14 Vibriony

Вибрионы
Семейство Vibrionacae
Рода: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas
Aeromonas, Plesiomonas высоко патогенно для гидробионтов, у человека
вызывают гастоэнтериты.
Род Vibrio.
Вид V. Cholerae
Биовары:
cholerae cholerae (classica)
сholerae eltor
O1
Вид V. cholerae (bengl)
O139
Все это вызывает холеру у человека и являются патогенными только для человека .
Вид V. parahaemoliticus, V. minicus, V. orientalis. Вызывают вибриозы которые могут
протекать как гастроэнтероколит, раневая инфекция, отиты и сепсис.
Общая характеристика.
Изогнутая палочка в форме запятой, Г-, подвидная, имеет один жгутик, спор
нет, капсул нет (искл. V. cholerae (bengl)), морфологически нестабильны – могут
превращаться в нитевидные и шаровидные формы, аэробы (факультативные
анаэробы).
Растут на простых питательных средах (очень быстро). Элективные среды: 1%
пептонная вода, щелочной агар рН 8-9. ТСВS (тиосульфат-цитрат-бром-сахарозный
агар), среды с телуидом. На жидкой среде пленка, на твердой мелкие колонии.
Диапазон температуры +14 - +40.
Биохимические свойства используются для родовой идентификации:
Оксидаза
+
Глюкоза
окисление
+
ферментация +
Индол
+
Сероводород
Лизин/орнитин декарбоксилазная активность
+
Аргинин декарбоксилазная активность
Антигенные свойства.
Связаны с наличием о-соматического антигена и Н-антигена. Для
идентификации большое значение имеет значение О-антигена по которому внутри
рода Vibrio и вида V. Cholerae различают от 1 до 139. О антиген термотстабилен.
Возбудители холеры (classica, сholerae eltor) относятся к О1 группе и bengl О139.
Другие вибрионы относятся ко 2,3,5,10 и т.д. группам т.е. non О1 или НАГвибрионы (не агглютинирующие О1 и О139 сыворотке) они не возбудители холеры.
Н-антиген общий, термолябильный и большого значения для идентификации
вибрионов не имеет.
О-антиген липополисахарид белковой приводы и имеет в своем составе три
фракции А, Б и С и в зависимости от сочетания фракций V. Cholerae classica и V.
Cholerae сholerae eltor делятся на три серовара, между собой они биовары.
Classica
 inaba (АС)
 agava (AB)
 hikojima (ABC)
Eltor:
 inaba (АС)
 agava (AB)
 hikojima (ABC)
Определение скеровара возбудителя имеет диагностическое значение если
идентифицируется (в Индии) один серовар, а в Шри-Ланка тоже возбудитель, но
другой серовар, то они друг с другом не связан. Серовары в bengae не выявляются.
История открытий возбудителей.
Первый возбудитель холеры – палочка Коха (classica) открыта в 1882 году из
органов больного, второй возбудитель сholerae eltor в 1902 году из организма
паломника на станции Эльтор в Индонезии, роль как возбудителя установлена в
1961 году, до этого не считался возбудителем холеры. В этом году установлено
начало седьмой пандемии холеры. Это было связано со сменой классического
возбудителя на холеру эльтор. Третий возбудитель (bengl) был выделен в 1992 году
в Бангладеш. Он стал распространятся в юго-восточной Азии, индию. В 1993 году
завезен в Россию в Ростов-на-Дону. Восьмая пандемия начавшись в 93 будет
связана с этим возбудитетелем. Сейчас все случаи холеры связаны с Eltor, но его
удельный вес уменьшается на Bengal. То есть возбудитель холеры постоянно
меняется для него черезвычайно важна изменчивость морфологическая, патогенная.
Поэтому среди возбудителей есть высоко патогенные штаммы (вызывают
пандемии) и низко патогенные (вызывают легкие случаи).
Факторы патогенности у возбудителей.
Высокая подвижность, способность пробуравливать слизистый слой и
адросбироваться на эпителиоцитов тонкого кишечника с помощью факторов
адгезии и колонизации, продукция ферментов муциназа, нейроамидаза, лецитиназы,
протеиназы.
Главный фактор патогенности продукция экзотоксина – холерогена
уникального по свойствам. Другие токсины энторотокиснов, эндотоксинов тоже
обеспечивают токсические свойства. Холероген продуцируется специальным геном
в сосаве генома бактериальной клетки – Vct-ген. Управляет этими генами два
регуляторных гена: tox-ген и r-ген в структуре которых могут быть мутации,
рекомбинации, что отражается на функции гена и делает организм возбудителем и
способен вызывать эпидемии. Если регуляторные гены подверглись другим
воздействием и что то отщепнулость от гена, то он не будет работать «молчать».
Таким образом есть высокотоксигенные возбудители и низкотокисгенные.
Обнаружить холероген у возбудителя можно методами:
 Биологический – проба на кроликах и котятах. Заражают → извлекают
кишечник → смотрят на изменения.
 Иммуноферментный анализ
 Реакции непрямой гемагглютинации
 Обнаружение холерогена на клеточной культуре ткани – повреждает
клетки.
 Генетический метод – ищут Vct-ген методом ПЦР или ДНК-зондов.
Патогенез холеры.
Источник: больной человек, бактерионоситель т.к. животные не болеют
Пути попадания: через рот
Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой
Инфицирующая доза: 109-1011 (содержится в 1 г фекалий) т.е. надо несколько
дней для заражения.
Путь инфекции: желудок (кислая среда губительна - может дальше не резвится,
если низкая кислотность, с водой или натощак барьер не срабатывает) → тонкий
кишечник (щелочная среда – ему хорошо) → адсорбируется на ворсинка тонкого
кишечника и начинает размножаться и выделяет все факторы патогенности,
особенно холероген. Холероген определяет типические признаки холеры т.к. это
специфический экзотоксин. Холероген белок хорошо изучен, состоит из двух
фракций (А и В). А – истинный токсин, а В не обладает токсическими свойствами
она распознает рецепторы эпителия тонкой кишки, формирует поры в составе
мембраны эпителиоцита и отвечает за проникновения А фракции. Затем А фракция
имеет мишень аденилатциклазу (фермент отвечающий за переход АТФ в цАМФ) →
накопление цАМФ → клетка теряет воду, соли Na, К бикарбонаты в просвет
кишечника → нарушение водно-солевого баланса организма. Человек теряет много
внутриклеточной жидкости, солей → жидкий стул (рисовый отвар), рвота →
дегидратация (за сутки несколько литров, похудеть на 10 кг). Объем порянной
жидкости и веса определяет степень дегидротации:
1 степень - 3%
2 степень - 5% (холерный гастроэнтерит)
3 степень – 10%
4 степень – 15%
(стадия алгиды)
Основное лечение: срочная нормализация водно-солевого баланса (струйно,
капельно вводят растворы).
В стуле нет лейкоцитов (нет воспаления), температура ниже нормы.
Микробиологическая диагностика холеры.
Основной метод диагностики: бактериологический т.к. входит в группу
особенно опасных. Исследованию подлежат: фекалии, промывные воды кишечника,
рвотные массы, секционный материал тонкого кишечника, желчного пузыря. Вода,
пищевые продукты, смывы с овощей и фруктов, смывы с рук персонала, забор
материала делается специально-обученным персоналом и специальными методами
защиты. Исследования проводится в лабораториях спец. Назначния
1 час: засевания на слективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар,
TCBS → термостат 370 – 3-4 часа →пересев на вторую ПВ, ЩА → 2 часа.
Экспресс методы диагностики холеры:
 Исследование материала в реакции иммунофлуоресценции с О1холерной сывороткой или О139-й(первичного или вторичного).
 Постановка реакции аглютинации в препарате висячая капля +
 Иммобилизация холерного вибриона: висячая капля + О 1 сыворотка →
прекращение подвижности.
12 часов: учет роста, отвивка подозрительной колонии на косой агар Клиглера,
щелочного агара для выделения возбудителя.
12 - 24 часа: рост чистой культуры и идентификация культуры.
Идентификация: окраска по Грамму, изучение подвижности и установления
принадлежности к роду по биотестам (оксидаза, ферментация глюкозы, проба на
индол, сероводород).
Дифференцировка: возбудителя от холероподобных вибриов по тестам:
Реакция агглютинации по 1 и 139 сыворотке, отношение к триаде сахаров
Хейберга (арабиноза -, сахароза +, манноза +, у подобных все +), отношение к
фагам.
24-36 часов: устанавливается биологический вариант возбудителя (биовар):
Лизабельность
Рост на агаре с полимексином В
Агглютинация
эритроцитов
курицы
Реакция фогес-проскауера
Холерный вибрион
Эльтор
Лизируется с 4
типом Мукерджи
Не растет
Не аглютинирует
Лизируется
фагом
Эльтор2
Растет
Аглютинирует
Отрицательная
положительная
Установление серовара с помощью сывороток: inaba, agava.
Серологический метод: определение парных сывороткам больного
специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации.
Профилактика.
Общаяя: выявление, изоляция, исследование воды, устройство туалетов,
сан-просвет работа.
Специфическая: холерная моновакцина – убитая взвесь возбудителей,
холерная вакцина+анатоксин – приготовлена из холерогена, холерные
бактериофаги (через рот), химиопрофилактика – терациклином, фуразалидолом.