изучение эффектов препарата сверхмалых доз антител к s

170
Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, ¹ 8, ïðèëîæåíèå
ÈÇÓ×ÅÍÈÅ ÝÔÔÅÊÒΠÏÐÅÏÀÐÀÒÀ ÑÂÅÐÕÌÀËÛÕ ÄÎÇ
ÀÍÒÈÒÅË Ê S-100 Â ÓÑËÎÂÈßÕ ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÎÉ
ÌÎÄÅËÈ ÃÅÌÎÐÐÀÃÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÈÍÑÓËÜÒÀ
Ò.À.Âîðîíèíà, È.À.Õåéôåö, Þ.Ë.Äóãèíà, Ñ.À.Ñåðãååâà, Î.È.Ýïøòåéí
ÎÎÎ “ÍÏÔ “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà
Ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê S-100 óâåëè÷èâàþò âûæèâàåìîñòü êðûñ, ñíèæàþò íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò, óñòðàíÿþò ìèîðåëàêñàöèþ, óëó÷øàþò êîîðäèíàöèþ äâèæåíèé è
êîãíèòèâíûå ôóíêöèè ó êðûñ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì ãåìîððàãè÷åñêèì èíñóëüòîì, íå
óñòóïàÿ íèìîäèïèíó.  îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà, ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê S-100
îáëàäàþò âûðàæåííûìè àíêñèîëèòè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ãåìîððàãè÷åñêèé èíñóëüò, íèìîäèïèí, àíòèòåëà ê áåëêó S-100, ñâåðõìàëûå
äîçû
Ãåìîððàãè÷åñêèé èíñóëüò (ÃÈ) — íàèáîëåå òÿæåëûé è èíâàëèäèçèðóþùèé âèä èíñóëüòà, ñîñòàâëÿþùèé 10-15% îò îáùåãî ÷èñëà èíñóëüòîâ.
Ëåòàëüíîñòü ïðè ÃÈ ñîñòàâëÿåò 25-80%, ïðè÷åì
35-50% ïàöèåíòîâ óìèðàþò â òå÷åíèå ïåðâûõ 30 ñóò
ïîñëå öåðåáðàëüíîé ãåìîððàãèè (ïîëîâèíà — â
òå÷åíèå ïåðâûõ 2 ñóò) [3]. Ëå÷åíèå ÃÈ âêëþ÷àåò
êîìïëåêñ ìåðîïðèÿòèé, íàïðàâëåííûõ, â ïåðâóþ
î÷åðåäü, íà óäàëåíèå ãåìàòîìû è ïðåäîòâðàùåíèå
ðàçâèòèÿ îòåêà ìîçãà â ïåðâûå ÷àñû ïîñëå èíñóëüòà.  äàëüíåéøåì îñíîâíîé öåëüþ ïðîâîäèìîé òåðàïèè ÿâëÿåòñÿ âîññòàíîâëåíèå íàðóøåííûõ ôóíêöèé ìîçãà (ñ ïîìîùüþ íåéðîïðîòåêòîðíûõ è íîîòðîïíûõ ïðåïàðàòîâ) è ïðåäîòâðàùåíèå âòîðè÷íîãî èíñóëüòà (ñ ïîìîùüþ àíãèîïðîòåêòîðîâ,
áëîêàòîðîâ Ca2+-êàíàëîâ, àíòèàãðåãàíòíûõ ïðåïàðàòîâ è äð.) [7]. Ðàíåå ïîêàçàíî, ÷òî àíòèòåëà
ê áåëêó S-100 â ñâåðõìàëûõ äîçàõ (ÑÌÄ àíòè-S100)
îáëàäàþò íåéðîïðîòåêòîðíîé àêòèâíîñòüþ â óñëîâèÿõ èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà [4].
Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü èçó÷åíèå ýôôåêòîâ ÑÌÄ àíòè-S100 â óñëîâèÿõ ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìîäåëè ÃÈ.
ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
ÃÈ ìîäåëèðîâàëè íà áåñïîðîäíûõ áåëûõ êðûñàõñàìöàõ ìàññîé 200-250 ã [2]. Ó êðûñ, íàðêîòèçèðîâàííûõ íåìáóòàëîì (40 ìã/êã âíóòðèìûøå÷íî),
óäàëÿëè ìÿãêèå òêàíè è íàäêîñòíèöó â òåìåííî-
öåíòðàëüíîé îáëàñòè ÷åðåïà.  ëåâîé ãåìèñôåðå
÷åðåïíîé êîñòè íà ðàññòîÿíèè 1.5-1.8 ìì íàçàä
îò áðåãìû è 2.5-3.0 ìì â ñòîðîíó îò ñàãèòòàëüíîãî øâà ïðîñâåðëèâàëè îòâåðñòèå äèàìåòðîì 1 ìì.
 ýòî îòâåðñòèå íà ãëóáèíó 4 ìì îïóñêàëè ìàíäðåí è îñóùåñòâëÿëè äåñòðóêöèþ ìîçãîâîé òêàíè â îáëàñòè âíóòðåííåé êàïñóëû ñ ïîñëåäóþùèì
(÷åðåç 2-3 ìèí) ââåäåíèåì â ìåñòî ïîâðåæäåíèÿ
êðîâè, âçÿòîé èç-ïîä ÿçûêà æèâîòíîãî (0.02-0.03 ìë).
Ñîãëàñíî äàííûì ìîðôîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé
ïðè ýòîì áûë äîñòèãíóò ëîêàëüíûé èíñóëüò â
îáëàñòè âíóòðåííåé êàïñóëû (äèàìåòð — 2 ìì,
ãëóáèíà — 3 ìì) áåç ñóùåñòâåííûõ ïîâðåæäåíèé
ñòðóêòóð ìîçãà, ðàñïîëîæåííûõ âûøå (â ÷àñòíîñòè, íåîêîðòåêñà).
ÑÌÄ àíòè-S100 (2.5 ìë/êã), áëîêàòîð Ca2+-êàíàëîâ íèìîäèïèí (0.1 ìã/êã) èëè äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (2.5 ìë/êã) ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî â
òå÷åíèå 14 ñóò. Ïåðâîå ââåäåíèå îñóùåñòâëÿëè ÷åðåç 4 ÷ ïîñëå ìîäåëèðîâàíèÿ ÃÈ.  êà÷åñòâå êîíòðîëÿ èñïîëüçîâàëè ëîæíîîïåðèðîâàííûõ æèâîòíûõ, êîòîðûì ïðîâîäèëè ñêàëüïèðîâàíèå êîæè â
òåìåííî-öåíòðàëüíîé îáëàñòè ÷åðåïà è ïðîñâåðëèâàëè îòâåðñòèå, íå ðàçðóøàÿ ìîçãîâûõ ñòðóêòóð.
 òå÷åíèå 14 ñóò ïîñëå îïåðàöèè îöåíèâàëè
âûæèâàåìîñòü êðûñ; íà 1, 3, 7 è 14-å ñóòêè ïðîâîäèëè òåñòèðîâàíèå íåâðîëîãè÷åñêîãî è ýìîöèîíàëüíîãî ñòàòóñà, ìûøå÷íîãî òîíóñà, êîîðäèíàöèè äâèæåíèé, à òàêæå êîãíèòèâíûõ ôóíêöèé æèâîòíûõ.
171
Íåâðîëîãè÷åñêèé äåôèöèò îöåíèâàëè ïî øêàëå McGrow (â ìîäèôèêàöèè [1]). Ïîäñ÷èòûâàëè
êîëè÷åñòâî êðûñ ñ ëåãêîé (0.5-2.5 áàëëà) è òÿæåëîé (3-10 áàëëîâ) íåâðîëîãè÷åñêîé ñèìïòîìàòèêîé.
Êîîðäèíàöèþ äâèæåíèé ó êðûñ èçó÷àëè ñ
ïîìîùüþ òåñòà âðàùàþùåãîñÿ ñòåðæíÿ [6,9]. Íåñïîñîáíîñòü æèâîòíûõ óäåðæèâàòü ðàâíîâåñèå â
òå÷åíèå 2 ìèí íà ñòåðæíå äèàìåòðîì 4 ñì, âðàùàþùåìñÿ ñî ñêîðîñòüþ 3 îá/ìèí, ðàññìàòðèâàëè êàê ïðîÿâëåíèå íàðóøåíèÿ êîîðäèíàöèè äâèæåíèé. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ íàðóøåíèé ìûøå÷íîãî
òîíóñà áûë èñïîëüçîâàí òåñò ïîäòÿãèâàíèÿ íà
ãîðèçîíòàëüíîé ïåðåêëàäèíå, íàòÿíóòîé íà âûñîòå 20-30 ñì îò ïîëà [5].
Êîãíèòèâíûå ôóíêöèè êðûñ îöåíèâàëè â
òåñòå óñëîâíîãî ðåôëåêñà ïàññèâíîãî èçáåãàíèÿ
(ÓÐÏÈ) [5,8]. Êðûñó ïîìåùàëè íà ÿðêî îñâåùåííóþ ïëàòôîðìó (25½7 ñì) õâîñòîì ê êâàäðàòíîìó
îòâåðñòèþ (6½6 ñì), âåäóùåìó â êàìåðó ñ ýëåêòðîäíûì ïîëîì (40½40½40 ñì). Âñëåäñòâèå íîðêîâîãî ðåôëåêñà ïîñëå íàõîæäåíèÿ âõîäà â òåìíóþ
êàìåðó êðûñà ïåðåõîäèëà â íåå è ïðîâîäèëà òàì
áîëüøóþ ÷àñòü âðåìåíè. Ñ ìîìåíòà ïîìåùåíèÿ
æèâîòíîãî â ýêñïåðèìåíòàëüíóþ êàìåðó â òå÷åíèå 180 ñ ðåãèñòðèðîâàëè ëàòåíòíûé ïåðèîä ïåðâîãî çàõîäà â çàòåìíåííîå îòäåëåíèå è ñóììàðíîå
âðåìÿ ïðåáûâàíèÿ êðûñû â íåì. Ïî èñòå÷åíèè
ýòîãî âðåìåíè â ìîìåíò, êîãäà êðûñà îêàçûâàëàñü
â òåìíîé êàìåðå, îòâåðñòèå çàêðûâàëè è íàíîñèëè æèâîòíîìó íåèçáåãàåìîå ýëåêòðîáîëåâîå
ðàçäðàæåíèå (10 óäàðîâ ñ ñèëîé òîêà 0.45 ìÀ,
äëèòåëüíîñòüþ èìïóëüñà 1 ñ, èíòåðâàëîì ìåæäó
èìïóëüñàìè 2 ñ).
Óðîâåíü òðåâîæíîñòè êðûñ îöåíèâàëè â ïðèïîäíÿòîì êðåñòîîáðàçíîì ëàáèðèíòå (ÏÊË) [5,6,11]
â òå÷åíèå 5 ìèí ïî êîëè÷åñòâó çàõîäîâ â îòêðûòûå ðóêàâà è âðåìåíè, ïðîâåäåííîìó â íèõ.
Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé ìåæäó ãðóïïàìè îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ t êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Ýêñïåðèìåíòàëüíûé ÃÈ ïðèâîäèë ê ãèáåëè 50%
æèâîòíûõ ê 14-ì ñóòêàì ïîñëå îïåðàöèè. ÑÌÄ
àíòè-S100 äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàëè âûæèâàåìîñòü
êðûñ (íà 20%, p<0.05) â îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà,
÷üå âëèÿíèå íà âûæèâàåìîñòü êðûñ áûëî íåäîñòîâåðíûì.
ÃÈ ïðèâîäèë ê âîçíèêíîâåíèþ íåâðîëîãè÷åñêèõ íàðóøåíèé ó 100% êðûñ, ìèîðåëàêñàöèè —
ó 50% è íàðóøåíèþ êîîðäèíàöèè äâèæåíèé —
ó 30% (òàáëèöà).  òå÷åíèå 14 ñóò òÿæåñòü íåâðîëîãè÷åñêîãî äåôèöèòà ïîñòåïåííî ñíèæàëàñü,
îäíàêî ñèìïòîìû ëåãêèõ (âÿëîñòü äâèæåíèé, ñëàáîñòü êîíå÷íîñòåé) è òÿæåëûõ (ìàíåæíûå äâèæåíèÿ, ïàðåçû êîíå÷íîñòåé, ïàðàëè÷è) íàðóøåíèé
Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà íåâðîëîãè÷åñêèé ñòàòóñ, ìèîðåëàêñàöèþ è êîîðäèíàöèþ
äâèæåíèé êðûñ ïîñëå ÃÈ (%)
Ïîêàçàòåëü
Òÿæåëûå íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ
Ëåãêèå íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ
Æèâîòíûå, íå ïîäòÿíóâøèåñÿ
íà ãîðèçîíòàëüíîé ïåðåêëàäèíå
Æèâîòíûå, íå óäåðæàâøèåñÿ
íà âðàùàþùåìñÿ ñòåðæíå
Ãðóïïà
Äíè ïîñëå îïåðàöèè
1-é
3-é
7-é
14-é
Êîíòðîëü
0
0
0
0
ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà
44*
12
0
20
ÃÈ+íèìîäèïèí
20
24
14
0
ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100
30
33
+
14
14
Êîíòðîëü
60
40
20
20
ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà
100*
100*
86*
60*
ÃÈ+íèìîäèïèí
50+
50
43+
43+
ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100
60
66
50+
43+
Êîíòðîëü
20
10
10
10
ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà
30
50*
43*
50*
ÃÈ+íèìîäèïèí
20
50*
71*
50*
ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100
10
10
24
25
10
+
+
Êîíòðîëü
10
0
10
ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà
30
25
29
20
ÃÈ+íèìîäèïèí
20
25
43*
17
ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100
9+
18
12
12
Ïðèìå÷àíèå. p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ: *êîíòðîëåì, +ãðóïïîé ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà.
172
Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2009, ¹ 8, ïðèëîæåíèå
Ðèñ. 1. Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà
êîãíèòèâíûå ôóíêöèè êðûñ ïîñëå ÃÈ â òåñòå ÓÐÏÈ.
Çäåñü è íà ðèñ. 2: 1 — èíòàêòíûå; 2 — êîíòðîëü; 3 —
ÃÈ+äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà; 4 — ÃÈ+íèìîäèïèí; 5 —
ÃÈ+ÑÌÄ àíòè-S100.
p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ: *êîíòðîëåì, +ãðóïïîé ÃÈ+
äèñòèëëèðîâàííàÿ âîäà.
ñîõðàíÿëèñü ó 60% è 20% êðûñ ñîîòâåòñòâåííî.
È íèìîäèïèí, è ÑÌÄ àíòè-S100 óìåíüøàëè
íåâðîëîãè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ ÃÈ âî âñå ñðîêè
èññëåäîâàíèÿ (òàáëèöà). Íà 14-å ñóòêè ïîñëå ÃÈ
íèìîäèïèí è ÑÌÄ àíòè-S100 ñíèæàëè êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ ñ ëåãêèìè íàðóøåíèÿìè â 1.4 è 1.8
ðàçà (p<0.05) ñîîòâåòñòâåííî; íèìîäèïèí ïîëíîñòüþ óñòðàíÿë òÿæåëûå íàðóøåíèÿ, ÑÌÄ àíòèS100 ñíèæàëè èõ ÷àñòîòó â 1.5 ðàçà. Ïðè ýòîì,
â îòëè÷èå îò íèìîäèïèíà, ÑÌÄ àíòè-S100 ñíèæàëè òàêæå êîëè÷åñòâî êðûñ ñ íàðóøåíèÿìè
êîîðäèíàöèè äâèæåíèé è ìèîðåëàêñàöèåé â 1.7
è 2 ðàçà ñîîòâåòñòâåííî (p<0.05; òàáëèöà).
×åðåç 7 è 14 ñóò ïîñëå ÃÈ ó êðûñ çíà÷èòåëüíî (â 2 ðàçà; p<0.05) óõóäøèëîñü âîñïðîèçâåäåíèå ÓÐÏÈ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâîâàëî î ðàçâèâøèõñÿ
íàðóøåíèÿõ êîãíèòèâíûõ ôóíêöèé. È íèìîäèïèí, è ÑÌÄ àíòè-S100 ïîëíîñòüþ âîññòàíàâëèâàëè âîñïðîèçâåäåíèå ÓÐÏÈ íà 7-å ñóòêè, îäíàêî íà 14-å ñóòêè ýòîò ýôôåêò ñîõðàíÿëñÿ òîëüêî
ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÑÌÄ àíòè-S100 (ðèñ. 1).
Êðîìå íåéðîïðîòåêòîðíîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàò ÑÌÄ àíòè-S100 îáëàäàë àíêñèîëèòè÷åñêèì
ýôôåêòîì: â òåñòå ÏÊË ïðåïàðàò íå òîëüêî óñòðàíÿë ïðîÿâëåíèÿ òðåâîæíîñòè æèâîòíûõ, âîçíèêøèå â ðåçóëüòàòå ÃÈ, íî è äîñòîâåðíî óâåëè÷èâàë âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â îòêðûòûõ ðóêàâàõ, ïî
ñðàâíåíèþ ñ èíòàêòíûìè æèâîòíûìè â 1.6 ðàçà
(p<0.05; ðèñ. 2).
Òàêèì îáðàçîì, ïðåïàðàò ÑÌÄ àíòè-S100
îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ïîâûøàòü âûæèâàåìîñòü
è óñòðàíÿòü íåâðîëîãè÷åñêèå íàðóøåíèÿ, âîçíè-
Ðèñ. 2. Âëèÿíèå íèìîäèïèíà è ÑÌÄ àíòè-S100 íà
ïîâåäåíèå êðûñ ïîñëå ÃÈ â òåñòå ÏÊË.
à — âðåìÿ, ïðîâåäåííîå â îòêðûòûõ ðóêàâàõ; á —
âðåìÿ, ïðîâåäåííîå íà öåíòðàëüíîé ïëàòôîðìå.
êàþùèå ó êðûñ ïîñëå ÃÈ. Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå
ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ðàíåå
ïðè èññëåäîâàíèè ïðîòèâîèøåìè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ïðåïàðàòà íà ìîäåëè èøåìè÷åñêîãî èíñóëüòà
[6], ïðåïàðàò ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê ïîòåíöèàëüíîå ñðåäñòâî ëå÷åíèÿ êàê èøåìè÷åñêîãî
èíñóëüòà, òàê è ÃÈ.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Ãàííóøêèíà È.Â. // Æóðí. íåâðîë. è ïñèõèàòð. 1996.
¹ 1. Ñ. 14-18.
2. Ìàêàðåíêî À.Í., Êîñèöûí Í.Ñ., Ïàñèêîâà Í.Â. //
Æóðí. âûñø. íåðâí. äåÿò. 2002. Ò. 52, ¹ 6. Ñ. 765-768.
3. Ïèðàäîâ Ì.À. // Íåðâíûå áîëåçíè. 2005. ¹ 1. Ñ. 17-19.
4. Ðîìàíîâà Ã.À., Âîðîíèíà Ò.À., Äóãèíà Þ.Ë. è äð. //
Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2005. Ò. 139, ¹ 4. Ñ. 395-399.
5. Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ
/ Ïîä ðåä. Ð.Ó.Õàáðèåâà. Ì., 2005.
6. Ñåðåäåíèí Ñ.Á., Âîðîíèíà Ò.À., Íåçíàìîâ Ã.Ã., Æåðäåâ Â.Ï. Ôåíàçåïàì. 25 ëåò â ìåäèöèíñêîé ïðàêòèêå. Ì., 2007. Ñ. 9-132.
173
7. Ñêîðîõîäîâ À.Ï. // Ìåä. êàôåäðà. 2005. ¹ 3.
Ñ. 144-150.
8. Ader R., Weijnen W., Moleman P. // Psychon. Sci. 1972.
Vol. 26. P. 125-128.
9. Dunham N.W., Miya T.S. // J. Am. Pharm. Assoc. Am.
Pharm. Assoc. (Baltim.). 1957. Vol. 46, N 3. P. 208-209.
·· B.W. // Front Biosci.
10. Heizmann C.W., Fritz G., Schafer
2002. N 7. P. d1356-d1368.
11. Ðellow S., File S.E. // Pharmacol. Biochem. Behav.
1986. Vol. 24, N 3. P. 525-529.
12. Rothermundt M., Arolt V., Wiesmann M. et al. // J.
Affect. Disord. 2001. Vol. 66. N 1. P. 89-93.