КРЕАТИНИН

www.olvex-d.ru
|
+7 (812) 412-5185, 412-8380, 412-6546
креатинин
Кат. №: 004.008 – 50 мл
Кат. №: 004.018 – 100 мл
Количество определений зависит
от характеристик используемого анализатора
и минимального рабочего объема кюветы.
Набор реагентов для определения содержания креатинина
энзиматическим кинетическим методом в сыворотке,
плазме крови и в моче.
Согласно стандартной процедуре анализа набор рассчитан на 50/100 определений.
тщательно перемешайте и через 1 мин. начните
считывание величины экстинкции с интервалом в 1
мин. в течение 2 минут. Вычислите среднее изменение
экстинкции за 1 минуту (ΔЕ/мин).
автоматические анализаторы
Принцип метода
Креатинин под действием фермента креатининиминогидролазы превращается в метилгидантоин.
Образующийся в данной реакции аммиак при участии
фермента глутаматдегидрогеназы с коферментом
НАДФН2 способствует образованию глутамата из
α-кетоглутарата. Скорость окисления НАДФН2 в ходе второй
реакции определяется по уменьшению оптической
плотности реакционной среды при 340 нм и пропорциональна количеству креатинина.
Длина волны
340 нм
Измерение против
Воздуха/воды
Метод измерения
Кинетика
Изменение оптической плотности
Уменьшается
Температура
Соотношение
образец/реагент/стартовый образец
Разведение исследуемого образца мочи
37°С
Время преинкубации
300 секунд
Время инкубации
60 секунд
Время реакции
60 секунд
4 : 20 : 1
1:49
Верхний предел абсорбции контрольн. пробы 2.000 А
схема реакции
креатининиминогидролаза
Креатинин + Н2О ______________> метилгидантоин + NН4+
глутаматдегидрогеназа
NН4++α-кетоглутарат+НАДФН+Н+ ______________________>
_________> глутамат + НАДФ++Н О
2
Исследуемый материал
Сыворотка или плазма крови.
Липимичная, гемолизированная сыворотка или плазма
крови для анализа не пригодна. Возможно хранение
исследуемого материала при t° 2-8°С в течение суток.
Свежая моча, разведенная в 50 раз (например 0,1 мл мочи
и 4,9 мл дистиллированной воды).
Состав набора
Реагент №1. Буфер.
Реагент №2. Фермент-кофакторный раствор.
Реагент №3. Стартовый реагент.
Калибратор – раствор креатинина 177 мкмоль/л.
Подготовка реагентов к процедуре анализа
и их стабильность
Рабочий реагент:
Перед проведением анализа смешайте необходимые
количества реагентов №1 и №2 в соотношении 4:1.
Рабочий реагент стабилен при t 2-8°С в защищенном от
света месте в плотно закрытом флаконе 14 дней.
Все реагенты стабильны в течение 6 месяцев при t 2-8°С.
Реагенты №1, №2 и №3 готовы к применению. Дата
изготовления, серия и номер набора по каталогу указаны
на упаковке.
Тщательно закрывайте флаконы с реагентами после
каждого использования!
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
Исследование проводите непосредственно в термостатируемой 37°С фотометрической кювете с длиной
оптического пути 1 см при длине волны 340 нм против
воздуха. Смешайте 1 мл рабочего реагента и 0,2 мл
анализируемого материала или калибратора. Через
5 минут добавьте 0,05 мл стартового реагента №3,
Нижний предел абсорбции контрольн. пробы 0.950 А
Максимально допустимое изменение
0.625 А
оптической плотности/мин
Калибратор
177 мкмоль/л
Линейность (сыворотка/плазма крови)
до 880 мкмоль/л
Линейность (моча)
до 37 ммоль/л
Если концентрация креатинина превышает 880 мкмоль/л
в сыворотке или 37 ммоль/л в моче, разведите сыворотку
или разведенную мочу в 5 раз физиологическим раствором и повторите определение (результат умножьте на 5).
расчет
Расчитайте концентрацию (С) креатинина по формулам:
1. Сыворотка, плазма крови:
ΔЕ пробы
С = __________________ х 177 мкмоль/л
ΔЕ калибр.
2. Моча:
ΔЕ пробы
177
ΔЕ пробы
С = ____________ х 50 х _____ = ____________ х 8,85 ммоль/л
ΔЕ калибр.
1000
ΔЕ калибр.
или
ΔЕ пробы
С = __________________ х 8,85 х V ммоль/сутки
ΔЕ калибр.
где: ΔЕ пробы – изменение оптической плотности
исследуемой пробы, ΔЕ калибр. – изменение оптической
плотности калибровочной пробы, 177 мкмоль/л –
концентрация креатинина в разведенном калибраторе,
50 – разведение мочи, 1000 – перевод в ммоль/л,
V – объем суточной мочи, л.
Нормальные ПОКАЗАТЕЛИ
Сыворотка/плазма:
Женщины – 53-97 мкмоль/л, мужчины – 61-115 мкмоль/л.
Моча: 4,4 - 17,7 ммоль/в сутки
Аналитические характеристики НАБОРА
Линейность - сыворотка/плазма до 880 мкмоль/л, моча до
37 ммоль/л. Воспроизводимость: коэффициент вариации
не более 5%.
Литература
Prenciple L.,Tanganelli E., et al.: Clin. Chem. 28/7, 1461 (1982).