîâàíèþ è ïðîâåäåíèþ ïîñåâà
3.3.1. Êàæäûé ïðåäñòàâëåííûé ê èññëåäîâàíèþ îáðàçåö (ìûøöû, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû, ïàðåíõèìàòîçíûå îðãàíû) ïåðåä ïîñåâîì îñâîáîæäàþò îò âèäèìîé æèðîâîé è ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè, ïîãðóæàþò íà 2—3 ìèí â ñïèðò è äâà ðàçà îáæèãàþò ñ ïîâåðõíîñòè. Çàòåì ñòåðèëüíûìè íîæíèöàìè èç
ãëóáèíû ðàçëè÷íûõ ìåñò êàæäîãî îáðàçöà âûðåçàþò êóñî÷êè ðàçìåðîì íå ìåíåå 2,0×1,5×2,5 ñì; ëèìôàòè÷åñêèå óçëû ðàçðåçàþò ïîïîëàì. Çàòåì âñå âûðåçàííûå êóñî÷êè èçìåëü÷àþò ñòåðèëüíûìè íîæíèöàìè.
3.3.2. Äëÿ ïîñåâà ñîñòàâëÿþò äâå ïðîáû ïî 15 ã êàæäàÿ. Îäíà ïðîáà ñîñòîèò èç êóñî÷êîâ ìûøö è
ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ, à âòîðàÿ — èç êóñî÷êîâ ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ (ïå÷åíè, ïî÷êè è ñåëåçåíêè).
4-2—1106
77
Ñ. 10 ÃÎÑÒ 21237—75
3.3.3. Êàæäóþ ïðîáó â îòäåëüíîñòè ïîìåùàþò â ñòåðèëüíûé ñòàêàí (êîëáó) ãîìîãåíèçàòîðà äëÿ
ïðèãîòîâëåíèÿ âçâåñè. Äëÿ ýòîãî â ñòàêàí (êîëáó) äîáàâëÿþò ïî 15 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà,
êîëè÷åñòâî êîòîðîãî ðàâíî ìàññå êàæäîé ïðîáû, è ãîìîãåíèçèðóþò ïðîáû â ýëåêòðè÷åñêîì ãîìîãåíèçàòîðå. Âíà÷àëå èçìåëü÷àþò ìàòåðèàë çàìåäëåííîé ÷àñòîòîé îáîðîòîâ, çàòåì ñ áîëüøåé ÷àñòîòîé îáîðîòîâ íå áîëåå 2,5 ìèí (â çàâèñèìîñòè îò ÷èñëà îáîðîòîâ).
1 ñì3 ïðèãîòîâëåííîé âçâåñè ñîäåðæèò 0,5 ã ïðîäóêòà.
3.3.4. Ïîëó÷åííûå âçâåñè îòñòàèâàþò 10 ìèí. Èç âåðõíåé ÷àñòè íàäîñàäî÷íîé æèäêîñòè ïèïåòêîé
Ïàñòåðà èëè ïåòëåé âíîñÿò íà ÷àøêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì è ýëåêòèâíîé ñðåäîé (Ýíäî, Ëåâèíà)
îäíó-äâå êàïëè èëè îäíó ïåòëþ è òùàòåëüíî âòèðàþò ìàòåðèàë â ïîâåðõíîñòü ïðåäâàðèòåëüíî ïîäñóøåííûõ ñðåä.
3.3.5. Îäíîâðåìåííî ñ ïîñåâîì íà ïëîòíûå ñðåäû ïðîèçâîäÿò ïîñåâ ìàòåðèàëà äëÿ íàêîïëåíèÿ
ñàëüìîíåëë â îäíó èç ñðåä îáîãàùåíèÿ (ñåëåíèòîâûé Ô-áóëüîí, Ìþëëåðà, Êàóôìàíà, Êèëëèàíà,
õëîðèñòîìàãíèåâóþ ñðåäó «Ì»). Äëÿ ýòîãî 20 ñì3 âçâåñè èç ìûøö è ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ âíîñÿò â îäèí
ôëàêîí (êîëáó), à 20 ñì3 âçâåñè èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíî⠗ â äðóãîé.  êàæäûé ôëàêîí íàëèâàþò
ïî 50 ñì3 ñðåäû îáîãàùåíèÿ.
Ïðè îòñóòñòâèè ãîìîãåíèçàòîðà äîïóñêàåòñÿ ïîñåâ êóñî÷êà ïðîáû ðàçìåðîì íå ìåíåå
2,0×1,5×2,5 ñì (ïóòåì íàíåñåíèÿ îòïå÷àòêîâ ðàçíûìè ñòîðîíàìè ïðîáû íà ïîâåðõíîñòü ïèòàòåëüíîé
ñðåäû â ÷àøêàõ ñ ïðåäâàðèòåëüíî ïîäñóøåííûì ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì è ýëåêòèâíîé ñðåäîé Ýíäî,
Ëåâèíà). Ïðè ýòîì íåîáõîäèìî ïðîèçâåñòè òàêæå ïîñåâ íà ýëåêòèâíûå ñðåäû èç ëèìôàòè÷åñêîãî óçëà
ïå÷åíè èëè ñîñêîáà ñ âíóòðåííåé ñòåíêè æåë÷íîãî ïóçûðÿ. Ïîñåâ â ñðåäó îáîãàùåíèÿ ïðîèçâîäÿò âî
ôëàêîíû Ñîêñëåòà (êîëáû), â êîòîðûå ïðåäâàðèòåëüíî íàëèòî ïî 50 ñì3 ñðåäû îáîãàùåíèÿ (ñåëåíèòîâîé Ô-áóëüîí, Ìþëëåðà, Êàóôìàíà, Êèëëèàíà, õëîðèñòîìàãíèåâàÿ ñðåäà «Ì»).  îäèí ôëàêîí âíîñèòñÿ èçìåëü÷åííàÿ ïðîáà èç ìûøö è ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ ìàññîé 10 ã, à â äðóãîé — 10 ã èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ.
Ñëåäóåò èìåòü â âèäó, ÷òî íà ñåëåíèòîâîì Ô-áóëüîíå S. typhi suis è S. cholerae suis, êàê ïðàâèëî,
íå ðàñòóò. Íàèëó÷øèé ðîñò S. cholerae suis íàáëþäàåòñÿ íà ñðåäå Êèëëèàíà.
3.3.6. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 18 ÷ ÷àøêè ñ ïåðâè÷íûìè
ïîñåâàìè íà ïëîòíûõ ñðåäàõ èçâëåêàþò èç òåðìîñòàòà è ïðîñìàòðèâàþò âèçóàëüíî, ïðè íåîáõîäèìîñòè
— ÷åðåç ëóïó èëè ïîä ìàëûì óâåëè÷åíèåì ìèêðîñêîïà.
Ïðè îòñóòñòâèè ðîñòà ÷åðåç 18 ÷ ïîñåâû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå äîïîëíèòåëüíî äî 24 ÷.
Íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå îòûñêèâàþò êîëîíèè, õàðàêòåðíûå äëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû, ðîæè, ïàñòåðåëëåçà, ëèñòåðèîçà, êîêêîâûõ èíôåêöèé è äð.
Íà ÷àøêàõ ñ ýëåêòèâíûìè ñðåäàìè (Ýíäî, Ëåâèíà) îòûñêèâàþò êîëîíèè, õàðàêòåðíûå äëÿ
áàêòåðèé ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ.
Ïðè îáíàðóæåíèè â ìàçêàõ ìèêðîáîâ, ïîäîçðèòåëüíûõ íà ñèáèðñêóþ ÿçâó, ïîñåâû íà ýëåêòèâíóþ ñðåäó è ñðåäó îáîãàùåíèÿ íå ïðîèçâîäÿò.
4. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÉ
4.1. Áàêòåðèîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâàíèå
Èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ (ïå÷åíè, ïî÷åê, ñåëåçåíêè) ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ òóøè èëè èç
ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ îðãàíà è òêàíè ïðèãîòîâëÿþò 2—10 ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ (â çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé è ïðåäïîëàãàåìîãî äèàãíîçà).
Ïðåïàðàòû âûñóøèâàþò íà âîçäóõå, ôèêñèðóþò è îêðàøèâàþò îäíîâðåìåííî è ïî Ãðàìó è
2 %-íûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà èëè ðàñòâîðîì Ðåáèãåðà.
Ïðè áàêòåðèîñêîïèè ìàçêîâ ïðåæäå âñåãî îáðàùàþò âíèìàíèå íà íàëè÷èå âîçáóäèòåëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû.
Ïðè îêðàñêå ñàôðàíèíîì ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû îêðàøèâàþòñÿ â êèðïè÷íî-êðàñíûé öâåò, à
êàïñóëû, òåíè (ñëåäû ðàñïàäà áàêòåðèé) — â ñâåòëî-æåëòûé.
Ïðè îêðàñêå ðàñòâîðîì Ðåáèãåðà ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû îêðàøèâàþòñÿ â òåìíî-ôèîëåòîâûé
öâåò, à êàïñóëû — â êðàñíî-ôèîëåòîâûé.
 ìàçêàõ èç ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ èëè äðóãèõ òêàíåé ñâèíåé, êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ïðè î÷àãîâîì ïîðàæåíèè, íàðÿäó ñ òèïè÷íûìè êàïñóëüíûìè ïàëî÷êàìè, ìîãóò îáíàðóæèâàòüñÿ àòèïè÷íûå
áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû â âèäå ñèëüíî èçîãíóòûõ èëè ïåðåêðó÷åííûõ äëèííûõ íèòåé, ðàçáóõøèõ è
ïîòåðÿâøèõ ïðàâèëüíûå êîíòóðû, èëè ðàñïàâøèõñÿ íà îòäåëüíûå, êàê áû îñêîëêè áàöèëë èëè òåíåé
ðàçëè÷íîé âåëè÷èíû, îòðèöàòåëüíî îêðàøèâàþùèõñÿ ïî Ãðàìó èëè â âèäå êîíãëîìåðàòà êàïñóë,
íàïîëíåííûõ ìåëü÷àéøèìè âêëþ÷åíèÿìè.
78
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 11
Íàëè÷èå â ìàçêàõ ãðàìïîëîæèòåëüíûõ ïàëî÷åê ñ îáðóáëåííûìè êîíöàìè, à ïðè îêðàñêå ñàôðàíèíîì èëè ðàñòâîðîì Ðåãèáåðà — ïàëî÷åê èëè öåïî÷åê ñ êàïñóëàìè èëè òåíåé â ìàçêàõ èç ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ ñâèíåé ñî ñïåöèôè÷åñêîé äëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû ïàòîëîãè÷åñêîé êàðòèíîé, äàåò ïðåäâàðèòåëüíîå çàêëþ÷åíèå îá îáíàðóæåíèè (áàêòåðèîñêîïè÷åñêè) ìèêðîáîâ, õàðàêòåðíûõ äëÿ âîçáóäèòåëÿ
ñèáèðñêîé ÿçâû.
Ïðè íàëè÷èè â ìàçêàõ àòèïè÷íûõ áàöèëë îäíîâðåìåííî ñ áàêòåðèîñêîïèåé ñòàâÿò ðåàêöèþ
ïðåöèïèòàöèè.
 çàâèñèìîñòè îò ðåçóëüòàòîâ áàêòåðèîñêîïèè è õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ ïðîâîäÿò
èññëåäîâàíèÿ íà íàëè÷èå îïðåäåëåííûõ ìèêðîáîâ.
4.2. Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ àýðîáíûõ áàêòåðèé
4.2.1. Â û ÿ â ë å í è å á à ö è ë ë ñ è á è ð ñ ê î é ÿ ç â û
4.2.1.1 Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ õàðàêòåðíîé ìîðôîëîãèè, â îïðåäåëåíèè õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è âûÿâëåíèè ïàòîãåííîñòè
ïóòåì çàðàæåíèÿ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ.
4.2.1.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ
Áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû îáíàðóæèâàþò â òðè ïîñëåäîâàòåëüíûõ ýòàïà: áàêòåðèîñêîïèÿ ìàçêîâ èç
ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà; ïîëó÷åíèå è èçó÷åíèå ñâîéñòâ ÷èñòîé êóëüòóðû íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ;
áèîëîãè÷åñêàÿ ïðîáà íà ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ è, ïðè íåîáõîäèìîñòè, ñåðîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå.
Ïðè áàêòåðèîñêîïèè ìàçêîâ èç ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà îáðàùàþò âíèìàíèå íà ôîðìó è
ðàñïîëîæåíèå îòäåëüíûõ ìèêðîáîâ è íàëè÷èå êàïñóë. Õàðàêòåðíûé âèä ñèáèðåÿçâåííûõ ïàëî÷åê è
îáèëèå èõ â ìàçêå íåðåäêî ïîçâîëÿåò ïîñòàâèòü äèàãíîç óæå ïî ðåçóëüòàòàì áàêòåðèîñêîïè÷åñêîãî
èññëåäîâàíèÿ.
Áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ÷åðåç 16—24 ÷ ðàñòóò â âèäå ñåðîáåëûõ øåðîõîâàòûõ ñ áàõðîì÷àòûìè êðàÿìè êîëîíèé, íàïîìèíàþùèõ ïîä ëóïîé èëè ïðè ìàëîì
óâåëè÷åíèè ìèêðîñêîïà «ãîëîâêó ìåäóçû», «ëüâèíóþ ãðèâó». Èç ïîäîçðèòåëüíîé êîëîíèè äåëàþò
ïîñåâ â ïðîáèðêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì.
Íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû ðàñòóò â âèäå êðóïíûõ õëîïüåâ, îñåäàþùèõ íà äíî ïðîáèðêè ê êîíöó ïåðâûõ ñóòîê, ñ îáðàçîâàíèåì îñàäêà, íàïîìèíàþùåãî êîìîê âàòû,
áóëüîí îñòàåòñÿ ïðîçðà÷íûì.
Èç áóëüîííîé êóëüòóðû ãîòîâÿò ïðåïàðàò «ðàçäàâëåííàÿ» èëè «âèñÿ÷àÿ êàïëÿ». Ïðè ìèêðîñêîïèðîâàíèè ïðåïàðàòà îáíàðóæèâàþòñÿ íåïîäâèæíûå ñèáèðåÿçâåííûå ïàëî÷êè.
Ïðè íåîáõîäèìîñòè äèôôåðåíöèàöèè ñèáèðåÿçâåííûõ áàöèëë îò ñàïðîôèòíûõ áàöèëë, êîòîðûå
ìîðôîëîãè÷åñêè î÷åíü ñõîäíû, âûäåëåííóþ ÷èñòóþ êóëüòóðó íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå èëè ìÿñîïåïòîííîì áóëüîíå èññëåäóþò: íà òåñò «æåì÷óæíîå îæåðåëüå», ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê ñèáèðåÿçâåííîìó
ôàãó, ñâåðòûâàåìîñòü æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà, ãåìîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü, êàïñóëîîáðàçîâàíèå.
Ò å ñ ò «æ å ì ÷ ó æ í î å î æ å ð å ë ü å» îñóùåñòâëÿþò îäíèì èç äâóõ ñïîñîáîâ:
Ïåðâûé ñïîñîá. Ïîñòàíîâêó òåñòà íà÷èíàþò ñ ðàçâåäåíèÿ ïåíèöèëëèíà ïî ï. 3.1.23.  òðè ïðîáèðêè ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì, â êàæäîé èç êîòîðûõ ñîäåðæèòñÿ ïî 0,5 è 0,05 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3
(ïî ï. 3.1.24), è â êîíòðîëüíóþ ïðîáèðêó áåç ïåíèöèëëèíà âíîñÿò ïî 0,25 ñì3 òðåõ÷àñîâûõ áóëüîííûõ
êóëüòóð èñïûòóåìûõ øòàììîâ, âûðàùåííûõ â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ïîñåâû ïîìåùàþò â
òåðìîñòàò â íàêëîííîì ïîëîæåíèè (íà äåðåâÿííóþ ðåéêó èëè ñòåêëÿííóþ òðóáêó) ïðè òåìïåðàòóðå
37 °Ñ. ×åðåç 3 ÷ èç êîíäåíñàöèîííîé æèäêîñòè áåðóò áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé ìàòåðèàë è ãîòîâÿò íà
ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ ìàçêè, êîòîðûå âûñóøèâàþò íà âîçäóõå, ôèêñèðóþò â òå÷åíèå 15 ìèí ñïèðòîýôèðíîé ñìåñüþ è îêðàøèâàþò ìåòèëåíîâîé ñèíüþ, ðàçâåäåííûì ôóêñèíîì èëè ïî Ãðàìó.
Âòîðîé ñïîñîá. Ê ìÿñî-ïåïòîííîìó áóëüîíó (ðÍ 7,2—7,4) ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 20 % ñûâîðîòêè
êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà áåç êîíñåðâàíòà. Äëÿ ýòîãî áåðóò òðè ïðîáèðêè, â êàæäîé èç êîòîðûõ
ñîäåðæèòñÿ ïî 8 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî áóëüîíà, è äîáàâëÿþò â êàæäóþ ïðîáèðêó 2,0 ñì3 ñûâîðîòêè
êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà. Â ïåðâóþ ïðîáèðêó äîáàâëÿþò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà, ñîäåðæàùåãî 10 åä.
â 1 ñì3 ðàñòâîðà, ïîëó÷àþò áóëüîí, ñîäåðæàùèé â 1 ñì3 0,5 åä. ïåíèöèëëèíà; âî âòîðóþ ïðîáèðêó
äîáàâëÿþò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà èç ïðîáèðêè, ñîäåðæàùåé 1 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà; â òðåòüþ
ïðîáèðêó ïåíèöèëëèíà íå äîáàâëÿþò, â íåé îñòàåòñÿ ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí ñ ñûâîðîòêîé êðîâè
(êîíòðîëüíàÿ). Áóëüîí ñ ñûâîðîòêîé êðîâè è ïåíèöèëëèíîì ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ïî
2,5 ñì3 è âíîñÿò â êàæäóþ èç íèõ ïî 0,25 ñì3 òðåõ÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû, âûðàùåííîé â
òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, èñïûòóåìûõ øòàììîâ. Äëÿ êîíòðîëÿ ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â áóëüîí ñ
ñûâîðîòêîé êðîâè áåç ïåíèöèëëèíà.
Ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí ïåðåä ïîñåâîì íàãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû 40 °Ñ, è
çàñåÿííûå ïðîáèðêè âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 3—6 ÷.
4-2*
79
Ñ. 12 ÃÎÑÒ 21237—75
Äàëüíåéøèé õîä èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäÿò â òîé æå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, êîòîðàÿ èçëîæåíà â ïåðâîì ñïîñîáå.
 ñëó÷àÿõ îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòîâ ìèêðîñêîïèè ÷åðåç 3 ÷ èíêóáàöèè ïîñåâîâ (íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå è ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå) ñëåäóåò ïðîäîëæèòü èíêóáàöèþ äî 6 ÷ è ïîñëå ýòîãî ïðîâåñòè
çàêëþ÷èòåëüíûé ó÷åò òåñòà.
Ïðè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè òåñòà «æåì÷óæíîå îæåðåëüå» áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû îáðàçóþò
öåïî÷êè øàðîîáðàçíîé ôîðìû, êîòîðûå ïðèîáðåòàþò ñõîäñòâî ñ îæåðåëüåì èç áóñ. Ñïîðîâûå ñàïðîôèòíûå àýðîáíûå áàêòåðèè, êàê ïðàâèëî, íå îáðàçóþò øàðîîáðàçíûõ ôîðì, à èìåþò îáû÷íóþ ôîðìó
ïàëî÷åê, ò. å. äàþò îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò ïðè ïîñòàíîâêå ýòîãî òåñòà.
Ë è ç è ñ ñ è á è ð å ÿ ç â å í í û ì ô à ã î ì «Ã à ì ì à Ì Â À» îñóùåñòâëÿþò îäíèì èç äâóõ
ñïîñîáîâ:
Ïåðâûé ñïîñîá. Íà ïîâåðõíîñòè ïëàñòèíêè ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì (ðÍ 7,2—7,4) â ÷àøêå
Ïåòðè ñòåðèëüíîé ïðîáèðêîé ñ ðîâíûìè êðàÿìè äåëàþò 5—6 íàñå÷åê. Áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé èëè
ñòåðèëüíîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ñ òîíêî îòòÿíóòûì êîíöîì íà ïîâåðõíîñòü àãàðà â öåíòð íàñå÷êè
(êðóæêà) íàíîñÿò îäíó êàïëþ òðåõ÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû èñïûòóåìûõ øòàììîâ. Âíåñåííóþ
êàïëþ ðàñïðåäåëÿþò ðàâíîìåðíî ïåòëåé ïî âñåé ïîâåðõíîñòè íàñå÷êè. Çàñåÿííûå ÷àøêè ïîäñóøèâàþò
â òå÷åíèå 15—20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, ïîñëå ÷åãî â öåíòð êàæäîãî ïîñåâà íàíîñÿò êàïëþ
íåðàçâåäåííîãî ôàãà, âíîâü ïîäñóøèâàþò â òå÷åíèå 10 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, è çàòåì ÷àøêè
ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ.
×åðåç 6—8 ÷ â ìåñòå ïîñåâà ìîæíî îáíàðóæèòü ñòåðèëüíîå ïÿòíî, â êîíòðîëüíûõ ÷àøêàõ âñå
íàñå÷êè ïîêðûòû êóëüòóðîé, êàê è â ÷àøêàõ, â êîòîðûõ èñïûòûâàëèñü ñàïðîôèòíûå ñïîðîîáðàçóþùèå àýðîáíûå áàêòåðèè.
Âòîðîé ñïîñîá — ñïîñîá «ñòåêàþùåé êàïëè». Èññëåäóåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò â òðè ïðîáèðêè íà
ñêîøåííûé ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð è âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íå áîëåå 20 ìèí.
Ïðîáèðêè ñòàâÿò âåðòèêàëüíî â øòàòèâ. Çàòåì íà âåðõíþþ ÷àñòü àãàðà íàíîñÿò êàïëþ íåðàçâåäåííîãî
áàêòåðèîôàãà. Îäíó ïðîáèðêó îñòàâëÿþò äëÿ êîíòðîëÿ áåç ôàãà. Äåéñòâèå ôàãà óñòàíàâëèâàþò ÷åðåç 6—
8 ÷.  êîíòðîëüíîé ïðîáèðêå ïî âñåé ïîâåðõíîñòè àãàðà íàáëþäàåòñÿ îáû÷íûé ðîñò êóëüòóðû.  ïðîáèðêàõ ñ ôàãîì ïî õîäó ñòåêàíèÿ êàïëè ìèêðîáû íå ðàñòóò, à âîêðóã ýòîé çîíû íàáëþäàåòñÿ îáû÷íûé
ðîñò êóëüòóðû â âèäê «áîðäþðà».
Íàèáîëåå ÷åòêî ÿâëåíèå ëèçèñà íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 16—18 ÷.
Ñ â å ð ò û â à å ì î ñ ò ü æ å ë ò ê à ê ó ð è í î ã î ÿ é ö à îïðåäåëÿþò ñëåäóþùèì îáðàçîì.
Èñïûòóåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé Äðîææåâêèíîé, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï.
3.1.21. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà âðåìÿ îò 8 äî 24 ÷. Çà óêàçàííîå âðåìÿ
ñèáèðåÿçâåííàÿ ïàëî÷êà íå âûçûâàåò êîàãóëÿöèþ æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà, à áîëüøèíñòâî ñïîðîîáðàçóþùèõ àýðîáíûõ áàêòåðèé êîàãóëèðóþò æåëòîê óæå ÷åðåç 6—8 ÷.
Ãåìîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü îïðåäåëÿþò ñëåäóþùèì îáðàçîì.
Èñïûòûâàåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò íà ÷àøêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ñ êðîâüþ èëè â ïðîáèðêó áóëüîíà ñ êðîâüþ. ×àøêó èëè ïðîáèðêó ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà 20—24 ÷.
Ïðè íàëè÷èè áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû íà ÷àøêå âûðàñòàþò õàðàêòåðíûå êîëîíèè áåç ãåìîëèçà,
áóëüîí ñ êðîâüþ òàêæå íå ãåìîëèçèðóåòñÿ. Ïðè íàëè÷èè äðóãèõ ñàïðîôèòíûõ ñïîðîîáðàçóþùèõ áàöèëë, â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ, âîêðóã êîëîíèé îáðàçóåòñÿ çîíà β-ãåìîëèçà è íàñòóïàåò ãåìîëèç áóëüîíà ñ êðîâüþ.
Î ï ð å ä å ë å í è å ê à ï ñ ó ë î î á ð à ç î â à í è ÿ in vitro.
Èñïûòóåìóþ êóëüòóðó ïåòëåé âûñåâàþò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé «ÃÊÈ», ïðèãîòîâëåííîé ïî ï.
3.1.20, ïðîáèðêó ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 30—120 ìèí ó îòäåëüíûõ ñèáèðåÿçâåííûõ ïàëî÷åê íà÷èíàåòñÿ êàïñóëîîáðàçîâàíèå, à ÷åðåç 16—18 ÷ âñå èëè áîëüøèíñòâî ñèáèðåÿçâåííûõ áàöèëë îáðàçóþò êàïñóëó. Ñî ñðåäû ãîòîâÿò ìàçêè, ôèêñèðóþò èõ 15 ìèí â ìåòàíîëå è îêðàøèâàþò ñèíüþ Ëåôôëåðà â òå÷åíèå 15 ìèí. Ïðè ìèêðîñêîïèè îáíàðóæèâàþò ñèíèå ïàëî÷êè è íèòè,
îêðóæåííûå ðîçîâîé êàïñóëîé.
Îäíîâðåìåííî ñ áàêòåðèîñêîïèåé èñõîäíîãî ìàòåðèàëà â ñîìíèòåëüíûõ ñëó÷àÿõ ïðîèçâîäÿò ðåàêöèþ ïðåöèïèòàöèè.
Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè ïðåöèïèòàöèè
2 ã ìàòåðèàëà ìåëêî íàðåçàþò â ïðîáèðêó è çàëèâàþò 10 ñì3 êàðáîëèçèðîâàííîãî 0,5 %-íîãî
ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Åñëè èññëåäóþò ñâåæèé ìàòåðèàë, òî åãî ïðåäâàðèòåëüíî âûäåðæèâàþò â
òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 18—24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Çàòåì ýêñòðàêò êèïÿòÿò â òå÷åíèå 30—40 ìèí è
ôèëüòðóþò ÷åðåç àñáåñòîâóþ íåéòðàëüíóþ âàòó äî ïîëíîé ïðîçðà÷íîñòè. 0,25—0,3 ñì3 ïðîçðà÷íîãî
ýêñòðàêòà âíîñÿò â óçêóþ ïðîáèðêó è ïîä íåãî ïîäñëàèâàþò òàêîå æå êîëè÷åñòâî ïðåöèïèòèðóþùåé
ñèáèðåÿçâåííîé ñûâîðîòêè, ïðîôèëüòðîâàííîé ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð.
80
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 13
Ðåàêöèÿ ñ÷èòàåòñÿ ïîëîæèòåëüíîé, åñëè íà ãðàíèöå ñûâîðîòêè è ýêñòðàêòà ÷åðåç 3—8 ìèí ïîÿâëÿåòñÿ ïðåöèïèòèðóþùåå êîëüöî; ñîìíèòåëüíîé, åñëè îíî ïîÿâëÿåòñÿ ÷åðåç 10—15 ìèí è îòðèöàòåëüíîé — ïðè îòñóòñòâèè êîëüöà.
Ïðè ïðîâåäåíèè ðåàêöèè ïðåöèïèòàöèè êîíòðîëîåì ñëóæàò: çàâåäîìî ñèáèðåÿçâåííûé àíòèãåí ñ
ñèáèðåÿçâåííîé ïðåöèïèòèðóþùåé ñûâîðîòêîé, íîðìàëüíàÿ ñûâîðîòêà ñ èññëåäóåìûì ýêñòðàêòîì è
ïðåöèïèòèðóþùàÿ ñûâîðîòêà ñ ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì.
Ïðè ïåðâîì êîíòðîëå äîëæíî ïîëó÷èòüñÿ áåëîå êîëüöî, à ïðè âòîðîì è òðåòüåì — êîëüöî
îòñóòñòâóåò.
Ïîñòàíîâêà áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû
Äëÿ ïîñòàíîâêè áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû íà æèâîòíûõ ÷àñòü èñõîäíîãî ìàòåðèàëà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñî ñòåðèëüíûì ïåñêîì è íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. 0,5 ñì3 âçâåñè âïðûñêèâàþò äâóì áåëûì ìûøàì ïîä êîæó â îáëàñòè ñïèíû.
Ïðè èññëåäîâàíèè ìàòåðèàëà îò ñâèíåé (ïîä÷åëþñòíûå ëèìôàòè÷åñêèå óçëû) îïûòíûõ æèâîòíûõ
çàðàæàþò òîëüêî ïîëó÷åííîé ÷èñòîé êóëüòóðîé.
 ñëó÷àå ãèáåëè ìûøåé, ÷òî îáû÷íî íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 24—72 ÷, èõ âñêðûâàþò: èç êðîâè ñåðäöà,
ïå÷åíè, ñåëåçåíêè è ìåñòà çàðàæåíèÿ ïðèãîòîâëÿþò ìàçêè, à èç îðãàíîâ äåëàþò ïîñåâû.
 ìàòåðèàëå èç ñâèíåé íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå êîëîíèè ñèáèðåÿçâåííûåõ áàöèëë ìîãóò áûòü
àòèïè÷íûìè, îñëàáëåííîé âèðóëåíòíîñòè èëè íåâèðóëåíòíûìè, íî îáëàäàþùèìè âñåìè äðóãèìè õàðàêòåðíûìè ïðèçíàêàìè ñèáèðåÿçâåííûõ âîçáóäèòåëåé.
4.2.1.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Îñíîâàíèåì äëÿ ïîñòàíîâêè äèàãíîçà íà ñèáèðñêóþ ÿçâó ÿâëÿþòñÿ: íàëè÷èå â ìàçêàõ èç ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà êàïñóëîîáðàçóþùèõ ïàëî÷åê, à èç êîëîíèé ãðàìïîëîæèòåëüíûõ — íåïîäâèæíûõ
áàöèëë; õàðàêòåðíûé ðîñò íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ; ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ ïðåöèïèòàöèè è ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû.
4.2.2 Â û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ð î æ è ñ â è í å é, ë è ñ ò å ð è î ç à è ï à ñ ò åðåëëåçà
4.2.2.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà è ïàñòåðåëëåçà çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ñïåöèôè÷åñêîãî ðîñòà ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå è èõ äèôôåðåíöèàöèè ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì, êóëüòóðíûì è áèîëîãè÷åñêèì ñâîéñòâàì.
4.2.2.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ
Íàëè÷èå ðîñòà íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ìåëêèõ ïðîçðà÷íûõ êîëîíèé òðåáóåò ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèé íà ïðèñóòñòâèå áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà è ïàñòåðåëëåçà. Èç ïîäîçðèòåëüíûõ êîëîíèé ïðèãîòîâëÿþò ìàçêè ñ îêðàñêîé ïî Ãðàìó, èññëåäóþò íà ïîäâèæíîñòü è ïðîèçâîäÿò
ïîñåâ íà ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð è ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí.
Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ïîêàçàòåëÿìè,
óêàçàííûìè â òàáë. 1.
Òàáëèöà 1
Íàèìåíîâàíèå
ïîêàçàòåëÿ
Ìàçêè-îòïå÷àòêè
Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé
ðîæè ñâèíåé
Íåñïîðîîáðàçóþùèå, òîíêèå,
ïðÿìûå èëè ñëåãêà èçîãíóòûå ïàëî÷êè, èíîãäà íèòè
Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì
àãàðå
Ìåëêèå ðîñèí÷àòûå, ïðîçðà÷íûå
êîëîíèè
Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì
àãàðå
Ëåãêîå ïîìóòíåíèå, ïîäíèìàþùèéñÿ ïðè âñòðÿõèâàíèè îñàäîê
Ìàçêè èç êóëüòóðû
4-3—1106
Êîðîòêèå, ïðÿìûå èëè ñëåãêà
èçîãíóòûå ïàëî÷êè; ïðè õðîíè÷åñêîì òå÷åíèè èíôåêöèè — êàê êîðîòêèå òîíêèå ïàëî÷êè, òàê è óäëèíåííûå öåïî÷êè è íèòè
81
ëèñòåðèîçà
Íåñïîðîîáðàçóþùèå, êîðîòêèå
ïàëî÷êè ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè.
Ðàñïîëàãàþòñÿ ïîîäèíî÷êå, ïîïàðíî,
â ôîðìå ðèìñêîé öèôðû V èëè â âèäå
ïàëèñàäà
Ìåëêèå ðîñèí÷àòûå, ïðîçðà÷íûå
êîëîíèè. ×åðåç 2—3 ñóòîê íàáëþäàåòñÿ ïîìóòíåíèå êîëîíèé
Íåáîëüøîå ïîìóòíåíèå ñ îáðàçîâàíèåì ñëèçèñòîãî îñàäêà, ïîäíèìàþùåãîñÿ ïðè âñòðÿõèâàíèè â âèäå êîñè÷êè
Êîðîòêèå, ïðÿìûå, îâîèäíûå ïàëî÷êè, èíîãäà ïî÷òè êîêêè, ðàñïîëàãàþòñÿ ïîîäèíî÷êå èëè êó÷êàìè
Ñ. 14 ÃÎÑÒ 21237—75
Ïðîäîëæåíèå
Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé
Íàèìåíîâàíèå
ïîêàçàòåëÿ
ðîæè ñâèíåé
Îêðàñêà ïî Ãðàìó
Ïîëîæèòåëüíàÿ
Ïîäâèæíîñòü
Íåïîäâèæåí
Ïðîáà íà êàòàëàçó
Îòðèöàòåëüíàÿ
ëèñòåðèîçà
Ïîëîæèòåëüíàÿ
Ïîäâèæåí â ìîëîäîé 6—20 ÷ êóëüòóðå, âûðàùåííîé ïðè òåìïåðàòóðå
20—22 °Ñ
Ïîëîæèòåëüíàÿ
Äëÿ ïðîâåäåíèÿ ïðîáû íà êàòàëàçó ê ñóòî÷íîé êóëüòóðå äîáàâëÿþò 1 ñì3 10 %-íîãî ðàñòâîðà
ïåðåêèñè âîäîðîäà.
Áàêòåðèè ëèñòåðèîçà, âûäåëÿÿ êàòàëàçó, ðàçëàãàþò ïåðåêèñü âîäîðîäà ñ îáðàçîâàíèåì ïóçûðüêîâ
ãàçà.
Ïðè íåîáõîäèìîñòè äîïîëíèòåëüíîé äèôôåðåíöèàöèè áàêòåðèé ëèñòåðèîçà îò áàêòåðèé ðîæè
ñâèíåé ïðèìåíÿþò ïîñåâû: íà æåëàòèí, íà óãëåâîäíóþ ñðåäó ñ ñàëèöèíîì, íà ìÿñî-ïåïòîííûé ïå÷åíî÷íûé àãàð ñ 0,01 % òåëëóðèòà êàëèÿ, íà ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð ñ êðîâüþ, à òàêæå ñòàâÿò êîíúþíêòèâàëüíóþ ïðîáó íà ìîðñêèõ ñâèíêàõ.
Áàêòåðèè ëèñòåðèîçà, â îòëè÷èå îò áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, íà æåëàòèíå äàþò ìåäëåííûé ðîñò â
âèäå óçëîâàòîé íèòè ñ íåðîâíûìè êðàÿìè è ïóøèñòûìè îòðîñòêàìè, æåëàòèí íå ðàçæèæàþò, ôåðìåíòèðóþò ñàëèöèí, âûçûâàþò β-ãåìîëèç íà àãàðå ñ êðîâüþ, ðàñòóò íà ìÿñî-ïåïòîííîì ïå÷åíî÷íîì àãàðå
ñ 0,5 % ãëþêîçû, 3 % ãëèöåðèíà è 0,01 % òåëëóðèòà êàëèÿ â âèäå ìåëêèõ ÷åðíûõ êîëîíèé è âûçûâàþò
êåðàòîêîíúþíêòèâèò ó ìîðñêèõ ñâèíîê.
Áàêòåðèè ïàñòåðåëëåçîâ, âûäåëåííûå èç òóø è èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé
åäèíûé ðîä áàêòåðèé ñ îäèíàêîâûìè ìîðôîëîãè÷åñêèìè êóëüòóðàëüíûìè è ôåðìåíòàòèâíûìè ñâîéñòâàìè, íî ðàçëè÷àþùèõñÿ ïî âèðóëåíòíûì ñâîéñòâàì.
Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ïàñòåðåëëåçà ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ïîêàçàòåëÿìè, óêàçàííûìè
â òàáë. 2.
Òàáëèöà 2
Íàèìåíîâàíèå ïîêàçàòåëÿ
Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé ïàñòåðåëëåçà
Ìàçêè-îòïå÷àòêè èç ìàòåðèàëà
Íåñïîðîîáðàçóþùèå, ìåëêèå, áèïîëÿðíî îêðàøèâàþùèåñÿ ïàëî÷êè
Îòðèöàòåëüíàÿ
Îêðàñêà ïî Ãðàìó
Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå
Ìåëêèå, ðîñèí÷àòûå, ñëåãêà îïàëåñöèðóþùèå
ïðîçðà÷íûå êîëîíèè, êîòîðûå ïðèíèìàþò ÷åðåç 2—3
ñóòîê ñåðîâàòî-áåëûé öâåò
Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå
Ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ îñàäêîì
Ìàçêè èç êóëüòóð
Áèïîëÿðíîñòü ïî÷òè âñåãäà îòñóòñòâóåò
Ïîäâèæíîñòü
Íåïîäâèæíû
4.2.2.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Î íàëè÷èè áàêòåðèé ñóäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ õàðàêòåðèñòèêàìè òàáë. 1 è 2.
4.2.3. Â û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ê î ê ê î â î é ã ð ó ï ï û
4.2.3.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé êîêêîâîé ãðóïïû (ñòàôèëîêîêêîâ, ñòðåïòîêîêêîâ) çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, îïðåäåëåíèè õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è
ñïîñîáíîñòè îòäåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ êîàãóëèðîâàòü öèòðàòíóþ ïëàçìó êðîâè êðîëèêà ïîä âîçäåéñòâèåì ôåðìåíòà êîàãóëàçû.
4.2.3.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèé
Íàëè÷èå íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ìåëêèõ ïðîçðà÷íûõ èëè ìóòíîâàòûõ êîëîíèé,
èíîãäà îáðàçóþùèõ ðàçëè÷íûå ïèãìåíòû, âûçûâàåò ïîäîçðåíèå íà ïðèñóòñòâèå âîçáóäèòåëåé êîêêîâûõ èíôåêöèé (äèïëîêîêêîçà, ñòàôèëîêîêêîçà, ñòðåïòîêîêêîçà).
Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ñòàâÿò íà îñíîâàíèè ìèêðîñêîïè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ (ãðàìïîëîæèòåëüíûå, íåïîäâèæíûå, íåñïîðîîáðàçóþùèå, êðóãëûå êëåòêè, ðàñïîëàãàþùèåñÿ îäèíî÷íî, öå82
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 15
ïî÷êàìè, ãðîçäÿìè è â âèäå ëàíöåòîâèäíûõ äèïëîêîêêîâ), à òàêæå îïðåäåëåíèÿ õàðàêòåðà ðîñòà íà
ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ.
Íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå ñòàôèëîêîêêè è äèïëîêîêêè äàþò ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ âûïàäåíèåì îáèëüíîãî îñàäêà.
Ïðè ðîñòå ñòðåïòîêîêêîâ íà áóëüîíå ñ 2 % ãëþêîçû áóëüîí îñòàåòñÿ ïðîçðà÷íûì, à íà äíî
ïðîáèðêè âûïàäàåò îñàäîê.
Ïàòîãåííîñòü ñòàôèëîêîêêîâ îïðåäåëÿþò ðåàêöèåé êîàãóëèðîâàíèÿ ïëàçìû êðîâè.
Ïëàçìó êðîâè êðîëèêà, ïðèãîòîâëåííóþ ïî ï. 3.1.16, ðàçëèâàþò ïî 0,5 ñì3 â äâå ñòåðèëüíûå
ïðîáèðêè, â îäíó ïðîáèðêó âíîñÿò ïåòëåé ñóòî÷íóþ àãàðîâóþ êóëüòóðó èñïûòóåìîãî ñòàôèëîêîêêà,
äðóãàÿ ïðîáèðêà ÿâëÿåòñÿ êîíòðîëüíîé. Âíåñåííóþ êóëüòóðó òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî îáå
ïðîáèðêè ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ïðîáèðêè îñòîðîæíî, èçáåãàÿ âñòðÿõèâàíèÿ,
ïðîñìàòðèâàþò. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè êîàãóëÿöèè ó÷èòûâàþò â òå÷åíèå 2—4 ÷ è ÷åðåç 24 ÷. Øòàììû
ñòàôèëîêîêêà, ïðîäóöèðóþùèå ôåðìåíò ïëàçìîêîàãóëàçó, âûçûâàþò ñâåðòûâàíèå ïëàçìû, âñëåäñòâèå
÷åãî îíà ïðåâðàùàåòñÿ â ñòóäíåîáðàçíóþ ìàññó, íå âûëèâàþùóþñÿ ïðè ïåðåâåðòûâàíèè ïðîáèðêè.
Ñâåðòûâàíèå ïëàçìû îáîçíà÷àåòñÿ çíàêîì «+» ñ óêàçàíèåì âðåìåíè, â òå÷åíèå êîòîðîãî ïðîèçîøëà
ðåàêöèÿ.
4.2.3.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Ïðè ïîëó÷åíèè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè ïëàçìîêîàãóëÿöèè ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî â ìÿñå îáíàðóæåí
ïàòîãåííûé ñòàôèëîêîêê.
4.2.4. Â û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ð î ä à ñ à ë ü ì î í å ë ë
4.2.4.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ ñàëüìîíåëë çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ õàðàêòåðíîãî ðîñòà
íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ è óñòàíîâëåíèè ôåðìåíòàòèâíûõ è ñåðîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ñàëüìîíåëë.
4.2.4.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ
Âûÿâëåíèå ñàëüìîíåëë ïðîâîäèòñÿ â ÷åòûðå ïîñëåäîâàòåëüíûõ ýòàïà: ïåðâè÷íûé (ïðÿìîé) ïîñåâ, îáîãàùåíèå, ïîñåâ ñî ñðåäû îáîãàùåíèÿ è ïîäòâåðæäåíèå.
Ïåðâè÷íûé ïîñåâ ïðîèçâîäèòñÿ ïóòåì ïîñåâà âçâåñè èññëåäóåìîãî ìàòåðèàëà íà ïëîòíûå ýëåêòèâíûå ñðåäû. Ýòè ñðåäû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ è èññëåäóþò íà ïðèñóòñòâèå
êîëîíèé, êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ òèïè÷íûìè èëè ïîäîçðèòåëüíûìè íà ñàëüìîíåëëû.
Íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñàëüìîíåëëû ðàñòóò, îáðàçóÿ õàðàêòåðíûå êîëîíèè:
- íà ôóêñèí-ñóëüôèòíîì àãàðå (àãàðå Ýíäî) ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå êðóãëûõ, áåñöâåòíûõ èëè
ñëåãêà ðîçîâàòûõ ïðîçðà÷íûõ, èëè ïîëóïðîçðà÷íûõ êîëîíèé;
- íà ýîçèí-ìåòèëåíîâîì ñèíåì àãàðå (àãàðå Ëåâèíà) ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå ïðîçðà÷íûõ,
áëåäíûõ, íåæíî-ðîçîâûõ èëè ðîçîâàòî-ôèîëåòîâûõ êîëîíèé.
Îáîãàùåíèå ïðîâîäÿò ïóòåì ïîñåâà íà æèäêèå ñåëåêòèâíûå ñðåäû. Ýòè ñðåäû âûäåðæèâàþò â
òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Íà ñåëåíèòîâîì Ô-áóëüîíå ëó÷øåé òåìïåðàòóðîé äëÿ íàêîïëåíèÿ
ñàëüìîíåëë ÿâëÿåòñÿ 43 °Ñ. Ïåðåñåâ ïðîèçâîäÿò ïîñëå îáîãàùåíèÿ èç æèäêèõ ñðåä íà ïëîòíûå ñåëåêòèâíûå äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû, êîòîðûå ïîñëå òåðìîñòàòèðîâàíèÿ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ èññëåäóþò íà
ïðèñóòñòâèå êîëîíèé òèïè÷íûõ èëè ïîäîçðèòåëüíûõ íà ñàëüìîíåëëû.
Íà ñåëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñàëüìîíåëëû ðàñòóò, îáðàçóÿ õàðàêòåðíûå êîëîíèè:
- íà áàêòîàãàðå Ïëîñêèðåâà ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå áåñöâåòíûõ êîëîíèé, íî êîëîíèè áîëåå
ïëîòíûå è íåñêîëüêî ìåíüøåãî ðàçìåðà, ÷åì íà ñðåäå Ýíäî;
- íà âèñìóò-ñóëüôèòíîì àãàðå ñàëüìîíåëëû, êàê ïðàâèëî, ðàñòóò â âèäå ÷åðíûõ èëè êîðè÷íåâûõ
êîëîíèé ñ õàðàêòåðíûì ìåòàëëè÷åñêèì áëåñêîì. Ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ ïðîêðàøèâàíèå â ÷åðíûé öâåò
ó÷àñòêà ñðåäû ïîä êîëîíèåé. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿþò íåêîòîðûå ñåðîëîãè÷åñêèå òèïû èç ãðóïïû Ñ,
êîòîðûå íà ýòîé ñðåäå ðàñòóò â âèäå íåæíûõ ñâåòëî-çåëåíûõ èëè êðóïíûõ ñåðîâàòî-çåëåíûõ êîëîíèé.
Ïîäòâåðæäåíèå íàëè÷èÿ áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë ïðîâîäÿò ïóòåì îïðåäåëåíèÿ ñîîòâåòñòâóþùèõ áèîõèìè÷åñêèõ è ñåðîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ êîëîíèé.
 ñëó÷àå îòñóòñòâèÿ ðîñòà áàêòåðèé ñàëüìîíåëë ïðè ïåðâè÷íîì (ïðÿìîì) ïîñåâå íà ýëåêòèâíûõ
ñðåäàõ, ÷åðåç 12—24 ÷ ïðîâîäÿò âûñåâ íà ñåëåêòèâíûå ñðåäû ñî ñðåä îáîãàùåíèÿ: èç ñðåä Ìþëëåðà,
Êàóôìàíà è Êèëëèàíà ÷åðåç 12—16 ÷, èç ñåëåíèòîâîãî Ô-áóëüîíà è õëîðèñòî-ìàãíèåâîé ñðåäû «Ì»
÷åðåç 18—24 ÷.
Ñîäåðæèìîå ôëàêîíîâ ïåðåä ïåðåñåâîì òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò è âûñåâàþò øòðèõîì ïåòëåé
äèàìåòðîì 2,5—3 ìì íà ÷àøêó ñ âèñìóò-ñóëüôèòíûì àãàðîì, áàêòîàãàðîì Ïëîñêèðåâà èëè àãàðîì
Ýíäî.
Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 18—24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, à ïîñåâû íà âèñìóò-ñóëüôèòíîì àãàðå — íà 48 ÷.
Ïðè îáíàðóæåíèè íà ÷àøêàõ ðîñòà ïîäîçðèòåëüíûõ êîëîíèé èññëåäóþò òðè—ïÿòü êîëîíèé ñ
êàæäîé ÷àøêè.
4-3*
83
Ñ. 16 ÃÎÑÒ 21237—75
Ïîäîçðèòåëüíûå êîëîíèè áàêòåðèé ñàëüìîíåëë èññëåäóþò â ñëåäóþùåì ïîðÿäêå: èç ÷àñòè êîëîíèé ïðèãîòîâëÿþò ìàçîê è îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó, çàòåì ïðîâîäÿò èññëåäîâàíèå íà ïîäâèæíîñòü.
Áàêòåðèè ñàëüìîíåëëû, êàê è âñå áàêòåðèè ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ïàëî÷êè ñ
çàêðóãëåííûìè êîíöàìè, íåñïîðîîáðàçóþùèå, â áîëüøèíñòâå ïîäâèæíûå (S. pullorum è S. gallinarum
íåïîäâèæíûå), îêðàøèâàþùèåñÿ ïî Ãðàìó îòðèöàòåëüíî.
Îñòàâøóþñÿ ÷àñòü êîëîíèè ðàñòèðàþò â êîíäåíñàöèîííîé âîäå ñêîøåííîãî àãàðà èëè â îäíîéäâóõ êàïëÿõ äîáàâëåííîãî ê àãàðó ñòåðèëüíîãî áóëüîíà. Ïîëó÷åííàÿ âçâåñü ñëóæèò èñõîäíûì ìàòåðèàëîì äëÿ äàëüíåéøåãî èññëåäîâàíèÿ.
×àñòü âçâåñè èñïûòûâàþò â ðåàêöèè àããëþòèíàöèè íà ïðåäìåòíîì ñòåêëå. Ðåàêöèþ ñòàâÿò ñ
ïîëèâàëåíòíîé àäñîðáèðîâàííîé àããëþòèðóþùåé Î-ñûâîðîòêîé ãðóïï À, Â, Ñ, D è Å.  êà÷åñòâå
êîíòðîëÿ ïðèìåíÿþò êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà.
Äëÿ ïðîâåäåíèÿ ðåàêöèè àããëþòèíàöèè íà ïðåäìåòíîå ñòåêëî íàíîñÿò êàïëþ ïîëèâàëåíòíîé
àäñîðáèðîâàííîé ñûâîðîòêè è ðÿäîì êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Çàòåì áàêòåðèîëîãè÷åñêîé
ïåòëåé çàõâàòûâàþò ÷àñòü âçâåñè è ðàñòèðàþò åå â êàïëå ñûâîðîòêè, íà÷èíàÿ ñ êðàÿ êàïëè, ïîñòåïåííî
çàõâàòûâàÿ âñþ êàïëþ. Ïåòëþ îáæèãàþò, çàõâàòûâàþò ïåòëåé åùå âçâåñè è âíîñÿò â êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà (êîíòðîëüíîãî), òàêæå ðàñòèðàÿ äî ïîëó÷åíèÿ ðàâíîìåðíîé âçâåñè.
Ïðè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè ÷åðåç 1—2 ìèí â êàïëå ñûâîðîòêè îáðàçóþòñÿ õëîïüÿ èëè êîìî÷êè,
à ñàìà æèäêîñòü ïðîñâåòëÿåòñÿ, ÷òî îñîáåííî çàìåòíî ïðè ïîêà÷èâàíèè ñòåêëà.
 ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå (êîíòðîëüíîì) íàáëþäàåòñÿ ðàâíîìåðíàÿ ìóòü.
Ïðè ïîëó÷åíèè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ñ àäñîðáèðîâàííîé ïîëèâàëåíòíîé ñûâîðîòêîé ïðîâîäÿò ðåàêöèþ àããëþòèíàöèè íà ñòåêëå ñ àäñîðáèðîâàííûìè ìîíîðåöåïòîðíûìè Î-ñûâîðîòêàìè. Ñëåäóåò íà÷èíàòü ñ áîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ ãðóïï Â, Ñ, D è Å, â ÷àñòíîñòè, â ãðóïïå  ñ IV,
â ãðóïïå D c IX, â ãðóïïå Ñ ñ VII, â ãðóïïå Å ñ III, X.
Ïðè îòðèöàòåëüíîé ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ñ îäíîé êîëîíèåé äîïîëíèòåëüíî èññëåäóþò åùå íå
ìåíåå òðåõ-÷åòûðåõ êîëîíèé.
Ïðè õàðàêòåðíîì ðîñòå íà äèôôåðåíöèàëüíîé ñðåäå, èçáèðàòåëüíîé ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè
àããëþòèíàöèè ñ ìîíîðåöåïòîðíîé Î-ñûâîðîòêîé è ïðè íàëè÷èè ïîäâèæíûõ ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê äàåòñÿ ïðåäâàðèòåëüíîå çàêëþ÷åíèå î òîì, ÷òî âûäåëåííàÿ êóëüòóðà îòíîñèòñÿ ê ñàëüìîíåëëàì.
Îäíîâðåìåííî ñ ðåàêöèåé àããëþòèíàöèè ìàòåðèàë çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð ÊðóìâèäåÎëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.13.
Ïîñåâ íà òðåõñàõàðíûé àãàð äåëàþò ñíà÷àëà øòðèõîì ïî ñêîøåííîé ïîâåðõíîñòè, à çàòåì óêîëîì
â ãëóáèíó ñòîëáèêà. Ñðåäó èíêóáèðóþò â òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 16—18 ÷. Ïðè íàëè÷èè ñàëüìîíåëë
ÿíòàðíûé öâåò ñðåäû Êðóìâèäå-Îëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà èçìåíÿåòñÿ ñëåäóþùèì
îáðàçîì: ñòîëáèê — æåëòî-áóðûé, ñêîøåííàÿ ïîâåðõíîñòü öâåò íå èçìåíÿåò. Ïî íàëè÷èþ òðåùèí è
ðàçðûâó ñòîëáèêà àãàðà óñòàíàâëèâàþò îáðàçîâàíèå ãàçà, ïî èçìåíåíèþ îêðàñêè ñòîëáèêà (ïî÷åðíåíèå) — íàëè÷èå ñåðîâîäîðîäà.
Ñàëüìîíåëëû, íå îáðàçóþùèå ñåðîâîäîðîäà, èçìåíÿþò öâåò ñòîëáèêà àãàðà â æåëòûé öâåò. Áàêòåðèè, íå îòíîñÿùèåñÿ ê ñàëüìîíåëëàì, ðàñùåïëÿþùèå ìî÷åâèíó, îêðàøèâàþò ñòîëáèê è ñêîøåííóþ
ïîâåðõíîñòü â ÿðêî-êðàñíûé öâåò, à áàêòåðèè, ñáðàæèâàþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó, èçìåíÿþò öâåò
ñðåäû â ñèíèé.
Åñëè êóëüòóðû ôåðìåíòèðóþò ëàêòîçó è ãëþêîçó ñ îáðàçîâàíèåì ãàçà è ðàñùåïëÿþò ìî÷åâèíó,
îíè íå ïðèíàäëåæàò ê áàêòåðèÿì ðîäà ñàëüìîíåëë.
Êóëüòóðû, íå ôåðìåíòèðóþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó è íå ðàñùåïëÿþùèå ìî÷åâèíó, íî ôåðìåíòèðóþùèå ãëþêîçó (ñ îáðàçîâàíèåì ãàçà) ïîäâåðãàþò äàëüíåéøåìó èññëåäîâàíèþ, äëÿ ÷åãî êóëüòóðó ñî
ñðåäû Êðóìâèäå-Îëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà èññëåäóþò ñ ìîíîðåöåïòîðíîé Î-ñûâîðîòêîé (ìàòåðèàë áåðóò ñ âåðõíåé ÷àñòè ñêîøåííîé ïîâåðõíîñòè). Çàòåì ýòó êóëüòóðó àããëþòèíèðóþò ñ
ìîíîðåöåïòîðíûìè Í-ñûâîðîòêàìè, ñíà÷àëà ñ ïåðâîé ôàçîé, çàòåì ñî âòîðîé ôàçîé Í-àíòèãåíà,
âõîäÿùåãî â äàííóþ ãðóïïó (äëÿ àããëþòèíàöèè ñ Í-ñûâîðîòêàìè êóëüòóðó áåðóò áëèæå ê êîíäåíñàöèîííîé æèäêîñòè â ïðîáèðêå, ãäå îñîáè áîëåå ïîäâèæíû) è óñòàíàâëèâàþò ñåðîëîãè÷åñêèé òèï
ñàëüìîíåëë.
Åñëè êóëüòóðû äàþò îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû àããëþòèíàöèè ñ ìîíîðåöåïòîðíûìè Î-ñûâîðîòêàìè, íî ïðè õàðàêòåðíîì ðîñòå íà ýëåêòèâíîé ñðåäå è ñîîòâåòñòâóþùèõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ
(ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïîäâèæíûå ïàëî÷êè) äåëàþò ïîñåâ íà ñðåäû ñ óãëåâîäàìè:
â êîðîòêèé ïåñòðûé ðÿä (âêëþ÷àÿ ñðåäû ñ ãëþêîçîé, ëàêòîçîé, ñàõàðîçîé, ìàííèòîì).  áóëüîí
Õîòòèíãåðà äëÿ îïðåäåëåíèÿ îáðàçîâàíèÿ èíäîëà è ñåðîâîäîðîäà ïîä ïðîáêó â ïðîáèðêó ñ áóëüîíîì
ïîìåùàþò èíäèêàòîðíûå áóìàæêè, ïðèãîòîâëåííûå ïî ïï. 3.1.25 è 3.1.26.
Ïîñåâû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 18—20 ÷, ïîñëå ÷åãî èõ
ïðîñìàòðèâàþò ïîä ìèêðîñêîïîì.
84
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 17
Ê áàêòåðèÿì èç ðîäà ñàëüìîíåëë îòíîñÿòñÿ áàêòåðèè, íå ôåðìåíòèðóþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó è
ôåðìåíòèðóþùèå ãëþêîçó è ìàííèò (S. typhi suis íå ôåðìåíòèðóåò ìàííèò), îáðàçóþùèå ñåðîâîäîðîä
(S. cholerae suis è S. typhi suis ñåðîâîäîðîä íå îáðàçóþò) è íå îáðàçóþùèå èíäîë.
Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïîëíîé òèïèçàöèè ñàëüìîíåëë ïðîâîäÿò ïîñåâ íà ðàñøèðåííûé ïåñòðûé ðÿä
äëÿ îïðåäåëåíèÿ áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ è èññëåäóþò èõ àíòèãåííûå ñâîéñòâà (òàáë. 3).
Òàáëèöà 3
Àíòèãåíû
Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà
+ +
+ +
+ +
+ +—
+ +
+ —
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ —
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
— +
— +
— +
— +
— +
— +
— +
— —
— +
— +
— +
— +
— +
— +
— +
— +
— (—+)
— +
— +
— +
— +
— +
— +
85
+
+ — +
+ — +
+
+ — +
+
+ + +
+
+ — +
+
+
+ + +
+ + +
+
+ —+ — —+
+ + +
+
+ + +
+
+
+ — —
+ Ó +
+
+ — —
+
+ + +
+
½ — —
½
+
— + +
+
— + +
— — —
+
+ — — —+ — +
Ó — —
+
— + +
+
+
+ + +
— + +
+
+ +
+ +
Ó +
+ +
+ +
+ +
+ +
— —+
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
— +
Ó +
Ó +
— +
+ +
+ +
+ +
+ —
+ —
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+½
+
+
+
+
+
+
+
+
Ãðóïïà
Ìî÷åâèíà
1, 5
—
—
1, 5
1, 2
enz#
1, 5
1, 5
—
1, 2
1, 2
1, 5
1, 7
1, 5
—
—
—
—
—
1, 5
enx
—
—
Èíäîë
d
gms
mt
k
lv
lv
y
c
z 29
d
eh
r
lv
k
d
gm
gp
gp.u
gq
lv
lw
—
—
— + —
Ó + +
Ó + +
+ + +
+ + +
Ó + +
+ + +
Ó Ó Ó
Ó + +
+ + +
— —+ +
+ +— +
— — Ó
— —+ +
— — +
— — +
Ñåðîâîäîðîä
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 7
6, 8
6, 8
6, 8
6, 8
6, 8
9, 12VE
1, 9, 12
1, 9, 12
1, 9, 12
9, 12
1, 9, 12
1, 9, 12
1, 9, 12
1, 9, 12
+ —+ — +
Ó Ó +
+
+ — +
+
— Ó +
+
+ Ó —+
+
+ Ó Ó
+
+ + +
+
+ Ó Ó
+
+ — +
+
+ + +
+
+ —+ — +
+ — Ó
+
—+ Ó — ½
—+ + — —+
½ — +
—
½ — —
—
Ðàìíîçà ïî Áèòòåðó
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Êñèëîçà
Ìàííèò
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Òðåãàëîçà
Ñàõàðîçà
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Ãëèöåðèí ïî Øòåðíó
Ëàêòîçà
+—
+—
+
+
+
+
+—
+
+
+
+—
+
+
+
+
+
Ðàìíîçà
ãàç
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Èíîçèò
êèñëîòà
—
1, 2
1, 2
1, 2
enx
1, 5
—
1, 2
enz#
1, 2
enx
enx
1, 6
1, 5
1, 5
1, 5
Äóëüöèò
2-ÿ ôàçà (íåñïåöèôè÷íàÿ)
a
b
d
eh
eh
h
fg
i
lv
r
—
b
c
c
c
—
Àðàáèíîçà
1-ÿ ôàçà (ñïåöèôè÷íàÿ)
1, 2, 12
1, 4, 5, 12
1, 4, 5, 12
1, 4, 5, 12
4, 5, 12
4, 5, 12
1, 4, 5, 12
1, 4, 5, 12
1, 4, 12
1, 4, 5, 12
4, 12
1, 4, 12, 27
4, 12
6, 7
6, 7
6, 7
Òèï
ñàëüìîíåëë
A S. paratyphi A
B S. paratyphi B
S. stanley
S. saint-paul
S. chester
S. reading
S. derby
S. typhi murium
S. brandenburg
S. heidelberg
S. abortus equi
S. abortus bovis
S. abortus ovis
C S. paratyphi C
S. cholerae suis
S. cholerae suis
kunzendorf
S. mission
S. montevideo
S. oraniengburd
S. thompson
S. concord
S. potsdam
S. bareilly
S. typhi suis
S. tennessee
S. muenchen
S. newport
S. bovis morbificans
S. manchester
S. blockley
D S. typhi
S. enteritidis
S. dublin
S. rostock
S. moscow
S. panama
S. dar—es—salaam
S. gallinarum
S. pullorum
Ãëþêîçà
Î-àíòèãåí
Í-àíòèãåí
—
—(+)
+
Ó
Ó
—+
+
+(—)
—+
+
—+
—
—+
—
—
—
—
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
½
+
—
+
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
+ — —
Ó
+ — —
Ó
+ — —
+
+ — —
+
(—) + — —
+ — —
Ó
— — —
Ó
— — —
—
+ — —
Ó
+ — —
+
+ — —
+
+ — —
+
+ — —
+
+ — —
+
— +— — —
+ — —
+
—+ + — —
—+ —+ — —
—+ + — —
+ — —
Ó
+ — —
Ó
— —+ — —
— — —
—
Ñ. 18 ÃÎÑÒ 21237—75
Ïðîäîëæåíèå
Àíòèãåíû
Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà
Äóëüöèò
Èíîçèò
Ðàìíîçà
Ãëèöåðèí ïî Øòåðíó
Òðåãàëîçà
Êñèëîçà
Ðàìíîçà ïî Áèòòåðó
Ñåðîâîäîðîä
Èíäîë
Ìî÷åâèíà
+ +—
+ +
+ +
+ +
+ +
Àðàáèíîçà
ãàç
1, 6
1, 6
lw
1, 2
1, 5
êèñëîòà
eh
lv
eh
r(i)
z.10
Ìàííèò
10
10
10
10
10
Ñàõàðîçà
3,
3,
3,
3,
3,
Ãëþêîçà
Ëàêòîçà
Å S. anatum
S. london
S. meleagridis
S. seegefeld
S. lecxington
2-ÿ ôàçà (íåñïåöèôè÷íàÿ)
Ãðóïïà
Î-àíòèãåí
Òèï
ñàëüìîíåëë
1-ÿ ôàçà (ñïåöèôè÷íàÿ)
Í-àíòèãåí
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
—
+
+
—
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Ó
Ó
Ó
+
+
+
+
+
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Ó ñ ë î â í û å î á î ç í à ÷ å í è ÿ:
«—» — îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò;
«—+» — îòðèöàòåëüíûé, èíîãäà ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò;
«+» — ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò;
«+—» — ïîëîæèòåëüíûé, ðåäêèå òèïû îòðèöàòåëüíûå;
«Ó» — ðàçëè÷íûå áèîõèìè÷åñêèå òèïû;
«½» — ïîçäíèé èëè íåïîñòîÿííûé ïîëîæèòåëüíûé, èëè îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò.
 ñëó÷àå âûÿâëåíèÿ êóëüòóð ñàëüìîíåëë ñ îòêëîíåíèåì îò òèïè÷íûõ ñâîéñòâ, äëÿ èõ îêîí÷àòåëüíîé èäåíòèôèêàöèè ïðè íåîáõîäèìîñòè ïðîâîäÿò äîïîëíèòåëüíûå èññëåäîâàíèÿ.
Åñëè êóëüòóðà îáëàäàåò ôåðìåíòàòèâíûìè ñâîéñòâàìè, òèïè÷íûìè äëÿ ñàëüìîíåëë, íî íå àããëþòèíèðóåòñÿ ñàëüìîíåëëåçíûìè Î- è Í-ñûâîðîòêàìè, ñëåäóåò èñïûòàòü åå ñïîñîáíîñòü ëèçèðîâàòüñÿ
ñàëüìîíåëëåçíûì Î-ôàãîì.
Ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè ÿâëÿåòñÿ äîïîëíèòåëüíûì ïðèçíàêîì, óêàçûâàþùèì íà ïðèíàäëåæíîñòü êóëüòóðû ê ðîäó ñàëüìîíåëë.
Äëÿ èñïûòàíèÿ êóëüòóð íà ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê Î-áàêòåðèîôàãó íà ïëàñòèíêå õîðîøî ïîäñóøåííîãî ùåëî÷íîãî àãàðà (ðÍ 7,2—7,4) ñòåðèëüíîé ïðîáèðêîé ñ ðîâíûìè êðàÿìè äåëàþò 5—6 íàñå÷åê. Íà
êàæäóþ íàñå÷êó íàíîñÿò ïî äâå êàïëè 4- èëè 18-÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû èñïûòóåìîãî øòàììà ñ
ïîìîùüþ òîíêîé îòòÿíóòîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêè èëè ïåòëè. Âçàìåí áóëüîííîé êóëüòóðû ìîæíî
èñïîëüçîâàòü âçâåñü ñóòî÷íîé àãàðîâîé êóëüòóðû íà ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå.
Ïîñëå ïîäñûõàíèÿ êóëüòóðû íà íàíåñåííûå êàïëè ïåòëåé èëè ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ìåíüøåãî
äèàìåòðà íàíîñÿò êàïëþ Î-áàêòåðèîôàãà, íà äðóãóþ â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ íàíîñÿò êàïëþ áóëüîíà. Ôàã
íàíîñÿò â ðàçâåäåíèè 10-êðàòíîì è 100-êðàòíîì (â çàâèñèìîñòè îò óêàçàííîãî íà ýòèêåòêå). Íà îäíîé
÷àøêå ìîæíî èñïûòûâàòü îäíîâðåìåííî 5—6 êóëüòóð.
×àøêè ñ íàíåñåííûìè êóëüòóðàìè è Î-áàêòåðèîôàãîì ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå
37 °Ñ íà 18—20 ÷, ïîñëå ÷åãî ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàòû. Ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè îïðåäåëÿåòñÿ
ïî ïîÿâëåíèþ íà ìåñòå íàíåñåíèÿ ôàãà ÷åòêî î÷åð÷åííîé çîíû ëèçèñà (ñëèâíîãî èëè îòäåëüíûõ
íåãàòèâíûõ êîëîíèé), êîòîðàÿ îò÷åòëèâî âèäíà íåâîîðóæåííûì ãëàçîì. Îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè îïðåäåëÿþò îòñóòñòâèåì ëèçèñà; â ìåñòàõ íàíåñåíèÿ ôàãà èìååò ìåñòî ðîñò êóëüòóðû, êàê â
êîíòðîëüíîì ìåñòå.
Î-ôàã ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí òàêæå äëÿ ïðåäâàðèòåëüíîãî èñïûòàíèÿ êóëüòóðû. Äëÿ ýòîãî
ïîäîçðèòåëüíûå êîëîíèè, âûðîñøèå íà ÷àøêàõ ñ äèôôåðåíöèàëüíîé ñðåäîé (Ýíäî, Ïëîñêèðåâà,
âèñìóò-ñóëüôèòíûì àãàðîì è äð.), ñíèìàþò è ïåðåñåâàþò íà îäèí èç ñåêòîðîâ ÷àøêè Ïåòðè ñî
ñëàáîùåëî÷íûì àãàðîì.  öåíòð êàæäîãî çàñåÿííîãî ñåêòîðà òîíêîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé èëè ïåòëåé
íàíîñÿò êàïëþ Î-ôàãà, ÷àøêè ïîìåùàþò â òåðìîñòàò è íà ñëåäóþùèé äåíü ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàòû.
4.2.4.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Îáíàðóæåíèå ïîäâèæíûõ (êðîìå S. pullorum è S. gallinarum) ïàëî÷åê, îòðèöàòåëüíûõ ïî Ãðàìó,
íå ôåðìåíòèðóþùèõ ëàêòîçó è ñàõàðîçó, ôåðìåíòèðóþùèõ ãëþêîçó è ìàííèò ñ îáðàçîâàíèåì êèñëîòû
86
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 19
è ãàçà (S. typhi suis íå ôåðìåíòèðóåò ìàííèò), äàþùèõ ïîëîæèòåëüíóþ ðåàêöèþ àããëþòèíàöèè ñ
ìîíîðåöåïòîðíûìè Î- è Í-ñàëüìîíåëëåçíûìè ñûâîðîòêàìè, óêàçûâàåò íà ïðèñóòñòâèå â ìÿñå áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë.
4.2.5.  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é è ç ð î ä à ê è ø å ÷ í î é ï à ë î ÷ ê è — Ý ø å ð èõèé
4.2.5.1. Ñóùíîñòü âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé èç ðîäà êèøå÷íîé ïàëî÷êè — Ýøåðèõèé çàêëþ÷àåòñÿ â
îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, õàðàêòåðà ðîñòà íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñ ëàêòîçîé è îòñóòñòâèÿ ñïîñîáíîñòè
îáðàçîâûâàòü öèòîõðîìîêñèäàçó, óòèëèçèðîâàòü öèòðàò, îáðàçîâûâàòü ñåðîâîäîðîä è ñïîñîáíîñòè ïðîäóöèðîâàòü èíäîë.
4.2.5.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ
Íàëè÷èå ðîñòà íà ÷àøêàõ ñ ýëåêòèâíûìè ñðåäàìè (Ýíäî, Ëåâèíà, Ïëîñêèðåâà) îêðàøåííûõ
êîëîíèé, âñëåäñòâèå ôåðìåíòàöèè èìè ëàêòîçû è èçìåíåíèÿ öâåòà èíäèêàòîðà — ëàêòîçîïîëîæèòåëüíûõ âàðèàíòîâ êèøå÷íîé ïàëî÷êè (èëè íå èçìåíÿþùèõ öâåòà ñðåäû êîëîíèé ëàêòîçîîòðèöàòåëüíûõ)
òðåáóåò èõ îïðåäåëåíèÿ äëÿ óñòàíîâëåíèÿ ïðèñóòñòâèÿ èõ â ìÿñå èëè ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ è
äèôôåðåíöèàöèè ïî áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì îò äðóãèõ ñõîäíûõ áàêòåðèé èç ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ.
Íà àãàðå Ýíäî áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ðàñòóò â âèäå êðàñíûõ ñ ìåòàëëè÷åñêèì
áëåñêîì (èëè áåç áëåñêà) ðîçîâûõ ñ êðàñíûì öåíòðîì èëè áåëûõ êîëîíèé; íà ýîçèí-ìåòèëåíîâîì
ñèíåì àãàðå (àãàðå Ëåâèíà) — â âèäå òåìíî-ôèîëåòîâûõ áëåñòÿùèõ êîëîíèé; íà áàêòîàãàðå Ïëîñêèðåâà
— â âèäå êèðïè÷íî-êðàñíûõ ñ ãëÿíöåâîé ïîâåðõíîñòüþ êîëîíèé.
Èç êîëîíèé, õàðàêòåðíûõ äëÿ áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè, ãîòîâÿò ìàçêè, îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó è ìèêðîñêîïèðóþò.
Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè — ìåëêèå ïàëî÷êè ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè ïî Ãðàìó
îêðàøèâàþòñÿ îòðèöàòåëüíî.
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ïîäâèæíîñòè êóëüòóðû ãîòîâÿò ïðåïàðàò «ðàçäàâëåííàÿ êàïëÿ» è ìèêðîñêîïèðóþò.
Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ÷àùå ïîäâèæíû.
Ïðè íàëè÷èè êîëîíèé, õàðàêòåðíûõ äëÿ áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè, èõ äèôôåðåíöèðóþò îò äðóãèõ ñõîäíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïî áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì, óêàçàííûì â òàáë. 4.
Òàáëèöà 4
Ðîä ìèêðîáà
Áèîõèìè÷åñêèå äèôôåðåíöèðóþùèå
ñâîéñòâà
Áèîõèìè÷åñêèå âàðèàíòû Escherichia
Proteus
1
2
3
4
5
6
Pr. vulgaris
Pr. mirabilis
Îáðàçîâàíèå ñåðîâîäîðîäà íà
òðåõñàõàðíîì àãàðå ñ äâîéíîé ñåðíîêèñëîé ñîëüþ çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ (ñîëüþ Ìîðà)
—
—
—
—
—
—
+
+
Îáðàçîâàíèå ãàçà íà ãëþêîçå íà
òðåõñàõàðíîì àãàðå ñ äâîéíîé ñåðíîêèñëîé ñîëüþ çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ (ñîëüþ Ìîðà)
Ôåðìåíòàöèÿ 10 %-íîé ëàêòîçû
+
+
—
+
+
+
—
+
+
—
—
—
+
—
+
—
Îáðàçîâàíèå èíäîëà
+
+
—
—
+
+
+
—
Ðàñùåïëåíèå ìî÷åâèíû
—
—
—
—
—
—
+
+
Ðàçëè÷íî
Óòèëèçàöèÿ öèòðàòà (íà ñðåäå Ñèììîíñà)
Ïîäâèæíîñòü
Ôåðìåíòàöèÿ ìàëüòîçû
Ôåðìåíòàöèÿ ìàííèòà
—
—
—
—
—
—
Ðàçëè÷íî
+/—
+/—
+/—
+/—
+/—
+/—
+
+
+
+
+
+
+
+
+
—
+
+
+
+
+
+
—
—
Ó ñ ë î â í û å î á î ç í à ÷ å í è ÿ:
«+» — ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò;
«—» — îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò;
«+/—» — ïîëîæèòåëüíûé èëè îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò.
87
Ñ. 20 ÃÎÑÒ 21237—75
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåðîâîäîðîäà èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð, ïðèãîòîâëåííûé ïî ï. 3.1.13 óêîëîì ñòîëáèê, è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ.
Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå îáðàçóþò ñåðîâîäîðîäà, è ñòîëáèê àãàðà ïî÷åðíåíèÿ
íå äàåò.
Äëÿ óñòàíîâëåíèÿ ñïîñîáíîñòè áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ðàñùåïëÿòü ìî÷åâèíó,
èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ìî÷åâèíîé è âûäåðæèâàþò 24 ÷ â òåðìîñòàòå
ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå ðàñùåïëÿþò ìî÷åâèíó è íå èçìåíÿþò öâåò ñðåäû. Ïðè íàëè÷èè áàêòåðèé, ðàñùåïëÿþùèõ ìî÷åâèíó, ðåàêöèÿ ñðåäû ñòàíîâèòñÿ ðåçêî
ùåëî÷íîé, è ñðåäà îêðàøèâàåòñÿ â ÿðêî-êðàñíûé öâåò.
Ôåðìåíòàöèþ ëàêòîçû óñòàíàâëèâàþò ïîñåâîì èñïûòóåìîé êóëüòóðû êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè â ñðåäó Ãèññà, ñîäåðæàùóþ 10 % ëàêòîçû, áîëüøèíñòâî áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè
ôåðìåíòèðóþò 10 %-íóþ ëàêòîçó.
Èíäîë îïðåäåëÿþò ïðè ïîìîùè èíäèêàòîðíîé áóìàæêè, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.25, áàêòåðèè
êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ÷àùå îáðàçóþò èíäîë è îêðàøèâàþò èíäèêàòîðíóþ áóìàæêó â êðàñíûé
öâåò.
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñïîñîáíîñòè óòèëèçèðîâàòü öèòðàòû èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà ñêîøåííûé àãàð Ñèììîíñà, ïðèãîòîâëåííûé ïî ï. 3.1.19, ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå ðàñòóò íà ýòîé ñðåäå è íå ìåíÿþò åå öâåòà,
áàêòåðèè, àññèìèëèðóþùèå öèòðàò, ðàñòóò, ïîäùåëà÷èâàÿ ñðåäó è èçìåíÿÿ åå öâåò èç îëèâêîâîçåëåíîãî â ñèíèé.
4.2.5.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Îáíàðóæåíèå îòðèöàòåëüíûõ ïî Ãðàìó ïàëî÷åê, îáðàçóþùèõ õàðàêòåðíûå êîëîíèè íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñ ëàêòîçîé, ôåðìåíòèðóþùèõ 10 %-íóþ ëàêòîçó, îáðàçóþùèõ èíäîë, íå ðàñùåïëÿþùèõ
ìî÷åâèíó, íå àññèìèëèðóþùèõ öèòðàòû, íå îáðàçóþùèõ ñåðîâîäîðîä, óêàçûâàåò íà íàëè÷èå áàêòåðèé
êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè.
4.2.6. Â û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é è ç ð î ä à ï ð î ò å ÿ
4.2.6.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, îïðåäåëåíèè ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è ñïîñîáíîñòè ãèäðîëèçîâàòü ìî÷åâèíó, îáðàçîâàíèè
ñåðîâîäîðîäà è îòñóòñòâèè ôåðìåíòàöèè ìàííèòà.
4.2.6.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ
Íàëè÷èå íà ñðåäàõ â ÷àøêàõ âóàëåîáðàçíîãî íàëåòà (Í-ôîðìà), ïðè ìèêðîñêîïèè êîòîðîãî îáíàðóæèâàþò ïîëèìîðôíûå ïîäâèæíûå ïàëî÷êè, îêðàøèâàþùèåñÿ ïî Ãðàìó îòðèöàòåëüíî, óêàçûâàåò íà
ïðèñóòñòâèå âóëüãàðíîãî ïðîòåÿ; íàðÿäó ñ êîëîíèÿìè, êîòîðûå äàþò ðàñïëûâàþùèéñÿ ïî ïîâåðõíîñòè
ðîñò, ìîãóò âñòðå÷àòüñÿ èçîëèðîâàííûå êîëîíèè ñðåäíåé âåëè÷èíû, íåæíûå ïîëóïðîçðà÷íûå ñ ðîçîâàòûì öåíòðîì, ïàëî÷êè èç ýòèõ êîëîíèé ëèøåíû æãóòèêîâ è íåïîäâèæíû (Î-ôîðìà).
Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ íàëè÷èÿ ïðîòåÿ (Í-ôîðìà) ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â êîíäåíñàöèîííóþ âîäó ñêîøåííîãî àãàðà (ñïîñîá Øóêåâè÷à).
Äëÿ îáíàðóæåíèÿ «íåðîÿùèõñÿ» Î-ôîðì ïðîèçâîäÿò ïîñåâ íà àãàð Ïëîñêèðåâà. Î-ôîðìà ïðîòåÿ
ðàñòåò íà ýòîé ñðåäå â âèäå ïðîçðà÷íûõ êîëîíèé, îáëàäàþùèõ õàðàêòåðíûì çàïàõîì è ñëåãêà ïîäùåëà÷èâàþùèõ ñðåäó, êîòîðàÿ îêðàøèâàåòñÿ îêîëî íèõ â æåëòûé öâåò. Áîëåå ñòàðûå êîëîíèè íåðåäêî
ìóòíåþò, à èõ öåíòð ïðèíèìàåò áóðóþ îêðàñêó.
Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ ïðèâåäåíû â òàáë. 4.
4.2.6.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ
Îáíàðóæåíèå ïîëèìîðôíûõ ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê, îáðàçóþùèõ õàðàêòåðíûé ðîñò íà ñðåäàõ Í-ôîðìà, ïîäâèæíûõ (Î-ôîðìà — íåïîäâèæíûå), ôåðìåíòèðóþùèõ ãëþêîçó è ìî÷åâèíó, íå
ôåðìåíòèðóþùèõ ëàêòîçó è ìàííèò, óêàçûâàåò íà íàëè÷èå áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ.
4.3. Ìåòîä óñêîðåííîãî âûÿâëåíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà, ñàëüìîíåëëåçà ïðè ïîìîùè ôëóîðåñöèðóþùèõ àíòèòåë
4.3.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ñïîñîáíîñòè àíòèòåë èììóííûõ ñûâîðîòîê
ïðè ñîåäèíåíèè ÷åðåç êàðáàìèäíûå ãðóïïû ñî ñïåöèàëüíûìè êðàñèòåëÿìè (ôëóîðîõðîìàìè) âñòóïàòü
â ñïåöèôè÷åñêóþ ñâÿçü ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè àíòèãåíàìè. Îáðàçóþùèéñÿ ïðè ýòîì êîìïëåêñ «àíòèãåí—àíòèòåëî» ôëóîðåñöèðóåò è ëåãêî îáíàðóæèâàåòñÿ ïðè ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèè.
Ìåòîä ìîæåò áûòü ïðèìåíåí â êà÷åñòâå ýêñïðåññíîãî è äëÿ óñêîðåííîé èäåíòèôèêàöèè
ìèêðîáîâ.
Ýêñïðåññíûé ìåòîä ïðîâîäèòñÿ â íà÷àëå èññëåäîâàíèÿ íàðÿäó ñ áàêòåðèîñêîïèåé è íå òðåáóåò
âûäåëåíèÿ ÷èñòîé êóëüòóðû ìèêðîáîâ èç èññëåäóåìîãî ìàòåðèàëà. Ïîëó÷åííûé â òå÷åíèå 2—6 ÷ îòâåò
ÿâëÿåòñÿ ïðåäâàðèòåëüíûì, ñèãíàëüíûì, òðåáóþùèì ïîäòâåðæäåíèÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèì ìåòîäîì.
88
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 21
Ïðèìåíåíèå ìåòîäà ëþìèíåñöèðóþùèõ ñûâîðîòîê äëÿ èäåíòèôèêàöèè âûäåëåííîé êóëüòóðû
ìèêðîáîâ èìååò öåëüþ óñêîðåíèå èññëåäîâàíèÿ, èñêëþ÷àþùåãî â ðÿäå ñëó÷àåâ îïðåäåëåíèå êóëüòóðàëüíûõ è áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ, ñåðîëîãè÷åñêèå ðåàêöèè è òèïèðîâàíèå.
4.3.2. À ï ï à ð à ò ó ð à, ì à ò å ð è à ë û è ð å à ê ò è â û
Ïðè ïðîâåäåíèè èññëåäîâàíèÿ ïðèìåíÿþò äîïîëíèòåëüíî àïïàðàòóðó, ìàòåðèàëû è ðåàêòèâû,
êðîìå óêàçàííûõ â ðàçä. 2:
ìèêðîñêîï ëþìèíåñöåíòíûé èëè ëþìèíåñöåíòíîå óñòðîéñòâî ÎÈ-17 ñ ïðèñòàâêîé ê áèîëîãè÷åñêîìó ìèêðîñêîïó;
ñûâîðîòêè ïðîòèâ ðîæè ñâèíåé ôëóîðåñöèðóþùèå;
ñûâîðîòêè ïðîòèâ ëèñòåðèîçà ñåðîòèïîâ 1, 4à, 4á, ôëóîðåñöèðóþùèå;
ñûâîðîòêè ôëóîðåñöèðóþùèå ãðóïïîâûå è êîìïëåêñíûå ñàëüìîíåëëåçíûå;
ñûâîðîòêà ïîëèâàëåíòíàÿ ñàëüìîíåëëåçíàÿ;
ñûâîðîòêà (ìå÷åíàÿ ÔÈÒÖ) ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíîâ êðîëèêà, îñëèíàÿ;
àëüáóìèí èç êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì;
ìàñëî íåôëóîðåñöèðóþùåå èììåðñèîííîå èëè åãî çàìåíèòåëü, èçãîòîâëåííûé èç äèìåòèëôòàëàòà
÷èñòîãî — 100 ñì3, íàôòàëèíà ñóáëèìèðîâàííîãî — 1,75 ã èëè òèìîëà ÷èñòîãî — 5 ã;
ãëèöåðèí ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (â ðàçâåäåíèè 9:1 ðÍ áóôåðà 8,0);
ðàñòâîð ôèçèîëîãè÷åñêèé ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì, ðÍ 7,4.
4.3.3. Ï î ä ã î ò î â ê à ê è ñ ñ ë å ä î â à í è þ
Ïðèãîòîâëåíèå ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì.
Íà àíàëèòè÷åñêèõ âåñàõ îòâåøèâàþò 9,078 ã õ.÷. îäíîçàìåùåííîãî ôîñôàòà êàëèÿ, ïîìåùàþò åãî
â ìåðíóþ êîëáó è äîâîäÿò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé äî 1000 ñì3. Çàòåì îòâåøèâàþò 11,876 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ è â äðóãîé ìåðíîé êîëáå äîâîäÿò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé äî îáúåìà 1000 ñì3.
Ïðè èñïîëüçîâàíèè äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ, ñîäåðæàùåãî 12 ìîëåêóë âîäû, äëÿ ïîëó÷åíèÿ
1000 ñì3 ðàñòâîðà áåðóò íàâåñêó ìàññîé 23,752 ã, à áåçâîäíîãî ðåàêòèâà — 9,476 ã. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ
áóôåðà ñ ðÍ 7,4 ñìåøèâàþò ÷åòûðå ÷àñòè ðàñòâîðà äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ è îäíó ÷àñòü
ðàñòâîðà îäíîçàìåùåííîãî ôîñôàòà êàëèÿ. Ïîëó÷åííûé áóôåð äîáàâëÿþò ê ôèçèîëîãè÷åñêîìó ðàñòâîðó â ñîîòíîøåíèè 1:50.
Åñëè ïðè ñìåøèâàíèè ôîñôàòîâ (4:1) íå ïîëó÷àþò ðÍ 8,0, òî èçìåíÿÿ ñîîòíîøåíèå ðàñòâîðîâ,
äîñòèãàþò íåîáõîäèìîé âåëè÷èíû ðÍ (ïðè ïîâûøåííîé êèñëîòíîñòè äîáàâëÿþò äâóçàìåùåííûé ôîñôàò íàòðèÿ, à ïðè ùåëî÷íîì ðÍ äîáàâëÿþò îäíîçàìåùåííûé ôîñôàò êàëèÿ).
Åñëè ïðè äîáàâëåíèè áóôåðà â ñîîòíîøåíèè 1:50 ê ôèçèîëîãè÷åñêîìó ðàñòâîðó ïîñëåäíèé áóäåò
èìåòü ðÍ íèæå 7,4, òî óâåëè÷åíèåì êîëè÷åñòâà äîáàâëåííîãî áóôåðà äîáèâàþòñÿ íóæíîé ðåàêöèè
ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà.
4.3.4. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î-ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâàíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà â êóëüòóðå
Äëÿ èññëåäîâàíèÿ èñïîëüçóþò 18—24-÷àñîâûå ÷èñòûå èëè ñìåøàííûå êóëüòóðû, èç êîòîðûõ
ãîòîâÿò ïî òðè ìàçêà íà îòäåëüíûõ ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ. Îäèí èç ìàçêîâ èñïîëüçóþò äëÿ îáðàáîòêè
ðîæèñòîé ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêîé, äâà äðóãèõ — äëÿ îáðàáîòêè ëèñòåðèîçíûìè ëþìèíåñöèðóþùèìè ñûâîðîòêàìè (ñåðîòèïîâ 1, 4à, 4á).
Ïåðåä ïðèìåíåíèåì ôëþîðåñöèðóþùóþ ñûâîðîòêó ðàçâîäÿò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (ðÍ 7,4) äî ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ, óêàçàííîãî íà ýòèêåòêå àìïóëû. Ñûâîðîòêè â
ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè ìîãóò õðàíèòüñÿ ïðè òåìïåðàòóðå 2—4 °Ñ â òå÷åíèå 2 ñóòîê.
Ìàçêè ãîòîâÿò ñðåäíåé ãóñòîòû (íåñêîëüêî äåñÿòêîâ ìèêðîáîâ â ïîëå çðåíèÿ ìèêðîñêîïà) ðàçìåðîì íå áîëåå 1 ñì2.
Ìåñòî íàíåñåíèÿ êóëüòóðû î÷åð÷èâàþò êàðàíäàøîì ïî ñòåêëó ñ îáðàòíîé ñòîðîíû, ïîäñóøèâàþò
ìàçêè íà âîçäóõå, ìàðêèðóþò è ôèêñèðóþò ýòèëîâûì ñïèðòîì â òå÷åíèå 15 ìèí; ìàçêè äëÿ ôèêñàöèè
ïîãðóæàþò â âåðòèêàëüíîì ïîëîæåíèè â ñòåêëÿííûé ñîñóä ñî ñïèðòîì. Êàæäîå ñòåêëî îòäåëÿþò ìåòàëëè÷åñêîé ïðîâîëî÷êîé èëè ñòåêëÿííîé ñîëîìêîé.
Ïîñëå ôèêñàöèè è èñïàðåíèÿ ñïèðòà ìàçêè îïîëàñêèâàþò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (ðÍ 7,4). Íà ñëåãêà ïîäñóøåííûé ìàçîê íàíîñÿò îäíó-äâå êàïëè ñîîòâåòñòâóþùåé ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè.
Ìàçêè ñ ñûâîðîòêîé ïîìåùàþò âî âëàæíóþ êàìåðó (â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé
áóìàãîé íà äíå) è âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí.
Äîïóñêàåòñÿ ìàçêè îïîëàñêèâàòü ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì èëè äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé áåç
ôîñôàòíîãî áóôåðà.
89
Ñ. 22 ÃÎÑÒ 21237—75
Çàòåì ñûâîðîòêó îòìûâàþò, ïîãðóæàÿ ìàçêè â êþâåòó, ñîäåðæàùóþ ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð ñ
ôîñôàòíûì áóôåðîì ðÍ 7,4 íà 20 ìèí. Ðàñòâîð â êþâåòå ïåðèîäè÷åñêè ïîìåøèâàþò è ìåíÿþò ÷åðåç
10 ìèí.
Îòìûòûå ìàçêè îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñóøèâàþò íà âîçäóõå. Äëÿ áûñòðîòû
âûñóøèâàíèÿ ìîæíî èñïîëüçîâàòü âåíòèëÿòîð.
4.3.4.1. Íà ïîâåðõíîñòü ìàçêà íàíîñÿò íåáîëüøóþ êàïëþ ãëèöåðèíà ñ áóôåðîì ðÍ 8,0, íàêðûâàþò ïîêðîâíûì ñòåêëîì, èçëèøåê ãëèöåðèíà óäàëÿþò.
Íà ïîêðîâíîå ñòåêëî íàíîñÿò íåôëóîðåñöèðóþùåå èììåðñèîííîå ìàñëî èëè åãî çàìåíèòåëü è
ïðîèçâîäÿò ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ.
4.3.4.2. Äèàãíîñòè÷åñêàÿ îöåíêà èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà:
«+ + + +» — ÿðêàÿ, ñâåðêàþùàÿ çåëåíàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ ìîðôîëîãè÷åñêè òèïè÷íûõ áàêòåðèé ñ
áîëåå èíòåíñèâíûì ñâå÷åíèåì ïî èõ ïåðèôåðèè (ïîëîæèòåëüíàÿ);
«+ + +» — îò÷åòëèâî âûðàæåííàÿ, äîñòàòî÷íî ÿðêàÿ, çåëåíîâàòàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ ìîðôîëîãè÷åñêè òèïè÷íûõ áàêòåðèé ñ áîëåå èíòåíñèâíûì ñâå÷åíèåì ïî èõ ïåðèôåðèè (ïîëîæèòåëüíàÿ);
«+ +» — íåäîñòàòî÷íî ÿðêàÿ æåëòîâàòî-çåëåíîâàòàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ, ïåðèôåðè÷åñêèé îáîäîê
âûÿâëÿåòñÿ ñ òðóäîì (ñîìíèòåëüíàÿ);
«+» — ëþìèíåñöåíöèÿ î÷åíü ñëàáàÿ, ìîðôîëîãèÿ áàêòåðèé ðàçëè÷àåòñÿ ñ òðóäîì (îòðèöàòåëüíàÿ);
«—» — ëþìèíåñöåíöèÿ îòñóòñòâóåò, âèäíû ëèøü òåíè áàêòåðèé (îòðèöàòåëüíàÿ).
Âèäîâóþ ïðèíàäëåæíîñòü îáíàðóæåííîãî âîçáóäèòåëÿ óñòàíàâëèâàþò ïî îïðåäåëåííîé ñûâîðîòêå, êîòîðàÿ âûçûâàåò ñïåöèôè÷åñêîå ñâå÷åíèå èññëåäóåìîé êóëüòóðû èíòåíñèâíîñòüþ íå ìåíåå ÷åì íà
òðè êðåñòà.
4.3.5. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î-ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâ à í è ÿ á à ê ò å ð è é ð î æ è ñ â è í å é è ë è ñ ò å ð è î ç à â ì ÿ ñ å è ï à ð å í õ èìàòîçíûõ îðãàíàõ
Ìàòåðèàë äëÿ èññëåäîâàíèÿ äîëæåí áûòü ñâåæèì. Äëÿ ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèè èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ ãîòîâÿò âçâåñü íà ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå õëîðèäà íàòðèÿ â ñîîòíîøåíèè 1:5.
Ïîñëå îñàæäåíèÿ êðóïíûõ ÷àñòèö âçâåñè èç ðàçíûõ ó÷àñòêîâ åå ïîâåðõíîñòè ãîòîâÿò ïî äâà-òðè ìàçêà
íà êàæäûé âèä ñûâîðîòêè.
Îáðàáîòêó ïðåïàðàòîâ è ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ ïðîâîäÿò òàê, êàê óêàçàíî ïðè èññëåäîâàíèè êóëüòóð (ï. 4.3.4.1).
4.3.6. Ä è à ã í î ñ ò è ÷ å ñ ê à ÿ î ö å í ê à è í ò å í ñ è â í î ñ ò è ñ â å ÷ å í è ÿ á à êòåðèé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà
Ïðè îáíàðóæåíèè âîçáóäèòåëÿ ñ òèïè÷íîé ìîðôîëîãèåé, ñïåöèôè÷åñêèì ñâå÷åíèåì è èíòåíñèâíîñòüþ íå íèæå ÷åì íà òðè êðåñòà, ñòàâÿò ïîëîæèòåëüíûé ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêèé äèàãíîç
ñîîòâåòñòâåííî òîé ñûâîðîòêå, êîòîðàÿ âûçâàëà ñâå÷åíèå âîçáóäèòåëÿ.
Ïðè ñîìíèòåëüíûõ èëè îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòàõ (ñëàáîå ñâå÷åíèå íà îäèí èëè äâà êðåñòà,
ñâå÷åíèå ìèêðîáîâ ñ àòèïè÷íîé ìîðôîëîãèåé èëè îòñóòñòâèå ñâå÷åíèÿ âîçáóäèòåëÿ â ìàçêàõ) äèàãíîç
óòî÷íÿþò ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèåé êóëüòóð, âûäåëåííûõ èç ïîñåâîâ ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà.
4.3.7. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î -ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâàíèÿ ñàëüìîíåëë
Äëÿ èññëåäîâàíèÿ ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû ìàçêè-îòïå÷àòêè èç îðãàíîâ è òêàíåé, ïðîáû ìÿñà
ïîñëå ïîäðàùèâàíèÿ â òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 4—6 ÷, à òàêæå ìàçêè, ïðèãîòîâëåííûå èç áàêòåðèàëüíûõ
êóëüòóð (êàê ÷èñòûõ, òàê è ñìåøàííûõ).
Ñóõóþ ôëóîðåñöèðóþùóþ ñàëüìîíåëëåçíóþ ñûâîðîòêó è àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ïåðåä
ïðèìåíåíèåì ðàñòâîðÿþò êàæäûé â îòäåëüíîñòè äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé â îáúåìå, óêàçàííîì íà
ýòèêåòêå àìïóëû.
Ïðè èñïîëüçîâàíèè ñûâîðîòêè ñîâìåñòíî ñ àëüáóìèíîì äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàáî÷åé ñìåñè, ôëóîðåñöèðóþùóþ ñàëüìîíåëëåçíóþ ñûâîðîòêó è àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ðàçâîäÿò êàæäûé â
îòäåëüíîñòè 0,15 ìîëü/äì3 ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ (ðÍ 7,2—7,4) íà îäíî ðàçâåäåíèå ìåíüøå, ÷åì
èõ ðàáî÷èå òèòðû, óêàçàííûå íà ýòèêåòêàõ ïðåïàðàòîâ. Ðàçâåäåííóþ ôëóîðåñöèðóþùóþ ñûâîðîòêó è
àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ñìåøèâàþò â ðàâíûõ îáúåìàõ. Ðàáî÷óþ ñìåñü õðàíÿò â ïðîáèðêå ñ
ïëîòíîé ðåçèíîâîé ïðîáêîé â òåìíîì ìåñòå ïðè òåìïåðàòóðå 4 °Ñ.
90
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 23
4.3.7.1. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â êóëüòóðå ïðÿìûì
ñïîñîáîì
Èññëåäîâàíèþ ïîäëåæàò ìîëîäûå, ÷èñòûå èëè ñìåøàííûå êóëüòóðû, âûðàùåííûå â æèäêèõ èëè
ëó÷øå íà ïëîòíûõ ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ïîñëå ïîÿâëåíèÿ ìàêðîñêîïè÷åñêè âèäèìîãî ðîñòà.
Èç äâóõ-òðåõ òèïè÷íûõ äëÿ ñàëüìîíåëë êîëîíèé ãîòîâÿò ìàçêè íà ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ ñîîòâåòñòâåííî ÷èñëó ñûâîðîòîê, êîòîðûå äîëæíû áûòü ïðèìåíèìû äëÿ èññëåäîâàíèÿ.
Ïðåïàðàòû ïîìåùàþò â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé íà äíå, íà êàæäûé
ìàçîê íàíîñÿò îäíó-äâå êàïëè ñûâîðîòêè â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè èëè ñûâîðîòêó ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì, ñûâîðîòêó ðàñïðåäåëÿþò ïî âñåé ïîâåðõíîñòè ìàçêà è âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé
òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 30 ìèí èëè â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí. Çàòåì ñûâîðîòêó îòìûâàþò äâàæäû ïî 10 ìèí 0,15 ìîëü/äì3 ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ. Îòìûòûå ìàçêè îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñóøèâàþò íà âîçäóõå èëè â òåðìîñòàòå.
Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ìàçêîâ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1.
4.3.7.2. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â ìÿñå è ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ ïðÿìûì ñïîñîáîì
 ñâåæèõ ïðîáàõ ïðè îòñóòñòâèè ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé òèïè÷íûå ôîðìû ñàëüìîíåëë ìîæíî
îáíàðóæèòü â ðåäêèõ ñëó÷àÿõ. Ïîýòîìó ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ ïðîâîäÿò ïîñëå íàêîïëåíèÿ
ñàëüìîíåëë. Äëÿ ýòîãî îò âñåõ îðãàíîâ îòðåçàþò êóñî÷êè ðàçìåðîì 2×3×4 ñì è ïîìåùàþò èõ â çàêðûòûõ ÷àøêàõ â òåðìîñòàò íà 4—6 ÷ äëÿ ïîäðàùèâàíèÿ; èõ èññëåäóþò ïðè îòðèöàòåëüíîì ðåçóëüòàòå
ïåðâè÷íîé ìèêðîñêîïèè.
Ãîòîâÿò äâå ñåðèè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ (ïî òðè ìàçêà â êàæäîé ñåðèè). Îäíó ñåðèþ ìàçêîâ îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó è èññëåäóþò ïî îáùåïðèíÿòîé ìåòîäèêå. Âòîðóþ ñåðèþ îêðàøèâàþò ëþìèíåñöèðóþùèìè ñàëüìîíåëëåçíûìè ñûâîðîòêàìè èëè ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñàëüìîíåëëåçíîé ñûâîðîòêè ñ
àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì. Îêðàñêó âåäóò àíàëîãè÷íî îêðàñêå ñàëüìîíåëë â êóëüòóðå.
Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1.
4.3.7.3. Äèàãíîñòè÷åñêàÿ îöåíêà èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ ñàëüìîíåëë
Ïðè ìèêðîñêîïèè ìàçêîâ èç êóëüòóðû èëè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ èç îðãàíîâ è òêàíåé áàêòåðèè
ñàëüìîíåëë äàþò ÿðêîå èçóìðóäíî-çåëåíîâàòîå ñâå÷åíèå ïî ïåðèôåðèè áàêòåðèé ñ õîðîøî âûðàæåííîé öåíòðàëüíîé òåìíîé çîíîé. Ôîí ïðåïàðàòà òåìíûé ñ îðàíæåâî-êðàñíûì îêðàøèâàíèåì ïîñòîðîííåé ìèêðîôëîðû, òêàíåâûõ ýëåìåíòîâ è äðóãèõ îðãàíè÷åñêèõ ÷àñòèö (ïðè ïðèìåíåíèè àëüáóìèíà,
ìå÷åíîãî ðîäàìèíîì), ñîäåðæàùèõñÿ â èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòàõ.
Õàðàêòåðíîå ñâå÷åíèå êîíòóðà (îáîäêà) ïðè âèçóàëüíîì îñìîòðå îöåíèâàåòñÿ â êðåñòàõ:
«+ + + +» — ñèÿþùåå çåëåíîâàòî-æåëòîâàòîå ñâå÷åíèå;
«+ + +» — ÿðêîå æåëòîâàòî-çåëåíîâàòîå ñâå÷åíèå;
«+ +» — óìåðåííîå æåëòîâàòî-çåëåíîâàòîå èëè áåëîâàòîå ñâå÷åíèå îò÷åòëèâî çàìåòíîãî êîíòóðà;
«+» — ñëàáîå áåëîâàòîå ñâå÷åíèå ðàçëè÷èìîãî êîíòóðà;
«—» — êëåòêè â âèäå ñåðîâàòûõ òåíåé, êîíòóð îòñóòñòâóåò èëè ñëàáî çàìåòåí íà îòäåëüíûõ
ó÷àñòêàõ ïåðèôåðèè êëåòîê (íå ó âñåõ ìèêðîáîâ).
4.3.7.4. Ïîëîæèòåëüíûì ðåçóëüòàòîì îáíàðóæåíèÿ ñàëüìîíåëë ñ÷èòàåòñÿ ñâå÷åíèå òèïè÷íûõ äëÿ
ñàëüìîíåëë ôîðì, îöåíèâàåìîå íå íèæå ÷åì íà äâà êðåñòà ïðè óñëîâèè, ÷òî â êîíòðîëüíûõ ïðåïàðàòàõ, îêðàøåííûõ ðàáî÷èì ðàçâåäåíèåì ãåòåðîëîãè÷åñêîé ñûâîðîòêè, îíî îöåíèâàåòñÿ îòðèöàòåëüíî, à
òàêæå ïðè îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòàõ îêðàøèâàíèÿ ñàëüìîíåëëåçíûìè ôëóîðåñöèðóþùèìè ñûâîðîòêàìè ãåòåðîëîãè÷åñêèõ áàêòåðèé (êèøå÷íîé ïàëî÷êè, ïðîòåÿ).
Ñâå÷åíèå íà îäèí êðåñò îöåíèâàåòñÿ êàê ñîìíèòåëüíîå, è èññëåäîâàíèå ïîâòîðÿþò.
4.3.7.5. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â êóëüòóðàõ, ìÿñå è
ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ íåïðÿìûì ñïîñîáîì
Ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ñîñòîèò èç äâóõ ýòàïîâ.
Ïåðâûé ýòàï. Îáðàáîòêà ìàçêîâ èç êóëüòóð, ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ èììóííîé ñûâîðîòêîé.
Ïîñëå ôèêñàöèè ìàçêîâ ýòèëîâûì ñïèðòîì, íà ìàçêè èç êóëüòóð èëè ìàçêè-îòïå÷àòêè èç ìÿñà
èëè îðãàíîâ íàíîñÿò ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé îäíó-äâå êàïëè ïîëèâàëåíòíîé ñàëüìîíåëëåçíîé ñûâîðîòêè, ðàçâåäåííîé ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì 1:32. Ìàçêè ïîìåùàþò â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé è âûäåðæèâàþò 30 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå èëè 15 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå
37 °Ñ.
Íåñâÿçàâøóþñÿ èììóííóþ ñûâîðîòêó îòìûâàþò 5 ìèí âîäîïðîâîäíîé âîäîé, ìàçêè âûñóøèâàþò íà âîçäóõå èëè â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ.
91
Ñ. 24 ÃÎÑÒ 21237—75
Âòîðîé ýòàï. Îêðàñêà ìàçêîâ èç êóëüòóð, ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêîé
ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíà êðîëèêà (ìå÷åíîãî ÔÈÒÖ) èëè ñìåñüþ ñûâîðîòêè ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì
ðîäàìèíîì.
Ïðè îêðàñêå ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíà êðîëèêà (ìå÷åíîãî
ÔÈÒÖ) èëè ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì, ãîòîâÿò
ðàáî÷óþ ñìåñü, êàê óêàçàíî â ï. 4.3.7.
Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ìàçêîâ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1. Äèàãíîñòè÷åñêóþ îöåíêó èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.7.3.
4.4. Ìåòîä âûÿâëåíèÿ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé
4.4.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ ñïîñîáíîñòè ðàñòè â îòñóòñòâèè êèñëîðîäà âîçäóõà, ìîðôîëîãèè âîçáóäèòåëåé, ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è
íà âûÿâëåíèè ïàòîãåííîñòè âîçáóäèòåëåé ïóòåì çàðàæåíèÿ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ.
Óäîâëåòâîðèòåëüíûå àíàýðîáíûå óñëîâèÿ ñîçäàþòñÿ â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ãäå â êà÷åñòâå
âîññòàíîâèòåëÿ ïðèìåíÿþò ìÿñî, ïå÷åíü, êîòîðûå îäíîâðåìåííî ñëóæàò è èñòî÷íèêîì ïèòàíèÿ.
Ñðåäà äîëæíà áûòü ôàñîâàíà âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû ïëîùàäü ïîâåðõíîñòè ñðåäû ïî àáñîëþòíîé âåëè÷èíå íå ïðåâûøàëà 1/10 åå îáúåìà, è ïîâåðõíîñòü åå áûëà èçîëèðîâàíà
îò êèñëîðîäà âîçäóõà.
Èññëåäîâàíèå íà àíàýðîáíûå áàêòåðèè ïðîâîäÿò ïðè ïîäîçðåíèè íà ñëåäóþùèå çàáîëåâàíèÿ:
ýìôèçåìàòîçíûé êàðáóíêóë (ýìêàð), çëîêà÷åñòâåííûé ðàíåâîé ãàçîâûé îòåê, áðàäçîò îâåö, äèçåíòåðèþ ÿãíÿò, ýíòåðîòîêñåìèþ îâåö, ñòîëáíÿê, íåêðîáàêòåðèîç, áîòóëèçì.
4.4.2. Ï ð î â å ä å í è å è ñ ñ ë å ä î â à í è ÿ
Ìàòåðèàëîì äëÿ èññëåäîâàíèÿ ïðè ýìêàðå è çëîêà÷åñòâåííîì ðàíåâîì ãàçîâîì îòåêå ÿâëÿþòñÿ
êóñî÷êè ïîðàæåííûõ ìûøö, îòå÷íûå òêàíè, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû, ïå÷åíü è ñåëåçåíêà; ïðè áðàäçîòå
îâåö — êðîâü èç ñåðäöà, ñëèçèñòàÿ îáîëî÷êà ñû÷óãà è òîíêîãî îòäåëà êèøå÷íèêà, èíôèëüòðàò ïîäêîæíîé êëåò÷àòêè; ïðè äèçåíòåðèè ÿãíÿò è ýíòåðîòîêñåìèè îâåö — ñîäåðæèìîå êèøå÷íèêà, ïîðàæåííàÿ ïî÷êà; ïðè ñòîëáíÿêå — ðàíåâîé ñåêðåò, ãíîé, êóñî÷êè òêàíåé, êîòîðûå áåðóò èç ãëóáîêèõ ñëîåâ
ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ; ïðè íåêðîáàêòåðèîçå — íåêðîòè÷åñêèå ôîêóñû ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ; ïðè
áîòóëèçìå — ñîäåðæèìîå æåëóäêà, òîëñòûõ êèøîê, ñåëåçåíêà, êóñîê ïå÷åíè è ãîëîâíîé ìîçã.
Äèàãíîç íà àíàýðîáíûå èíôåêöèè ñòàâÿò íà îñíîâàíèè áàêòåðèîñêîïèè, ïîñåâà ìàòåðèàëà è
áèîïðîáû íà æèâîòíûõ.
Äëÿ áàêòåðèîñêîïèè èç ìàòåðèàëà ãîòîâÿò íåñêîëüêî ìàçêîâ èëè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ, êîòîðûå
îêðàøèâàþò ìåòèëåíîâîé ñèíüþ èëè ïî Ãðàìó.
Ïðè ïðîñìîòðå ìàçêîâ îáðàùàþò âíèìàíèå íà ôîðìó, ðàñïîëîæåíèå îòäåëüíûõ ìèêðîáîâ, íàëè÷èå è ðàñïîëîæåíèå ñïîð, íàëè÷èå êàïñóë è îòíîøåíèå ê îêðàñêå ïî Ãðàìó.
Äëÿ ïîñåâà ìàòåðèàë îáæèãàþò è íàâåñêó ìàññîé 10 ã ðàñòèðàþò â ñòåðèëüíîé ñòóïêå ñ äîáàâëåíèåì äâîéíîãî êîëè÷åñòâà ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà.
Ïî 3—5 ñì3 ïðèãîòîâëåííîé âçâåñè çàñåâàþò â ÷åòûðå áîëüøèå ïðîáèðêè ñ ìÿñíîé ñðåäîé òèïà
Òàðîööè, çàëèòîé ñëîåì âàçåëèíîâîãî ìàñëà òîëùèíîé 0,5 ñì, ïðåäâàðèòåëüíî ïðîãðåòîé â êèïÿùåé
âîäÿíîé áàíå â òå÷åíèå 20—30 ìèí, à çàòåì áûñòðî îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû íå íèæå 50 °Ñ.
Ïîñåâû ïåðåä òåðìîñòàòèðîâàíèåì ïðîãðåâàþò äëÿ âñåõ óêàçàííûõ àíàýðîáîâ äâå ïðîáèðêè ïðè òåìïåðàòóðå 80 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí; ïðè èññëåäîâàíèè íà Cl. botulinum òèïà Å îäíó ïðîáèðêó ïðè òåìïåðàòóðå 60 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí (ïðè ýòîì ñîõðàíÿþòñÿ ñïîðû Cl. botulinum òèïà Å), à äðóãóþ ïðè 80 °Ñ â
òå÷åíèå 20 ìèí. Îñòàëüíûå ïðîáèðêè îñòàâëÿþò íåïðîãðåòûìè.
Ïðè ïîäîçðåíèè íà Cl. botulinum äëÿ âûÿâëåíèÿ òèïà Å äâå ïðîáèðêè — îäíó íåïðîãðåòóþ è îäíó
ïðîãðåòóþ ïðè 60 °Ñ âûäåðæèâàþò ïðè òåìïåðàòóðå 28 °Ñ. Äðóãèå äâå ïðîáèðêè (íåïðîãðåòóþ è
ïðîãðåòóþ ïðè 80 °Ñ) èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà äðóãèå àíàýðîáíûå áàêòåðèè.
Òåðìîñòàòèðîâàíèå ïðîâîäÿò â òå÷åíèå 5—10 ñóòîê; íàáëþäåíèå çà ðîñòîì ïðîèçâîäÿò åæåäíåâíî.
Ïðè îáíàðóæåíèè ðîñòà ïðîèçâîäÿò ìèêðîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâàíèå.
Ìîðôîëîãèÿ è õàðàêòåð ðîñòà íà ñðåäå Êèòò-Òàðîööè îòäåëüíûõ ïàòîãåííûõ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé ïðèâåäåíû â òàáë. 5.
Âûäåëåíèå ÷èñòîé êóëüòóðû ïðîèçâîäèòñÿ ïî ñëåäóþùåé ìåòîäèêå (ìåòîä ðàññåâà ïî Âåéîíó—
Âèíüÿëþ).
Íà ìàðòåíîâñêîì áóëüîíå ãîòîâÿò ïîëóæèäêèé àãàð (0,5 %) ñ 0,5 % ãëþêîçû è ðàçëèâàþò â
ïðîáèðêè ïî 9 ñì3; àãàð ïîäîãðåâàþò äî òåìïåðàòóðû 55 °Ñ è ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â óáûâàþùåì ïîðÿäêå:
â ïåðâóþ ïðîáèðêó çàñåâàþò 1 ñì3 êóëüòóðû èç áóëüîíà Êèòò-Òàðîööè, âî âòîðóþ — 1 ñì3 èç ïåðâîé
ïðîáèðêè, â òðåòüþ — 1 ñì3 èç âòîðîé è òàê äî ïÿòîé ïðîáèðêè.
92
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 25
Òàáëèöà 5
Ìîðôîëîãèÿ
Íàèìåíîâàíèå
àíàýðîáíûõ áàêòåðèé
Âåëè÷èíà
ìèêðîáîâ,
ìêì
äëèíà
Âîçáóäèòåëü øóìÿùåãî êàðáóíêóëà
Cl. Chauvoei
øèðèíà
Ôîðìà ïàëî÷åê
Ìàçêè èç ìàòåðèàëà
2—8
0,5—
Ñïîðîîáðàçóþùàÿ
1,0 ïîëèìîðôíàÿ (âåðåòåíîîáðàçíàÿ, øàðîâèäíàÿ, ãðóøåâèäíàÿ), òîëñòàÿ ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè ïàëî÷êà, ðàñïîëàãàþùàÿñÿ îäèíî÷íî è ïàðàìè
Àíàýðîáíûå áàêòå- 8—15 2,5—
Îòäåëüíûå ïàëî÷ðèè ãðóïïû çëîêà÷å10
êè ñ çàêðóãëåííûìè
ñòâåííîãî ðàíåâîãî
êðàÿìè, íåðåäêî
îòåêà:
íèòè, îñîáåííî ñ
Cl. septicum
ïîâåðõíîñòè ïå÷åíè
Cl. oedematiens
Ïîäâèæíîñòü
Ñïîðû
Ôîðìà è ðàñïîëîæåíèå
+
Îâàëüíàÿ, öåíòðàëüíîå èëè ñóáêîíöåâîå
×åðåç 16—20 ÷ ñëàáîå ðàâíîìåðíîå
ïîìóòíåíèå, ãàçîîáðàçîâàíèå
+
Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáêîíöåâîå; ñâîáîäíî
ëåæàùåå
×åðåç 16—24 ÷ ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ ãàçîîáðàçîâàíèÿìè, â äàëüíåéøåì áóëüîí ïðîñâåòëÿåòñÿ è íà äíå îáðàçóåòñÿ õëîïüåâèäíûé îñàäîê
Íåæíûé ðîñò ñî
ñëàáûì ãàçîîáðàçîâàíèåì, ÷åðåç 18—24 ÷
áóëüîí ïðîñâåòëÿåòñÿ, íà äíå õëîïüåâèäíûé îñàäîê
Îáèëüíîå ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå
ñ ïîñëåäóþùèì îáðàçîâàíèåì îñàäêà,
áåç ãàçîîáðàçîâàíèÿ
×åðåç 5—6 ÷ ïîÿâëÿåòñÿ ðàâíîìåðíîå
ïîìóòíåíèå, áóðíîå
ãàçîîáðàçîâàíèå, ÷åðåç 48 ÷ ñðåäà ïðîñâåòëÿåòñÿ
Èíòåíñèâíîå ïîìóòíåíèå ñðåäû è
ãàçîîáðàçîâàíèå, â
ñòàðûõ êóëüòóðàõ
äàåò îñàäîê, êîòîðûé òÿíåòñÿ â âèäå
ñëèçèñòûõ íèòåé
Îáèëüíûé ðîñò ñ
ãàçîîáðàçîâàíèåì è
íåïðèÿòíûì ãíèëîñòíûì çàïàõîì
Èíòåíñèâíàÿ ìóòü,
÷åðåç 48—72 ÷ íàñòóïàåò ïðîñâåòëåíèå
ñðåäû. Êóëüòóðà èçäàåò çàïàõ ææåíîãî
ðîãà
Ïîìóòíåíèå ñðåäû, ãàçîîáðàçîâàíèå,
êóëüòóðà èçäàåò çàïàõ
ïðîãîðêëîãî ìàñëà
Òèïà À è Â
5—10 0,8—
Êðóïíàÿ ïîëèìîð1,0 ôíàÿ ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè
ïàëî÷êà
+
Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå
Cl. histolyticum
2—5
+
Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå (ôîðìà
èãîëüíîãî óøêà)
Cl. perfringens
4—8
—
Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå
Cl. sordelii
2—4
+
Îâàëüíàÿ, ðàñïîëàãàåòñÿ ê êîíöàì
Cl. sporogenes
3—7
0,8—
Ïàëî÷êè ñ çàêðóã1,1 ëåííûìè êîíöàìè,
áûñòðî îáðàçóþò
ñïîðû
Âîçáóäèòåëü ñòîëá- 3—10 0,4—
Ïàëî÷êè ñ çàêðóãíÿêà
0,8 ëåííûìè êîíöàìè
Cl. tetani
+
Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå
+
Êðóãëàÿ; êîíöåâîå â âèäå áàðàáàííîé ïàëî÷êè
À, Â, Ñ, D, E, F 2,6— 0,3—
Òîëñòàÿ ïàëî÷êà ñ
(âîçáóäèòåëü áîòóëèç- 10
0,8 çàêðóãëåííûìè êîíìà)
öàìè
Cl. botulinum
+
Îâàëüíàÿ; ñóáòåðìèíàëüíîå («òåííèñíàÿ ðàêåòêà»),
ðåæå öåíòðàëüíîå
0,5—
Òîíêèå ïàëî÷êè ñ
0,8 çàêðóãëåííûìè êîíöàìè; ðàñïîëàãàþòñÿ
îäèíî÷íî, ïàðàìè
èëè öåïî÷êàìè
1,0—
Òîëñòàÿ ïàëî÷êà ñî
1,5 ñëåãêà çàêðóãëåííûìè îáðóáëåííûìè
êîíöàìè. Â îðãàíèçìå
æèâîòíîãî îáðàçóåò
êàïñóëó
1,0—
Ïîëèìîðôíàÿ ïà1,5 ëî÷êà ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè,
ðàñïîëîæåíû ïî 2—3
÷ëåíèêà, âñòðå÷àþòñÿ öåïî÷êè è íèòè
93
Õàðàêòåð ðîñòà íà
ñðåäå Êèòò-Òàðîööè
Ñ. 26 ÃÎÑÒ 21237—75
Ïðîäîëæåíèå
Ìîðôîëîãèÿ
Íàèìåíîâàíèå
àíàýðîáíûõ áàêòåðèé
Âåëè÷èíà
ìèêðîáîâ,
ìêì
äëèíà
øèðèíà
Ôîðìà ïàëî÷åê
Ìàçêè èç ìàòåðèàëà
Âîçáóäèòåëü íåêðî0,5—1,0
Ïàëî÷êè è êîðîòÏîëèìîðô- êèå íèòè îáû÷íî
áàêòåðèîçà
íàÿ, íèòè îäèíàêîâîé òîëùèBact. necrophorum
ðàçëè÷íîé íû, çåðíèñòîäëèíû, êî- îêðàøåííûå íèòè
Ïîäâèæíîñòü
—
Ñïîðû
Õàðàêòåð ðîñòà íà
ñðåäå Êèòò-Òàðîööè
Ôîðìà è ðàñïîëîæåíèå
Íå îáðàçóþò
Èíòåíñèâíàÿ
ìóòü, î÷åíü ñëàáîå
ãàçîîáðàçîâàíèå
ðîòêèå ïàëî÷êè
è
äàæå ôîðìû
êîêêîâ
Î á î ç í à ÷ å í è å:
«+» — ïîäâèæíû;
«—» — íåïîäâèæíû.
Ïîñëå òùàòåëüíîãî ïåðåìåøèâàíèÿ ïîëó÷åííûõ ðàçâåäåíèé êóëüòóðû èç êàæäîé ïðîáèðêè ñðåäó
íàñàñûâàþò â ñòåêëÿííûå òðóáêè (äëèíîé 20 ñì è äèàìåòðîì 0,75 ñì), îäèí êîíåö êîòîðûõ çàêðûò
âàòîé, à äðóãîé — îòòÿíóò. Ñðåäó íàñàñûâàþò íà óðîâåíü íå áîëåå 3/4 äëèíû òðóáêè, ïîñëå ÷åãî
îòòÿíóòûé êîíåö òðóáêè çàïàèâàþò (ïðè çàïàéêå, âî èçáåæàíèå ðàçáðûçãèâàíèÿ ìàòåðèàëà, íåëüçÿ
äåðæàòü ïðîòèâîïîëîæíûé êîíåö çàæàòûì).
Òðóáêè ñî ñðåäîé áûñòðî îñòóæàþò ïîä ñòðóåé õîëîäíîé âîäû è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé 37 °Ñ. Íà 2—5 ñóòêè ïîñåâû â òðóáêàõ ïðîñìàòðèâàþò è îòìå÷àþò ðîñò îòäåëüíûõ êîëîíèé.
Îáû÷íî àíàýðîáíûå áàêòåðèè ðàñòóò â ãëóáîêèõ ñëîÿõ àãàðà (íèæå 1 ñì îò âåðõíåãî êðàÿ). Ïðè íàëè÷èè
ãàçà ñòîëáèê àãàðà ðàçðûâàåòñÿ. Â ìåñòàõ íàõîæäåíèÿ îòäåëüíîé êîëîíèè òðóáêó íàäïèëèâàþò, ôëàìáèðóþò íàä ïëàìåíåì è ðàçëàìûâàþò. Êîëîíèþ ñíèìàþò ïåòëåé âìåñòå ñ àãàðîì è ïåðåíîñÿò â ïðîáèðêó
ñî ñðåäîé Êèòò-Òàðîööè.
 ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè èçó÷àþò êóëüòóðíûå è áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà âûäåëåííîé ÷èñòîé êóëüòóðû.
Äëÿ áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû èñïîëüçóþò èñõîäíûé ìàòåðèàë, à òàêæå êóëüòóðó.
Çàðàæåíèå îïûòíûõ æèâîòíûõ ïðîèçâîäÿò òåì æå ìàòåðèàëîì, êîòîðûé èñïîëüçóþò äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ ïîñåâîâ.
Ïðè ïîäîçðåíèè íà ýìôèçàìàòîçíûé êàðáóíêóë çàðàæàþò âíóòðèìûøå÷íî ìîðñêóþ ñâèíêó âçâåñüþ
â äîçå 0,5—1 ñì3, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç 16—96 ÷; ïðè ïîäîçðåíèè íà çëîêà÷åñòâåííûé îòåê òàêæå
çàðàæàþò âíóòðèìûøå÷íî ìîðñêóþ ñâèíêó èëè ìûøü âçâåñüþ â äîçå 1 ñì3, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç
12—24 ÷ ïîñëå èíúåêöèè; ïðè ïîäîçðåíèè íà áðàäçîò îâåö çàðàæàþò ïîäêîæíî èëè âíóòðèìûøå÷íî
ìîðñêóþ ñâèíêó, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç 1—2 ñóòîê; ïðè ïîäîçðåíèè íà äèçåíòåðèþ ÿãíÿò è ýíòåðîòîêñåìèþ îâåö äëÿ âíóòðèìûøå÷íîãî çàðàæåíèÿ èñïîëüçóþò êðîëèêîâ èëè ìîðñêèõ ñâèíîê, êîòîðûå
ïîãèáàþò â òå÷åíèå ïåðâûõ ñóòîê; ïðè ïîäîçðåíèè íà ñòîëáíÿê çàðàæàþò ôèëüòðàòîì èç êóëüòóðû â
äîçå 0,5—0,8 ñì3 ïîäêîæíî áåëûõ ìûøåé â îáëàñòè êîðíÿ õâîñòà, æèâîòíûå ïîãèáàþò íà 3—4 ñóòêè;
ïðè ïîäîçðåíèè íà íåêðîáàêòåðèîç çàðàæåíèå â äîçå 0,5—1 ñì3 êðîëèêîâ è áåëûõ ìûøåé ïðîèçâîäÿò
ïîä êîæó â îáëàñòè óõà (êðîëèê) èëè æèâîòà (ìûøü). Íà ìåñòå èíúåêöèè, îñîáåííî íà óõå, ïîÿâëÿþòñÿ íåêðîçû. Æèâîòíûå ïîãèáàþò ÷åðåç 5—10 ñóòîê, èíîãäà îíè âûæèâàþò.
Èññëåäîâàíèå íà îïðåäåëåíèå áîòóëèçìà (òîêñèíîîáðàçîâàíèå) ïðîâîäÿò íà áåëûõ ìûøàõ.
Íåéòðàëèçàöèÿ òîêñèíà ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêîé ñûâîðîòêîé
Èñïîëüçóåìûé ìàòåðèàë ïðåäâàðèòåëüíî ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñî ñòåðèëüíûì ôèçèîëîãè÷åñêèì
ðàñòâîðîì â ñîîòíîøåíèè 1:2, âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå 1—1,5 ÷ äëÿ ýêñòðàãèðîâàíèÿ òîêñèíà, çàòåì íàñòîé ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð èëè öåíòðèôóãèðóþò ïðè
3000 îá/ìèí â òå÷åíèå 15—20 ìèí.
Íåéòðàëèçàöèÿ òîêñèíà: ê 0,5—0,8 ñì3 ôèëüòðàòà äîáàâëÿþò 0,2 ñì3 ñìåñè äèàãíîñòè÷åñêèõ ìîíîâàëåíòíûõ ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêèõ ñûâîðîòîê òèïîâ À, Â, Ñ, D, E è F ïî 0,04 ñì3 êàæäîãî òèïà. Ñìåñü
âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 30 ìèí.
94
ÃÎÑÒ 21237—75 Ñ. 27
Äâóì ìûøàì ââîäÿò ïî 0,5—0,8 ñì3 èññëåäóåìîãî ôèëüòðàòà èëè öåíòðèôóãàòà âíóòðèáðþøèííî
èëè âíóòðèâåííî (âíóòðèâåííî ââîäÿò òîëüêî öåíòðèôóãàò). Äðóãèì äâóì ìûøàì ââîäÿò ñìåñü ôèëüòðàòà è ñûâîðîòêè.
Àíàëîãè÷íîå èñïûòàíèå ìîæåò áûòü ïðîâåäåíî ñ 6—7 ñóòî÷íîé êóëüòóðîé, âûðàùåííîé íà ïå÷åíî÷íîì áóëüîíå.
 ýòîì ñëó÷àå îòñàñûâàþò ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé âåðõíèé ñëîé êóëüòóðû, ôèëüòðóþò ÷åðåç
âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð è äàëåå ïîñòóïàþò, êàê è ïðè èñïûòàíèè íàñòîÿ.
Åñëè ìûøè, ïîëó÷èâøèå ôèëüòðàò, íåîáðàáîòàííûé ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêîé ñûâîðîòêîé, ïîãèáàþò, ðåçóëüòàò áèîïðîáû ïîëîæèòåëüíûé (â ìÿñå èìååòñÿ òîêñèí). Ìûøè, êîòîðûì ââîäèëàñü ñìåñü
ôèëüòðàòà ñ ñûâîðîòêîé (êîíòðîëüíûå), âûæèâàþò.
 ñëó÷àå ãèáåëè âñåõ ÷åòûðåõ ìûøåé ñëåäóåò ïîâòîðèòü ðåàêöèþ íåéòðàëèçàöèè ñ ýêñòðàêòàìè,
ðàçâåäåííûìè â 5, 10, 20 è äàæå 100 ðàç.
Ïðè îáíàðóæåíèè â èñïûòóåìîì ìàòåðèàëå áîòóëèíè÷åñêîãî òîêñèíà ñðàçó æå ñòàâÿò ðàçâåðíóòóþ ðåàêöèþ íåéòðàëèçàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ òèïà òîêñèíà ñ òèïîñïåöèôè÷åñêèìè äèàãíîñòè÷åñêèìè
ñûâîðîòêàìè.
ÈÍÔÎÐÌÀÖÈÎÍÍÛÅ ÄÀÍÍÛÅ
1. ÐÀÇÐÀÁÎÒÀÍ È ÂÍÅÑÅÍ Ãîñóäàðñòâåííûì àãðîïðîìûøëåííûì êîìèòåòîì ÑÑÑÐ
2. ÓÒÂÅÐÆÄÅÍ È ÂÂÅÄÅÍ Â ÄÅÉÑÒÂÈÅ Ïîñòàíîâëåíèåì Ãîñóäàðñòâåííîãî êîìèòåòà ñòàíäàðòîâ
Ñîâåòà Ìèíèñòðîâ ÑÑÑÐ îò 14.11.75 ¹ 3054
3. ÂÇÀÌÅÍ ÃÎÑÒ 7269—54 â ÷àñòè ðàçäåëà II
4. ÑÑÛËÎ×ÍÛÅ ÍÎÐÌÀÒÈÂÍÎ-ÒÅÕÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÄÎÊÓÌÅÍÒÛ
Îáîçíà÷åíèå
ÍÒÄ, íà êîòîðûé
äàíà ññûëêà
ÃÎÑÒ 171—81
ÃÎÑÒ 195—77
ÃÎÑÒ 245—76
ÃÎÑÒ 779—55
ÃÎÑÒ 1027—67
ÃÎÑÒ 1341—97
ÃÎÑÒ 1770—74
ÃÎÑÒ 1791—67
ÃÎÑÒ 2493—75
ÃÎÑÒ 2874—82
ÃÎÑÒ 3164—78
ÃÎÑÒ 4025—95
ÃÎÑÒ 4159—79
ÃÎÑÒ 4170—78
ÃÎÑÒ 4198—75
ÃÎÑÒ 4201—79
ÃÎÑÒ 4208—72
ÃÎÑÒ 4209—77
ÃÎÑÒ 4232—74
ÃÎÑÒ 4233—77
Íîìåð ïóíêòà
Îáîçíà÷åíèå
ÍÒÄ, íà êîòîðûé
äàíà ññûëêà
Íîìåð ïóíêòà
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
1.2
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
ÃÎÑÒ 4328—77
ÃÎÑÒ 4523—77
ÃÎÑÒ 5541—76
ÃÎÑÒ 5556—81
ÃÎÑÒ 5833—75
ÃÎÑÒ 5962—67
ÃÎÑÒ 6038—79
ÃÎÑÒ 6253—78
ÃÎÑÒ 6259—75
ÃÎÑÒ 6552—80
ÃÎÑÒ 6672—75
ÃÎÑÒ 6691—77
ÃÎÑÒ 6709—72
ÃÎÑÒ 9147—80
ÃÎÑÒ 9284—75
ÃÎÑÒ 9412—93
ÃÎÑÒ 10354—82
ÃÎÑÒ 11293—89
ÃÎÑÒ 11773—76
ÃÎÑÒ 12026—76
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
1.2
2.1
2.1
2.1
Îáîçíà÷åíèå
ÍÒÄ, íà êîòîðûé
äàíà ññûëêà
Íîìåð ïóíêòà
ÃÎÑÒ 13739—78
ÃÎÑÒ 13805—76
ÃÎÑÒ 16317—87
ÃÎÑÒ 17206—96
ÃÎÑÒ 18300—87
ÃÎÑÒ 20015—88
ÃÎÑÒ 20729—75
ÃÎÑÒ 20730—75
ÃÎÑÒ 21239—93
ÃÎÑÒ 21241—89
ÃÎÑÒ 22280—76
ÃÎÑÒ 24104—88
ÃÎÑÒ 25336—82
ÃÎÑÒ 25706—83
ÃÎÑÒ 27068—86
ÎÑÒ 25—11—38—84
ÒÓ 6—09—5169—84
ÒÓ 6—09—5170—84
ÒÓ 6—09—5484—90
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
2.1
5. Îãðàíè÷åíèå ñðîêà äåéñòâèÿ ñíÿòî ïî ïðîòîêîëó ¹ 4—93 Ìåæãîñóäàðñòâåííîãî Ñîâåòà ïî ñòàíäàðòèçàöèè, ìåòðîëîãèè è ñåðòèôèêàöèè (ÈÓÑ 4—94)
6. ÈÇÄÀÍÈÅ ñ Èçìåíåíèÿìè ¹ 1, 2, óòâåðæäåííûìè â îêòÿáðå 1981 ã., ÿíâàðå 1987 ã. (ÈÓÑ 1—82,
4—87)
95