Clostridium Difficile Agar Base

Clostridium Difficile Agar Base
Основа селективного агара для Clostridium difficile
M836
Среду со специальной добавкой используют для селективного выделения Clostridium
difficile из пищевых продуктов и некоторого патологического материала.
Состав**:
Ингредиенты
грамм/литр
Протеозопептон
Натрия гидрофосфат
Калия дигидрофосфат
Магния сульфат
Натрия хлорид
Фруктоза
Агар-агар
40,00
5,00
1,00
0,10
2,00
6,00
15,00
Конечное значение рН (при 25ºС) 7,4 ± 0,2
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 34,55 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для
полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в
течение 15 мин. Остудить до 50ºС и асептично добавить: восстановленное в воде
содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для Clostridium difficile (FD010) и
стерильную дефибринированную кровь лошади или барана (до 7% об/об). Тщательно
перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.
Принцип и оценка результата:
Эта среда приводится в прописи George и соавт. (1). В качестве причины заболевания
человека Clostridium difficile впервые были описаны Smith и King (2).
Селективные компоненты этой среды (циклосерин и цефокситин) подавляют рост
большинства бактерий, обильно представленных в кишечном содержимом:
энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, грамотрицательных анаэробных бактерий
и клостридий, не относимых к виду Clostridium difficile. Добавление лошадиной крови (до
7% об/об) способствует увеличению размеров колоний Clostridium difficile и их
выделению. Материал засевают штрихами для получения роста изолированных колоний.
Засеянные чашки инкубируют 18-48 ч при 37ºС. Clostridium difficile образуют сероватобелые колонии неправильной формы, выпуклые непрозрачные, размером 4-6 мм в
диаметре через 48 ч. Ввиду присутствия антибиотиков эти микроорганизмы не имеют
типичного окрашивания по методу Грама. Поскольку предполагается внесение крови в
среду, она не содержит индикатор нейтральный красный (1). Рекомендуется проводить и
другие тесты для определения возбудителя (выявление специфического токсина) и
оценивать клинические данные. Для получения типичных морфологических
характеристик рекомендуется сделать пересев на кровяной агар (М073).
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Основа среды имеет светло-янтарную окраску. При добавлении дефибринированной
крови лошади или барана (до 7% об/об). среда становится вишнево-красной и
опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25ºС водный раствор (6,91% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч
условиях.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост*
Clostridium difficile (11204)
Хороший или обильный
Escherichia coli (25922)
Подавляется
Shigella flexneri (12022)
Подавляется
Staphylococcus aureus (25923)
Подавляется
Примечание: * = при внесении селективной добавки
при 35-37ºС в анаэробных
Цвет колоний
Серовато-белый
–
–
–
Ссылки:
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25ºС. Использовать до даты, указанной на
этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8ºС не более 5 суток.