Опыт использования наборов «RecomBlot HCV IgG» Mikrogen Diagnostik(Германия) в качестве подтверждающего теста в диагностике HCV инфекции. Гасилова Наталья Александровна Врач КДЛ «ИНВИТРО-Москва» ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» ВИРУС ГЕПАТИТА С Семейство Flaviviridae Геном РНК, 9500 н Размер вируса - 50нм Поверхностный гликопротеин Е1 / Е2 Нуклеокапсид (core) Линейная РНК СТРУКТУРА ГЕНОМА HCV СТРУКТУРНЫЕ сore • • • • • E1 E2/NS1 НЕСТРУКТУРНЫЕ NS2 NS3 NS4 NS5 NS3- белок с активностью протеазы, хеликазы NS4- неизвестная функция NS5 – ферменты, в том числе РНК полимераза Core –белки нуклеокапсида Е1, Е2 – белки оболочки Диагностика ВГС Иммунохимическая Молекулярнобиологическая Анти ВГС сумм. Анти-ВГС IgG Анти ВГС IgM Core Ag РНК ВГС кач. РНК ВГС кол. (вирусная нагрузка) Генотипирование Определение устойчивости к препаратам ( прямое секвенирование) ПРИМЕНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ В ДИАГНОСТИКЕ ВГС , ВГВ. Приказ № 322 от 21.10.2002 г. МЗ РФ «О применении в практике здравоохранения иммуно-ферментных тест-систем для выявления антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти ВГС) в сыворотке крови человека» • Обязательное использование подтверждающих тестов при выявлении положительного результата • Использовать для подтверждения положительного результата анти ВГС тест-системы содержащие полный спектр структурных и неструктурных белков • Чувствительность тест-систем для определения HBsAg не менее 0,1 нг/мл • Список тест-систем допущенных к использованию на территории РФ (прошли сравнительные испытания) ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ СКРИНИНГА анти ВГС (total) • Национальный институт здоровья США консенсус 2002 г. – Высокая специфичность и чувствительность тестов ИФА (99%), позволяет отказаться от проведения подтверждающих тестов в группах риска – Отрицательный результат является достаточным у иммунокомпетентных лиц для исключения ВГС – Ложноположительные результаты возможны у лиц с аутоиммунной патологией, рекомендуется проведение ПЦР – RIBA полезное дополнение при исследовании донорской крови СХЕМА ПОДТВЕРЖДЕНИЯ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ анти ВГС (total) в практике «ИНВИТРО» • Высоколожительный результат анти ВГС (total), с S/CO > 5 на « Architect» Abbott , подтверждается повторным исследованием методом ИФА • Слабопожительный результат анти ВГС (total), с S/CO < 5 подтверждается методом ИБ ИММУНОБЛОТ (иммунный блоттинг) : относится к методам серологической диагностики. Этот метод позволяет определять антитела различных классов (IgG/IgM) к отдельным антигенам возбудителя (вирусы, бактерии, простейшие), а не суммарно, как это происходит при других методах (ИФА, РНГА, РПГА и т.д.) Преимущества метода ИБ перед ИФА : • Более специфичный метод , но менее чувствительный. • Позволяет сделать прогноз развития инфекции, в зависимости от наличия антител к тем или иным белкам ( при ВИЧ : полоса к р24, начало инфекции) • Позволяет косвенно судить о ложноположительном результате в ИФА при ВГС : наличие только полос к NS5, признак ложноположительного результата. • Предположительно судить о времени возникновения инфекции (токсоплазмоз) «Recom Blot HCV IgG 2.0» Mikrogen Diagnostika , Германия УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ИБ Оценка результата иммуноблота для метода «Recom Blot HCV IgG 2.0» +/- + или ++ NS3 0 3 Хеликаза 0 3 NS5-12 0 2 NS4 0 4 Core Ag 5 8 Сумма баллов оценка <5 отрицательный 6-9 пограничный (сомнит.) >10 положительный РЕЗУЛЬТАТ ИММУНОБЛОТА ВГС • Положительный (комм: Рекомендуется выполнить тест №321 – РНК ВГС кач.) • Сомнительный (комм: Рекомендуется повторить через 30 дней) • Отрицательный • • • • • • Программа «RecomScan» Mikrogen Diagnostik, Германия обеспечивает следующие этапы : Сканирование и сохранение протокола иммуноблота в виде файла. Оценка наличия полос, в сравнении с контрольным стрипом Оценка интенсивности окрашивания полос в баллах Выдача заключения согласно сумме баллов Возможность электронного сохранения результата и автоматической передачи результата в ЛИС АППАРАТ BeeBlot Bee Robotica Ltd, U.K. «Recom Blot HCV IgG 2.0» в практике «ИНВИТРО» с 2009 г. • Исследовано более 6000 положительных в скрининге ВГС пациентов • Положительный результат скрининга подтвержден методом иммуноблота в 72 % • Выявлено ложноположительных результатов– 28 % КП (ИП) = ОПобр./ ОПкрит. • Коэффициент позитивности – позволяет увеличить информативность лабораторного сообщения • КП (ИП)-соотношение оптической плотности исследуемого образца к критической оптической плотности (cut off) • ПК> 9, вероятность ВГС-инфекции около 92,6% • КП <1,5 вероятность ложноположительных результатов 11,8% А.А.Потапов,Е.Б.Редченко,П.Г.Богуш,Л.К.Ковальчук «Иммунодиагностика вирусного гепатита С» 2008г. Зависимость частоты ложноположительных результатов скрининга ВГС от КП в практике «ИНВИТРО» 8% № ПРОБ 1420 6% 21 % КП 1-2 65 % КП 2-3 КП 3-4 КП 4-5 Неопределенный результат иммуноблота • В группе «неотрицательных результатов» ИБ составил - 42 % • Возможен у лиц с недавней инфекцией ВГС • Встречается у лиц в прошлом имевших контакт с ВГС, но не заболевшим. • Может рассматриваться, как ложноположительный результат в группе лиц с низким риском ВГС (аутоиммунная патология, другие вирусные инфекции) Благодарю за внимание!