Способ дифференциальной диагностики псевдотуберкулеза и

ÐÎÑÑÈÉÑÊÀß ÔÅÄÅÐÀÖÈß
RU
(19)
(11)
2 339 952
(13)
C1
(51) ÌÏÊ
G01N 33/53
(2006.01)
ÔÅÄÅÐÀËÜÍÀß ÑËÓÆÁÀ
ÏÎ ÈÍÒÅËËÅÊÒÓÀËÜÍÎÉ ÑÎÁÑÒÂÅÍÍÎÑÒÈ,
ÏÀÒÅÍÒÀÌ È ÒÎÂÀÐÍÛÌ ÇÍÀÊÀÌ
(12)
ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß Ê ÏÀÒÅÍÒÓ
(21), (22) Çà âêà: 2007120082/15, 29.05.2007
(24) Äàòà íà÷àëà îòñ÷åòà ñðîêà äåéñòâè ïàòåíòà:
29.05.2007
(45) Îïóáëèêîâàíî: 27.11.2008 Áþë. ¹ 33
C 1
C 1
R U
2 3 3 9 9 5 2
(54) ÑÏÎÑÎÁ ÄÈÔÔÅÐÅÍÖÈÀËÜÍÎÉ ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÈ ÏÑÅÂÄÎÒÓÁÅÐÊÓËÅÇÀ È ÊÈØÅ×ÍÎÃÎ
ÈÅÐÑÈÍÈÎÇÀ È ÄÈÀÃÍÎÑÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÍÀÁÎÐ ÄËß ÅÃÎ ÎÑÓÙÅÑÒÂËÅÍÈß
(57) Ðåôåðàò:
Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê îáëàñòè ìåäèöèíû, â
÷àñòíîñòè ê ñïîñîáó ñåðîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè
èåðñèíèîçîâ (ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî
èåðñèíèîçà),
âûçûâàåìûõ
Yersinia
pseudotuberculosis
è
Yersinia
enterocolitica.
Ñïîñîá îñíîâàí íà îïðåäåëåíèè ñïåöèôè÷åñêèõ
àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì çàáîëåâàíèé â ñûâîðîòêå
êðîâè
áîëüíîãî
ìåòîäîì
òâåðäîôàçíîãî
èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, ãäå â êà÷åñòâå
àíòèãåíîâ èñïîëüçóþòñ îäíîìîìåíòíî äâà
âèäîñïåöèôè÷åñêèõ
ïîðîîáðàçóþùèõ
áåëêà
íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) Y. pseudotuberculosis è èç
Y. enterocolitica. Çà äèàãíîñòè÷åñêèå òèòðû â ÈÔÀ
ïðèí òû ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê 1:800 äë ïîðèíà
ÈÌ Y. pseudotuberculosis è 1:1600 äë ïîðèíà ÍÌ
Y.enterocolitica.
Äèàãíîñòè÷åñêèé
íàáîð
íà
ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç ñîäåðæèò
ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè âèäîñïåöèôè÷åñêèìè áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé
ìåìáðàíû
Y.
pseudotuberculosis
è
Y.
enterocolitica,
îáðàçöû
êîíòðîëüíûõ
(ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè
è âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë, åìêîñòè ñ
ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è
ñòîï-ðåàãåíòàìè,
ñóáñòðàòîì
è
áóôåðíûìè
ñèñòåìàìè. Èñïîëüçîâàíèå ñïîñîáà ïîçâîë åò
ïðîâîäèòü
äèôôåðåíöèàëüíóþ
äèàãíîñòèêó
ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà è
âû âë òü ñëó÷àè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçíîé
èíôåêöèè. 2 í.ï. ô-ëû, 3 èë.
Ñòðàíèöà: 1
RU
2 3 3 9 9 5 2
Àäðåñ äë ïåðåïèñêè:
690022, ã.Âëàäèâîñòîê, ïð-êò 100-ëåòè Âëàäèâîñòîêó, 159, Òèõîîêåàíñêèé èíñòèòóò
áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÄÂÎ ÐÀÍ, ïàòåíòíûé
îòäåë, Í.È. Ñòàäíè÷åíêî
(73) Ïàòåíòîîáëàäàòåëü(è):
Òèõîîêåàíñêèé èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè
Äàëüíåâîñòî÷íîãî îòäåëåíè Ðîññèéñêîé
àêàäåìèè íàóê (ÒÈÁÎÕ ÄÂÎ ÐÀÍ) (RU),
Ãîñóäàðñòâåííîå îáðàçîâàòåëüíîå ó÷ðåæäåíèå
âûñøåãî ïðîôåññèîíàëüíîãî îáðàçîâàíè "Âëàäèâîñòîêñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé
óíèâåðñèòåò Ôåäåðàëüíîãî àãåíòñòâà ïî
çäðàâîîõðàíåíèþ è ñîöèàëüíîìó ðàçâèòèþ"
(ÃÎÓ ÂÏÎ ÂÃÌÓ Ðîñçäðàâà) (RU)
R U
(56) Ñïèñîê äîêóìåíòîâ, öèòèðîâàííûõ â îò÷åòå î
ïîèñêå: CHART H, CHEASTY Ò The serodiagnosis
of human infections with Yersinia
enterocolitica and Yersinia
pseudotuberculosis, FEMS Immunol Med
Microbiol. 2006 Aug; 47(3):391-7, PMID:
16872375 [PubMed - indexed for MEDLINE]. RU
2153172 C1, 02.12.1998. RU 2101342 C1,
10.01.1998. ÏÎÐÒÍßÃÈÍÀ Î.Þ. è äð.
Áàêòåðèàëüíûå ïîðèíû êàê ïåðñïåêòèâíûå
àíòèãåíû äë (ñì. ïðîä.)
(72) Àâòîð(û):
Âîñòðèêîâà Îëüãà Ïàâëîâíà (RU),
Ïîðòí ãèíà Îëüãà Þðüåâíà (RU),
Ìàëàøåíêîâà Âëàäëåíà Ãåîðãèåâíà (RU),
Õîìåíêî Âàëåíòèíà Àëåêñàíäðîâíà (RU),
Íîâèêîâà Îëüãà Äàíèèëîâíà (RU),
Ãîðäååö Àëüâèíà Âàñèëüåâíà (RU),
Ñîëîâüåâà Òàìàðà Ôåäîðîâíà (RU)
R U
(56) (ïðîäîëæåíèå):
äèàãíîñòèêè è âàêöèíîïðîôèëàêòèêè èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé. Âåñòíèê ÄÂÎ ÐÀÍ, 2004, ¹3, ñ.35-44.
ÍÎÂÈÊÎÂÀ Î.Ä. è äð. Èñïîëüçîâàíèå ïîðèíà èç âíåøíåé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis äë ñåðîäèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà. Áþëë. ýêñï. áèîë. ìåä., 2005, ¹8, ñ.199-202.
R U
2 3 3 9 9 5 2
C 1
C 1
2 3 3 9 9 5 2
Ñòðàíèöà: 2
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
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2 339 952
(13)
C1
(51) Int. Cl.
G01N 33/53
(2006.01)
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2007120082/15, 29.05.2007
(24) Effective date for property rights: 29.05.2007
(45) Date of publication: 27.11.2008 Bull. 33
2 3 3 9 9 5 2
(54) METHOD FOR DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF PSEUDO-TUBERCULOSIS AND INTESTINAL
YERSINIOSIS AND DIAGNOSTIC SET FOR ITS REALISATION
(57) Abstract:
FIELD: medicine.
SUBSTANCE: determine specific antibodies to
activators of diseases in blood serum of the
patient using the method of solidphase enzyme
multiplied immunoassay where as antigenes are
used in one stage two species-specific poreforming proteins outside membranes (NM) Y.
pseudotuberculosis and from Y. enterocolitica. As
diagnostic titres in EIA delutions of serum 1:800
for porin NM are accepted. pseudotuberculosis and
1:1600
for
porin
NM
Y.enterocolitica.
The
diagnostic set on a pseudotuberculosis and
intestinal yersiniosis contains a tablet with the
immobilized antigens - species-specific proteinsporins of external membrane Y. pseudotuberculosis
and Y. enterocolitica, samples control (positive
and negative) blood sera and the second common-
species antibodies, capacity with ready for the
use inactivating and stop reagents, substrate and
buffer systems.
EFFECT: possibility to carry out differential
diagnostics of pseudotuberculosis from intestinal
yersiniosis and to tap cases of the admixed form
of yersuniosal infection.
3 dwg, 1 ex, 2 cl
Ñòðàíèöà: 3
EN
C 1
R U
(73) Proprietor(s):
Tikhookeanskij institut bioorganicheskoj
khimii Dal'nevostochnogo otdelenija
Rossijskoj akademii nauk (TIBOKh DVO RAN)
(RU),
Gosudarstvennoe obrazovatel'noe uchrezhdenie
vysshego professional'nogo obrazovanija
"Vladivostokskij gosudarstvennyj meditsinskij
universitet Federal'nogo agentstva po
zdravookhraneniju i sotsial'nomu razvitiju"
(GOU VPO VGMU Roszdrava) (RU)
2 3 3 9 9 5 2
C 1
Mail address:
690022, g.Vladivostok, pr-kt 100-letija
Vladivostoku, 159, Tikhookeanskij institut
bioorganicheskoj khimii DVO RAN, patentnyj
otdel, N.I. Stadnichenko
R U
(72) Inventor(s):
Vostrikova Ol'ga Pavlovna (RU),
Portnjagina Ol'ga Jur'evna (RU),
Malashenkova Vladlena Georgievna (RU),
Khomenko Valentina Aleksandrovna (RU),
Novikova Ol'ga Daniilovna (RU),
Gordeets Al'vina Vasil'evna (RU),
Solov'eva Tamara Fedorovna (RU)
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5
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Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê îáëàñòè ìåäèöèíû, â ÷àñòíîñòè ê ñïîñîáó ñåðîëîãè÷åñêîé
äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ (ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà).
Èåðñèíèîçíûå èíôåêöèè, âûçûâàåìûå ïàòîãåííûìè äë ÷åëîâåêà Yersinia
pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica, îòíîñ òñ ê øèðîêî ðàñïðîñòðàíåííûì â
ìèðå îñòðûì êèøå÷íûì çàáîëåâàíè ì. Ýòèîëîãè÷åñêîå ðîäñòâî âîçáóäèòåëåé
ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà ñïîñîáñòâóåò îïðåäåëåííîìó ñõîäñòâó ýòèõ
èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé. Èåðñèíèîçû õàðàêòåðèçóþòñ ïîäîáèåì êëèíè÷åñêèõ ôîðì è
ïðî âë þòñ êàê â âèäå ïåðâè÷íî-î÷àãîâûõ ôîðì (ãåíåðàëèçîâàííà , êèøå÷íà ,
àáäîìèíàëüíà è ñìåøàííà , àíãèíîçíà , îñòðà ðåñïèðàòîðíà , íî è áîëåå ðåäêà êîæíà ), òàê è â âèäå âòîðè÷íî-î÷àãîâûõ ôîðì èåðñèíèîçîâ (ïíåâìîíè÷åñêîé, ãåïàòèòíîé,
ìåíèíãî-ýíöåôàëèòè÷åñêîé, ñåïòè÷åñêîé è äð.). Ïðè ýòîì ïðèíöèïèàëüíûõ ðàçëè÷èé â
êëèíè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ ýòèõ ôîðì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè â çàâèñèìîñòè îò âèäà
âîçáóäèòåë (Y. pseudotuberculosis èëè Y. enterocolitica) íå âû âëåíî [1-3]. Ïðè
ïîñòàíîâêå ïåðâè÷íîãî äèàãíîçà «èåðñèíèîç» ïðàêòèêóþùèå âðà÷è îðèåíòèðóþòñ , êàê
ïðàâèëî, íà êëèíè÷åñêèå ïðî âëåíè çàáîëåâàíè . Ïñåâäîòóáåðêóëåç (ÏÑÁ), íàïðèìåð,
õàðàêòåðèçóåòñ áîëüøåé âûðàæåííîñòüþ òîêñèêî-àëëåðãè÷åñêîãî ñèíäðîìà, à êèøå÷íûé
èåðñèíèîç (ÊÈ) - äèñôóíêöèåé ÆÊÒ è îðãàííûìè ïîðàæåíè ìè [1-3]. Îäíàêî ïîäîáíûå
ðàçëè÷è â êëèíè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ ìåæäó ÏÑÒ è ÊÈ ÷åòêî ïðîñëåæèâàþòñ òîëüêî ïðè
ìàññîâîì ïðîâåäåíèå àíàëèçà è ìàëî ïîìîãàþò â äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêå â
êàæäîì êîíêðåòíîì ñëó÷àå.  ñâ çè ñ ýòèì óñòàíîâëåíèå ýòèîëîãè÷åñêîãî äèàãíîçà ïðè
èåðñèíèîçàõ òîëüêî ïî åãî êëèíè÷åñêèì ïðî âëåíè ì îñîáåííî â ðàííèå ñðîêè è ïðè
ñïîðàäè÷åñêîé çàáîëåâàåìîñòè ïðàêòè÷åñêè íåâîçìîæíî [1-3]. Îñîáåííî ÷àñòî
äèàãíîñòè÷åñêèå îøèáêè âîçìîæíû ó äåòåé ðàííåãî âîçðàñòà, à òàêæå ïðè ò æåëîé ôîðìå
çàáîëåâàíè . Îäíàêî è ïðè áîëåå ëåãêîì òå÷åíèè èíôåêöèè ó äåòåé ñòàðøåãî âîçðàñòà
ïîñòàâèòü ïðàâèëüíûé äèàãíîç ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè çàáîëåâàíè íå óäàåòñ áåç
ðåçóëüòàòîâ ëàáîðàòîðíîãî îáñëåäîâàíè [2]. Ñëîæíîñòü âåðèôèêàöèè ÏÑÒ îò ÊÈ òîëüêî
ïî êëèíè÷åñêèì ïðî âëåíè ì â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ íåðåäêî ïðèâîäèò ê îøèáî÷íîìó
äèàãíîçó, äàæå ïðè òèïè÷íîì òå÷åíèè çàáîëåâàíè . Îñîáóþ ñëîæíîñòü ïðè äèàãíîñòèêå
èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè â çàâèñèìîñòè îò ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðåäñòàâë þò ñëó÷àè
ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçîâ, îáóñëîâëåííîé îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica.  ñâ çè ñ ýòèì îñîáóþ çíà÷èìîñòü ïðè äèôôåðåíöèàöèè îáîáùåííîãî
äèàãíîçà «èåðñèíèîç» (ÏÑÁ è/èëè ÊÈ) ïðèîáðåòàåò íåîáõîäèìîñòü ÷åòêîãî ðàçãðàíè÷åíè äàííûõ èíôåêöèé ïðè âñïûøå÷íîé çàáîëåâàåìîñòè, êîãäà íåîáõîäèìû ìàñøòàáíûå
ïðîòèâîýïèäåìè÷åñêèå ìåðîïðè òè , ñ ó÷åòîì íåêîòîðûõ ðàçëè÷èé â ìåõàíèçìå ïåðåäà÷è
âîçáóäèòåëåé ÏÑÒ è ÊÈ. Îêîí÷àòåëüíûé äèàãíîç âîçìîæåí òîëüêî ñ èñïîëüçîâàíèåì
ëàáîðàòîðíûõ ìåòîäîâ îáñëåäîâàíè ïàöèåíòà. Â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêòèâíûìè
äîêóìåíòàìè [4] áîëüøîå çíà÷åíèå óäåë åòñ ñåðîëîãè÷åñêèì ìåòîäàì äèàãíîñòèêè,
íàïðàâëåííûì íà âû âëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì èåðñèíèîçîâ - Y.
pseudotuberculosis è Y. enterocolitica. Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè êðîâè áîëüíûõ íà
íàëè÷èå àíòèòåë ê îïðåäåëåííîìó âèäó âîçáóäèòåë ïîçâîë þò îðèåíòèðîâàòü êëèíèöèñòà
â òàêòèêå âåäåíè áîëüíîãî è â îïðåäåëåííîé ñòåïåíè ïðîãíîçèðîâàòü òå÷åíèå
çàáîëåâàíè .
Èñïîëüçóåìûå â ïðàêòèêå ëå÷åáíûõ ó÷ðåæäåíèé ñåðîëîãè÷åñêèå ìåòîäû, îñíîâàííûå íà
ðåàêöèè àããëþòèíàöèè (ÐÀ), ðàçðàáîòàíû äë äèàãíîñòèêè êàê ÏÑÒ, òàê è ÊÈ è
îáåñïå÷èâàþò âåðèôèêàöèþ ëèáî ÏÑÒ, ëèáî - ÊÈ [5, 6].  ñâ çè ñ ýòèì äèôôåðåíöèàëüíà äèàãíîñòèêà èåðñèíèîçîâ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè òðåáóåò ïîñëåäîâàòåëüíîãî èñïîëüçîâàíè ðàçëè÷íûõ òèïîñïåöèôè÷åñêèõ äèàãíîñòèêóìîâ: ñíà÷àëà äë îïðåäåëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ
àíòèòåë ê Y. pseudotuberculosis, çàòåì - ê Y. enterocolitica. Ïîäîáíà ñõåìà àíàëèçà
ïðîâîäèòñ ïîýòàïíî: äë âû âëåíè àíòèòåë ê èåðñèíè ì âíà÷àëå ñòàâ ò ðàçâåðíóòóþ
ðåàêöèþ ñ äèàãíîñòèêóìàìè ê íàèáîëåå ÷àñòî âñòðå÷àþùèìñ ñåðîâàðàì Y.
pseudotuberculosis (1 Â) èëè ê Y. enterocolitica (0:9 è 0:3). Çàòåì, åñëè âîçíèêíåò â
ýòîì íåîáõîäèìîñòü, ÐÀ ñòàâ ò ñ äèàãíîñòèêóìàìè ê äðóãèì ñåðîâàðèàíòàì Y.
pseudotuberculosis (III, IV) èëè Y. enterocolitica (0:5,27, 0:8, 0:6 è äð.). Òàêèì
Ñòðàíèöà: 4
DE
RU 2 339 952 C1
5
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îáðàçîì, ïðåäëàãàåìà ñõåìà ñåðîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ìíîãîýòàïíà,
òðóäîåìêà è äëèòåëüíà. Êðîìå òîãî, ïîñêîëüêó â êà÷åñòâå àíòèãåíà â ÐÀ èñïîëüçóþòñ æèâûå êóëüòóðû èåðñèíèé, à ðåàêöè òèïîñïåöèôè÷åñêà , òî íåîáõîäèìî èìåòü êóëüòóðû
èåðñèíèé ðàçíûõ ñåðîëîãè÷åñêèõ âàðèàíòîâ, íàèáîëåå ÷àñòî âûçûâàþùèõ çàáîëåâàíè . Ê
íåäîñòàòêàì ìåòîäîâ ìîæíî îòíåñòè òàêæå ðåòðîñïåêòèâíîñòü ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà, òàê
êàê àíòèòåëà â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ âû âë þòñ òîëüêî íà 2-3 íåäåë õ áîëåçíè.
Ñïîñîáû äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ, îñíîâàííûå íà ðåàêöèè íåïð ìîé ãåìàããëþòèíàöèè
(ÐÍÃÀ), ðàçðàáîòàíû äë äèàãíîñòèêè êàê ÏÑÒ, òàê è äë - ÊÈ. Íåñìîòð íà îïðåäåëåííûå
óñïåõè ïî óñîâåðøåíñòâîâàíèþ ýòèõ äèàãíîñòèêóìîâ, ÷òî ïîçâîëèëî íàëàäèòü èõ
ïðîìûøëåííûé âûïóñê, îíè èìåþò òàêæå ñóùåñòâåííûå íåäîñòàòêè [7, 8]. Ïðåäëàãàåìûå
ñïîñîáû õàðàêòåðèçóþòñ íåâûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ, ïîñêîëüêó â ðåàêöèè èñïîëüçóþòñ òèïîñïåöèôè÷åñêèå àíòèãåíû - ëèïîïîëèñàõàðèäû Y. pseudotuberculosis 1B è Y.
enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîâàðèàíòîâ, ÷òî íå ïîçâîë åò âû âë òü ñëó÷àè çàáîëåâàíèé,
âûçâàííûõ äðóãèìè ñåðîâàðèàíòàìè ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Êðîìå òîãî, îáùåïðèí òûé
ìíîãîñòàäèéíûé ïîäõîä ê äèàãíîñòèêå èåðñèíèîçîâ áåç ó÷åòà ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë îòëè÷àåòñ äëèòåëüíîñòüþ àíàëèçà, ïåðåðàñõîäîì ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî,
íåîáõîäèìûõ ðåàãåíòîâ, ìàòåðèàëîâ è äð.
Äë äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ â ïîñëåäíèå ãîäû èíòåíñèâíî ðàçðàáàòûâàåòñ èììóíîôåðìåíòíûé àíàëèç (ÈÔÀ) ñ èñïîëüçîâàíèåì àíòèãåíîâ ðàçëè÷íîé ïðèðîäû [9-12],
îäíàêî ïðåäëàãàåìûå âàðèàíòû ÈÔÀ íå ïîçâîë þò ïðîâîäèòü îäíîìîìåíòíî
äèôôåðåíöèðîâàíèå ÏÑÒ è ÊÈ, à òðåáóþò ïîýòàïíîãî èõ èñïîëüçîâàíè , áîëüøèõ çàòðàò
âðåìåíè è íåîáõîäèìûõ ìàòåðèàëîâ.
Ïðåäëîæåí ñïîñîá äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïðîòåèíîâîãî
àíòèãåíà, ñâîáîäíî ñåêðåòèðóåìîãî â êóëüòèâèðóåìóþ ñðåäó ðàçíûìè âèäàìè èåðñèíèé, â
÷àñòíîñòè Y. pseudotuberculosis 1B ñåðîâàðèàíòà [12]. Îäíàêî ýòîò ñïîñîá íå
îáåñïå÷èâàåò äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè
âîçáóäèòåë .
Èçâåñòåí ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ ñ èñïîëüçîâàíèåì â ÈÔÀ
òèïîñïåöèôè÷åñêîãî àíòèãåíà - ëèïîïîëèñàõàðèäà (ËÈÑ) èç Y. pseudotuberculosis 1 B
ñåðîâàðèàíòà èëè ËÏÑ èç Y. enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîòèïîâ [13]. Îäíàêî
ïðåäëàãàåìûé ìåòîä ââèäó åãî òèïîñïåöèôè÷íîñòè íå ïîçâîë åò äèàãíîñòèðîâàòü
çàáîëåâàíè , âûçâàííûå Y. pseudotuberculosis II, III, IV ñåðîâàðèàíòàìè, è Y.
enterocolitica 0:5, 0:6, 0:7, 0:8 è äðóãèõ ñåðîòèïîâ. Êðîìå òîãî, äë âåðèôèêàöèè ÏÑÒ
îò ÊÈ íåîáõîäèìî ïîýòàïíîå èñïîëüçîâàíèå òèïîñïåöèôè÷åñêèõ äèàãíîñòèêóìîâ,
íàïðèìåð, ñíà÷àëà íà ÏÑÒ, çàòåì - íà ÊÈ. Äë ïðîâåäåíè òàêîãî àíàëèçà òðåáóþòñ î÷èùåííûå àíòèãåíû èç ðàçëè÷íûõ ñåðîëîãè÷åñêèõ âàðèàíòîâ Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica, íà ïîëó÷åíèå êîòîðûõ çàòðà÷èâàåòñ çíà÷èòåëüíîå âðåì , ÷òî óñëîæí åò
äèàãíîñòèêó.
Ýòîò ñïîñîá âêëþ÷àåò ñëåäóþùèå ýòàïû:
1) ïîñàäêà àíòèãåíà íà ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò, â êà÷åñòâå àíòèãåíà èñïîëüçóåòñ èíàêòèâèðîâàííûé êîðïóñêóë ðíûé àíòèãåí èç Y. enterocolitica 0:3 è 0:9 ñåðîâàðèàíòîâ;
2) îòìûâêà ïëàíøåòà;
3) íàíåñåíèå èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â äèàãíîñòè÷åñêîì ðàçâåäåíèè;
4) îòìûâêà ïëàíøåòà;
5) íàíåñåíèå êîíúþãàòà;
6) îòìûâêà ïëàíøåòà;
7) íàíåñåíèå ñóáñòðàòíîé ñìåñè;
8) ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè.
 íàñòî ùåå âðåì ïðîìûøëåííûé âûïóñê èììóíîôåðìåíòíûõ äèàãíîñòèêóìîâ (ÈÔÀ
òåñò-ñèñòåì) íà èåðñèíèîçû â íàøåé ñòðàíå íå îñóùåñòâë åòñ . Ìåòîäû
äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ, ïðåäëàãàåìûå ðàçíûìè àâòîðàìè [9-12], íå
îñíàùåíû íåîáõîäèìûìè íàáîðàìè ðåàãåíòîâ äë ïðîâåäåíè èììóíîäèàãíîñòèêè
èåðñèíèîçà.
Ñòðàíèöà: 5
RU 2 339 952 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Ïðåäëàãàåìûå ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû õàðàêòåðèçóþòñ íåâûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ è
÷óâñòâèòåëüíîñòüþ ê âû âëåíèþ èåðñèíèîçîâ, îáóñëîâëåííûõ ðàçíûìè ñåðîëîãè÷åñêèìè
âàðèàíòàìè Y. pseudotuberculosis (II, III, IV) è Y. enterocolitica (0:5, 0:6, 0:7, 0:
8 è äðóãèå), íàèáîëåå ÷àñòî âûçûâàþùèõ çàáîëåâàíè , è íå îáåñïå÷èâàþò
äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçîâ â çàâèñèìîñòè îò ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë .
Çàäà÷à èçîáðåòåíè - ñîâåðøåíñòâîâàíèå äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè
ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà çà ñ÷åò îäíîâðåìåííîãî îïðåäåëåíè ýòèõ
èíôåêöèé, âûçûâàåìûõ ðàçíûìè ñåðîëîãè÷åñêèìè âàðèàíòàìè âîçáóäèòåëåé èåðñèíèîçîâ,
è ðàçðàáîòêà äèàãíîñòè÷åñêîãî íàáîðà.
 ðåçóëüòàòå ðåøåíè ïîñòàâëåííîé çàäà÷è ðàçðàáîòàí ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé
äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà, âêëþ÷àþùèé îïðåäåëåíèå
ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî ìåòîäîì
òâåðäîôàçíîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, ïðåäóñìàòðèâàþùåãî íàíåñåíèå àíòèãåíîâ
íà ïëàíøåò, â êîòîðîì ñîãëàñíî èçîáðåòåíèþ íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò
âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis, çà
äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800, à íà äðóãóþ ïîëîâèíó
ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia
enterocolitica, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:1600 è
âåðèôèêàöèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà îñóùåñòâë þò ñðàâíåíèåì
çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèé ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíàìè
èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.), ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò ïñåâäîòóáåðêóëåç, ïðè âåëè÷èíå
îòíîøåíè ÎÏY.å./ÎÏY.ps áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò êèøå÷íûé èåðñèíèîç, ïðè
âåëè÷èíàõ îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. áëèçêèõ èëè ðàâíûõ 1,0,
äèàãíîñòèðóþò ñìåøàííóþ ôîðìó èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè.
Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç ñîäåðæèò ïëàíøåò ñ
èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè - âèäîñïåöèôè÷åñêèìè áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé
ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia enterocolitica, îáðàçöû êîíòðîëüíûõ
(ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè è âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë,
åìêîñòè ñ ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è ñòîï-ðåàãåíòàìè, ñóáñòðàòîì è
áóôåðíûìè ñèñòåìàìè.
Òåõíè÷åñêèé ðåçóëüòàò, îáåñïå÷èâàåìûé ãðóïïîé èçîáðåòåíèé, çàêëþ÷àåòñ â
ïîâûøåíèè ñïåöèôè÷íîñòè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè èììóíîôåðìåíòíîé äèàãíîñòèêè
èåðñèíèîçîâ. Çà âë åìûé ñïîñîá ïîçâîë åò ïðîâîäèòü äèôôåðåíöèàëüíóþ äèàãíîñòèêó
ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà è âû âë òü ñëó÷àè ñìåøàííîé ôîðìû
èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè, îáóñëîâëåííîé îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica. Ñïîñîá âë åòñ áîëåå ïðîñòûì, ò.ê. îáåñïå÷èâàåò îäíîìîìåíòíîå
ïðîâåäåíèå ñèñòåìíîãî àíàëèçà èç îäíîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî íà èåðñèíèîç
ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë , ÷òî óëó÷øàåò èììóíîäèàãíîñòèêó èåðñèíèîçîâ, ñîêðàùàåò
âðåì ïðîâåäåíè è ñòîèìîñòü àíàëèçà.
Ïîðîîáðàçóþùèå áåëêè íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) ãðàìîòðèöàòåëüíûõ áàêòåðèé
âë þòñ èììóíîëîãè÷åñêèìè ìàðêåðàìè, õàðàêòåðíûìè äë âèäà èëè ðîäà
ìèêðîîðãàíèçìîâ, è îòíîñ òñ ê âûñîêîèììóíîãåííûì êîìïîíåíòàì áàêòåðèàëüíîé êëåòêè,
è îïðåäåëåíèå àíòèòåë ê íèì èñïîëüçóåòñ äë äèàãíîñòèêè èíôåêöèîííûõ çàáîëåâàíèé
[14].
Àâòîðû çà âë åìîãî ñïîñîáà óñòàíîâèëè, ÷òî ïîðèíû èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica âë þòñ âèäîñïåöèôè÷åñêèìè àíòèãåíàìè âîçáóäèòåëåé ïñåâäîòóáåðêóëåçà
è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà, àíòèòåëà ê êîòîðûì îáíàðóæèâàþòñ íåçàâèñèìî îò
ñåðîëîãè÷åñêîãî âàðèàíòà âîçáóäèòåëåé êàê â àíòèñûâîðîòêàõ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ,
èììóíèçèðîâàííûõ ëèçàòàìè êëåòîê Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica, òàê è â
ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ ïñåâäîòóáåðêóëåçîì è êèøå÷íûì èåðñèíèîçîì.
Ñïîñîá îñóùåñòâë åòñ ñëåäóþùèì îáðàçîì: äèàãíîñòèêó ïðîâîä ò ïî ìåòîäèêå
âû âëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî, èñïîëüçó Ñòðàíèöà: 6
RU 2 339 952 C1
5
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15
20
25
30
35
40
45
50
ñòàíäàðòíûé òâåðäîôàçíûé èììóíîôåðìåíòíûé àíàëèç (ÈÔÀ, íåïð ìîé, íåêîíêóðåíòíûé
àíàëèç àíòèòåë) [15].  êà÷åñòâå àíòèãåíîâ èñïîëüçóþòñ îäíîìîìåíòíî äâà
âèäîñïåöèôè÷åñêèõ ïîðîîáðàçóþùèõ áåëêà èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è èç ÍÌ Y.
enterocolitica, âûäåëåííûõ â îäèíàêîâûõ óñëîâè õ è ïî îäíîé ìåòîäèêå [16]. Çà
äèàãíîñòè÷åñêèå òèòðû â ÈÔÀ ïðèí òû ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê 1:800 äë ïîðèíà ÍÌ Y
pseudotuberculosis (ñîãëàñíî ïàòåíòó RU ¹2153172 Ñ1, 20.07.2000) è 1:1600 äë ïîðèíà
ÍÌ Y. enterocolitica.
Äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð â ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìå íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enterocolitica
îïðåäåë ëè, ñðàâíèâà ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûå çíà÷åíè [17], ðàâíûå îòíîøåíè ì
çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèé ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ
áàêòåðèîëîãè÷åñêè ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì è çäîðîâûõ ëþäåé (Ðîï/Ðçä) ïðè ðàçëè÷íûõ
ðàçâåäåíè õ, ãäå Fîï=Fc+Fô
Fc - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ñïåöèôè÷åñêîé ðåàêöèè àíòèãåí/àíòèòåëî
(àíòèòåëà - ñûâîðîòêà êðîâè áîëüíîãî ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì, èëè ïîëîæèòåëüíûé
êîíòðîëü),
Fçä - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè ñ ñûâîðîòêîé êðîâè çäîðîâîãî
äîíîðà, èëè îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü,
Fô - çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà íåñïåöèôè÷åñêîé ôîíîâîé ðåàêöèè.
Äë èññëåäóåìûõ ñûâîðîòîê (57 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ áàêòåðèîëîãè÷åñêè
ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì è 86 äîíîðîâ) â ðàçâåäåíè õ 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:
1600 1:3200 ýòè âåëè÷èíû îêàçàëèñü ñîîòâåòñòâåííî ðàâíû 3,6; 4,0; 4,2; 5,5; 5,0; 4,1
(ôèã.1). Çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèí ëè ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè, äë êîòîðîãî
ñîîòíîøåíèå Fîï/Fçä îêàçàëîñü íàèáîëüøèì. Òàêèì îáðàçîì, â ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y.
enterocolitica çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèí òî ðàçâåäåíèå 1:800-1:1600. Àíàëèç
ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ ïîìîùüþ äàííîé òåñò-ñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíà
ïîêàçàë, ÷òî óðîâåíü ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë çàðåãèñòðèðîâàí â ïðåäåëàõ 0,64-2,0 åäèíèö
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè, ÷òî äîñòîâåðíî îòëè÷àëîñü îò
êîíòðîëüíûõ çíà÷åíèé (0,1-0,3 åäèíèö îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè).
Äë ïîäòâåðæäåíè ñïåöèôè÷íîñòè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y.
enterocolitica íàìè áûëî îáñëåäîâàíî 657 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ õàðàêòåðíûìè
êëèíè÷åñêèìè ïðèçíàêàìè èåðñèíèîçà (357 äåòåé â âîçðàñòå îò 1 ãîäà äî 14 ëåò è 200
ñûâîðîòîê êðîâè âçðîñëûõ ïàöèåíòîâ). Êðîìå òîãî, ó÷èòûâà ïîëèìîðôèçì èåðñèíèîçíîé
èíôåêöèè, áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû 256 ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ îñòðûìè êèøå÷íûìè
èíôåêöè ìè, íå îáóñëîâëåííûõ Y. enterocolitica (ïñåâäîòóáåðêóëåç - 134,
ñàëüìîíåëëåç - 54, îñòðûå âèðóñíûå ãåïàòèòû (À è Â) - 68). Âåðèôèêàöè óêàçàííûõ
çàáîëåâàíèé ïðîâîäèëàñü ñ ó÷åòîì êëèíèêî-ýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ, áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ
è/èëè ñïåöèôè÷åñêèõ ñåðîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 86
ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ ÷åëîâåê, ñîïîñòàâèìûõ ïî âîçðàñòó è ïîëó ñ îáñëåäóåìûìè
áîëüíûìè.
 ðåçóëüòàòå àíàëèçà áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ
ïñåâäîòóáåðêóëåçîì è ñàëüìîíåëëåçîì â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1:800) âçàèìîäåéñòâóþò ñ
ïîðèíîì. Îäíàêî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ðåàêöèè ýòèõ ñûâîðîòîê â 2-3
ðàçà ìåíüøå çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè ïîðèíà ñ
ñûâîðîòêàìè êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì. Ïðè ðàçâåäåíèè ýòèõ ñûâîðîòîê 1:1600 àíòèòåëà ê ïîðèíó èç Y. enterocolitica áûëè îïðåäåëåíû íà óðîâíå îòðèöàòåëüíîãî
êîíòðîë . Ïðè àíàëèçå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ãåïàòèòàìè àíòèòåë ê ïîðèíó èç Y.
enterocolitica íå îáíàðóæåíî íè â îäíîì èç ñëó÷àåâ (ôèã.2). Ñëåäîâàòåëüíî, ðàçâåäåíèå
ñûâîðîòîê êðîâè 1:1600 â áîëüøåé ñòåïåíè ñîîòâåòñòâóåò äèàãíîñòè÷åñêîìó òèòðó â ÈÔÀ
íà îñíîâå ïîðèíà èç Y. enter ocolitica ïðè âåðèôèêàöèè êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà.
Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî ïðåäëàãàåìà òåñò-ñèñòåìà ïîçâîë åò
ýôôåêòèâíî è äîñòîâåðíî îñóùåñòâë òü äèôôåðåíöèàëüíóþ äèàãíîñòèêó èåðñèíèîçà îò
äðóãèõ îñòðûõ êèøå÷íûõ çàáîëåâàíèé. Ñëåäîâàòåëüíî, ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà èç Y.
enterocolitica âë åòñ ÷óâñòâèòåëüíûì ìåòîäîì äèàãíîñòèêè èåðñèíèîçà, îáëàäàåò
Ñòðàíèöà: 7
RU 2 339 952 C1
5
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âûñîêîé ñïåöèôè÷íîñòüþ è íå äàåò ïåðåêðåñòíûõ ðåàêöèé ñ àíòèòåëàìè ê âîçáóäèòåë ì
çàáîëåâàíèé, ñõîäíûõ ïî êëèíèêå ñ èåðñèíèîçîì.
Äë îñóùåñòâëåíè äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî
èåðñèíèîçà ïîëèñòèðîëîâûé 96-ëóíî÷íûé ïëàíøåò («Dynatech», Øâåéöàðè èëè «Costar»,
ÑØÀ) ñåíñèáèëèçèðóþò àíòèãåíàìè, íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò
âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. pseudotuberculosis, à íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà
- âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. enterocolitica è ïðîâîä ò àíàëèç ïî ñäàíäàðòíîé
ìåòîäèêå.
Àíàëèç ñîñòîèò èç ñëåäóþùèõ ýòàïîâ:
1) ïîñàäêà àíòèãåíîâ íà òâåðäûé íîñèòåëü (96 ëóíî÷íûé ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò)
(êîíöåíòðàöè êàæäîãî àíòèãåíà - 5 ìêã/ìë â êàðáîíàò-áèêàðáîíàòíîì áóôåðå ñ ðÍ 9.0);
2) îòìûâêà ïëàíøåòà îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ 3-5 ðàç ïî 5 ìèí áóôåðîì "Â",
ñîñòî ùèì èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,05% òâèí-20 (èëè òâèí-80);
3) èíàêòèâàöè ïëàíøåòà (ïðåäîòâðàùåíèå íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè àíòèãåíà ñ
àíòèòåëàìè) áóôåðîì "Ñ", ñîñòî ùèì èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") +
0,1% òâèí-20;
4) íàíåñåíèå èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè â äâóõ ïàðàëëåë õ ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ â
äèàãíîñòè÷åñêèõ ðàçâåäåíè õ (1:800 äë ïîðèíà èç Y. pseudotuberculosis è 1:1600 äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica) ãîòîâèòñ ñ èñïîëüçîâàíèåì áóôåðà "Â";
5) îòìûâêà ïëàíøåòà;
6) íàíåñåíèå êîíúþãàòà (âòîðûå îáùåâèäîâûå àíòèòåëà, ìå÷åííûå ïåðîêñèäàçîé
õðåíà): ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå (1:1000) ãîòîâèòñ â áóôåðå "Ñ";
7) îòìûâêà ïëàíøåòà;
8) íàíåñåíèå ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà: 0.04% î-ôåíèëåíäèàìèí â öèòðàòíîôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 5.0) + 10 ìêë 33% Í2Î2 (â ðàñ÷åòå íà 10 ìë áóôåðà);
9) íàíåñåíèå ñòîï-ðåàãåíòà: 0,5Ì ðàñòâîð ñåðíîé êèñëîòû (H2SO4) ãîòîâèòñ ïðè
ðàçáàâëåíèè 1 ìë êîíöåíòðèðîâàííîé H2SO4 â 15 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû;
10) ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè.
Äë èññëåäîâàíè äèàãíîñòè÷åñêèõ êà÷åñòâ è ñïåöèôè÷íîñòè ïðåäëàãàåìîé ÈÔÀ òåñòñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíîâ èç ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica îáñëåäîâàíî
194 áîëüíûõ â âîçðàñòå îò 1 ãîäà äî 14 ëåò; èç íèõ - 146 áîëüíûõ èåðñèíèîçîì è
ïñåâäîòóáåðêóëåçîì, 48 áîëüíûõ - ñ ýòèîëîãè÷åñêè ðàñøèôðîâàííîé êèøå÷íîé èíôåêöèåé
(ñàëüìîíåëëåç). Äèàãíîñòèêà óêàçàííûõ çàáîëåâàíèé ïðîâîäèëàñü ñ ó÷åòîì êëèíèêîýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ, áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ è/èëè ñïåöèôè÷åñêèõ ñåðîëîãè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèé. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 27 ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ ÷åëîâåê,
ñîïîñòàâèìûõ ïî âîçðàñòó è ïîëó ñ îáñëåäóåìûìè áîëüíûìè.
Ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíîâ èç Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica ïðè
àíàëèçå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ ïåðâè÷íûì äèàãíîçîì «èåðñèíèîç» óñòàíîâëåíî, ÷òî
ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçàìè âçàèìîäåéñòâóþò â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ (1:800
äë ÏÑÒ è 1:1600 äë ÊÈ) ñ ïîðèíàìè èç îáîèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ.
Ïðè ñðàâíåíèè ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûõ ñðåäíèõ çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè
ðàñòâîðà ïîëîæèòåëüíûõ ðåàêöèé ñ èñïîëüçîâàíèåì îáîèõ àíòèãåíîâ [17] â 73% ñëó÷àåâ
óñòàíîâëåíî, ÷òî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y.
enterocolitica (ÎÏY.å.) â 2 ðàçà áîëüøå ïîäîáíîãî ïîêàçàòåë ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y.
pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) (ÎÏY.å./ÎÏY.ps.>2,0), ÷òî ïîäòâåðæäàåò ýòèîëîãèþ çàáîëåâàíè ,
âûçâàííîãî Y. enterocolitica (ôèã.1à).  22,3% ñëó÷àåâ óñòàíîâëåíî, ÷òî çíà÷åíèå
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñûâîðîòîê êðîâè â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1:
800) ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis â 2 ðàçà áîëüøå ïîäîáíîãî ïîêàçàòåë ðåàêöèè
ïðè âçàèìîäåéñòâèè ýòèõ æå ñûâîðîòîê â äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå (1:1600) ñ ïîðèíîì èç Y.
enterocolitica (ÎÏY.å./ÎÏY.ps.>2,0), ÷òî ïîäâåðæäàåò ýòèîëîãèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçíîé
èíôåêöèè (ôèã.1á).  4,7% ñëó÷àåâ ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû áûëà îáíàðóæåíà
ñìåøàííà ôîðìà èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè. Òàê, ïðè âçàèìîäåéñòâèè ñûâîðîòîê (â
äèàãíîñòè÷åñêîì òèòðå 1:800) ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé
Ñòðàíèöà: 8
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30
35
40
45
50
ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè áûëî áëèçêèì (èëè ðàâíûì) çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè
ðàñòâîðà ðåàêöèè ïðè âçàèìîäåéñòâèè ýòèõ æå ñûâîðîòîê (â ðàçâåäåíèè 1:1600) ñ ïîðèíîì
èç Y. enterocolitica (ÎÏY.ps.=ÎÏY.å.å) (ôèã.1â).  ñëó÷àå ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ
ñàëüìîíåëëåçîì â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ (1:800 äë ÏÒÁ è 1:1600 äë ÊÈ) ïîëîæèòåëüíûõ
ðåàêöèé â ÈÔÀ ñ ïîðèíàìè èåðñèíèé îáíàðóæåíî íå áûëî.
Òàêèì îáðàçîì, ïðåäëàãàåìà ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìà íà îñíîâå ïîðèíîâ ÍÌ Y.
pseudotuberculosis è Y. enterocolitica âë åòñ âûñîêîñïåöèôè÷íûì, ýôôåêòèâíûì è
÷óâñòâèòåëüíûì ìåòîäîì, ïîçâîë þùèì äèôôåðåíöèðîâàòü èåðñèíèîç îò
ïñåâäîòóáåðêóëåçà è âû âë òü ñìåøàííûå ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè,
îáóñëîâëåííûå îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y. enterocolitica.
Èçîáðåòåíèå èëëþñòðèðóåòñ ñëåäóþùèìè ÷åðòåæàìè:
Íà ôèã.1 ïðåäñòàâëåíî îïðåäåëåíèå óðîâí ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê ïîðèíó èç Y.
enterocolitica â ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ èåðñèíèîçîì ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì (ð ä
1) è çäîðîâûõ ëþäåé (ð ä 2) ïðè ðàçëè÷íûõ ðàçâåäåíè õ (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:
1600, 1:3200 - òî÷êè 1, 2, 3, 4, 5, 6 ñîîòâåòñòâåííî) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ íà îñíîâå ïîðèíà
èç Y. enterocolitica.
Íà ôèã.2 ïðåäñòàâëåí àíàëèç ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ (ñàëüìîíåëëåçîì, èåðñèíèîçîì,
ïñåâäîòóáåðêóëåçîì, ãåïàòèòàìè) è äîíîðîâ â ðàçâåäåíèè 1:800 (ð äû 1, 2, 3, 4, 5) è 1:
1600 (ð äû 7, 8, 9, 10, 11) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ òåñò-ñèñòåìû íà îñíîâå ïîðèíà èç Y.
enterocolitica.
Íà ôèã.3 (à, á, â) ïðåäñòàâëåíî îïðåäåëåíèå àíòèòåë ê ïîðèíàì ÍÌ Y.
pseudotuberculosis è Ó enterocolitica â ñûâîðîòêàõ êðîâè áîëüíûõ ïñåâäîòóáåðêóëåçîì
(ÏÑÒ) è êèøå÷íûì èåðñèíîçîì (ÊÈ) ñ ïîìîùüþ ÈÔÀ ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè çàáîëåâàíè : 1 ÏÑÒ (ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800), 2 - ÊÈ (ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:1600):
à) âåðèôèêàöè êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà: ñðåäíåå çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè
ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Ó enterocolitica (ÎÏY.å.) â 2 ðàçà áîëüøå ñðåäíåãî
çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis
(ÎÏY.ps.) - ÎÏY.ps.>2,0;
á) âåðèôèêàöè ïñåâäîòóáåðêóëåçà: ñðåäíåå çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â
ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) â 2 ðàçà áîëüøå ñðåäíåãî çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ð5./
ÎÏY.å.>2,0;
â) âåðèôèêàöè ñìåøàííîé ôîðìû èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè: ñðåäíåå çíà÷åíèå
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç Y. enterocolitica (ÎÏY.å..) ðàâíî
(èëè áëèçêî) ñðåäíåìó çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñ ïîðèíîì èç
Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) - ÎÏY.å.=ÎÏY.ps., à ÎÏY.å./ÎÏY.ps. è ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áëèçêè èëè
ðàâíû 1,0.
Èçîáðåòåíèå èëëþñòðèðóåòñ ñëåäóþùèì ïðèìåðîì:
Ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò (96-ëóíî÷íûé ïîëèñòèðîëîâûé ïëàíøåò ôèðìû «Dynatech»,
Øâåéöàðè èëè «Costar», ÑØÀ) ñåíñèáèëèçèðóþò àíòèãåíàìè, íà îäíó ïîëîâèíó ïëàíøåòà
íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. pseudotuberculosis, a íà äðóãóþ ïîëîâèíó
ïëàíøåòà - âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê-ïîðèí ÍÌ Y. enterocolitica â êîíöåíòðàöèè 5 ìêã/ìë
â êàðáîíàò-áèêàðáîíàòíîì áóôåðå ñ ðÍ 9.0 êàæäîãî èç àíòèãåíîâ è âûäåðæèâàþò ïðè 37°Ñ
â òå÷åíèå - 2 ÷àñ. Äàëåå ñîäåðæèìîå ëóíîê óäàë þò ñèëüíûì âñòð õèâàíèåì, è ïëàíøåò
ïðîìûâàþò 3 ðàçà áóôåðîì "Â", ñîñòî ùèì èç 0,02 Ì ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4
(áóôåð "À") + 0,05% òâèí-20. Áóôåð "À" ñîäåðæèò: 5,68 ã Na2HPO4 + 6,24 ã NaH2PO4 + 11,2
ã NaCl + 2 ë Í2O. Ïðè êàæäîé ñòàäèè ïðîìûâêè ïëàíøåòà íåîáõîäèìî òùàòåëüíî óäàë òü
îñòàòêè âëàãè èç ëóíîê ïîñòóêèâàíèåì ïåðåâåðíóòîãî ïëàíøåòà î ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó.
Çàòåì â êàæäóþ ëóíêó ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 300 ìêë áóôåðà "Ñ", ñîñòî ùåãî èç
ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ðÍ 7,4 (áóôåð "À") + 0,1% òâèí-20, è ïëàíøåò èíàêòèâèðóþò â
òå÷åíèå 16-18 ÷àñîâ ïðè 4°Ñ. Ïîñëå óäàëåíè èíàêòèâèðóþùåãî ðàñòâîðà, â ëóíêè
ïëàíøåòà ïî äâà ïîâòîðà äë êàæäîãî àíòèãåíà âíîñ ò ïî 100 ìêë èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè
êðîâè, ïîëîæèòåëüíûõ è îòðèöàòåëüíûõ êîíòðîëåé â äèàãíîñòè÷åñêèõ òèòðàõ,
Ñòðàíèöà: 9
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45
50
îïðåäåëåííûõ äë êàæäîãî àíòèãåíà: 1:800 - äë ïîðèíà èç Y, pseudotuberculosis è 1:
1600 - äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica. Èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ,
ïîëîæèòåëüíûå è îòðèöàòåëüíûå êîíòðîëè ðàçâîä ò áóôåðîì "Â". Ïëàíøåò èíêóáèðóþò 2 ÷
ïðè 37°Ñ, çàòåì îòìûâàþò 3-5 ðàç ïî 5 ìèí îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ áóôåðîì "Â",
òùàòåëüíî óäàë îñòàòêè âëàãè èç ëóíîê.
Çàòåì â êàæäóþ ëóíêó ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 100 ìêë êîíúþãàòà (ìå÷åííûå ôåðìåíòîì
âòîðûå îáùåâèäîâûå àíòèòåëà) â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè (1:1000) â áóôåðå "Ñ" è èíêóáèðóþò
1,5 ÷ ïðè 37°Ñ, çàòåì ïëàíøåò îòìûâàþò, êàê îïèñàíî âûøå, äîïîëíèòåëüíî îïîëîñíóâ
ïëàíøåò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé.  ëóíêè ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 70 ìêë ñóáñòðàòèíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà, ñîäåðæàùåãî 0,04% îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà â öèòðàòíîôîñôàòíîì áóôåðå (ðÍ 5,0) è 10 ìêë 33% H2O2 â ðàñ÷åòå íà 10 ìë èñïîëüçóåìîãî áóôåðà.
Öèòðàòíî-ôîñôàòíûé áóôåð ãîòîâ ò ïðè ñìåøèâàíèè 49,3 ìë 0,2 Ì äâóçàìåùåííîãî
ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðè (1,42 ã íà 50 ìë H2O) è 50,7 ìë 0,1 Ì ëèìîííîêèñëîãî íàòðè (2,1 ã íà 100 ìë Í2O). Ïëàíøåò âûäåðæèâàþò 15-20 ìèí â òåìíîòå (äë ðàçâèòè öâåòíîé
ðåàêöèè) ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, çàòåì äîáàâë þò â êàæäóþ ëóíêó ïî 30 ìêë 0,5
Ì H2SO4 äë îñòàíîâêè ðåàêöèè. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè ó÷èòûâàþò ñ ïîìîùüþ
ñïåêòðîôîòîìåòðà, èçìåð îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà ïðè äëèíå âîëíû ðàâíîé 492
íì. Ïðè ïîñòàíîâêå ÈÔÀ íà ïëàíøåòå îäíîâðåìåííî èçìåð þò îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü
ðàñòâîðà â ëóíêàõ, ñîäåðæàùèõ êîíòðîëè:
- êîíòðîëü ïîëîæèòåëüíûé (êîíòðîëè ñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ
â äâóõ ïàðàëëåë õ) - 100 ìêë ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíîãî èðñèíèîçîì è 100 ìêë ñûâîðîòêè
êðîâè áîëüíîãî ïñåâäîòóáåðêóëåçîì (ñûâîðîòêè ñ áàêòåðèîëîãè÷åñêè ïîäòâåðæäåííûì
äèàãíîçîì) + 100 ìêë êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30 ìêë H2SO4;
- êîíòðîëü îòðèöàòåëüíûé (ñ êàæäûì èç àíòèãåíîâ) - 100 ìêë ñûâîðîòêè êðîâè
çäîðîâîãî äîíîðà + 100 ìêë êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30
ìêë H2SO4;
- êîíòðîëü íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè - 100 ìêë áóôåðíîãî ðàñòâîðà + 100 ìêë
êîíúþãàòà + 70 ìêë ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà + 30 ìêë H2SO4.
Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì, åñëè âåëè÷èíà, ñîîòâåòñòâóþùà îòíîøåíèþ
çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñî ñïåöèôè÷åñêîé ñûâîðîòêîé ê
çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñ íîðìàëüíîé ñûâîðîòêîé äë êàæäîãî
àíòèãåíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,1 [15].
Âåðèôèêàöè èåðñèíèîçà ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðè ïîëîæèòåëüíûõ
çíà÷åíè õ ðåàêöèè îñóùåñòâë åòñ ïóòåì îïðåäåëåíè âåëè÷èí, ðàâíûõ îòíîøåíèþ
çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè îäíîé è òîé æå ñûâîðîòêè
êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è ñ àíòèãåíîì èç Y.
enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ps./ÎÏY.å. èëè, íàîáîðîò, ÎÏY.å./ÎÏY.ps..
 ñëó÷àå, åñëè ýòà âåëè÷èíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,0 (ÎÏY.ps./ÎÏY.å.≥2,0), òî
ïîäòâåðæäàåòñ ïñåâäîòóáåðêóëåçíà ýòèîëîãè çàáîëåâàíè , è, íàîáîðîò, åñëè
ÎÏY.å./ÎÏY.ps.≥2,0, òî ýòèîëîãè÷åñêèì âîçáóäèòåëåì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè âë åòñ Y.
enterocolitica.  ñëó÷àå, åñëè çíà÷åíè ÎÏY.ps. è ÎÏY.å. áëèçêèå èëè ðàâíûå è çíà÷åíè îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ñîîòâåòñòâåííî áëèçêè èëè ðàâíû 1.0, òî
èåðñèíèîçíà èíôåêöè îáóñëîâëåíà îäíîâðåìåííî Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica.
Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà èåðñèíèîçû (ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç) äë ïðîâåäåíè çà âë åìîãî ñïîñîáà ñ ïîìîùüþ èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) íà
îñíîâå âèäîñïåöèôè÷åñêèõ àíòèãåíîâ - ïîðèíà íàðóæíîé ìåìáðàíû (ÍÌ) Y.
pseudotuberculosis è ïîðèíà ÍÌ Y. enterocolitica ïðåäíàçíà÷åí äë îäíîìîìåíòíîãî
âû âëåíè ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê ïîðèíàì ÍÌ Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica èç îäíîé ïðîáû ñûâîðîòêè êðîâè ÷åëîâåêà è ìîæåò èñïîëüçîâàòüñ â
êëèíè÷åñêèõ è ýïèäåìèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíè õ, à òàêæå ñëóæáîé êðîâè.
Íàáîð ñîäåðæèò âñå íåîáõîäèìûå äë ïðîâåäåíè ÈÔÀ ðåàãåíòû, êðîìå
äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
Ñòðàíèöà: 10
RU 2 339 952 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Ñîñòàâ íàáîðà:
1) ïëàíøåò ïîëèñòèðîëîâûé 96-ëóíî÷íûé (ôèðìà «Dynatech» Øâåéöàðè èëè «Costar»
ÑØÀ) ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè (ïîðèíû) èç Y. pseudotuberculosis è Y.
enterocolitica â ãåðìåòè÷íî çàêðûòîì ïàêåòå - 1 øò.;
2) ôîñôàòíî-ñîëåâîé áóôåð (êîíöåíòðèðîâàííûé ðàñòâîð áóôåðà äë èíàêòèâàöèè è
îòìûâêè ïëàíøåòà äë ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê è êîíúþãàòà) - 2 ôëàêîíà.
3) êîíúþãàò (ôðàêöè îáùåâèäîâûõ àíòèòåë ïðîòèâ ñóììàðíîé ôðàêöèè
èììóíîãëîáóëèíîâ ÷åëîâåêà, ìå÷åííûõ ïåðîêñèäàçîé õðåíà) - 1 ôëàêîí;
4) ñóáñòðàò (îðòî-ôåíèëåíäèàìèí, 4 ìã) - 1 ôëàêîí;
5) öèòðàòíî-ôîñôàòíûé áóôåð - 1 ôëàêîí;
6) îòðèöàòåëüíûå è ïîëîæèòåëüíûå êîíòðîëè (ëèîôèëüíî âûñóøåííûå îáðàçöû
ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ ïîäòâåðæäåííûì äèàãíîçîì «ïñåâäîòóáåðêóëåç» è «êèøå÷íûé
èåðñèíèîç», ñûâîðîòêè êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ) - 4 ôëàêîíà;
7) äåòåðãåíò (òâèí-20 èëè òâèí-80) - 1 ôëàêîí;
8) ïåðåêèñü âîäîðîäà (Í2O2, êîíöåíòðèðîâàííûé ðàñòâîð) - 1 ôëàêîí;
9) ñòîï-ðåàãåíò (ðàñòâîð 0,5 Ì ñåðíîé êèñëîòû, Í2SO4) - 1 ôëàêîí;
Íàáîð ðàññ÷èòàí íà 96 îïðåäåëåíèé, âêëþ÷à êîíòðîëè.
Ïðèãîòîâëåíèå ðåàãåíòîâ äë ïðîâåäåíè àíàëèçà:
1. Áóôåð "À": ñîäåðæèìîå 1-ãî ôëàêîíà ñ êîíöåíòðàòîì ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà (ðÍ
7,4) (ñìåñü ñîëåé: 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî 12-âîäíîãî, 0,02 Ì
íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî îäíîçàìåùåííîãî 2-âîäíîãî è 0,1 Ì íàòðè õëîðèñòîãî)
íåîáõîäèìî ðàñòâîðèòü â 1 ë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
2. Áóôåð "Â" äë îòìûâêè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè èññëåäóåìûõ ñûâîðîòîê êðîâè
áîëüíûõ, ïîëîæèòåëüíîãî è îòðèöàòåëüíîãî êîíòðîëåé: Ê 1 ë áóôåðà "À" äîáàâèòü 0,5 ìë
òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Â".
Ïðåäâàðèòåëüíîå ðàçâåäåíèå ñûâîðîòîê: èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ,
êîíòðîëüíûå (ïîëîæèòåëüíûå è îòðèöàòåëüíûå) ñûâîðîòêè êðîâè ðàçâîä ò áóôåðîì "Â" äî
ðàáî÷åãî ðàçâåäåíè .
3. Áóôåð "Ñ" äë èíàêòèâàöèè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè êîíúþãàòà: ê 200 ìë áóôåðà "À"
äîáàâë þò 0,2 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Ñ".
4. Ñóáñòðàòíà ñìåñü ãîòîâèòñ íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì. Äë ïðîâåäåíè ðåàêöèè ñîäåðæèìîå ôëàêîíà ñ ñóáñòðàòîì (4 ìã îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà)
ðàñòâîð þò â 10 ìë öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà (ãîòîâîãî ê óïîòðåáëåíèþ) è äîáàâë þò
10 ìêë 33% Í2Î2.
5. Ñòîï-ðåàãåíò (ðàñòâîð 0,5 Ì H2SO4) ãîòîâ ê èñïîëüçîâàíèþ.
Äë ïîâûøåíè äîñòîâåðíîñòè ðåçóëüòàòîâ àíàëèçà èññëåäóåìûå è êîíòðîëüíûå
îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè ðåêîìåíäóþòñ ñòàâèòü äë êàæäîãî àíòèãåíà â äóáëèêàòàõ,
èñïîëüçó äë êàæäîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè äâå ëóíêè.
Ïðîâåäåíèå èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà ñ ïîìîùüþ ïðåäëàãàåìîãî äèàãíîñòè÷åñêîãî
íàáîðà:
Ïðåäâàðèòåëüíî ãîòîâûé ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè (ïîðèí èç Y.
pseudotuberculosis è ïîðèí èç Y. enterocolitica, êàæäûé èç êîòîðûõ íàíåñåí íà
ïîëîâèíó ïëàíøåòà) òðåáóåòñ ïðîèíàêòèâèðîâàòü.
1). Èíàêòèâàöè ïëàíøåòà (ïðåäîòâðàùåíèå íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâ çûâàíè àíòèãåíà ñ
àíòèòåëàìè): âíîñ ò âî âñå ëóíêè ïî 300 ìêë áóôåðà "Ñ" è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå íî÷è
(16 ÷ - 18 ÷) ïðè 6-8°Ñ. Áóôåð "Ñ" ñîñòîèò èç ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà ñ ðÍ 7,4 (áóôåð
"À") +0,1% òâèí-20 (èëè òâèí-80). Äë ïðèãîòîâëåíè áóôåðà "À" íåîáõîäèìî ðàñòâîðèòü
ñîäåðæèìîå 1-ãî ôëàêîíà (ñìåñü ñîëåé: 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî
12-âîäíîãî, 0,02 Ì íàòðè ôîñôîðíîêèñëîãî îäíîçàìåùåííîãî 2-âîäíîãî è 0,1 Ì íàòðè õëîðèñòîãî) â 1 ë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Äàëåå ê 200 ìë áóôåðà "À" äîáàâë þò 0,2 ìë
òâèí-20 (èëè òâèí-80) è ïîëó÷àþò áóôåð "Ñ" äë èíàêòèâàöèè ïëàíøåòà è äë ðàçâåäåíè êîíúþãàòà. Ðàñòâîð íå õðàí ò.
2). Îòìûâêà ïëàíøåòà: ïîñëå èíàêòèâàöèè óäàë þò ñîäåðæèìîå ëóíîê äåêàíòèðîâàíèåì
Ñòðàíèöà: 11
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è ïðîìûâàþò èõ 3-5 ðàç ïî 5 ìèí îò íåñâ çàâøèõñ êîìïîíåíòîâ áóôåðîì "Â". Äë ïðèãîòîâëåíè áóôåðà "Â" ê 1 ë áóôåðà "À" äîáàâë þò 0,5 ìë òâèí-20 (èëè òâèí-80) è
ïîëó÷àþò ðàñòâîð äë îòìûâàíè ïëàíøåòà è ðàçâåäåíè ñûâîðîòîê. Ïðè êàæäîé
ïðîìûâêå âî âñå ëóíêè äîáàâë þò ïî 300 ìêë ïðîìûâî÷íîãî áóôåðà "Â". Ïðè
äåêàíòèðîâàíèè íåîáõîäèìî òùàòåëüíî óäàë òü îñòàòêè æèäêîñòè èç ëóíîê ïîñòóêèâàíèåì
ïëàíøåòà â ïåðåâåðíóòîì ïîëîæåíèè ïî ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãå.
3). Íàíåñåíèå ïî 100 ìêë èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè, ïîëîæèòåëüíîãî è îòðèöàòåëüíîãî
êîíòðîëåé äë êàæäîãî àíòèãåíà â äâóõ ïàðàëëåë õ: ñûâîðîòêè íàíîñ ò â äèàãíîñòè÷åñêèõ
òèòðàõ, îïðåäåëåííûõ äë êàæäîãî àíòèãåíà (1:800 äë ïîðèíà èç Y. pseudotuberculosis
è 1:1600 äë ïîðèíà èç Y. enterocolitica), â áóôåðå "Â", êàê îïèñàíî âûøå.
4). Èíêóáèðîâàíèå ïëàíøåòà ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 2 ÷àñîâ.
5). Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè ñîäåðæèìîå ëóíîê óäàë þò è ïëàíøåò ïðîìûâàþò
òùàòåëüíî 3 ðàçà áóôåðîì "Â".
6). Âíîñ ò âî âñå ëóíêè ïî 100 ìêë ðàñòâîðà êîíúþãàòà â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè: ðàáî÷åå
ðàçâåäåíèå (1:1000) ãîòîâèòñ ïðè ðàñòâîðåíèè ñîäåðæèìîãî ôëàêîíà (ñóõîãî ïðåïàðàòà)
â áóôåðå "Ñ".
7). Èíêóáèðîâàíèå ïëàíøåòà ïðè 37°Ñ â òå÷åíèå 1,5 ÷àñà.
8). Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè èç ëóíîê óäàë þò ñîäåðæèìîå è ïëàíøåò ïðîìûâàþò, êàê
îïèñàíî âûøå.
9). Íàíåñåíèå ñóáñòðàòíîé ñìåñè. Ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíûé ðàñòâîð ãîòîâèòñ íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì: ñóõîé ïðåïàðàò îðòî-ôåíèëåíäèàìèíà (4 ìã, 1
ôëàêîí) ðàñòâîð þò â 10 ìë 0,05 Ì öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà (ðÍ 5.0) è äîáàâë þò 10
ìêë 33% Í2Î2. Äë ïðèãîòîâëåíè ðàñòâîðà öèòðàòíî-ôîñôàòíîãî áóôåðà ñîäåðæèìîå
ôëàêîíà (ñìåñü ñîëåé) ðàñòâîð þò â 10 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ïåðåä íàíåñåíèåì
ñóáñòðàò-èíäèêàòîðíîãî ðàñòâîðà ïëàíøåò îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è
âûñóøèâàþò.
10). Âî âñå ëóíêè ïëàíøåòà âíîñ ò ïî 70 ìêë ñóáñòðàòíîé ñìåñè è èíêóáèðóþò â
òåìíîòå â òå÷åíèå 15-20 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå.
11). Âî âñå ëóíêè â òîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, êàê è ñóáñòðàòíóþ ñìåñü, äîáàâë þò ïî
30 ìêë ñòîï-ðåàãåíòà äë îñòàíîâêè ôåðìåíòíîé ðåàêöèè.
12). Ðåãèñòðàöè ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèè: èçìåð þò îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà
ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè â ëóíêàõ ïðè äëèíå âîëíû ðàâíîé 492 íì.
Ðåçóëüòàò ñ÷èòàþò ïîëîæèòåëüíûì, åñëè âåëè÷èíà, ñîîòâåòñòâóþùà îòíîøåíèþ
çíà÷åíè îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñî ñïåöèôè÷åñêîé ñûâîðîòêîé ê
çíà÷åíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ëóíêàõ ñ íîðìàëüíîé ñûâîðîòêîé äë êàæäîãî
àíòèãåíà áîëüøå èëè ðàâíà 2,1 [15].
Âåðèôèêàöè èåðñèíèîçà ñ ó÷åòîì ýòèîëîãèè âîçáóäèòåë ïðè ïîëîæèòåëüíûõ
çíà÷åíè õ ðåàêöèè îñóùåñòâë åòñ ïóòåì îïðåäåëåíè âåëè÷èí, ðàâíûõ îòíîøåíèþ
çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà ïðè âçàèìîäåéñòâèè îäíîé è òîé æå ñûâîðîòêè
êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíîì èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è ñ àíòèãåíîì èç Y.
enterocolitica (ÎÏY.å.) - ÎÏY.ps./ÎÏY.å. èëè, íàîáîðîò, ÎÏY.å./ÎÏY.ps..
 ñëó÷àå, åñëè âåëè÷èíà îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíà 2,0 (ïðè ÎÏY.ps./
ÎÏY.å.≥2,0), òî ïîäòâåðæäàåòñ ïñåâäîòóáåðêóëåçíà ýòèîëîãè çàáîëåâàíè , è, íàîáîðîò,
åñëè ÎÏY.å./ÎÏY.ps.≥2,0, òî ýòèîëîãè÷åñêèì âîçáóäèòåëåì èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè âë åòñ Y. enterocolitica.  ñëó÷àå, åñëè çíà÷åíè ÎÏY.ps. è ÎÏY.å. áëèçêèå èëè ðàâíûå è çíà÷åíè îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ñîîòâåòñòâåííî áëèçêè èëè ðàâíû 1.0, òî
èåðñèíèîçíà èíôåêöè îáóñëîâëåíà îäíîâðåìåííî Y. enterocolitica è Y.
pseudotuberculosis.
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Ôîðìóëà èçîáðåòåíè 1. Ñïîñîá äèôôåðåíöèàëüíîé äèàãíîñòèêè ïñåâäîòóáåðêóëåçà è êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà,
âêëþ÷àþùèé îïðåäåëåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âîçáóäèòåë ì çàáîëåâàíèé â
ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíîãî ìåòîäîì òâåðäîôàçíîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà,
ïðåäóñìàòðèâàþùåãî íàíåñåíèå àíòèãåíîâ íà ïëàíøåò, îòëè÷àþùèéñ òåì, ÷òî íà îäíó
ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê ïîðèí íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia
pseudotuberculosis, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè 1:800, à
íà äðóãóþ ïîëîâèíó ïëàíøåòà íàíîñ ò âèäîñïåöèôè÷åñêèé áåëîê ïîðèí íàðóæíîé
ìåìáðàíû Yersinia enterocolitica, çà äèàãíîñòè÷åñêèé òèòð ïðèíèìàþò ðàçâåäåíèå
ñûâîðîòêè 1:1600 è âåðèôèêàöèþ ïñåâäîòóáåðêóëåçà îò êèøå÷íîãî èåðñèíèîçà
îñóùåñòâë þò ñðàâíåíèåì çíà÷åíèé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ðàñòâîðà â ðåàêöèè ñûâîðîòêè
êðîâè áîëüíîãî ñ àíòèãåíàìè èç Y. pseudotuberculosis (ÎÏY.ps.) è èç Y. enterocolitica
(ÎÏY.å.), ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.ps./ÎÏY.å. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0 äèàãíîñòèðóþò
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ïñåâäîòóáåðêóëåç, ïðè âåëè÷èíå îòíîøåíè ÎÏY.å./ÎÏY.ps. áîëüøå èëè ðàâíîé 2,0
äèàãíîñòèðóþò êèøå÷íûé èåðñèíèîç, ïðè âåëè÷èíàõ îòíîøåíèé ÎÏY.ps./ÎÏY.å. è
ÎÏY.å./ÎÏY.ps. ðàâíûõ 1,0 äèàãíîñòèðóþò ñìåøàííóþ ôîðìó èåðñèíèîçíîé èíôåêöèè.
2. Äèàãíîñòè÷åñêèé íàáîð íà ïñåâäîòóáåðêóëåç è êèøå÷íûé èåðñèíèîç õàðàêòåðèçóåòñ òåì, ÷òî îí ñîäåðæèò ïëàíøåò ñ èììîáèëèçîâàííûìè àíòèãåíàìè - âèäîñïåöèôè÷åñêèìè
áåëêàìè-ïîðèíàìè íàðóæíîé ìåìáðàíû Yersinia pseudotuberculosis è Yersinia
enterocolitica, îáðàçöû êîíòðîëüíûõ (ïîëîæèòåëüíîé è îòðèöàòåëüíîé) ñûâîðîòîê êðîâè è
âòîðûõ îáùåâèäîâûõ àíòèòåë, åìêîñòè ñ ãîòîâûìè äë óïîòðåáëåíè èíàêòèâèðóþùèì è
ñòîï-ðåàãåíòàìè, ñóáñòðàòîì è áóôåðíûìè ñèñòåìàìè.
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