Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при время индукционной терапии по протоколу

реклама
А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Г.А. Цаур, Е.В. Шориков, С.В. Цвиренко,
Л.И. Савельев, Л.Г. Фечина
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при
В-линейном остром лимфобластном лейкозе у детей во
время индукционной терапии по протоколу
ALL-MB-2008
Областная детская клиническая больница №1, Екатеринбург
Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург
Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург
«Национальные дни лабораторной медицины России», 4-6 октября 2011, Москва
Минимальная остаточная болезнь
(minimal residual disease, MRD) –
состояние, обусловливающее
развитие рецидива и связанное с
сохранением опухолевых клеток в
крайне низких концентрациях,
ниже предела чувствительности
морфологических методов
Относительное количество опухолевых клеток
1
10-1
Предельная
чувствительность
цитологического
исследования
10-2
10-3
10-4
10-5
Предельная
чувствительность
проточной цитометрии
и ПЦР
10-6
10-7
0
0
1
Терапия
2
3
4
5
Время наблюдения (годы)
Основные методы мониторинга MRD
Количественная полимеразная
цепная реакция
Определение химерного гена
Определение химерного транскрипта
Определение клональных перестроек генов
тяжелых цепей ИГ и ТкР
Многоцветная проточная
цитометрия
Применение проточной
цитометрии для мониторинга
MRD
Определение лейкозассоциированного
иммунофенотипа (LAIP)
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во
время терапии
 G. Gaipa et al, Leukemia, 2005
 A.J. van der Sluijs-Gelling et al, Leukemia, 2005
 G. Gaipa et al, Leukemia, 2005
 M. Borowitz et al, Cytometry B, 2005
 G. Gaipa et al, Cytometry B, 2008
 M.N. Dworzak et al, Blood, 2008
 M.N. Dworzak et al, Cytometry B, 2010
Цель исследования – оценить изменения
экспрессии опухолевыми клетками CD10,
CD34, CD19, CD20, CD45 и CD58 на 15-й день
терапии по протоколу ALL-MB-2008 и
значимость этих изменений для мониторинга
MRD
Пациенты и методы исследования
 22 пациента с CD10(+) BCP-ALL и величиной MRD на 15-й день
терапии > 0,01%
 9-цветная проточная цитометрия (FACS Aria, BD):









CD58 (AICD58-FITC, BC)
CD11a (LFA-1-PE, BD)
CD34 (581-PE-TexasRed, BC)
CD38 (HIT2-PerCP-Cy5.5, BD)
CD10 (HI10a-PE-Cy7, BD)
CD19 (SJ25C1-APC, BD)
CD20 (L27-APC-Cy7, BD)
CD45 (2D1-AmCyan, BD)
Syto 41 (Invitrogen)
 Оценивали:



Среднюю интенсивность флюоресценции (MFI)
Коэффициент вариации (CV)
Долю позитивных клеток (%)
Выделение опухолевых клеток
SSC
CD10
Syto 41
Опухолевые
клетки
CD45
Обратное
гейтирование
Ядросодержащие
клетки
SSC
SSC
CD19
FSC
CD19(+)-клетки
Нормальное созревание В-лимфоцитов
CD34
CD10
CD20
BCP 1
CD45
BCP 2
TdT
CD99
CD38
BCP 3
Зрелые
В-лимфоциты
CD44
CD11a
CD58
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD10
p = 0,0030
CD19
p = 0,0033
CD20
CD34
p = 0,0273
p = 0,0007
CD45
CD58
p = 0,0001
p = 0,0017
Изменения иммунофенотипа (В-лимфоциты)
CD20
CD19
p = 0,0013
p = 0,1060
CD45
CD58
p = 0,0130
p = 0,0067
15-й день
CD10
Диагноз
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD45
CD34
CD58
15-й день
CD10
Диагноз
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
CD19
CD45
CD20
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
изменения распределения клеток
CD20
CD10
p = 0,1913
CD34
p = 0,0364
p = 0,0008
CD45
CD58
p = 0,0003
p = 0,3443
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
15-й день Диагноз
изменения распределения клеток
MFI = 168529
CV = 39.9%
MFI = 13379
CV = 53.8%
MFI = 245
CV = 118.9%
MFI = 37724
CV = 70.8%
MFI = 2912
CV = 149.3%
MFI = 1318
CV = 56.4%
CD10
CD34
CD45
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
изменения доли позитивных клеток
CD20
CD34
p = 0,0015
p = 0,0003
CD45
p = 0,0002
Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)
Диагноз
изменения доли позитивных клеток
87,4%
15-й день
CD10
24,5%
20,4%
90,7%
18,2%
84,8%
CD20
CD45
CD34
Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во
время индукционной терапии
CD10
CD20
p = 0,0071
p = 0,0069
CD19
CD45
CD34
p = 0,0001
CD58
p = 0,0001
p = 0, 2117
p = 0,0005
Michael N. Dworzak, Angela Schumich, Dieter Printz, Ulrike Pötschger,
Zvenyslava Husak, Andishe Attarbaschi, Giuseppe Basso, Giuseppe Gaipa,
Richard Ratei, Georg Mann and Helmut Gadner
CD20 up-regulation in pediatric B-cell precursor
acute lymphoblastic leukemia during induction
treatment: setting the stage for anti-CD20 directed
immunotherapy
Blood, 2008, Vol. 112, p. 3982-3988
CD10
Пациент Б. (14 лет)
День 0
День 15
День 36
перед HRI
перед HRV
перед HRIV
перед HRIII
перед HRII
CD20
Пациент С. (11 месяцев)
CD10
День 36
День 0
День 15
День 85
День 43
CD20
Выводы
 На 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 происходят
существенные изменения иммунофенотипа опухолевых клеток
 Основными тенденциями изменения иммунофенотипа
опухолевых клеток являются снижение экспрессии CD10, CD34,
CD58 и повышение экспрессии CD19, CD20, CD45
 Изменения иммунофенотипа усложняют мониторинг МОБ, так
как уменьшают различия между нормальными и опухолевыми
клетками
Благодарю за внимание!
Скачать