Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgG

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgG
к вирусу простого герпеса 2 типа в сыворотке крови
(ИммуноФА-IgG-ВПГ2)
Номер по каталогу ИФ-20-03
Набор ИммуноФА-IgG-ВПГ2 предназначен для качественного и
полуколичественного определения наличия видоспецифических IgG-антител к
вирусу простого герпеса 2 типа в сыворотке крови человека методом
иммуноферментного анализа на стрипованных полистироловых планшетах.
В природе распространены два варианта вируса простого герпеса, которые
имеют различные биологические и эпидемиологические характеристики. У
людей оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания разной степени
остроты - от характерных высыпаний на коже и слизистых до энцефалитов.
Вирус герпеса 2 типа обычно ассоциируется с повреждением слизистых половых
органов: генитальный герпес – одно из наиболее часто передаваемых половым
путем заболеваний. Однажды возникнув, инфекция персистирует в латентной
форме в сенсорных ганглиях, вызывая периодические обострения.
Распространение вируса 2 типа составляет 4-7% для различных популяции. IgGантитела вируса 2 типа встречаются у 6% людей в возрасте 20-29 лет.
Беременные женщины, инфицированные генитальным герпесом, имеют в 2-3
раза более высокую вероятность спонтанного аборта и преждевременных родов,
чем неинфицированные. Активное выделение генитального вируса у беременных
женщин может приводить к острой неонатальной герпетической инфекции,
приобретаемой при прохождении новорожденного через инфицированные
половые органы (риск заражения новорожденных 40-60%), что ведет к высокой
заболеваемости и смертности при отсутствии терапии. Специфические IgGантитела обычно появляются через две-три недели после первичного заражения.
У пациентов с рецидивирующим заболеванием часто не обнаруживается
увеличение концентрации IgG-антител.
Быстрая и точная диагностика герпетической инфекции необходима,
чтобы уточнить этиологию, оценить динамику заболевания и гарантировать
своевременное назначение селективной антивирусной химиотерапии с целью
ограничения распространения инфекции.
Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА
Е
Е
Е
Е

S
Е
Е
P
Иммобилизованный
антиген
Анализируемый
образец
Иммобилизованные
иммунокомплексы
Конъюгат
вторичных
антител с
пероксидазой
Иммобилизованные иммунокомплексы
с мечеными
Субстратная
реакция
антителами
СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
1. Подготовка исследуемых образцов: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл
РРС (разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием.
2. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительной, пороговой и
отрицательной контрольных сывороток, разбавленных в 101 раз образцов
исследуемых сывороток крови и инкубация (30 мин, +37оС).
2. Промывка лунок планшета.
3. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС).
4. Промывка лунок планшета.
5. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл раствора субстрата и инкубация (15 мин,
+37оС).
6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента.
7. Измерение оптической плотности (=450 нм), интерпретация результатов.
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Специфичность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им. Л.А.
Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex
Virus 2 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Чувствительность набора относительно ОСО 42-28-373-04 (утверждена ГИСК им.
Л.А. Тарасевича), а также относительно набора SERION ELISA classic Herpes
Simplex Virus 2 IgG (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Предварительное разведение: по 10 мкл каждого образца смешать с 1 мл РРС
(раствор для разведения сывороток) (разведение 1: 100).
Интерпретация результатов:
Качественная оценка результатов. При качественной оценке результат анализа
исследуемых образцов следует считать:
положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgG к ВПГ2),
отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgG к
ВПГ-2).
Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор
являются
сомнительными, в этом случае необходимо провести повторное исследование вновь
полученных сывороток.
Полуколичественная оценка результатов основана на определении титра антител в
исследуемых положительных образцах сыворотки крови. При полуколичественной
оценке результатов на бланке с полулогарифмической системой координат отложить
значения титров К+ (указан на этикетке флакона) и Кпор (1:100) по оси абсцисс, а
соответствующие им значения оптических плотностей – по оси ординат. Соединить
две точки прямой линией. Титр исследуемого образца найти, отложив на полученной
прямой значение оптической плотности и опустив перпендикуляр на ось абсцисс.
Длина волны измерения: 450 нм.
Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ).
Условия инкубации (время, tоС) :
- 1-ая инкубация 30 мин при +37оС;
- 2-ая инкубация 30 мин при +37оС;
- инкубация с ТМБ 15 мин при +37оС.
Время проведения анализа: 1 час 20 минут.
Объем пробы: 100 мкл.
Количество анализируемой сыворотки: 10 мкл (для анализа сыворотка разводится в
101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки).
Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая
контрольные образцы.
Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки.
Срок годности набора: 12 месяцев.
Все реагенты набора представлены в жидком виде.