Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса M к Toxoplasma gondii в сыворотке крови (ИммуноФА-IgM-Токсо) Номер по каталогу ИФ-20-05 ТУ 9398-037-41566050-2009 Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/06886 Набор предназначен для качественного определения антител класса M к Toxoplasma gondii в сыворотке крови людей методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на стрипованных полистироловых планшетах. Возбудитель – T. gondii относится к простейшим. Жизненный цикл возбудителя проходит внутри клеток организма-хозяина. Окончательный хозяин паразита – обычно зараженные кошки выделяют с испражнениями особую форму токсоплазм - ооцисты. Попавшие в организм промежуточного хозяина (грызуны, птицы, скот, человек) ооцисты продолжают жизненный цикл, в мышечной и других тканях организма, где образуются псевдо- и истинные цисты. Передача возбудителя от человека к человеку исключена (кроме вертикальной передачи во время беременности), поскольку токсоплазма ни в одной из форм не выделяется из организма человека. При инфицировании беременной женщины в первом триместре, возможно самопроизвольное прерывание беременности; вероятность инфицирования плода составляет не более 15%, но тяжесть неврологических дефектов и риск возникновения хориоретинитов у плода выше. У инфицированных новорожденных врожденный токсоплазмоз часто проявляется в виде генерализованного поражения. В случае заражения в третьем триместре беременности, вероятность инфицирования плода повышается до 65%, в этом случае врожденный токсоплазмоз проявляется поздно. При обследовании беременных женщин первичная инфекция определяется по увеличению титров специфических антител в 3 и более раз. Обнаружение в крови беременной специфичных антител класса M и нарастание титров антител класса G подтверждает первичное заражение токсоплазмой. Такие беременные, независимо от наличия или отсутствия клинических проявлений, подлежат срочному лечению с целью профилактики заражения плода. Определение антител класса M играет решающую роль при постановке диагноза токсоплазмоза у новорожденных, поскольку специфические антитела класса G, в отличие от антител класса M, могут передаваться плоду от матери. Высокая чувствительность анализа позволяет диагностировать ранние стадии заболевания, что особенно важно для пациентов с иммунодефицитами и для младенцев, у которых уровень антител в крови, как правило, очень низкий. Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА Е Е Е Е S Е Е Р Иммобилизованный антиген Анализируемый образец Иммобилизованные иммунокомплексы Конъюгат вторичных антител с пероксидазой Иммобилизованные иммунокомплексы с мечеными антителами Субстратная реакция СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА 1. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительного, отрицательного и порогового контрольных образцов, разведенных в 101 раз образцов исследуемых сывороток крови и инкубация (30 мин, +37оС). 2. Промывка лунок планшета. 3. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС). 4. Промывка лунок планшета. 5. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл субстратного раствора и инкубация (15 мин, +37оС). 6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента. 7. Измерение оптической плотности (λ=450 нм), интерпретация результатов. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Результаты ИФА учитываются при следующих условиях: Значение ОПК+(ср) - не ниже 1,0. Значение ОПК-(ср) - не выше 0,1. Значение ОП к пор - не ниже 0,1. В противном случае исследование необходимо повторить. Интерпретация результатов: ОП образца > 1,1х ОПКпор – положительный, ОП образца < 0,9х ОПКпор – отрицательный, 0,9х ОПКпор <ОП образца < 1,1х ОПКпор исследование. - сомнительный, необходимо повторить Длина волны измерения: 450 нм. Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ). Условия инкубации (время, tоС): - 1-я инкубация 30 минут при +37оС; - 2-я инкубация 30 мин при +37оС; - инкубация с ТМБ 15 мин при +37оС. Время проведения анализа: 1 час 30 минут. Объем пробы: 100 мкл. Количество анализируемой сыворотки: 5 мкл (для анализа сыворотка разводится в 101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки). Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы. Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки. Срок годности набора: 12 месяцев. Все реагенты набора представлены в жидком виде.