Для анализа использовался масс

Application Note:AN 117A
Aнализ панели стероидов с помощью тройного
квадрупольного масс-спектрометра IONICS 3Q 220
Краткая характеристика метода:
 Тройной квадрупольный масс-спектрометр IONICS 3Q
220 использовался для анализа панели 9 стероидов.
 Тестостерон, прогестерон, 17-OH-прогестерон,
дезоксикортикостерон, кортикостерон, 11дезоксикотизол, дегидроэпиандростерон (ДГЭА), 17-OHпрегненолон, аллопрегнанолон проанализированы в MRM
режиме.
 Нижние пределы определения всех соединений
находятся на уровне пг/мл.
 Точность анализа находится в пределах 91-106%
1. Введение
Стероидные
гормоны
регулируют
метаболизм,
нейротрансмиссию, внутриклеточную передачу сигналов
и многое другое. Контроль этих гормонов в организме
позволяет получить значительные положительные
эффекты при предотвращении судорог, онкологических
заболеваний и нарушений репродуктивной функции.
Количественное определение большой группы стероидов
в одном и том же образце биологической жидкости
позволяет проводить быстрое определение веществ как
для применения в клинике, так и для исследовательских
целей.
Добиться высокой чувствительность для всех стероидов
чрезвычайно трудно ввиду отличающихся условий
ионизации каждого отдельного вещества. Однако
применение масс-спектрометра IONICS 3Q 220 позволяет
успешно решить эту задачу.
2. Метод
Цель данной заметки - показать возможности
ВЭЖХ/МС/МС метода для анализа панели стероидов в
биологичеслой матрице при использовании массспектрометра IONICS 3Q 220.
Стандартные растворы были приготовлены в сыворотке
крови человека в различных концентрациях (Таблица
3). Каждый образец анализировался 5 раз. Точность
анализа определялась как средняя величина разницы
между обнаруженной и номинальной концентрацией для
всех точек калибровочной кривой. CV определялось для
5
инжекций
стандартного
раствора
каждой
концентрации.
2.1 Параметры масс-спектрометра
Для анализа использовался масс-спектрометр IONICS
3Q 220 в положительном ESI режиме.
Таблица 1: Параметры масс-спектрометра
Напряжение ESI (В)
Температура HSID (oC)
Газ-распылитель
Газ-осушитель
Газ-нагреватель
Температура источника (oC)
Время задержки (ms)
Пауза (мс)
5500
350
350
120
350
350
100
5
Таблица 2: MRM переходы
Тестостерон
289.2/97.1
289.2/109.1
Прогестерон
315.1/97.1
315.1/109.1
17-OH-Прогестерон
331.0/97.1
331.0/109.1
Дезоксикортикостерон
331.0/97.1
331.0/109.1
Кортикостерон
347.2/121.1
-
11-Дезоксикортизол
347.2/97.1
347.2/109.1
ДГЭА
253.0/197.0
-
17-OH-прегненолон
315.2/279.2
-
Аллопрегненалон
301.1/135.1
-
2.2 Условия хроматографирования
Хроматографирование проводилось с использованием
системы Shimadzu Prominence HPLC, при объеме
инжектируемой пробы 10 мкл на колонке Kinetex C18
(2.1x50 мм, 2.7 мкм) и скорости подвижной фазы 0.5
мл/мин. Состав подвижной фазы: растворитель А MeOH/H2O (5/95) с 5 мМ ацетата аммония и 0.1%
муравьиной кислоты; растворитель B - MeOH/H2O (95/5)
с 5 мМ ацетат аммония и 0.1% муравьиной кислоты.
Application Note:AN 117A
3. Результаты
3.2 Линейность калибровочной кривой
Таблица 3: Результаты анализа панели стероидов
Вещество
LLOQ
(нг/мл)
Точность
(%)
CV
(%)
Тестостерон
0.0024
101
13
Диапазон
калибров
ки
(нг/мл)
0.0024-10
Прогестерон
0.0024
96
7
0.0024-5
17-ОН-Прогестерон
0.0012
96
17
0.0012-10
Деоксикортикостерон
0.0024
97
5
0.0024-20
Кортикостерон
0.025
104
15
0.025-25
11-деоксицортизол
0.0048
106
12
0.0048-10
ДГЭА
0.098
98
9
0.050-25
17-ОН-Прегненолон
0.025
91
18
0.025-50
Аллопрегненолон
0.025
100
17
0.025-100
Все анализируемые вещества дают
линейную
калибровочную кривую в измеряемом интервале
концентраций
с
точностью
и
прецизионностью
удовлетворяющими
требованиям, предъявляемым к
биоанализу, даже без использования внутренних
стандартов. На рисунках 5 и 6
представлены
полученные результаты, полученные для калибровочных
кривых
тестостерона и ДГЭА. Они являются
репрезентативными для всей панели стероидов.
Рисунок 5: Калиброчная кривая для тестостерона
(289.2/97.1)
3.1 Экстрагированные ионные
хроматограммы (EICs)
На рисунках 1-4 представлены EICs тестостерона,
прогестерона,
ДГЭА,
и
11-деоксикортизола
соответственно. Концентрация всех соединений в
биологической матрице на преставленных рисунках
равна 0.01 нг/мл.
Рисунок 1: EIC тестостерона в матрице.
Рисунок 6: Калибровочная кривая для ДГЭА
(253.1/197.1)
Рисунок 2: EIC прогестерона в матрице.
4. Выводы
Рисунок 3: EIC ДГЭА в матрице.
Рисунок 4:EIC 11-деоксикортизола в матрице.
Масс-спектрометр IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer
обладает чувствительностью, позволяющей определять
стероиды в биологической матрице на уровне пг/мл.
Такая высокая чувствительность может быть достигнута
при совместном анализе андрогенов, глюкокортокоидов
и прогестагенов в одной пробе. Таким образом, прибор
дает возможность определять панель стероидов,
используя всего один метод анализа. При использовании
модели IONICS 3Q 220, которая поставляется
оборудованной источником Torrent Multi-Option Dual
Source™ значительно повышается производительность,
что
позволяет
высокозагруженным
лабораториям
достичь высокого качества результатов в сжатые сроки
и сэкономить время и ресурсы при получении большого
массива данных.
5. Контактная информация
Если Вы хотите получить дополнительную информацию о
приборах класса IONICS, наших продуктах и сервисе, посетите
наш вебсайт или обращайтесь к нашим представителям.
Контакты:
ООО «БиоФармЭксперт»,
т. +7-915-180-5909
[email protected]