Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при время индукционной терапии по протоколу
advertisement
А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Г.А. Цаур, Е.В. Шориков, С.В. Цвиренко, Л.И. Савельев, Л.Г. Фечина Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при В-линейном остром лимфобластном лейкозе у детей во время индукционной терапии по протоколу ALL-MB-2008 Областная детская клиническая больница №1, Екатеринбург Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург «Национальные дни лабораторной медицины России», 4-6 октября 2011, Москва Минимальная остаточная болезнь (minimal residual disease, MRD) – состояние, обусловливающее развитие рецидива и связанное с сохранением опухолевых клеток в крайне низких концентрациях, ниже предела чувствительности морфологических методов Относительное количество опухолевых клеток 1 10-1 Предельная чувствительность цитологического исследования 10-2 10-3 10-4 10-5 Предельная чувствительность проточной цитометрии и ПЦР 10-6 10-7 0 0 1 Терапия 2 3 4 5 Время наблюдения (годы) Основные методы мониторинга MRD Количественная полимеразная цепная реакция Определение химерного гена Определение химерного транскрипта Определение клональных перестроек генов тяжелых цепей ИГ и ТкР Многоцветная проточная цитометрия Применение проточной цитометрии для мониторинга MRD Определение лейкозассоциированного иммунофенотипа (LAIP) Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во время терапии G. Gaipa et al, Leukemia, 2005 A.J. van der Sluijs-Gelling et al, Leukemia, 2005 G. Gaipa et al, Leukemia, 2005 M. Borowitz et al, Cytometry B, 2005 G. Gaipa et al, Cytometry B, 2008 M.N. Dworzak et al, Blood, 2008 M.N. Dworzak et al, Cytometry B, 2010 Цель исследования – оценить изменения экспрессии опухолевыми клетками CD10, CD34, CD19, CD20, CD45 и CD58 на 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 и значимость этих изменений для мониторинга MRD Пациенты и методы исследования 22 пациента с CD10(+) BCP-ALL и величиной MRD на 15-й день терапии > 0,01% 9-цветная проточная цитометрия (FACS Aria, BD): CD58 (AICD58-FITC, BC) CD11a (LFA-1-PE, BD) CD34 (581-PE-TexasRed, BC) CD38 (HIT2-PerCP-Cy5.5, BD) CD10 (HI10a-PE-Cy7, BD) CD19 (SJ25C1-APC, BD) CD20 (L27-APC-Cy7, BD) CD45 (2D1-AmCyan, BD) Syto 41 (Invitrogen) Оценивали: Среднюю интенсивность флюоресценции (MFI) Коэффициент вариации (CV) Долю позитивных клеток (%) Выделение опухолевых клеток SSC CD10 Syto 41 Опухолевые клетки CD45 Обратное гейтирование Ядросодержащие клетки SSC SSC CD19 FSC CD19(+)-клетки Нормальное созревание В-лимфоцитов CD34 CD10 CD20 BCP 1 CD45 BCP 2 TdT CD99 CD38 BCP 3 Зрелые В-лимфоциты CD44 CD11a CD58 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) CD10 p = 0,0030 CD19 p = 0,0033 CD20 CD34 p = 0,0273 p = 0,0007 CD45 CD58 p = 0,0001 p = 0,0017 Изменения иммунофенотипа (В-лимфоциты) CD20 CD19 p = 0,0013 p = 0,1060 CD45 CD58 p = 0,0130 p = 0,0067 15-й день CD10 Диагноз Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) CD45 CD34 CD58 15-й день CD10 Диагноз Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) CD19 CD45 CD20 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) изменения распределения клеток CD20 CD10 p = 0,1913 CD34 p = 0,0364 p = 0,0008 CD45 CD58 p = 0,0003 p = 0,3443 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) 15-й день Диагноз изменения распределения клеток MFI = 168529 CV = 39.9% MFI = 13379 CV = 53.8% MFI = 245 CV = 118.9% MFI = 37724 CV = 70.8% MFI = 2912 CV = 149.3% MFI = 1318 CV = 56.4% CD10 CD34 CD45 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) изменения доли позитивных клеток CD20 CD34 p = 0,0015 p = 0,0003 CD45 p = 0,0002 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки) Диагноз изменения доли позитивных клеток 87,4% 15-й день CD10 24,5% 20,4% 90,7% 18,2% 84,8% CD20 CD45 CD34 Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во время индукционной терапии CD10 CD20 p = 0,0071 p = 0,0069 CD19 CD45 CD34 p = 0,0001 CD58 p = 0,0001 p = 0, 2117 p = 0,0005 Michael N. Dworzak, Angela Schumich, Dieter Printz, Ulrike Pötschger, Zvenyslava Husak, Andishe Attarbaschi, Giuseppe Basso, Giuseppe Gaipa, Richard Ratei, Georg Mann and Helmut Gadner CD20 up-regulation in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia during induction treatment: setting the stage for anti-CD20 directed immunotherapy Blood, 2008, Vol. 112, p. 3982-3988 CD10 Пациент Б. (14 лет) День 0 День 15 День 36 перед HRI перед HRV перед HRIV перед HRIII перед HRII CD20 Пациент С. (11 месяцев) CD10 День 36 День 0 День 15 День 85 День 43 CD20 Выводы На 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 происходят существенные изменения иммунофенотипа опухолевых клеток Основными тенденциями изменения иммунофенотипа опухолевых клеток являются снижение экспрессии CD10, CD34, CD58 и повышение экспрессии CD19, CD20, CD45 Изменения иммунофенотипа усложняют мониторинг МОБ, так как уменьшают различия между нормальными и опухолевыми клетками Благодарю за внимание!
