78 Оригинальные исследования ДЕЙСТВИЕ ОПУХОЛЕВЫХ

Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
ÄÅÉÑÒÂÈÅ ÎÏÓÕÎËÅÂÛÕ ÊËÅÒÎÊ ÊÀÐÖÈÍÎÌÛ ØÅÉÊÈ ÌÀÒÊÈ
ÍÀ ÒÐÎÌÁÎÖÈÒÛ ×ÅËÎÂÅÊÀ
Ë.Ì. Øèøëî1, Å.Â. Øàìîâà2, Å.Í. Àëåêñàíäðîâà1, Â.È. Ïðîõîðîâà1
1
2
ÐÍÏÖ ÎÌÐ èì. Í.Í. Àëåêñàíäðîâà, ã. Ìèíñê
Áåëîðóññêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò, ã. Ìèíñê
Êëþ÷åâûå ñëîâà: àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ, êëåòêè ëèíèè HeLa, ìåòàñòàçèðîâàíèå, òðîìáîîáðàçîâàíèå.
 ñòàòüå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ êóëüòóðû îïóõîëåâûõ êëåòîê ëèíèè HeLa íà òðîìáîöèòû ÷åëîâåêà. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êëåòêè êàðöèíîìû øåéêè ìàòêè ÷åëîâåêà â äèàïàçîíå êîíå÷íûõ êîíöåíòðàöèé
1,2×102–2,3×104 êëåòîê/ìë èíäóöèðîâàëè àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, êîòîðàÿ èìåëà êîíöåíòðà-öèîííîçàâèñèìûé
õàðàêòåð. Ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè ïîêàçàë íàëè÷èå êàê ãîìîàãðåãàòîâ òðîìáîöèò-òðîìáîöèò, òàê è áîëüøèõ ãåòåðîàãðåãàòîâ òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà. Ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, óñòàíîâëåíèå êîòîðûõ áóäåò ñïîñîáñòâîâàòü ðàçðàáîòêå íîâûõ ïîäõîäîâ â ëå÷åíèè îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ, íàïðàâëåííûõ íà ñíèæåíèå óðîâíÿ
ìåòàñòàçèðîâàíèÿ è òðîìáîîáðàçîâàíèÿ.
THE EFFECT OF UTERINE CERVIX CARCINOMA CELLS ON HUMAN
PLATELETS
L.M. Shishlo, E.V. Shamova, E.N. Alexandrova, V.I. Prokhorova
Key words: platelet aggregation, HeLa line cells, metastasizing, thrombogenesis.
The paper presents the results of investigating the effect of HeLa line tumour cells culture on human platelets. It was
found that human cervical carcinoma cells in the final concentration range of 1.2×102–2.3×104 cell/ml induced platelet
aggregation which was of concentration-related character. The microscopic analysis of the cellular suspension showed the
presence of both platelet-platelet homoaggregates and large platelet-tumour cell heteroaggregates. The optimal settings for
further investigation of HeLa-induced platelet aggregation mechanisms were selected. The determination of these mechanisms
would facilitate the development of new approaches to cancer treatment targeted at reducing the level of metastasizing and
thrombogenesis.
ÂÂÅÄÅÍÈÅ
È
ññëåäîâàíèå ìåõàíèçìîâ òðîìáîîáðàçîâàíèÿ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ â
îíêîëîãè÷åñêîé ïðàêòèêå óáåäèòåëüíî ïîêàçàëî âàæíóþ ðîëü òðîìáîöèòîâ â ýòèõ ïðîöåññàõ.
Ñ îäíîé ñòîðîíû, öèðêóëÿöèÿ â êðîâåíîñíîì
ðóñëå îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ áîëüøîãî êîëè÷åñòâà òðîìáîïëàñòèíîâîãî ôàêòîðà è ñïåöèôè÷åñêèõ ïðîêîàãóëÿíòîâ, àêòèâàöèÿ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ, âëèÿíèå îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà îêàçûâàåò íåãàòèâíîå âîçäåéñòâèå
íà òðîìáîöèòàðíîå çâåíî ãåìîñòàçà ïóòåì ïîâðåæäåíèÿ áåëêîâîãî ñëîÿ ìåìáðàí òðîìáîöèòîâ, è ìîæåò ñòàòü ïðè÷èíîé èõ àêòèâàöèè,
ïðîâîöèðóþùåé òðîìáîãåííûå îñëîæíåíèÿ ó
ýòîé ãðóïïû ïàöèåíòîâ [1–5]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû
78
— ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò
î òîì, ÷òî àêòèâèðîâàííûå òðîìáîöèòû ñîçäàþò áëàãîïðèÿòíûå óñëîâèÿ äëÿ ìåòàñòàçèðîâàíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê. Îïóõîëåâûå êëåòêè
ïîïàäàþò â êðîâü ïðè íåêðîçå ïåðâè÷íîãî î÷àãà, à òàêæå ïðè îïåðàòèâíîì óäàëåíèè îïóõîëè.
Äî 95% îïóõîëåâûõ êëåòîê, ïîïàâøèõ â êðîâîòîê, ïîãëîùàþòñÿ ìàêðîôàãàìè. Îäíàêî ïðè
ïîâûøåíèè àãðåãàöèîííîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ è òðîìáîïëàñòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïëàçìû
îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ âîêðóã îïóõîëåâûõ
êëåòîê îáðàçóåòñÿ òðîìáîöèòàðíî-ôèáðèíîãåííàÿ îáîëî÷êà, êîòîðàÿ çàùèùàåò èõ îò èììóííîãî íàäçîðà è óâåëè÷èâàåò âåðîÿòíîñòü ìåòàñòàçèðîâàíèÿ [6–8]. Òàêîé ãåòåðîàãðåãàò ñïîñîáåí ëåãêî ïåðåíîñèòüñÿ ñ êðîâîòîêîì è, áëàãîäàðÿ òðîìáîöèòàì, àäãåçèðîâàòü ê ýíäîòåëèþ.
Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.2, ¹3 (7), 2008
Êðîìå òîãî, ôàêòîðû ðîñòà, âûäåëÿåìûå àêòèâèðîâàííûìè òðîìáîöèòàìè, ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû îïóõîëåâûìè êëåòêàìè äëÿ ðîñòà.
Áîëüøèå ïî ñâîèì ðàçìåðàì àãðåãàòû òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà òàêæå ìîãóò ñòàòü
ïðè÷èíîé çàêóïîðêè ñîñóäîâ è íàðóøåíèÿ ìèêðîöèðêóëÿöèè êðîâè. Èìåííî ïîýòîìó, èçó÷åíèå ìåõàíèçìîâ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, èíäóöèðóåìîé îïóõîëåâûìè êëåòêàìè, ïðåäñòàâëÿåò
èíòåðåñ è ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìûì äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ òðîìáîãåííûõ îñëîæíåíèé è ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ãåìàòîãåííûì ïóòåì. Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû ÿâèëèñü
èññëåäîâàíèå ñïîñîáíîñòè îïóõîëåâûõ êëåòîê
ëèíèè HeLa (êàðöèíîìû øåéêè ìàòêè ÷åëîâåêà)
àêòèâèðîâàòü òðîìáîöèòû ÷åëîâåêà è ïîäáîð
îïòèìàëüíûõ óñëîâèé äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ äàííîãî ïðîöåññà.
ÌÀÒÅÐÈÀËÛ È ÌÅÒÎÄÛ
Ïîëó÷åíèå îòìûòûõ òðîìáîöèòîâ. Äîíîðñêóþ öèòðàòíóþ êðîâü, ïîëó÷àëè èç Ðåñïóáëèêàíñêîé ñòàíöèè ïåðåëèâàíèÿ êðîâè. Îáîãàùåííóþ òðîìáîöèòàìè ïëàçìó (ÎÒÏ) ïîëó÷àëè
öåíòðèôóãèðîâàíèåì êðîâè ïðè 200g â òå÷åíèå
10 ìèíóò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Îòìûòûå
òðîìáîöèòû ïîëó÷àëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì
ÎÒÏ ïðè 1200g â òå÷åíèå 3 ìèí. Ñóñïåíçèþ
òðîìáîöèòîâ ïîëó÷àëè äâóêðàòíûì îòìûâàíèåì îñàäêà êëåòîê òðèñ-áóôåðîì (13,3 ìÌ Tris,
120 ìÌ NaCl, 15,4 ìÌ KCl, 6 ìÌ D-ãëþêîçà,
1,5 ìÌ ÝÄÒÀ, pH 6,9) è ñîõðàíÿëè ïðè êîìíàòíîé
òåìïåðàòóðå â êîíöåíòðàöèè 2,5×109 êëåòîê/ìë [9].
Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû îïóõîëåâûõ êëåòîê.
Îïóõîëåâûå êëåòêè ëèíèè HeLa, ïîëó÷àëè èç
ÍÈÈ ýïèäåìèîëîãèè è ìèêðîáèîëîãèè. Êóëüòóðó êëåòîê âûðàùèâàëè ïðè òåìïåðàòóðå 37 °C
â ïèòàòåëüíîé ñðåäå 199 ñ äîáàâëåíèåì 10 %
ñûâîðîòêè êðîâè ïëîäîâ êîðîâû è 50 ìêã/ìë
êàíàìèöèíà, êàæäûå 5–7 äíåé ïåðåñåâàëè âî
ôëàêîíû ñî ñâåæåé ïèòàòåëüíîé ñðåäîé. Äëÿ
èññëåäîâàíèÿ ñïîñîáíîñòè îïóõîëåâûõ êëåòîê
âûçûâàòü àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ èñïîëüçîâàëè êóëüòóðó êëåòîê â ëîãàðèôìè÷åñêîé
ñòàäèè ðîñòà — ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ðàññåâà. Äëÿ
ïîëó÷åíèÿ êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè ìîíîñëîé
êëåòîê ïðîìûâàëè 0,02%-íûì ðàñòâîðîì
âåðñåíà, çàòåì èíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 5 ìèíóò
ïðè òåìïåðàòóðå 37 °C, âñòðÿõèâàëè, äîáàâëÿëè
âî ôëàêîí ñâåæóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó è ïèïåòèðîâàëè. Ïîäñ÷åò êîëè÷åñòâà êëåòîê ïðîâîäèëè
â êàìåðå Ãîðÿåâà. Êîíöåíòðàöèÿ êëåòîê â
ñóñïåíçèè ñîñòàâëÿëà 3,5×106/ìë, à æèçíåñïîñîáíîñòü êëåòîê, ïî êðèòåðèþ èñêëþ÷åíèÿ êðàñèòåëÿ òðèïàíîâîãî ñèíåãî (0,1 %), — íå ìåíåå
95 % [10–11]. Çàòåì êëåòêè îòìûâàëè îò ñðåäû
êóëüòèâèðîâàíèÿ ôîñôàòíî-ñîëåâûì áóôåðîì,
íå ñîäåðæàùèì Ñà2+, Mg2+ (10ìÌ; ðÍ 7,35) è
ñîõðàíÿëè â êîíöåíòðàöèè 1,7×107 êëåòîê/ìë
ïðè òåìïåðàòóðå 2–8 °Ñ.
Èññëåäîâàíèå àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ.
Àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, èíäóöèðîâàííóþ
êëåòêàìè HeLa, èññëåäîâàëè îïòè÷åñêèì
ìåòîäîì ñ ïðèìåíåíèåì àíàëèçàòîðà ÀÐ2110
íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííîãî öåíòðà «Solar» [12–
13]. Â êþâåòó àãðåãîìåòðà âíîñèëè 30 ìêë
îòìûòûõ òðîìáîöèòîâ è 340 ìêë ôîñôàòíîñîëåâîãî áóôåðà ñ Ñà2+ è Mg2+ (137 ìÌ NaCl,
2,7 ìÌ KCl, 10 ìÌ Na2HPO4/KH2PO4, 1 ìÌ CaCl2,
0,5 ìÌ MgCl2 pH 7,35), èíêóáèðîâàëè ïðè 37 °Ñ
è ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 2 ìèíóò, à çàòåì äîáàâëÿëè 5 ìêë êëåòîê HåLà (1,7×104–1,7×107 êëåòîê/ìë).
Ïðîöåññ àãðåãàöèè íåïðåðûâíî ðåãèñòðèðîâàëñÿ êàê èçìåíåíèå ñâåòîïðîïóñêàíèÿ êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè. Àãðåãàöèþ îöåíèâàëè ïî
òðåì êðèòåðèÿì: ñòåïåíü àãðåãàöèè (ìàêñèìóì
ñâåòîïðîïóñêàíèÿ, %), ëàã-ôàçà (âðåìÿ ñ ìîìåíòà äîáàâëåíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê äî íà÷àëà
ïðîöåññà àãðåãàöèè, ìèí.), âèä êðèâîé (îäíîôàçíàÿ, äâóõôàçíàÿ).
Ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç. Ñôîðìèðîâàííûå êëåòî÷íûå àãðåãàòû èññëåäîâàëè ñ ïîìîùüþ îïòè÷åñêîãî ìèêðîñêîïà Olympus BX51WI
(×400).
Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà äàííûõ. Ðåçóëüòàòû ïðåäñòàâëåíû êàê ñðåäíåå çíà÷åíèå ± îøèáêà ñðåäíåãî äëÿ 5 íåçàâèñèìûõ ýêñïåðèìåíòîâ.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ È ÎÁÑÓÆÄÅÍÈÅ
Íà ðèñ. 1 ïðèâåäåíû òèïè÷íûå àãðåãàöèîííûå êðèâûå, ïîëó÷åííûå íàìè ïðè äîáàâëåíèè
êëåòîê ÍåLa â êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 1,2×102–
2,3×104 êëåòîê/ìë ê ñóñïåíçèè òðîìáîöèòîâ.
Îêàçàëîñü, ÷òî â ïðèñóòñòâèè îïóõîëåâûõ êëåòîê èíäóöèðóåòñÿ àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ, êîòîðàÿ íà÷èíàåòñÿ ÷åðåç 10–14 ìèíóò (ëàã-ôàçà)
ïîñëå âíåñåíèÿ êóëüòóðû êëåòîê. Ïðè÷åì ïðè
óâåëè÷åíèè èõ êîíöåíòðàöèè âðåìÿ ëàã-ôàçû
óìåíüøàåòñÿ, â òî âðåìÿ êàê ñòåïåíü àãðåãàöèè
íåçíà÷èòåëüíî óâåëè÷èâàåòñÿ. Òàê, èçìåíåíèå
êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê ñ 1,2×102 äî
79
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
Ðèñóíîê 1 – Êèíåòè÷åñêèå êðèâûå àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, àêòèâèðîâàííûõ êëåòêàìè HeLa â ðàçëè÷íûõ êîíöåíòðàöèÿõ (1 – 2,3×104, 2 – 2,3×103,
3 – 2,3×102, 4 – 1,2×102 êë/ìë)
Ðèñóíîê 2 – Äâóõôàçíàÿ êðèâàÿ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ
2,3×104 êëåòîê/ìë ïðèâåëî ê óâåëè÷åíèþ ñòåïåíè
HåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ
íà 18,8 ± 4,2 %. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðè
èñïîëüçîâàíèè êëåòîê HeLa â êîíöåíòðàöèè
âûøå 2,3×104 êëåòîê/ìë, íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå
ñâåòîïðîïóñêàíèÿ è óâåëè÷åíèå ëàã-ôàçû. Ýòî
îáúÿñíÿåòñÿ òåì, ÷òî òðîìáîöèòû è îïóõîëåâûå
êëåòêè çíà÷èòåëüíî ðàçëè÷àþòñÿ ïî ðàçìåðàì.
Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê
ïðèâîäèò ê çíà÷èòåëüíîìó ïîâûøåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè, ÷òî
çàòðóäíÿåò ðåãèñòðàöèþ ïðîöåññà àãðåãàöèè
îïòè÷åñêèì ìåòîäîì.
Òàêèì îáðàçîì, â íàñòîÿùåé ðàáîòå âûÿâëåíî, ÷òî íàèáîëåå îïòèìàëüíûì ÿâëÿåòñÿ èñïîëüçîâàíèå êëåòîê HeLa â êîíöåíòðàöèè 1,2×102–
2,3×104 êëåòîê/ìë, ÷òî ïîçâîëÿåò èñïîëüçîâàòü
äàííûé êîíöåíòðàöèîííûé äèàïàçîí äëÿ èçó÷åíèÿ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, àêòèâèðîâàííûõ
îïóõîëåâûìè êëåòêàìè.
Èíòåðåñåí òîò ôàêò, ÷òî ïðè èññëåäîâàíèè
ÍåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ
â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ àãðåãàöèîííûå êðèâûå
èìåëè äâóõôàçíûé õàðàêòåð, êàê ïîêàçàíî íà
ðèñ. 2. Íàëè÷èå âòîðîé âîëíû àãðåãàöèè íà
ýêñïåðèìåíòàëüíûõ êðèâûõ ñâèäåòåëüñòâóåò î
ðåàêöèè âûñâîáîæäåíèÿ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ
ãðàíóë òðîìáîöèòîâ ñîáñòâåííûõ èíäóêòîðîâ
è ïîñëåäóþùåì óñèëåíèè àãðåãàöèè êëåòîê.
Äëÿ äàëüíåéøåãî èññëåäîâàíèÿ ïîëó÷åííûõ
êëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ, áûë ïðîâåäåí ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè (ðèñ. 3).
Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè äîáàâëåíèè êëåòîê HeLa
ê ñóñïåíçèè òðîìáîöèòîâ îáðàçóþòñÿ íå òîëüêî
ãîìîàãðåãàòû òðîìáîöèò-òðîìáîöèò, íî è áîëüøèå ãåòåðîàãðåãàòû òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ
êëåòêà.
Êëþ÷åâàÿ ðîëü òðîìáîöèòîâ â èíèöèàöèè
òðîìáîîáðàçîâàíèÿ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê ó îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ óêàçûâàåò íà íåîáõîäèìîñòü èçó÷åíèÿ âîçìîæíûõ
ìåõàíèçìîâ, ëåæàùèõ â îñíîâå ýòèõ ïðîöåññîâ.
 êðîâåíîñíûõ ñîñóäàõ èíèöèàöèÿ òðîìáîçà
ïðîèñõîäèò â ðåçóëüòàòå àäãåçèè, àêòèâàöèè è
àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ. Ïðè íàðóøåíèÿõ
âíóòðåííåãî ýíäîòåëèàëüíîãî ñëîÿ ñîñóäà (ïðè
îïåðàòèâíûõ âìåøàòåëüñòâàõ, õðîíè÷åñêèõ
çàáîëåâàíèÿõ ñîñóäîâ) òðîìáîöèòû ïðèêðåïëÿþòñÿ ê ó÷àñòêó ïîâðåæäåíèÿ, âçàèìîäåéñòâóÿ
ñ êîëëàãåíîâûìè âîëîêíàìè è ôàêòîðîì
Âèëëåáðàíäà. Ñâÿçûâàíèå ñ ýòèìè ñóáñòðàòàìè,
à òàêæå ñ ðàçëè÷íûìè ïðîòðîìáîãåííûìè
àãîíèñòàìè, âûñâîáîæäàþùèìèñÿ â ïëàçìó
êðîâè áîëüíûõ ðàêîì èç îïóõîëåâûõ êëåòîê,
80
Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.2, ¹3 (7), 2008
Ðèñóíîê 3 – Ìèêðîôîòîãðàôèè òðîìáîöèòîâ è îïóõîëåâûõ êëåòîê, ïîëó÷åííûå äî (à) è ïîñëå (á) àãðåãàöèè êëåòîê (×400)
ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ è îáðàçîâàíèþ òðîìáîöèòàðíî-îïóõîëåâûõ àãðåãàòîâ.
Àíàëèç ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ ïîêàçûâàåò, ÷òî
ñïîñîáíîñòü îïóõîëåâûõ êëåòîê îáðàçîâûâàòü
àãðåãàòû ñ òðîìáîöèòàìè êîððåëèðóåò ñ èõ
ìåòàñòàòè÷åñêèì ïîòåíöèàëîì è íîñèò êîíöåíòðàöèîííî-çàâèñèìûé õàðàêòåð (îò êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê). Ýòî ðàññìîòðåíî â
ðÿäå ðàáîò â ýêñïåðèìåíòå ñ ëèíèÿìè îïóõîëåâûõ êëåòîê àäåíîêàðöèíîìû (Ñàñî-2), ôèáðîñàðêîìû (ÍÒ-1080) [14, 15]. Â íàñòîÿùåé ðàáîòå
ïðè èçó÷åíèè ÍåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè
òðîìáîöèòîâ, òàêæå óñòàíîâëåíà îáðàòíàÿ
êîíöåíòðàöèîííàÿ çàâèñèìîñòü ñî âðåìåíåì
ëàã-ôàçû àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ è ïðÿìàÿ ñî
ñòåïåíüþ àãðåãàöèè.  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ àãðåãàöèÿ êëåòîê èìåëà äâóõñòàäèéíûé âèä, ÷òî ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ñïîñîáíîñòè êëåòîê HeLa
èíäóöèðîâàòü ñåêðåöèþ âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë òðîìáîöèòîâ. Äàííûé ïðîöåññ èãðàåò âàæíóþ ðîëü â óñèëåíèè ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ, òàê êàê â ðåçóëüòàòå ñåêðåöèè èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë âûñâîáîæäàþòñÿ òàêèå èíäóêòîðû àãðåãàöèè, êàê ÀÄÔ è
òðîìáîêñàí À 2. Êðîìå òîãî, â ëèòåðàòóðå
èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî êëåòêè ÍeLa èíèöèèðóþò
ïðîöåññ ãåíåðàöèè òðîìáèíà [16], ïîýòîìó â
HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ
íàðÿäó ñ ÀÄÔ è òðîìáîêñàíîì À2 âîçìîæíûì
èíäóêòîðîì àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ
òðîìáèí. Àãîíèñòû àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ,
ñâÿçûâàÿñü ñ ðåöåïòîðàìè ïîâåðõíîñòè êëåòîê,
çàïóñêàþò ðÿä ïðîöåññîâ âíóòðèêëåòî÷íîé
ñèãíàëèçàöèè, ïðèâîäÿùèõ ê ðåîðãàíèçàöèè
öèòîñêåëåòà, ýêñïðåññèè àäãåçèîííûõ ðåöåïòîðîâ è îáðàçîâàíèè ìåæêëåòî÷íûõ êîíòàêòîâ.
Èçâåñòíî, ÷òî â ïðîöåññå îáðàçîâàíèÿ ãåòåðîàãðåãàòà òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà ìîãóò
ïðèíèìàòü ó÷àñòèå òàêèå àäãåçèîííûå ðåöåïòîðû êàê GPIb-IÕ-V, GPIIb/IIIa è P-ñåëåêòèí [17–
18]. Ñëåäîâàòåëüíî, èñïîëüçîâàíèå àíòàãîíèñòîâ äàííûõ ðåöåïòîðîâ, à òàêæå èíãèáèòîðîâ
ôåðìåíòîâ, ó÷àñòâóþùèõ â ÀÄÔ-, òðîìáîêñàí
À 2- è òðîìáèí-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè
òðîìáîöèòîâ ïîçâîëèò óñòàíîâèòü ìåõàíèçìû
HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ.
Òàêèì îáðàçîì, îïóõîëåâûå êëåòêè ëèíèè
HeLa àêòèâèðóþò ïðîöåññ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, â ðåçóëüòàòå êîòîðîãî îáðàçóþòñÿ êàê
òðîìáîöèòàðíûå, òàê è îïóõîëåâî-òðîìáîöèòàðíûå àãðåãàòû. Íàìè ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, óñòàíîâëåíèå êîòîðûõ ïîçâîëèò ðàçðàáîòàòü íîâûå ïîäõîäû â îíêîëîãèè, íàïðàâëåííûå íà ñíèæåíèå óðîâíÿ ìåòàñòàçèðîâàíèÿ
è òðîìáîîáðàçîâàíèÿ â îðãàíèçìå îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ.
Ñïèñîê èñïîëüçîâàííûõ èñòî÷íèêîâ
1. Cancer procoagulant and blood platelet activation / B. Olas [et al.] // Cancer Lett. — 2001. — Vol. 169.
— P. 165–171.
2. Ñïîíòàííàÿ àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ â îöåíêå
ðèñêà òðîìáîãåííûõ îñëîæíåíèé ïîñëåîïåðàöèîííîãî ïåðèîäà ïðè ðàêå ëåãêîãî / À.Í. Àôàíàñüåâà [è
81
Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ
äð.] // Êëèí. ëàáîð. äèàãíîñò. — 2003. — ¹ 12. — Ñ. 42–43.
3. Increased Platelet Aggregation and Production
of Platelet-Derived Microparticles after Surgery for
Upper Gastrointestinal Malignancy / M.D. Masataka
[et al.] // J. Surg. Res. — 2003. — Vol. 115. — P. 174–183.
4. Èçìåíåíèå êîàãóëÿöèîííûõ ñâîéñòâ êðîâè â
çàâèñèìîñòè îò ðàñïðîñòðàíåííîñòè îïóõîëåâîãî
ïðîöåññà ïðè ðàêå ìîëî÷íîé æåëåçû / Â.Þ. Áàðñóêîâ
[è äð.] // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. — 2007,
¹ 3. — Ñ. 73–76.
5. Òåð-Îâàíåñîâ, Ì.Ä. Òðîìáîòè÷åñêèå îñëîæíåíèÿ â îíêîëîãèè: îïûò, ðåàëèçîâàííûé íà ïðàêòèêå
/ Ì.Ä. Òåð-Îâàíåñîâ, À.Â. Ìàäæóãà // Ïðàêòè÷åñêàÿ
îíêîëîãèÿ. — 2001. — ¹ 1. — Ñ.25–32.
6. Protection from tumor necrosis factor-mediated
cytolysis by platelets / C. Philippe [et al.] // Am. J. Pathol.
— 1993. — Vol. 143. — P. 1713–1723.
7. Àôàíàñüåâà, À.Í. Èññëåäîâàíèå ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ â îíêîëîãè÷åñêîé
ïðàêòèêå / À.Í. Àôàíàñüåâà // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. — 2002, ¹ 2. — Ñ. 67–68.
8. Äàíèëîâ, È.Ï. Ðîëü ãåìîñòàçà â ìåòàñòàçèðîâàíèè îïóõîëåâûõ êëåòîê / È.Ï. Äàíèëîâ // Çäðàâîîõðàíåíèå. — 2005, ¹ 8. — Ñ.21–22.
9. Ñàìàëü, À.Á. Àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ: ìåòîäû
èçó÷åíèÿ è ìåõàíèçìû / À.Á. Ñàìàëü, Ñ.Í. ×åðåíêåâè÷, Í.Ô. Õìàðà. — Ìí.: Óíèâåðñèòåòñêîå, 1990. —
104 ñ.
10. Ïîë, Ä. Êóëüòóðà êëåòîê è òêàíè / Ä. Ïîë —
Ïåð. ñ àíãë. Ìåäãèç, 1963 — 347ñ.
82
11. Êóëüòóðà æèâîòíûõ êëåòîê. Ìåòîäû: Ïåð. ñ
àíãë. / Ïîä ðåä. Ð. Ôðåøíè. — Ì.: Ìèð, 1989 — 333ñ.
12. Ðóäåíêî, Ñ.Â. Àðòåôàêòû òðàäèöèîííîé
àãðåãîìåòðèè / Ñ.Â. Ðóäåíêî // Êëèí. ëàáîð. äèàãíîñò.
— 2005, ¹ 7. — Ñ. 41–46.
13. Platelet function assays / Rand M.L [et al.] //
Transfus. Apher. Sci. — 2003. — Vol. 28. — P. 307–317.
14. Medina, C. Platelet Aggregation-Induced by
Caco-2 Cells: Regulation by Matrix Metalloproteinase2 and Adenosine Diphosphate / C. Medina // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 2006. — Vol. 317. — P. 739 – 745.
15. Jurasz, P. Matrix Metalloproteinase 2 in Tumor
Cell-induced Platelet Aggregation: Regulation by Nitric
Oxide1 / P. Jurasz [et al.] // J. Cancer Res. — 2001. —
Vol. 61. — P.376–382.
16. Sheu, J.R. Triflavin, an Arg-Gly-Asp-containing
peptide, inhibits tumor cell-induced platelet aggregation
/ J.R. Sheu [et al.] // J. Cancer Res. — 1993. —Vol. 84,
¹ 10. — P.1062–71.
17. Oleksowicz, L. Adhesive receptors expressed by
tumor cells and platelets: novel targets for therapeutic
anti-metastatic strategies / L. Oleksowicz, J.P. Dutcher /
/ Med. Oncol. — 1995. — Vol. 12, ¹ 2. — P. 95–102.
18. Jurash, P. Platelet-cancer interaction: mechanisms and pharmacology of tumour cell-induced platelet
aggregation / P. Jurash [et al.] // Br. J. Pharmacol. — 2004.
— Vol. 143. — P. 819–826.