(1)Дифференциация поверхностных загрязнений и минорных содержаний

(1)Дифференциация поверхностных
загрязнений и минорных содержаний
психоактивных веществ в волосах и срезах
ногтевых пластин
при совместном применении методов ГХ-МС
и ВЭЖХ-МС/МС
(2) Контроль правильности при определении
следовых содержаний каннабимиметиков в
крови методом ВЭЖХ-МС/МС
д.х.н. Савчук С.А.
ФГБУ ФМИЦПН МЗ
Взаимодействие ХТЛ и экспертных служб ФСКН
Газовая хроматография с масс-селективным детектированием
(Маэстро МСД)
Высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемным
трехквадрупольным масс-селективным детектированием
(QQQ Agilent 6460).
Высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-селективным
детектированием в полном сканированиии продукт-ионов
(Bruker Toxtuper)
Подготовка проб мочи, волос, срезов ногтевых
пластин




Поверхность волос и ногтей отмывают метанолом,
смывы анализируют. Волосы и ногти измельчают.
Отмытые от загрязнений измельченные волосы и
ногти подвергают ферментному или химическому
гидролизу с дальнейшей твердофазной очисткой и
анализом.
Альтернативный вариант пробоподготовки волос и
ногтей: извлечение в метанол при ультразвуковой
обработке с последующей твердофазной очисткой.
Пробы мочи гидролизуют, экстрагируют смесью
растворителей или подвергают твердофазной
экстракции с последующей дериватиизацией
(химической модификацией для улучшения
хроматографических свойств). 1 мкл экстракта
вводят в хроматограф
Результаты исследования волос на наркотические вещества
(образцы Якутск)
Образцы волос получены из ГБУ Республики Саха (Якутия) «Якутский
республиканский наркологический диспансер», нарпавление от 07 апреля 2014 г.
1
С-а Т.А.
«соли»: метилендиоксипировалерон (MDPV)/
спайсы: THJ-2201
2
Т-ян Г.Г.
«соли»:пирролидинвалерофенон (PVP),
метилендиоксипировалерон (MDPV).
3
Г-юк Т.В.
«соли»:пирролидинвалерофенон (PVP),
метилендиоксипировалерон (MDPV).
спайсы: JWH-018, TMCP-2201, THJ-2201
4
К-ва С.Н.
«соли»:пирролидинвалерофенон (PVP),
метилендиоксипировалерон (MDPV).
спайсы: TMCP-2201
5
Ш-ев К.А.
Тетрагидроканнабинол, каннабидиол, касннабинол, 3пропилканнабинол
6
Ж-оев У.Т.
Не обнаружено
ГХ-МС-DOAS «волосы №3» Якутск
500(0.5мин)
700/мин,1000(0.8мин), 150/мин,2800(30мин)
Надежная AMDIS идентификация «легких»
компонентов: PVP, MDPV
ГХ-МС-SCREEN «волосы №3» Якутск
1000/(1 мин), 350/мин,3000(30мин)
Надежная AMDIS идентификация «тяжелых»
компонентов: JWH-018
Bruker TOXTYPER_pos «волосы 3» Якутск дополнительно
идентифицирован JWH-122-5-fluoropentyl (MAM-2201)
Bruker TOXTYPER_pos волосы Якутск, THJ-2201
Agilent 6460 QQQ TMCP-2201, THJ-2201 волосы
Якутск
Bruker TOXTYPER_pos волосы Якутск JWH-018,
CE 15, 20
Подтверждение Agilent 6460 QQQ волосы
Якутск JWH-018, CE 15, 20
Bruker TOXTYPER_pos волосы Якутск JWH-1225-fluoropentyl (MAM-2201)
Agilent 6460 QQQ «волосы 3» Якутск
спектр ??JWH-122-5-fluoropentyl (MAM-2201)
Контроль правильности при
определении следовых
содержаний (1-25 нг/мл)
каннабимиметиков в крови
методом ВЭЖХ-МС/МС
Agilent 6460 QQQ
Исследование проб «А»
(аликвоты 1)
крови и мочи от трупа
Объект исследования,
предварительные результаты


Кровь и моча от трупа
военнослужащего, подозреваемого в
употреблении наркотических веществ.
Предварительный анализ, проведенный
методами ГХ-МС и ВЭЖХ-МС/МС
(Toxtyper Bruker) показал отсутствие
психоактивных веществ в крови и моче.
Подготовка пробы крови
К 0.8 мл плазмы или цельной крови
добавляют высаливатель 0.5 г, 200 мг
твердого буфера (карбонатбикарбонатного 1:2), 0.8 мл
ацетонитрила, vortex 30 сек,
центрифугирование при 15 об/мин 3
мин. Надосадочный слой (5 мкл) вводят
в хроматограф.
Подготовка проб мочи






Гидролиз: к 3 мл мочи добавляют 0.5 мл 5N раствора
NaOH, выдерживают при 500С в течение 20 минут.
Экстракция: в пробирку вносят 3 мл мочи или
гидролизата мочи.
гидролизат подкисляют до рН 2-3 добавлением 250350 мкл конц. соляной кислоты,
экстрагируют 3 мл смеси изооктан-этилацетат 7:1 на
орбитальном шейкере 5 мин,Экстрагируют 10 мин на
орбитальном шейкере.
центрифугируют при 3000 об/мин 5 мин.
отделяют органический слой, переносят в
металлический колпачок TOX-LAB для упаривания и
упаривают в токе горячего воздуха (экстракт не
пересушивать, прекращать упаривание сразу после
исчезновения жидкой фазы). К упаренному экстракту
добавляют 500 мкл ацетонитрила, встряхивают на
вибромиксере 2-3 сек и анализируют.
Контроль чувствительности в режиме MRM
Стандарт – резерпин в ацетонитриле 25 нг/мл
Контроль чувствительности в режиме FULL
SCAN продукт-ионов, прекурсор m/z 609.
Стандарт – резерпин в ацетонитриле 25 нг/мл
Контроль фона прибора в режиме MRM
(показаны ионы AB-Chm M, m/z 358 >145,
358>312, 358>241 )
Анализ пробы крови от трупа,
показаны профили соответствующие AB-Chm M
(COOH), 7.55 min , m/z 358 >145, 358>312,
358>241
Кровь от трупа, full scane product ion, precursor m/z 358. ABChminaca metab. (COOH) 7.57 min
Collision 10 v
full scane product ion, precursor m/z 358
Standard spectra
AB-Chminaca metab. (COOH) Collision 15 v
Анализ пробы мочи от трупа,
показаны профили соответствующие AB-Chm M
(COOH), 7.55 min , m/z 358 >145, 358>312,
358>241
Моча от трупа, full scane product ion, precursor m/z 358.
AB-Chminaca metab. (COOH) 7.57 min
full scane product ion, precursor m/z 358,
Collision energy (CID) 17 v.
Время удерживания соответствует,
спектр не соответствует библиотечному
Исследование проб «В»
(аликвоты 2)
крови и мочи
от трупа
Добавили пробы “blank”
Контроль чувствительности в режиме MRM и в
режиме FULL SCAN продукт-ионов, прекурсор
m/z 609. Стандарт – резерпин в ацетонитриле
25 нг/мл
Контроль фона прибора в режиме MRM
(показаны ионы AB-Chm M, m/z 358 >145,
358>312, 358>241 )
Анализ пробы крови “BLANK 1” (показаны
профили соответствующие AB-Chm M (COOH),
7.55 min , m/z 358 >145, 358>312, 358>241 )
Анализ пробы крови “BLANK 2” (показаны
профили соответствующие AB-Chm M (COOH),
7.55 min , m/z 358 >145, 358>312, 358>241 )
Анализ пробы крови от трупа,
показаны профили соответствующие AB-Chm M
(COOH), 7.55 min , m/z 358 >145, 358>312,
358>241
Кровь от трупа, full scane product ion, precursor m/z 358.
AB-Chminaca metab. (COOH) 7.57 min
Collision 15 v
full scane product ion, precursor m/z 358
Standard spectra
AB-Chminaca metab. (COOH) Collision 15 v
Кровь от трупа, full scane product ion, precursor m/z 358. ABChminaca metab. (COOH) 7.57 min
Collision 10 v
full scane product ion, precursor m/z 358
Standard spectra
AB-Chminaca metab. (COOH) Collision 15 v
Анализ пробы крови “BLANK 1” и “BLANK 1”
(показаны профили соответствующие AB-Chm M
(COOH), 7.55 min , m/z 358 >145, 358>312,
358>241 ) Результат отрицательный
Моча “BLANK1”
Моча “BLANK2”
Высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-селективным
детектированием в полном сканированиии продукт-ионов
(Bruker Toxtuper)
AB-PINACA-F metab.,purity 91.3%, но визуально не удовлетворяет
критериям идентификации по соотношению минорных фрагментов,
время удерживания не совпадает на 0.1 мин,
часто присутствует в пробах «blank»
Диаграмма 1. Профиль веществ, обнаруженных в смывах и
экстрактах волос пациента Б-ва. По оси Y даны интенсивности
хроматографического пика по базовому иону
Диаграмма 2. Профиль веществ, обнаруженных в смывах и
экстрактах срезов ногтевых пластин с пальцев рук пациента Б-ва.
По оси Y даны интенсивности хроматографического пика по
базовому иону
Диаграмма 3. Профиль веществ, обнаруженных в смывах и
экстрактах срезов ногтевых пластин с пальцев рук пациента Б-ва.