Высокочувствительное прямое определение тироидных ВЭЖХ/МС/МС

Техническая заметка AN121
Высокочувствительное прямое определение тироидных
гормонов Т3 и Т4 в сыворотке крови с помощью метода
ВЭЖХ/МС/МС



Краткое описание технической заметки:
Представлен метод быстрого и чувствительного определения трииодотиронина и
тироксина в сыворотке крови с помощью тройного квадрупольного массспектрометра IONICS 3Q 320
Нижний предел количественного определения обоих соединений при использовании
IONICS 3Q 320 составляет менее 0.78 пг/мл
Линейность калибровочной кривой соблюдается в интервале 0.78 пг/мл – 4,000 пг/мл
время анализа менее 4 минут
1. Введение:
Тироидные гормоны 3,3’,5 трииодотиронин и тироксин (T3 и T4 соответственно) являются эндогенными
гормонами и играют важную роль во многих биологических процессах, включая метаболизм углеводов,
потребление кислорода и синтез белков.
Определение тироидных гормонов необходимо при диагностике гипер- и гипотироидизма и требует высокой
специфичности и чувствительности, которые не могут обеспечить иммунные методы. В последние годы
применение ВЭЖХ/МС/МС для анализа низких концентраций Т3 и Т4 продемонстрировало преимущества этого
метода по сравнению с иммуными методами благодаря более высокой селективности и чувствительности
определения. Применение
ВЭЖХ/МС/МС метода с использованием тройного квадрупольного массспектрометра IONICS 3Q 320 позволяет не только существенно повысить специфичность и чувствительность
определения этих гормонов, но и значительно упрощает пробоподготовку.
2. Метод
2.1 Пробоподготовка
Маточные растворы Т3 и Т4 концентрацией 100 мкг/мл готовились в метаноле с добавлением 0.1N NH3.
Сыворотка крови человека использовалась в качестве матрицы. Маточные растворы T3 и T4 вносились в
сыворотку крови. Маточные растворы T3 и T4 вносились в сыворотку крови для получения аналитического
раствора концентрацией 10 нг/мл, который затем последовательно разбавлялся для получения растворов для
построения калибровочной кривой. Внутренний стандарт не применялся.
2.2 Параметры масс-спектрометра
Для анализа T3 и T4 применялся масс-спектрометр IONICS 3Q 320 с источником ионов с электрораспылением.
Использовались следующие параметры масс-спектрометра:
Напряжение ESI = -5,000 В; HSID = 300 ºС;
Газ-распылитель = 200; Газ-осушитель = 120;
Газ-нагреватель = 350; Температура источника = 325 ºС.
Компонент
Т3
Т4
MRM
649.7/127.0
775.7/127.0
CE
50
49
CCL2
86
164
CCL4
82
73
2.3 Хроматографические условия
Анализ тироидных гормонов проводился с использованием тройного квадрупольного масс-анализатора IONICS
3Q-320 подсоединенного к ВЭЖХ системе Shimadzu UFLC. Использовалась колонка Waters Xbridge C18 column
(100 x 2.1 mm, 3.5µm) при температуре хроматографирования 40 ºC с градиентом подвижной фазы: растворитель
Б (0.1% муравьиной кислоты и 2 мМ ацетата аммония в ацетонитриле), растворитель А: 0.1% муравьиной
кислоты и 2 мМ ацетата аммония в 2 %-м ацетонитриле. Время цикла 6 мин при скорости подвижной фазы 60
мкл/мин.
Техническая заметка AN121
3. Результаты
Рис 1. Отсутствие эффекта памяти для Т3 и Т4
На рисунке 1 показаны результаты эксперимента по
отсутствию эффекта памяти для Т3 и Т4.
Компоненты хорошо разделяются в выбранных
условиях хроматографирования. На рисунке 1
красной линией представлена хроматограмма 500
мкг/мл Т3 и Т4.
Зеленой
линией
представлена
увеличенная
хроматограмма растворителя, проанализированного
сразу же после образца Т3 и Т4. Перенос веществ.
как видно из рисунка, не происходит.
Предел обнаружения для Т3 и Т4 составил менее 0,7 пг/мл ( Рис 2.a и 2.b)
3.2 Линейность
Калибровочная кривая Т3 и Т4 в сыворотке крови линейна в динамическом диапазоне 0.78-4000 пг/мл
Нижний предел количественного определения обоих веществ в сыворотке 0.78 пг/мл при CV 14.4% и
точности 117.3% (Рис. 3).
Рис. 3. Калибровочная кривая Т3 в сыворотке крови человека
Рис. 4. Калибровочная кривая Т4 в сыворотке крови человека
4. Заключение
Применение тройного квадрупольного масс-спектрометра IONICS 3Q 320 позволило разработать
селективный и высокочувствительный метод определения низких концентраций тироидных гормонов в
сыворотке крови человека. Нижний предел количественного определения Т3 и Т4 составляет 0,78 пг/мл. Анализ
контрольных образцов Т3 и Т4 демонстрирует высокую точность и воспроизводимость анализа низких
концентраций при минимальной пробопорготовке, которые могут быть достигнуты с применением массанализатора IONICS 3Q 320 при ВЭЖХ/МС/МС анализе тироидных гормонов.
5. Контактная информация
Для того, чтобы узнать больше о масс-спектрометрах,
услугах и других продуктах компании IONICS Вы можете
посетить веб-сайт www.ionics.ca или связаться с представителями
компании напрямую.
Контакты:
ООО «БиоФармЭксперт»,
т. +7-915-180-5909
sales@biopharmexpert.com