ЛЕПТОСПИРОЗ

ЛЕПТОСПИРОЗ
Лептоспироз животных
Лептоспироз (синонимы: болезнь Васильева-Вейля,
инфекционная желтуха, японская 7-дневная лихорадка,
водная лихорадка, покосно-луговая лихорадка, собачья
лихорадка и др. (leptospirosis, Weits disease, canicol
fever – англ.) - острая инфекционная болезнь,
вызываемая различными серотипами лептоспир,
характеризуется лихорадкой, симптомами общей
интоксикации, поражением почек, печени, нервной
системы. При тяжелых случаях наблюдается желтуха,
геморрагический синдром, острая почечная
недостаточность и менингит.
Leptospira
Возбудитель относится к роду Leptospira,
включающий в себя только один вид
Leptospira interrogans. Вид подразделяется
на два комплекса - паразитический
(Interrogans) и сапрофитный (Biflexa). В каждом комплексе по антигенным свойствам
выделяются серотипы, в настоящее время
известно около 200 патогенных серотипов и
около 60 - сапрофитных. Серотипы с общими антигенами объединяют в серологические группы. Патогенные серотипы
объединены в 23 серогруппы.
Источник инфекции:
Источниками инфекции являются
различные животные - лесная
мышь, полевка, водяные крысы,
землеройки, крысы, собаки, свиньи,
крупный рогатый скот и др.
Человек, больной лептоспирозом,
источником инфекции не является.
Факторы передачи инфекции:
• Передача инфекции у животных происходит
через воду и корм.
• Заражение человека чаще всего
происходит при контакте кожи и слизистых
оболочек с водой, загрязненной выделениями
животных (при купании).
•
Употребление продуктов питания, кормов,
загрязнённых экскрементами грызунов.
•
Заболевание носит профессиональный
характер.
•
•
•
•
Патогенез болезни
Воротами инфекции чаще является кожа. Для проникновения лептоспир
достаточно малейших нарушений целостности кожи. В связи с этим заражение
наступает даже при кратковременном контакте с водой, содержащей
лептоспиры. Возбудитель может проникать также через слизистые оболочки
органов пищеварения и конъюнктиву глаз. Дальнейшее продвижение лептоспир
происходит по лимфатическим путям. Ни в лимфатических сосудах, ни в
регионарных лимфатических узлах воспалительных явлений не развивается.
Барьерная роль лимфатических узлов выражена слабо. Лептоспиры легко их
преодолевают и заносятся в различные органы и ткани, в которых происходит
размножение и накопление лептоспир. По времени это совпадает с
инкубационным периодом (от 4 до 14 дней).
Начало болезни (обычно острое) связано с массивным поступлением
лептоспир и их токсинов в кровь (первые 2 недели – до 30 дней)
Вторичная массивная бактериемия приводит к обсеменению различных
органов, где продолжается размножение возбудителей. Лептоспиры, их токсины
и продукты обмена приводят к выраженной интоксикации, которая особенно
быстро нарастает в первые 2-3 дня от начала болезни. Лептоспиры обладают
гемолизином, что приводит к разрушению (гемолизу) эритроцитов.
Особое место в патогенезе лептоспироза занимает поражение почек. В
большинстве случаев летальные исходы связаны с развитием острой почечной
недостаточности (уремическая кома). Она возникает в результате
непосредственного действия лептоспир и их токсических продуктов
жизнедеятельности на клеточную стенку, приводит к тяжелым повреждениям
эпителия почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества почек, что
приводит к нарушению процессов мочеобразования. Именно в почках наиболее
длительно сохраняются лептоспиры (до 40 дней).
Диагноз на лептоспироз устанавливают
комплексно на основании:
– эпизоотологических данных;
– клинических признаков;
– патологоанатомических изменений;
– результатов лабораторных
исследований.
Методы лабораторных исследований:
ПЦР - полимеразная цепная
реакция
• ПРЯМОЙ метод диагностики;
• Выявление уникального для лептоспир
фрагмента ДНК (РНК);
• Максимальная чувствительность;
• Высокая специфичность;
Строение
молекулы ДНК
Структура молекулы ДНК была открыта
Уотсоном и Криком в 1953 году.
ДНК построена в виде двойной спирали,
состоящей из двух полинуклеотидных цепей.
Каждый нуклеотид состоит:
- азотистого основания (аденин, тимин,
гуанин, цитозин);
- пятиуглеродного сахара (дезоксирибоза);
- остатка фосфорной кислоты.
Виды биологического материала,
•
•
•
•
•
•
•
•
•
используемого для ПЦР-диагностики
Цельная кровь (сыворотка, плазма)
Моча, сперма, носовая, влагалищная,
препуциальная слизь
Фекалии
Слюна, смывы с конъюнктивы, из носовой
полости, с прямой кишки
Молоко, молозиво
Патологический материал
Продукты питания, корма
Объекты внешней среды
Бактериальные и клеточные культуры, смывы с
питательных сред
Основная проблема при
использовании ПЦР
в лабораторной диагностике
–
- высокий риск
контаминации реагентов и
биологического материала
продуктами ПЦР и
получение
ложноположительных
результатов
Решение проблемы Детекция продуктов
амплификации методом
гибридизационнофлуоресцентной детекции в
режиме «реального времени» REAL-TIME PCR
Преимущества ПЦР
c гибридизационно-флуоресцентной детекцией
 Минимальный риск контаминации
 Специфичность
 Высокая скорость анализа
 Удобный формат анализа данных
 Исключение субъективной интерпретации результатов
 Возможность генотипирования микроорганизмов
 Возможность количественного анализа
Приборы для ПЦР с детекцией фрагментов
амплификации в режиме реального времени
“ABI Prism 7000”
“Rotor Gene”Corbett
Applied Biosystems, США Recearch,Австралия
“iCycler iQ”
Bio Rad, США
MX3000
США
“Smart Cycler”,
Cepheid, США
Основные
характеристики ПЦР
• Высокая чувствительность, основанная на
экспоненциальном принципе накопления
продукта.
• Высокая специфичность, основанная на
выявлении уникальных для микро-(макро)организма участков генетического
материала.
• Метод прямого выявления возбудителя,
основанный на универсальности способа
хранения и передачи генетической
информации живой материи
Погрешности ПЦР-диагностики
• Ложноположительные результаты
Причина: контаминация проб и помещений лаборатории;
низкоспецифичные тест-системы;
• Ложноотрицательные результаты
Влияют : 1. преаналитические процедуры (условия отбора,
транспортировки, хранения и подготовки проб);
2. потери ДНК на этапе выделения;
3. качество работы амплификатора;
4. низкочувствительные тест-системы