В.А. Дубровский, И.В. Забенков, С.О. Торбин Определение

11. Gabbasov Z.A., Popov E.G., Gavrilov I.Yu., Posin E.Ya. Platelet
aggregation: The use of optical density fluctuations to study
microaggregate formation in platelet suspension // Thromb. Res.
1989. Vol. 54 (3). PP. 215-223.
12. Gabbasov Z.A., Gavrilov I.Yu., Popov E.G. The use of optical
density fluctuations for determination of platelet concentration
in stirred suspension // Platelets. 1992. Vol. 3. PP. 281-282.
13. Solen K.A., Sukavaneshvar S., Zheng Y., Hanrahan B., Hall M.W.,
Goodman P., Goodman B., Mohammad S.F. A Light-Scattering
Instrument to Detect Thromboemboli in Blood // J. Biomedical
Optics. 2003. Vol. 8. PP. 70-79.
14. Doubrovski V.A., Osin A.B., Milovanov S.E. Laser space
scanning in flow cytometry / Proc. SPIE «Basic applications of
lasers, Qualification and localization using diffused photon in
highly scattered media». 1993. Vol. 2082. P. 184.
15. Äóáðîâñêèé Â.À., Äâîðåöêèé Ê.Í., Ùåðáàêîâà È.Â., Áàëàåâ À.Ý.
Ïðîñòðàíñòâåííîå ñêàíèðîâàíèå ëàçåðíîãî èçëó÷åíèÿ â
ïðîòî÷íûõ ñ÷åò÷èêàõ-àíàëèçàòîðàõ ÷àñòèö // Ïðèáîðû è
òåõíèêà ýêñïåðèìåíòà. 1999. Ò. 42. ¹ 2. Ñ. 111-115.
16. Äóáðîâñêèé Â.À., Ãàíèëîâà Þ.À., Çàáåíêîâ È.Â. Ïðèìåíåíèå ñïåêòðàëüíî ôèëüòðîâàííîãî çîíäèðóþùåãî ñâåòîâîãî ëó÷à è RGB ðàçëîæåíèÿ ìèêðîôîòîãðàôèé äëÿ ïðîòî÷íîé ðåãèñòðàöèè àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ, óñèëåííîé
óëüòðàçâóêîì // Îïòèêà è ñïåêòðîñêîïèÿ. 2012 (ïðèíÿòà â
ïå÷àòü).
17. Äóáðîâñêèé Â.À., Òîðáèí Ñ.Î., Åëèñååâà À.À., Ãàðèíà Ê.È.
Îïðåäåëåíèå ìåòðîëîãè÷åñêèõ õàðàêòåðèñòèê òðîìáîöèòàðíûõ àãðåãàòîâ ìåòîäîì öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè / Ïðîáëåìû îïòè÷åñêîé ôèçèêè è áèîôîòîíèêè. SFM-2011. Ñàðàòîâ. 2011. Ñ. 8-12.
18. Rosenfeld A., Kak A.C. Digital Picture Processing. Vol. I and II.
– San Diego: Academic Press, 1982.
Âàëåðèé Àëåêñàíäðîâè÷ Äóáðîâñêèé,
êàíä. ôèç.-ìàò. íàóê, äîöåíò, çàâ. êàôåäðîé,
Èãîðü Âëàäèìèðîâè÷ Çàáåíêîâ,
êàíä. ôèç.-ìàò. íàóê, ñò. ïðåïîäàâàòåëü,
Ñòàíèñëàâ Îëåãîâè÷ Òîðáèí,
àñïèðàíò,
êàôåäðà ìåäèöèíñêîé è áèîëîãè÷åñêîé
ôèçèêè èì. Â.Ä. Çåðíîâà,
Âÿ÷åñëàâ Èâàíîâè÷ Åðåìèí,
êàíä. ìåä. íàóê, äîöåíò, çàâ. êàôåäðîé ýïèäåìèîëîãèè,
Îëüãà Åâãåíüåâíà Öàðåâà,
êàíä. ìåä. íàóê,
çàâ. ãåìàòîëîãè÷åñêîé ëàáîðàòîðèåé êëèíèêè ãåìàòîëîãèè,
Ñàðàòîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé
óíèâåðñèòåò èì. Â.È. Ðàçóìîâñêîãî,
ã. Ñàðàòîâ,
e-mail: [email protected]
Â.À. Äóáðîâñêèé, È.Â. Çàáåíêîâ, Ñ.Î. Òîðáèí
Îïðåäåëåíèå ãðóïïû êðîâè ÷åëîâåêà ïî ñèñòåìå AB0 ìåòîäîì öèôðîâîé
ìèêðîñêîïèè
Àííîòàöèÿ
Ïðåäëîæåíî èñïîëüçîâàíèå ìåòîäà öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ãðóïïîâîé ïðèíàäëåæíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà.
Ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîêàçàíî, ÷òî ñî÷åòàíèå ìåòîäà öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè ñ óñèëåíèåì àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ ñ ïîìîùüþ
ñòîÿ÷åé óëüòðàçâóêîâîé âîëíû ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü âåëè÷èíû ðàçðåøåíèÿ îêîëî/áîëåå òðåõ ïîðÿäêîâ. Ñòîëü íàäåæíàÿ ðåãèñòðàöèÿ àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ ìîæåò ñòàòü õîðîøåé áàçîé äëÿ ïîñòàíîâêè çàäà÷è î ðàçðàáîòêå ïðèáîðà äëÿ òèïèðîâàíèÿ
êðîâè íà îñíîâå öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè.
Îïðåäåëåíèå ãðóïïû êðîâè ïî ñèñòåìå AB0, èëè Rh (ñèñòåìå ðåçóñ), ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç íàèáîëåå ÷àñòî èñïîëüçóåìûõ òåñòîâ ëàáîðàòîðíîé äèàãíîñòèêè. Íàïðèìåð, â ÑØÀ åæåãîäíî
ïðîâîäèòñÿ îò 150 äî 200 ìëí. ïîäîáíûõ òåñòîâ â öåíòðàõ ïî
ïåðåëèâàíèþ êðîâè [1]. Ó÷èòûâàÿ ñîîòíîøåíèå íàñåëåíèÿ Ðîññèè è ÑØÀ, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî â íàøåé ñòðàíå êîëè÷åñòâî
òåñòîâ ïî òèïèðîâàíèþ êðîâè ïðèáëèæàåòñÿ ê 100 ìëí. â ãîä.
Åñòåñòâåííî, òàêàÿ ÷àñòîòíîñòü òåñòèðîâàíèÿ êðîâè íà ãðóïïîâóþ ïðèíàäëåæíîñòü òðåáóåò ñîçäàíèÿ ñïåöèàëüíîé àïïàðàòóðû, àâòîìàòîâ äëÿ îïðåäåëåíèÿ ãðóïïû êðîâè.
Ïåðâûå ïðèáîðû òàêîãî òèïà íà îñíîâå ïðîòî÷íîãî ìåòîäà îïèñàíû â [2], [3], èõ äàëüíåéøåå ðàçâèòèå çàòðîíóòî âî ìíîãèõ ñòàòüÿõ, íàïðèìåð â [4]-[10]. Ïðèáîðû ñòàòè÷åñêîãî òèïà,
íå òðåáóþùèå ñîçäàíèÿ èññëåäóåìîãî ïîòîêà ðàñòâîðà êðîâè,
îáñóæäàþòñÿ, íàïðèìåð, â [11], [12].
Íàïîìíèì, ÷òî â îñíîâå îïðåäåëåíèÿ ãðóïïû êðîâè ÷åëîâåêà ëåæèò ïðîöåññ àããëþòèíàöèè (ñêëåèâàíèÿ) ýðèòðîöèòîâ.
Ýòîò ïðîöåññ ïðîèñõîäèò â òîì ñëó÷àå, åñëè ãåìàããëþòèíèðóþùàÿ ñûâîðîòêà (àíòèñûâîðîòêà) èììóíîëîãè÷åñêè ñîîòâåòñòâóåò ýðèòðîöèòàì äàííîé ãðóïïû êðîâè («ïîëîæèòåëüíàÿ»
ðåàêöèÿ ñ îáðàçîâàíèåì àããëþòèíàòîâ).  ïðîòèâíîì ñëó÷àå
àããëþòèíàöèÿ ýðèòðîöèòîâ íå íàáëþäàåòñÿ, ýðèòðîöèòû îñòàþòñÿ îäèíî÷íûìè («îòðèöàòåëüíàÿ» ðåàêöèÿ àããëþòèíàöèè).
Îäíîé èç íàèáîëåå âàæíûõ õàðàêòåðèñòèê ïðèáîðîâ äëÿ
òèïèðîâàíèÿ êðîâè ÿâëÿåòñÿ èõ ðàçðåøàþùàÿ ñïîñîáíîñòü.
Àâòîðû ðàçëè÷íûõ ðàáîò îïðåäåëÿþò ýòîò ïàðàìåòð ïî-ðàçíîìó [11]-[15]. Íàïîìíèì, ÷òî ïîä ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòüþ
ìîæíî ïîíèìàòü îòíîøåíèå îïòè÷åñêîãî ñèãíàëà P+, ñîîòâåò-
14
ñòâóþùåãî «ïîëîæèòåëüíîé» ðåàêöèè àããëþòèíàöèè, ê óðîâíþ ôîòîñèãíàëà P– äëÿ «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè [13]-[15].
Î÷åâèäíî, ÷òî óâåëè÷åíèå ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè r = P+ / P–
ïîâûøàåò íàäåæíîñòü îïðåäåëåíèÿ ãðóïïû êðîâè.
Âàæíî ïîä÷åðêíóòü, ÷òî íåçàâèñèìî îò èçáðàííîãî ôèçè÷åñêîãî ïðèíöèïà ïðèáîðû äëÿ òèïèðîâàíèÿ êðîâè îñóùåñòâëÿþò ðåãèñòðàöèþ àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ, êàê ïðàâèëî,
íå ïðÿìûì, êîñâåííûì îáðàçîì. Íàïðèìåð, ôîòîìåòðè÷åñêèé
ìåòîä ïîçâîëÿåò ýêñïåðèìåíòàëüíî îïðåäåëèòü âçàèìîñâÿçü
ìåæäó çíà÷åíèåì èçìåðÿåìîãî îïòè÷åñêîãî êîýôôèöèåíòà ïðîïóñêàíèÿ îáðàçöà è ñîñòîÿíèåì ñìåñè «êðîâü–ñûâîðîòêà».
Öåëè ðàññìàòðèâàåìîé ðàáîòû:
• èçó÷åíèå âîçìîæíîñòè ïðèìåíåíèÿ öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè
â êà÷åñòâå ïðÿìîãî ìåòîäà îïðåäåëåíèÿ ãðóïïîâîé ïðèíàäëåæíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà;
• îöåíêà ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè ìåòîäà òèïèðîâàíèÿ
êðîâè, îñíîâàííîãî íà ïðèíöèïàõ öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè.
1. Îáúåêò èññëåäîâàíèÿ, òåõíîëîãèÿ
ïðîáîïîäãîòîâêè, òåõíèêà ýêñïåðèìåíòà
Îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ ÿâëÿëàñü «ýðèòðîöèòàðíàÿ ìàññà»
(ÝÌ) äîíîðñêîé êðîâè âñåõ ÷åòûðåõ ãðóïï ïî ñèñòåìå AB0 â
ñî÷åòàíèè ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè ãåìàããëþòèíèðóþùèìè ñûâîðîòêàìè. Îòíîøåíèå îáúåìîâ «êðîâü/ñûâîðîòêà» ñîñòàâëÿëî
1:10, ÷òî ñîîòâåòñòâóåò íîðìå, ïðèíÿòîé â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå. Ïîëó÷åííàÿ ñìåñü «êðîâü-ñûâîðîòêà» ðàçáàâëÿëàñü ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì òàê, ÷òî ñîîòíîøåíèå îáúåìîâ êðîâü/
ôèçðàñòâîð áûëî ðàâíûì 1:25. Èññëåäóåìàÿ æèäêîñòü ïîìå-
ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÀß ÒÅÕÍÈÊÀ. 2013. ¹ 3 (279)
ùàëàñü â êþâåòó îáúåìîì 2400 ìêë, êîòîðàÿ, â ñâîþ î÷åðåäü,
óñòàíàâëèâàëàñü íà ïüåçîêåðàìè÷åñêèé ïðåîáðàçîâàòåëü äëÿ
îáëó÷åíèÿ ñìåñè óëüòðàçâóêîì (ÓÇ).  ñîîòâåòñòâèè ñ [16], [17]
âðåìÿ ÓÇ-îáëó÷åíèÿ ðàñòâîðà ñîñòàâëÿëî 90 ñ. Äëÿ âîçáóæäåíèÿ ïüåçîêåðàìè÷åñêîãî ïðåîáðàçîâàòåëÿ èñïîëüçîâàëñÿ ãåíåðàòîð Ã3-112/1 ñ óñèëèòåëåì, à åãî âûõîäíîå íàïðÿæåíèå êîíòðîëèðîâàëîñü îñöèëëîãðàôîì Ñ1-79. Ãåíåðàòîð íàñòðàèâàëñÿ ðåçîíàíñíî ïî îòíîøåíèþ ê ïðåîáðàçîâàòåëþ v = 2,25 ÌÃö,
åãî âûõîäíîå íàïðÿæåíèå, ïîäàâàåìîå íà ïüåçîêåðàìèêó, íå
ïðåâûøàëî 15 Â, ÷òî îáåñïå÷èâàëî óëüòðàçâóêîâîå äåéñòâèå
íà ýðèòðîöèòû áåç èõ ãåìîëèçà.
 [18]-[20] áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñòîÿ÷àÿ ÓÇ-âîëíà, ôîðìèðóåìàÿ â ðàñòâîðå «êðîâü–ñûâîðîòêà», ïðèâîäèëà ê óâåëè÷åíèþ
ñêîðîñòè àããëþòèíàöèè, îáðàçîâàíèþ êðóïíûõ è ïëîòíûõ àããëþòèíàòîâ («ïîëîæèòåëüíàÿ» ðåàêöèÿ) è ôîðìèðîâàíèþ íåïðî÷íûõ àãðåãàòîâ ïðè «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè. Ïðè âûêëþ÷åíèè óëüòðàçâóêà àããëþòèíàòû áûñòðî ñåäèìåíòèðóþò, â òî
âðåìÿ êàê àãðåãàòû ðàññûïàþòñÿ íà îòäåëüíûå ýðèòðîöèòû,
èõ ñêîðîñòü ñåäèìåíòàöèè çíà÷èòåëüíî íèæå.  ðåçóëüòàòå
ïîñëå èíêóáàöèè îáðàçöà (2 ìèí, [16], [17]) íà äíå êþâåòû ëîêàëèçóþòñÿ êðóïíûå àããëþòèíàòû («ïîëîæèòåëüíàÿ» ðåàêöèÿ)
èëè îäèíî÷íûå ýðèòðîöèòû («îòðèöàòåëüíàÿ»). Îïòèìàëüíîå
âðåìÿ îáëó÷åíèÿ îáðàçöà t0 = 60...90 ñ [16], [17]; â íàñòîÿùåé
ðàáîòå t0 ïðèíÿòî ðàâíûì 90 ñ.
Äàëåå ðàñòâîð àããëþòèíàòîâ/ýðèòðîöèòîâ îáúåìîì 20 ìêë
îòáèðàëè ñî äíà êþâåòû è ðàçáàâëÿëè ôèçðàñòâîðîì â 400 ðàç.
Èç ïîëó÷åííîãî ðàñòâîðà âíîâü îòáèðàëè îáúåì â 20 ìêë, êîòîðûé, â ñâîþ î÷åðåäü, â âèäå êàïëè ðàñïîëàãàëè íà ïðåäìåòíîì
ñòåêëå ìèêðîñêîïà. Ðàçâåäåíèå àããëþòèíàòîâ/ýðèòðîöèòîâ â
400 ðàç áûëî ïðîäèêòîâàíî òåì, ÷òî ïðè òàêîì ðàçâåäåíèè êðóïíûå àããëþòèíàòû íà ïðåäìåòíîì ñòåêëå íå ñëèâàþòñÿ â åäèíûé
ìàññèâ, âèçóàëèçèðóþòñÿ ðàçäåëüíî.  òî æå âðåìÿ ïðè «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè îäèíî÷íûå ýðèòðîöèòû òàêæå âèäíû ðàçäåëüíî, íå óñòèëàþò ïîëå çðåíèÿ ìèêðîñêîïà â âèäå åäèíîãî «êîâðà».
ëîâëåíî íåîáõîäèìîñòüþ ôîðìèðîâàíèÿ áàçû äàííûõ, äîñòàòî÷íîé äëÿ äîñòîâåðíîé ñòàòèñòè÷åñêîé îáðàáîòêè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ðåçóëüòàòîâ äëÿ èññëåäóåìîãî îáðàçöà ñìåñè
«êðîâü-ñûâîðîòêà». Êîýôôèöèåíò óâåëè÷åíèÿ îáúåêòèâà ìèêðîñêîïà ñîñòàâëÿë 10x, îêóëÿðà 10x; ïîëå çðåíèÿ 0,8 ìì. Íà
ïóòè ñâåòîâîãî ëó÷à (ïîäñâåòêà ìèêðîñêîïà) óñòàíàâëèâàëè
ñâåòîôèëüòð ñ ìàêñèìóìîì ïðîïóñêàíèÿ ñâåòà íà äëèíå âîëíû 540 íì, ò. å. â îáëàñòè ïîãëîùåíèÿ ñâåòà ãåìîãëîáèíîì
(ðèñ. 1). Ê îêóëÿðó ìèêðîñêîïà ïîäêëþ÷àëè ïîëèõðîìíóþ öèôðîâóþ êàìåðó «Logitect-Quick Cam» ñ ðàçðåøåíèåì 2 Ìïêñ. Íà
ðèñ. 2 ïðåäñòàâëåíû òèïè÷íûå ôîòîèçîáðàæåíèÿ ýðèòðîöèòîâ
è èõ èììóííûõ êîìïëåêñîâ (àããëþòèíàòîâ).
Íà ðèñ. 2 âèäíî ñëåäóþùåå:
1) íåñìîòðÿ íà óëüòðàçâóêîâîå îáëó÷åíèå ñìåñè «êðîâü–ñûâîðîòêà», â ñëó÷àå «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè (ðèñ. 2à) ýðèòðîöèòàðíûå àããëþòèíàòû, åñòåñòâåííî, íå îáðàçóþòñÿ; íà
ðèñóíêå ïðåäñòàâëåíû ëèøü îäèíî÷íûå ýðèòðîöèòû;
2) ñîïîñòàâëåíèå ôîòî íà ðèñ. 2 äåìîíñòðèðóåò ýôôåêòèâíîñòü
âëèÿíèÿ óëüòðàçâóêà íà ôîðìèðîâàíèå ýðèòðîöèòàðíûõ
àããëþòèíàòîâ. Ñîâåðøåííî î÷åâèäíî, ÷òî ïëîùàäü, çàíèìàåìàÿ àããëþòèíàòàìè (ðèñ. 2á), íåñîèçìåðèìà ñ òåì æå
ïàðàìåòðîì äëÿ îäèíî÷íûõ ýðèòðîöèòîâ (ðèñ. 2à). Ñëåäîâàòåëüíî, âåëè÷èíà ïëîùàäè ìîæåò ñëóæèòü ìåðîé, êîòîðàÿ ïîçâîëÿåò ñóäèòü î òîì, ïðîèçîøëà ðåàêöèÿ àããëþòèíàöèè èëè íåò;
3) çàìåòèì, ÷òî â ñèëó èñïîëüçîâàíèÿ â ìèêðîñêîïå çåëåíîãî
ñâåòîôèëüòðà ôîí, íà êîòîðîì ðàñïîëàãàþòñÿ êëåòêè è èõ
àããëþòèíàòû, èìåë çåëåíûé öâåò, à îäèíî÷íûå ýðèòðîöèòû (ðèñ. 2à) ïðåäñòàâëÿëèñü îáðàçîâàíèÿìè òåìíî-çåëåíîãî öâåòà;
4) â òî æå âðåìÿ ïðèíöèïèàëüíî òî, ÷òî êðóïíûå ýðèòðîöèòàðíûå àããëþòèíàòû (ðèñ. 2á) íà ðåàëüíûõ öâåòíûõ ôîòîãðàôèÿõ èìåëè êðàñíûé öâåò; ýòî îáñòîÿòåëüñòâî â ðàçäåëå 3 áóäåò
îáúÿñíåíî è èñïîëüçîâàíî ïðè êîìïüþòåðíîé îáðàáîòêå öèôðîâûõ ôîòîèçîáðàæåíèé. Åñòåñòâåííî, ÷åðíî-áåëûå ôîòîãðàôèè ýòè îñîáåííîñòè äåìîíñòðèðîâàòü íå ìîãóò.
2. Äâóõâîëíîâîå çîíäèðîâàíèå ñìåñè
«êðîâü-ñûâîðîòêà»
Ðèñ. 1. Ñïåêòðàëüíûå õàðàêòåðèñòèêè:
1 – ãåìîãëîáèí; 2 – îïòè÷åñêèé ñâåòîôèëüòð
Ðàññìîòðèì áîëåå ïîäðîáíî îòìå÷åííîå â ðàçäåëå 1 öâåòîâîå îòëè÷èå èçîáðàæåíèé êðóïíûõ ýðèòðîöèòàðíûõ àããëþòèíàòîâ îò îäèíî÷íûõ ýðèòðîöèòîâ.
Äëÿ ïðîñòîòû ïðîâåäåíèÿ êà÷åñòâåííûõ îöåíîê ïðåäñòàâèì
ñâåòîâîé ïîòîê îñâåòèòåëüíîé ñèñòåìû ìèêðîñêîïà ïîñëå ïðîõîæäåíèÿ çåëåíîãî ñâåòîôèëüòðà (ñïåêòð – êðèâàÿ 2 íà ðèñ. 1) â
âèäå èçëó÷åíèÿ íà äâóõ õàðàêòåðíûõ äëèíàõ âîëí âèäèìîãî
äèàïàçîíà λ1 è λ2. Âûáèðàåì äëèíû âîëí λ1 è λ2 â ñîîòâåòñòâèè
ñî ñïåêòðîì ãåìîãëîáèíà: λ1 = 540 íì ñîîòâåòñòâóåò îäíîìó èç
ìàêñèìóìîâ ïîãëîùåíèÿ â çåëåíîé îáëàñòè ñïåêòðà è λ2 = 650 íì,
íà êîòîðîé ïîãëîùåíèå ñâåòà çíà÷èòåëüíî íèæå.
Òåîðåòè÷åñêèå îöåíêè óêàçûâàþò íà òî, ÷òî ñå÷åíèå ñâåòîðàññåÿíèÿ íà ýðèòðîöèòàõ íà âûáðàííûõ äëèíàõ âîëí ïðàêòè÷åñêè îäèíàêîâî, ñëåäîâàòåëüíî, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî îòëè÷èå êîýôôèöèåíòîâ ïðîïóñêàíèÿ íà λ1 è λ2 (êðèâàÿ 1 íà ðèñ. 1)
îáóñëîâëåíî ïîãëîùåíèåì ñâåòà, à íå ðàññåÿíèåì. Òîãäà, â ñîîòâåòñòâèè ñ çàêîíîì Áóãåðà,
I(λ1) = I0(λ1) exp[–µa(λ1)l];
(1)
I(λ2) = I0(λ2) exp[–µa(λ2)l],
(2)
ãäå I0(λ1), I0(λ2) è I(λ1), I(λ2) – èíòåíñèâíîñòè ñâåòîâûõ ïîòîêîâ
ñ äëèíàìè âîëí λ1 è λ2 íà âõîäå è âûõîäå èç ñëîÿ êðîâè ñîîòâåòñòâåííî; µa(λ1) è µa(λ2) – îïòè÷åñêèå êîýôôèöèåíòû ïîãëîùåíèÿ ãåìîãëîáèíà íà äëèíàõ âîëí λ1 è λ2; l – òîëùèíà ñëîÿ
êðîâè. Êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ µa(λ) îïðåäåëÿåòñÿ êàê [21]
Ðèñ. 2. Ôðàãìåíòû ôîòîèçîáðàæåíèé: à) ýðèòðîöèòîâ («îòðèöàòåëüíàÿ» ðåàêöèÿ àããëþòèíàöèè); á) ýðèòðîöèòîâ è èõ èììóííûõ êîìïëåêñîâ (àããëþòèíàòîâ, «ïîëîæèòåëüíàÿ» ðåàêöèÿ)
Ñ ïîìîùüþ ìèêðîñêîïà «ËÎÌÎ ÁÈÎÌÅÄ» èçãîòàâëèâàëè 20 ôîòîãðàôèé â ðàçëè÷íûõ îáëàñòÿõ êàïëè, ÷òî áûëî îáóñÌÅÄÈÖÈÍÑÊÀß ÒÅÕÍÈÊÀ. 2013. ¹ 3 (279)
µa(λ) = (2,3·e·C) / (64500),
(3)
ãäå e – ìîëÿðíûé êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ ñâåòà ãåìîãëîáèíîì, (1 / ñì) / (ìîëü / ë); C – êîíöåíòðàöèÿ ãåìîãëîáèíà, ã/ë;
ìîëåêóëÿðíûé âåñ ãåìîãëîáèíà ðàâåí 64500 ã/ìîëü. Çíà÷åíèÿ
e(λ) ïðèâåäåíû â [21], à âåëè÷èíà C äëÿ öåëüíîé êðîâè òàì æå
äàíà ðàâíîé 150.
15
Êàê îòìå÷àëîñü â ðàçäåëå 1, îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ ÿâëÿëàñü íå öåëüíàÿ êðîâü, à ÝÌ ñ ïîâûøåííûì ñîäåðæàíèåì ýðèòðîöèòîâ. Ïîýòîìó â ôîðìóëó (3) äîïîëíèòåëüíî ââåäåì âåëè÷èíó ãåìàòîêðèòà H (â ïðåäïîëîæåíèè, ÷òî ïîñëå öåíòðèôóãèðîâàíèÿ êðîâè â áèîîáúåêòå óäàëåí âåñü îáúåì ïëàçìû) è
ñòåïåíü ðàçáàâëåíèÿ ýðèòðîöèòàðíîé ìàññû N ñ òåì, ÷òîáû
èìåòü âîçìîæíîñòü îöåíèâàòü µa(λ) ïðè ðàçëè÷íûõ ðàçáàâëåíèÿõ ÝÌ:
µa(λ) = (2,3·e·150 / H·N) / (64500).
(4)
Îöåíêè ïî ôîðìóëå (4) äëÿ C = 150, e(λ1) = 53236, e(λ2) = 4
(îêñèãåìîãëîáèí, ðàçìåðíîñòè óêàçàíû âûøå) [21], H = 1/2 è
N = 1 (ðàçáàâëåíèå îòñóòñòâóåò) äàþò ñëåäóþùèå ðåçóëüòàòû:
µa(λ1) = 575 ñì–1 è µa(λ2) = 4 ñì–1.
Ïðèðàâíèâàÿ I(λ1) è I(λ2) [ôîðìóëû (1) è (2)], ëåãêî ïîëó÷èòü ñîîòíîøåíèå äëÿ òîëùèíû ñëîÿ ýðèòðîöèòàðíîé ìàññû
l0, ïðè êîòîðîé I(λ1) = I(λ2):
l0 = Ln K / [µa(λ1) – µa(λ2)],
(5)
ãäå K = I0(λ1) / I0(λ2) – ñîîòíîøåíèå èíòåíñèâíîñòåé ñâåòîâûõ
ïîòîêîâ íà λ1 è λ2 íà âõîäå â ñëîé êðîâè. Âåëè÷èíà K îïðåäåëÿåòñÿ ñïåêòðîì îïòè÷åñêîãî ñâåòîôèëüòðà (ðèñ. 1, êðèâàÿ 2);
äëÿ âûáðàííûõ äëèí âîëí λ1 = 540 íì è λ2 = 650 íì, êîýôôèöèåíò K = 4,3. Äëÿ âûøåïðèâåäåííûõ âåëè÷èí µa(λ1), µa(λ2) è K
îöåíêè (5) äàþò l0 = 26 ìêì.
Î÷åâèäíî, ÷òî ïðè l < l0 èíòåíñèâíîñòü I(λ1) > I(λ2), ò. å.
«çåëåíàÿ» êîìïîíåíòà ñïåêòðà ïðè çîíäèðîâàíèè ÝÌ ïðåâàëèðóåò íàä «êðàñíîé».  ïðîòèâíîì ñëó÷àå ïðè l > l0 òîëùèíà
ñëîÿ êðîâè îêàçûâàåòñÿ íàñòîëüêî áîëüøîé, ÷òî íåñìîòðÿ íà
óñëîâèå K > 1, èíòåíñèâíîñòè ñîîòíîñÿòñÿ êàê I(λ1) < I(λ2), ò. å.
«êðàñíàÿ» êîìïîíåíòà ñïåêòðà äîìèíèðóåò. Ýòîò ðåçóëüòàò
ìîæåò áûòü ñîîòíåñåí ñî ñëó÷àåì «ïîëîæèòåëüíîé» ðåàêöèè
àããëþòèíàöèè: êðóïíûé ñãóñòîê êðîâè (àããëþòèíàò) ïîäîáåí
ðàññìîòðåííîìó ñëîþ ÝÌ.
 ñëó÷àå «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè àããëþòèíàòû íå îáðàçóþòñÿ, à èññëåäóåìûé áèîîáúåêò ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé âçâåñü
ýðèòðîöèòîâ â ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå, ïðè÷åì, êàê îòìå÷àëîñü â ðàçäåëå 1, ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ ýðèòðîöèòàðíîé ìàññû
ñîñòàâëÿåò 1:400. Äëÿ çàäàííûõ âûøå ïàðàìåòðîâ, íî äëÿ N,
ðàâíîé 400, âåëè÷èíà l0 =10 ìì [ôîðìóëà (5)]. Ñðàâíåíèå l0 ñ
òîëùèíîé èññëåäóåìîé êàïëè ðàñòâîðà áèîîáúåêòà ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî â ýêñïåðèìåíòå âñåãäà áóäåò ñîõðàíÿòüñÿ ñîîòíîøåíèå èíòåíñèâíîñòåé I(λ1) > I(λ2), ñëåäîâàòåëüíî, èçîáðàæåíèå ñëîÿ ðàñòâîðà êðîâè áóäåò âñåãäà âîñïðèíèìàòüñÿ çåëåíûì.
 öåëîì, îáîáùàÿ, ìîæíî çàêëþ÷èòü:
• ðåàêöèÿ àããëþòèíàöèè «ïîëîæèòåëüíàÿ», åñëè â èçîáðàæåíèè áèîîáúåêòà èìåþò ìåñòî íåêèå îáðàçîâàíèÿ êðàñíîãî öâåòà, êîòîðûå ìîãóò âîñïðèíèìàòüñÿ êàê àããëþòèíàòû;
• ðåàêöèÿ àããëþòèíàöèè «îòðèöàòåëüíàÿ», åñëè èçîáðàæåíèå
áèîîáúåêòà ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñîâîêóïíîñòü ÷àñòèö (ýðèòðîöèòîâ) çåëåíîãî öâåòà, à «êðàñíûå îáðàçîâàíèÿ» îòñóòñòâóþò.
3. Ïðèíöèïû îáðàáîòêè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
ðåçóëüòàòîâ
Öåëüþ îáðàáîòêè öèôðîâûõ ôîòîèçîáðàæåíèé ÿâëÿëîñü:
1) âûÿâëåíèå íà ôîòî àããëþòèíàòîâ (ïðè «ïîëîæèòåëüíîé»
ðåàêöèè) è îïðåäåëåíèå ïëîùàäè S(+)i, êîòîðóþ çàíèìàåò
íà ôîòî êàæäûé àããëþòèíàò (i – íîìåð àããëþòèíàòà, i = 1,
2, 3, …); îïðåäåëåíèå ñóììàðíîé ïëîùàäè, êîòîðóþ çàíèìàþò âñå àããëþòèíàòû íà 20 ôîòî äàííîãî îáðàçöà êðîâè
[S0(+) = ΣS(+)i];
2) âûÿâëåíèå íà ôîòî «ýðèòðîöèòàðíûõ îáðàçîâàíèé» íåèììóííîãî õàðàêòåðà (ïðè «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè) è îïðåäåëåíèå ïëîùàäè S(–) i, êîòîðóþ çàíèìàåò íà ôîòî êàæäîå èç îáðàçîâàíèé; îïðåäåëåíèå ñóììàðíîé ïëîùàäè,
êîòîðóþ çàíèìàþò âñå ýðèòðîöèòàðíûå îáðàçîâàíèÿ íà
20 ôîòî äàííîãî îáðàçöà êðîâè [S0(–) = ΣS(–)i];
3) íàõîæäåíèå ðàçðåøåíèÿ ìåòîäà öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè äëÿ
îïðåäåëåíèÿ ãðóïïû êðîâè ïóòåì âû÷èñëåíèÿ r = S0(+) / S0(–).
16
Çàìåòèì, ÷òî ïîä òåðìèíîì «ýðèòðîöèòàðíîå îáðàçîâàíèå»
íåèììóííîãî õàðàêòåðà áóäåì ïîíèìàòü íåêîòîðóþ ñîâîêóïíîñòü ýðèòðîöèòîâ, ñëó÷àéíûì îáðàçîì áëèçêî ðàñïîëîæåííûõ äðóã ê äðóãó. Òàêóþ ñîâîêóïíîñòü ýðèòðîöèòîâ êîìïüþòåðíàÿ ïðîãðàììà ìîæåò âîñïðèíÿòü êàê àããëþòèíàò.
Îáðàáîòêà öèôðîâûõ ìèêðîôîòîãðàôèé îñíîâàíà íà èõ
îöèôðîâêå ïî ïèêñåëàì è ïðåäñòàâëåíèè ðåçóëüòàòà â âèäå ñòàòèñòè÷åñêèõ âûáîðîê [15]. Äëÿ 8-ðàçðÿäíîé öèôðîâîé êàìåðû
«Logitect-Quick Cam» êîäèðîâàíèå ñîñòîÿíèÿ îäíîãî ïèêñåëà
ñ ïîìîùüþ îäíîãî áàéòà ïîçâîëÿåò ïåðåäàâàòü 256 ðàçëè÷íûõ
îòòåíêîâ, íàïðèìåð ñåðîãî öâåòà, – îò ïîëíîñòüþ ÷åðíîãî
(B = 0 åä. ÿðêîñòè; B – brightness) äî ïîëíîñòüþ áåëîãî (B = 255 åä.
ÿðêîñòè). Êàæäûé èç ôîòîêàäðîâ ðàñêëàäûâàëñÿ íà RGBêîìïîíåíòû, èç êîòîðûõ àíàëèçó ïîäâåðãàëèñü G (Green)- è
R (Red)-ñîñòàâëÿþùèå. Ýòè G- è R-êîìïîíåíòû ïðåäñòàâëÿëèñü â âèäå äâóõ öèôðîâûõ ìàòðèö [B(R) è B(G)], êîòîðûå çàòåì ïîïèêñåëüíî ñîïîñòàâëÿëèñü ìåæäó ñîáîé ïðîãðàììíûì
îáðàçîì. Åñëè ÿðêîñòü B(G), ñîîòâåòñòâóþùàÿ äàííîìó ïèêñåëó ôîòîèçîáðàæåíèÿ, ïðåâîñõîäèëà ÿðêîñòü B(R) â òîé æå òî÷êå ôîòîêàäðà, òî çíà÷åíèå ÿðêîñòè B(R) îáíóëÿëîñü, èíà÷å ÿðêîñòè B(R) ïðèñâàèâàëîñü îïðåäåëåííîå ÷èñëîâîå çíà÷åíèå, íàïðèìåð 255.  ðåçóëüòàòå ìàòðèöà B(R) ïðåäñòàâëÿëà ñîáîé íàáîð
÷èñëîâûõ çíà÷åíèé äâóõ òèïî⠖ «0» èëè «255», åå âèçóàëèçàöèÿ
äàâàëà ÷åðíî-êðàñíîå èçîáðàæåíèå (ðèñ. 3). Çàìåòèì, ÷òî íà ÷åðíî-áåëîì ðèñóíêå êðàñíàÿ îáëàñòü ïðåäñòàâëåíà ñåðîé.
Ðèñ. 3. Áèíàðíûå èçîáðàæåíèÿ ôîòî ðèñ. 2
Äëÿ «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè (â îòñóòñòâèå àããëþòèíàòîâ)
èçîáðàæåíèå ïðåäñòàâëÿëîñü ïðàêòè÷åñêè êàê ïîëíîñòüþ ÷åðíîå (ðèñ. 3à), ïîñêîëüêó ïî÷òè äëÿ êàæäîãî ïèêñåëà âûïîëíÿëîñü óñëîâèå B(G) > B(R) è, ñëåäîâàòåëüíî, B(R) = 0.
 ñëó÷àå «ïîëîæèòåëüíîé» ðåàêöèè â òî÷êàõ ôîòîêàäðà,
êîòîðûå ñîîòâåòñòâîâàëè «ìåæêëåòî÷íîìó» ïðîñòðàíñòâó èëè
îäèíî÷íûì ýðèòðîöèòàì, âûïîëíÿëîñü B(G) > B(R) è, êàê ðåçóëüòàò, ýòè îáëàñòè ôîòîêàäðà ôîðìèðîâàëèñü êàê ÷åðíûå
(ðèñ. 3á). Îäíàêî â èíûõ îáëàñòÿõ ôîòîêàäðà, ãäå íàõîäèëñÿ
êðóïíûé àããëþòèíàò, èìåëî ìåñòî B(G) < B(R) è ÿðêîñòè B(R)
ïðèñâàèâàëîñü çíà÷åíèå 255. Ýòà îáëàñòü íà ìîíèòîðå îêðàøèâàëàñü â êðàñíûé öâåò (ðèñ. 3á, íà ÷åðíî-áåëîì ðèñóíêå ýòà
îáëàñòü èìååò ñåðûé öâåò).
Èòàê, ðèñ. 3à, á ÿâëÿþòñÿ ïðîäóêòîì êîìïüþòåðíîãî ïðåîáðàçîâàíèÿ ñîîòâåòñòâóþùèõ ðèñ. 2à, á ïóòåì ïîïèêñåëüíîãî ñðàâíåíèÿ âåëè÷èí ÿðêîñòåé B(G) è B(R). Ðèñ. 3à, á ÿâëÿþòñÿ áèíàðíûìè èçîáðàæåíèÿìè ðåàëüíûõ ìèêðîôîòîãðàôèé ðèñ. 2.
Äëÿ òîãî ÷òîáû èç áèíàðíîé êàðòèíû ôîòîãðàôèè èçâëå÷ü
äàííûå î ÷èñëå àããëþòèíàòîâ è èõ ïëîùàäè, èñïîëüçîâàëàñü
ïðîöåäóðà ñåãìåíòàöèè èçîáðàæåíèÿ ìåòîäîì «ðàñùåïëåíèÿ
è ñëèÿíèÿ» [22]. Â ðåçóëüòàòå ýòîé îïåðàöèè áûëè îïðåäåëåíû
ïîëîæåíèå êàæäîé ñâÿçíîé îáëàñòè è èõ ïëîùàäè. Äëÿ òîãî
÷òîáû â äàëüíåéøèõ ðàñ÷åòàõ ó÷åñòü òîëüêî ïëîùàäè àããëþòèíàòîâ è íå ó÷èòûâàòü èõ äëÿ îäèíî÷íûõ ýðèòðîöèòîâ, ïðîâîäèëàñü ôèëüòðàöèÿ îáúåêòîâ ïî ïëîùàäè. Äàëåå ïëîùàäè
àããëþòèíàòîâ èëè «ýðèòðîöèòàðíûõ îáðàçîâàíèé» ñóììèðîâàëèñü ïî 20 ôîòîêàäðàì äëÿ êàæäîé êàïëè áèîîáúåêòà, íàõîäèëèñü âåëè÷èíû S0(+) è S0(–), èõ ñðàâíåíèå ïîçâîëÿëî îïðåäåëèòü ðàçðåøåíèå r = S0(+) / S0(–).
4. Ýêñïåðèìåíòàëüíûå ðåçóëüòàòû, îáñóæäåíèå
Îöåíêà ðàçðåøåíèÿ ìåòîäà öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè äëÿ
ðåãèñòðàöèè àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ, ðåàëèçîâàííàÿ íà
ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÀß ÒÅÕÍÈÊÀ. 2013. ¹ 3 (279)
îñíîâå îáðàáîòêè ïîëó÷åííûõ ìèêðîôîòîãðàôèé, ïðèâåäåíà
â òàáë. 1. Âåëè÷èíû S0(+) è S0(–) – ñóììàðíûå ïî 20 ôîòîêàäðàì ïëîùàäè, çàíèìàåìûå àããëþòèíàòàìè ïðè «ïîëîæèòåëüíîé» ðåàêöèè è «ýðèòðîöèòàðíûìè îáðàçîâàíèÿìè» ïðè «îòðèöàòåëüíîé» ðåàêöèè ñîîòâåòñòâåííî.
Òàáëèöà 1
Èçîãåìàããëþòèíèðóþùèå ñûâîðîòêè
Ãðóïïà êðîâè
Oαβ(I) (àíòè À+Â)
O(I)
–
–
–
A(II)
1568
–
1660
Aβ(II) (àíòè Â)
Bα(III) (àíòè À)
Ðàçðåøåíèå S0(+) / S0(–)
B(III)
2425
3265
–
AB(IV)
2954
1675
2064
A(II) (ñëàáàÿ
àããëþòèíàöèÿ)
6
–
6
Èç òàáë. 1 âèäíî, ÷òî:
1) ìåòîä öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè â ñî÷åòàíèè ñ óëüòðàçâóêîâûì äåéñòâèåì íà èññëåäóåìóþ ñìåñü «êðîâü-ñûâîðîòêà»
ïîçâîëÿåò äîñòè÷ü âåëè÷èí ðàçðåøåíèÿ r = S0(+) / S0(–) ñâûøå òûñÿ÷è åäèíèö;
2) äîñòèãíóòûå çíà÷åíèÿ ðàçðåøåíèÿ r = S0(+) / S0(–) ÿâëÿþòñÿ âïîëíå ïðèåìëåìûìè äëÿ ïîñòàíîâêè çàäà÷è î êîíñòðóèðîâàíèè ïðèáîðà äëÿ òèïèðîâàíèÿ êðîâè íà îñíîâå öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè;
3) â òàáëèöå ñïåöèàëüíî ïðèâåäåíû ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòîâ ñ îáðàçöîì êðîâè ñî ñëàáîé àããëþòèíàöèåé, îäíàêî
è â ýòîì ñëó÷àå óëüòðàçâóê äàåò õîòÿ è ñêðîìíûé, íî,
êàê ïîêàçûâàþò ðàñ÷åòû, âûèãðûø â âåëè÷èíå ðàçðåøåíèÿ r = S0(+) / S0(–) ïðèìåðíî â 5 ðàç.
Çàìåòèì, ÷òî ïðè ñëàáîé àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ íà
ïðàêòèêå èñïîëüçóþò äîïîëíèòåëüíûå òåñòû – îáðàòíûé òåñò
ïåðåêðåñòíîãî ìåòîäà, ò. å. àíàëèç àããëþòèíàöèè ñòàíäàðòíûõ
ýðèòðîöèòîâ ñ ïîìîùüþ ïëàçìû èññëåäóåìîé êðîâè.
Çàêëþ÷åíèå
Âïåðâûå ïðåäëîæåíî èñïîëüçîâàíèå ìåòîäà öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ãðóïïû êðîâè ÷åëîâåêà. Ýêñïåðèìåíòàëüíî ïîêàçàíî, ÷òî ìåòîä öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè â ñî÷åòàíèè ñ óñèëåíèåì àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ ñ ïîìîùüþ
ñòîÿ÷åé óëüòðàçâóêîâîé âîëíû ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü âåëè÷èíû
ðàçðåøåíèÿ îêîëî/áîëåå òðåõ ïîðÿäêîâ. Ýòî îçíà÷àåò, ÷òî ðåãèñòðàöèÿ àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ ìîæåò áûòü ïðîèçâåäåíà äîñòàòî÷íî íàäåæíî, ñëåäîâàòåëüíî, ñòàíîâèòñÿ âïîëíå
ïðèåìëåìîé ïîñòàíîâêà çàäà÷è î ðàçðàáîòêå ïðèáîðà äëÿ òèïèðîâàíèÿ êðîâè íà îñíîâå öèôðîâîé ìèêðîñêîïèè.
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû:
1. Vyas et al. Simulteneous human AB0 and RH(D) blood typing
an antibody screening by flow cytometry / United States Patent
5,776,711. July 7, 1998.
2. Sturgeon P. Automation: Its introduction to the field of blood
group serology // Immunohematology. 2001. Vol. 17. P. 4.
3. Blood Policy and Technology / Congress of Technology
Assessment. OTA-H-260. – Washington, DC. U.S. January 1985.
4. Tatsumi N., Tsuda I., Inoue K. Trial AB0 and Rh blood typing
with an automated blood cell counter // Clin. Lab. Haemotol.
1989. Vol. 11 (2). PP. 123-130.
5. Murai J., Naka K., Shimojo N., Katakami T., Nakagishi M.,
Kuroki T., Okuda K. Quantitative analysis of Lewis antigens
on erythrocytes by flow cytometry // Clin. Chim. Acta. 1994.
Vol. 226 (1). PP. 21-28.
6. Muranyi et al. Blood typing apparatus / United States Patent
4533638. US Patent Issued on August 6. 1985.
7. Tatsumi N., Tsuda I., Inoue K. Trial AB0 and Rh blood typing
with an automated blood cell counter // Clin. Lab. Haemotol.
1989. Vol. 11 (2). PP. 123-130.
ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÀß ÒÅÕÍÈÊÀ. 2013. ¹ 3 (279)
8. Äóáðîâñêèé Â.À., Äâîðåöêèé Ê.Í., Ùåðáàêîâà È.Â., Áàëàåâ À.Ý.,
Êèðè÷óê Â.Ô. Ëàçåðíîå ïðîñòðàíñòâåííîå ñêàíèðîâàíèå â ïðîòî÷íîé öèòîìåòðèè // Öèòîëîãèÿ. 1999. Ò. 41. ¹ 1. C. 104-108.
9. Dubrovskii V.A., Dvoretskii K.N., Balaev A.E., Shcherbakova I.V.
Laser beam space scanning in flow particle counter-analyzers //
Instruments and Experimental Techniques. 1999. Vol. 42.
¹ 2. PP. 245-248.
10. Doubrovski V.A., Osin A.B., Milovanov S.E. Laser space
scanning in flow cytometry // Proc. SPIE «Basic applications of
lasers, Qualification and localization using diffused photon in
highly scattered media». USA. 1993. Vol. 2082.
11. Anthony S.R. A Simplified Visible/Near-Infrared
Spectrophotometric Approach to Blood Typing for Automated
Transfusion Safety / A thesis presented to North Carolina State
University. Raleigh. North Carolina. USA. 2005.
12. Lambert J.B. A miniaturized device for blood typing using a
simplified spectrophotometric approach / A thesis submitted to
North Carolina State University. Raleigh. North Carolina.
USA. 2006.
13. Doubrovski V.A., Dvoretski K.N. Detection of ultrasonic
agglutination of erythrocytes in vitro by the method of elastic
light scattering // Optics and Spectroscopy. 2000. Vol. 89. ¹ 1.
PP. 99-102.
14. Ganilova Yu.A., Doubrovski V.A., Zabenkov I.V. The resolving
power of the flowing method to register the process of human
erythrocytes agglutination in vitro on the base of correlation
analysis of microphotographs // Proc. SPIE. 2011. Vol. 7999.
P. 799903.
15. Äóáðîâñêèé Â.À., Äîëìàøêèí À.À. Îïðåäåëåíèå ãðóïïîâîé
ïðèíàäëåæíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà íà îñíîâå öèôðîâûõ ôîòîãðàôèé ïðîöåññà àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ // Îïòèêà è
ñïåêòðîñêîïèÿ. 2010. Ò. 109. ¹ 2. Ñ. 1346-1350.
16. Äóáðîâñêèé Â.À., Äîëìàøêèí À.À. Îïðåäåëåíèå ãðóïïû êðîâè íà îñíîâå öèôðîâûõ ôîòîãðàôèé ñåäèìåíòàöèè ýðèòðîöèòîâ è èõ àããëþòèíàòîâ, óñèëåííîé óëüòðàçâóêîì // Ìåäèöèíñêàÿ òåõíèêà. 2012. ¹ 2. Ñ. 24-30.
17. Äîëìàøêèí À.À., Äóáðîâñêèé Â.À., Çàáåíêîâ È.Â. Îïðåäåëåíèå ãðóïïû êðîâè íà îñíîâå ðåãèñòðàöèè óïðóãîãî ðàññåÿíèÿ ëàçåðíîãî èçëó÷åíèÿ ìåòîäîì öèôðîâîé ôîòîãðàôèè //
Êâàíòîâàÿ ýëåêòðîíèêà. 2012. Ò. 42. ¹ 5. Ñ. 409-417.
18. Àëèïîâ À.Í., Âàíèíñêèé Â.Ç., Äåíèñîâ Ë.Á., Äîíñêîâ Ñ.È.,
Äóáðîâñêèé Â.À., Çàâüÿëîâ Ý.Í., Êíÿçüêîâ Í.Í. Ñïîñîá
îïðåäåëåíèÿ ðåàêöèè àããëþòèíàöèè / À. ñ. èçîáðåòåíèÿ
¹ 1683760.
19. Doubrovski V.A., Dvoretski K.N. Ultrasonic wave action upon
the red blood cell agglutination in vitro // Ultrasound in
Medicine & Biology. 2000. Vol. 26. ¹ 4. P. 655.
20. Äóáðîâñêèé Â.À., Äâîðåöêèé Ê.Í., Áàëàåâ À.Ý. Èññëåäîâàíèå
ìåõàíèçìà óñèëåíèÿ àãðåãàöèè ýðèòðîöèòîâ óëüòðàçâóêîâûì
ïîëåì // Àêóñòè÷åñêèé æóðíàë. 2004. Ò. 50. ¹ 2. Ñ. 184.
21. Gratzer W.B., Kollias N. Tabulated Molar Extinction Coefficient
for Hemoglobin in Water / http://omlc.ogi.edu/spectra/
hemoglobin/index.html.
22. Rosenfeld A., Kak A.C. Digital Picture Processing. Vol. I, II.
– Academic Press. San Diego. 1982. 2nd edn.
Âàëåðèé Àëåêñàíäðîâè÷ Äóáðîâñêèé,
êàíä. ôèç.-ìàò. íàóê, äîöåíò, çàâ. êàôåäðîé,
Èãîðü Âëàäèìèðîâè÷ Çàáåíêîâ,
êàíä. ôèç.-ìàò. íàóê, ñò. ïðåïîäàâàòåëü,
Ñòàíèñëàâ Îëåãîâè÷ Òîðáèí,
àñïèðàíò,
êàôåäðà ìåäèöèíñêîé è áèîëîãè÷åñêîé ôèçèêè
èì. ïðîô. Â.Ä. Çåðíîâà,
Ñàðàòîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé
óíèâåðñèòåò èì. Â.È. Ðàçóìîâñêîãî,
ã. Ñàðàòîâ,
e-mail: [email protected]
17