глюкоза www.olvex-d.ru | +7 (812) 412-5185, 412-8380, 412-6546

www.olvex-d.ru
|
+7 (812) 412-5185, 412-8380, 412-6546
глюкоза
Кат. № 005.004 - 200 мл
Кат. № 005.014 - 500 мл
Кат. № 005.034 - 1000 мл
Набор реагентов для определения концентрации глюкозы
в крови энзиматическим колориметрическим методом
с депротеинизацией. Реакция Триндера, GOD-PAP.
Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на 200/500/1000 определений.
Принцип метода
β-D-глюкоза под действием фермента глюкозооксидазы
окисляется
до
D-глюконолактона.
Образующаяся
в данной реакции перекись водорода при участии
фермента пероксидазы способствует окислительному
азосочетанию 4-аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного соединения (хинониминовый
краситель). Интенсивность окраски реакционной среды
пропорциональна содержанию глюкозы в исследуемом
материале
и
определяется
фотометрически.
схема реакции
глюкозооксидаза
β-D-глюкоза + О2 + Н2О _______> глюконовая кислота + Н2О2
пероксидаза
2 Н2О2 + 4-ААР + фенол ______________________>
________> хинониминовый краситель + 4 Н О
2
Исследуемый материал
Капиллярная или венозная кровь человека.
При заборе крови для замедления гликолиза и
предотвращения свертывания использовать пробирки,
содержащие фторид натрия и антикоагулянт. Необходимое
количество крови для исследования необходимо сразу
после забора внести в пробирку с депротеинизирующим
раствором и тщательно перемешать.
Состав набора
Реагент №1. Буфер.
Реагент №2. Лиофилизат.
Реагент №3. Депротеинизатор.
Калибратор – раствор глюкозы 10 ммоль/л.
Подготовка реагентов к процедуре анализа
и их стабильность
Содержимое одного флакона с реагентом №2 растворить
в содержимом одного флакона с реагентом №1
при аккуратном перемешивании. Рабочий реагент готов
к применению через 2 минуты после растворения.
Рабочий реагент стабилен при температуре 2-8°С в
защищенном от света месте в плотно закрытом флаконе
не менее 6 месяцев.
Калибратор готов к использованию. После вскрытия
флакона калибратор стабилен не менее 6 месяцев при
температуре 2-8С.
Невскрытые реагенты стабильны не менее 18 месяцев в
защищенном от света месте при температуре 2-8°С.
Дата изготовления, серия и номер набора по каталогу
указаны на упаковке.
Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после
каждого использования!
Количество определений зависит
от характеристик используемого анализатора
и минимального рабочего объема кюветы.
Подготовка образцов к анализу
ОПЫТНАЯ
ПРОБА
КАЛИБРОВОЧНАЯ
ПРОБА
КОНТРОЛЬНАЯ
(ХОЛОСТАЯ)
ПРОБА
Реагент №3, мкл
250
250
250
Кровь, мкл
25
-
-
Калибратор, мкл
-
25
-
Вода дистиллир., мкл
-
-
25
КОМПОНЕНТЫ
РЕАКЦИОННОЙ СРЕДЫ
Пробы тщательно перемешать и выдержать в течение
10 минут при комнатной температуре (18–25°С), после
чего опытные пробы центрифугировать при 900 g в течение
10 минут. Для дальнейшего анализа использовать
прозрачную надосадочную жидкость. Надосадочную
жидкость опытной пробы можно хранить в герметично
закупоренном флаконе при t 2–8°С не более 5 дней.
Процедура анализа
КОМПОНЕНТЫ
РЕАКЦИОННОЙ СРЕДЫ
ОПЫТНАЯ
ПРОБА
КАЛИБРОВОЧНАЯ
ПРОБА
КОНТРОЛЬНая
(ХОЛОСТАЯ)
ПРОБА
Рабочий реагент, мл
1.0
1.0
1.0
Надосадочная жидкость
опытной пробы, мкл
50
-
-
Надосадочная жидкость
калибровочной пробы, мкл
-
50
-
Надосадочная жидкость
контрольной пробы, мкл
-
-
50
Реакционную смесь тщательно перемешайте и инкубируйте не менее 20 минут при 37°С или 30 минут при комнатной температуре. После окончания инкубации измерьте оптическую плотность опытной и калибровочной проб
против контрольной (холостой) пробы при длине волны
500 нм (490 – 540 нм). Окраска растворов стабильна не
менее 1 часа после окончания инкубации при хранении
проб в защищенном от света месте при комнатной температуре.
расчет
Расчет концентрации глюкозы в крови (С) проведите по
формуле:
Е пробы
С = ____________ x 10 ммоль/л,
Е калибр.
где: Е пробы - оптическая плотность исследуемой пробы,
Е калибр. - оптическая плотность калибровочной пробы,
10 ммоль/л - концентрация глюкозы в калибраторе.
Нормальные ПОКАЗАТЕЛИ
3,50 - 5,70 ммоль/л.
Аналитические характеристики набора
Линейность: 1,0 - 30,0 ммоль/л.
Значение коэффициента вариации - не более 5 %.
ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ:
Бледно-розовая окраска рабочего реагента
с величиной оптической плотности до 0,250 А,
измеренной против дистиллированной воды при
длине волны 500 нм, не влияет на правильность
определения глюкозы в исследуемом образце.
Литература
Trinder P., Ann. clin. Biochem., 1969, vol. 6, p.24.
!