Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgG к вирусу простого герпеса 1 типа в сыворотке крови (ИммуноФА-IgG-ВПГ1) Номер по каталогу ИФ-20-02 Набор ИммуноФА-IgG-ВПГ1 предназначен для качественного и полуколичественного определения наличия видоспецифических IgG-антител к вирусу простого герпеса 1 типа в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа на стрипованных полистироловых планшетах. В природе распространены два варианта вируса простого герпеса, которые имеют различные биологические и эпидемиологические характеристики. У людей оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания разной степени остроты - от характерных высыпаний на коже и слизистых до энцефалитов. Вирус простого герпеса 1 типа инфицирует слизистые глаз, рта и места перехода эпидермиса в эпителий слизистой оболочки на лице, а также является одной из наиболее распространенных причин острых неэпидемических энцефалитов у взрослых. Вирусом простого герпеса 1 типа инфицировано 70-85% населения. Специфические IgG-антитела обычно появляются через две-три недели после первичного заражения. У пациентов с рецидивирующим заболеванием часто не обнаруживается увеличение концентрации IgG-антител. Быстрая и точная диагностика герпетической инфекции необходима, чтобы уточнить этиологию, оценить динамику заболевания и гарантировать своевременное назначение селективной антивирусной химиотерапии с целью ограничения распространения инфекции. Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА Е Е Е Е Е Иммобилизованный антиген Анализируемый образец Иммобилизованные иммунокомплексы Конъюгат вторичных антител с пероксидазой S Е Иммобилизованные иммунокомплексы с мечеными антителами Р Субстратная реакция СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА 1. Подготовка исследуемых образцов: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС (разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием. 1. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительной, пороговой и отрицательной контрольных сывороток, подготовленных образцов исследуемых сывороток крови и инкубация (30 мин, +37оС). 2. Промывка лунок планшета. 3. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС). 4. Промывка лунок планшета. 5. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл раствора субстрата и инкубация (15 мин, 37оС). 6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента. 7. Измерение оптической плотности (=450 нм), интерпретация результатов. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Чувствительность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. Специфичность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. Предварительное разведение: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС (раствор для разведения сывороток) (разведение 1:100). Интерпретация результатов: Качественная оценка результатов. При качественной оценке результат анализа исследуемых образцов следует считать: положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgG к ВПГ-1), отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgG к ВПГ-1). Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор являются сомнительными, в этом случае необходимо провести повторное исследование вновь полученных сывороток. Полуколичественная оценка результатов основана на определении титра антител в исследуемых положительных образцах сыворотки крови. При полуколичественной оценке результатов на бланке с полулогарифмической системой координат отложить значения титров К+ (указан на этикетке флакона) и Кпор (1:100) по оси абсцисс, а соответствующие им значения оптических плотностей – по оси ординат. Соединить две точки прямой линией. Титр исследуемого образца найти, отложив на полученной прямой значение оптической плотности и опустив перпендикуляр на ось абсцисс. Длина волны измерения: 450 нм. Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ). Условия инкубации (время, tоС): - 1-ая инкубация 30 мин при +37оС; - 2-ая инкубация 30 мин при +37оС; - инкубация с ТМБ 15 мин при +37оС. Время проведения анализа: 1 час 20 минут. Объем пробы: 100 мкл. Количество анализируемой сыворотки: 10 мкл (для анализа сыворотка разводится в 101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки). Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы. Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки. Срок годности набора: 12 месяцев. Все реагенты набора представлены в жидком виде.