Патогенные спирохеты Возбудитель сифилиса – Treponema pallidum Возбудитель сифилиса относится к семейству Spirochaetaceae, роду Treponema. Морфология. Бледные трепонемы имеют форму спирально извитых нитей длиной 6-20 мкм, шириной 0,09 – 0,18 мкм. Трепонемы имеют сложную структуру: клеточную стенку, ЦПМ, окружающую цитоплазму. Между клеточной стенкой и ЦПМ располагаются два пучка фибрилл, которые прикреплены на концах клетки к базальным тельцам – блефаропластам. Количество фибрилл в пучке у каждой клетки от 4 до 10. Фибриллы придают клетке винтообразную форму (первичные завитки). В процессе движения трепонемы образуют изгибы – вторичные завитки, в количестве 8-12. Вторичные завитки – мелкие равномерные. При неблагоприятных условиях (воздействие антител, химиотерапевтических препаратов) трепонемы образуют L-формы и цисты , что объясняет скрытое, длительное, бессимптомное течение заболевания, устойчивость возбудителя к лекарственным препаратам. Тинкториальные свойства. Трепонемы окрашиваются по методу Романовского-Гимзе в бледно-розовый цвет из-за скудного содержания в их теле нуклеопротеидов, редуцируют нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности клетки, в связи с чем для микроскопического исследования трепонем можно использовать метод импрегнации серебром. Культуральные свойства. Трепонемы не удается культивировать на искусственных питательных средах, что обусловлено наличием небольшого генома с лимитированием процессов биосинтеза и способности выживать исключительно за счет хозяина. Возможно культивирование на культуре клеток. Ферментативные свойства выражены слабо. Они сбраживают некоторые углеводы, преобразуемые в ходе гликолиза и пентозофосфатного пути и служащие в качестве источника энергии. Являются микроаэрофилами. Токсинообразование. Трепонемы не продуцируют белкового токсина, содержат липополисахаридный токсин. Антигенная структура. Серовары не установлены. Возбудитель обладает сложной антигенной структурой, обусловленной наличием полисахаридных, липидных и протеиновых комплексов. Основная часть антигенов локализуется в трехслойной наружной стенке. Различают специфический термолабильный белковый антиген и неспецифический липоидный антиген, который по своему составу идентичен кардиолипину, экстрагированному из бычьего сердца. Патогенность для животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Патогенез. Единственный источник возбудителя в природе – больной человек. Механизмы заражения – контактный, искусственный, вертикальный. Пути передачи – прямой и непрямой контакт, трансфузионный, трансплацентарный, интранатальный, постнатальный. Заражение сифилисом людей происходит при непосредственном контакте, преимущественно половым путем. Бытовой путь заражения через предметы домашнего обихода (посуда, постельное белье), сигареты встречается редко из-за быстрой гибели возбудителя вне организма человека. Возможно заражение в результате переливания крови от доноров, больных сифилисом (трансфузионный сифилис), поэтому все доноры перед сдачей крови подвергаются клиническому и серологическому обследованию для исключения 1 сифилиса. Передача возбудителя может происходить от беременной женщины плоду через плаценту. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки половых органов, реже – полости рта и поврежденная кожа. Инкубационный период при приобретенном сифилисе обычно 20-28 дней. В месте внедрения возбудителя развивается папула, которая затем превращается в язву с чистым дном и плотным основанием – «твердый шанкр” или первичный сифилома. Часть трепонем мигрирует в регионарные лимфатические узлы, вызывая лимфаденит, а затем через грудной проток проникают в кровяное русло, вызывая септицемию. Первичная сифилома характеризуется воспалительной реакцией с превалированием лимфоцитов и плазматических клеток. Трепонемы обнаруживаются в большом количестве в тканевом содержимом язвы, а также в регионарных лимфатических узлах. Это типичная картина первичного сифилиса, который продолжается 6–8 нед. Затем твердый шанкр исчезает и на его месте иногда остается незначительный рубец. После латентной стадии, продолжительностью 6–8 нед наступает вторичный сифилис, обусловленный генерализацией процесса. Он может быть «свежим», рецидивным и скрытым. Для вторичного сифилиса характерно появление высыпаний на коже и слизистых оболочках в виде пятен, папул, пустул и поражения внутренних органов и нервной системы ( менингиты). Поражения характеризуются воспалительной инфильтрацией на месте скопления трепонем, чаще всего в стенках сосудов с преобладанием плазматических клеток. В серозной жидкости элементов сыпи обнаруживается большое количество трепонем. Свежий сифилис переходит в латентную стадию, в которой трепонемы сохраняются и размножаются в фагосомах клеток, обусловливая появление рецидива. После нескольких рецидивов вторичного сифилиса инфекционный процесс может принять скрытый характер. Возбудитель в это время сохраняется в тканях организма в виде цист или L-форм. Продолжительность вторичного сифилиса – до 4 лет и более. При отсутствии лечения возможно развитие третичного сифилиса, для которого характерно продуктивное воспаление в органах и тканях по типу инфекционной гранулемы. В этом периоде в коже, подкожной клетчатке, костях, внутренних органах образуются инфильтраты (гуммы), склонные к распаду и ведущие к значительным изменениям в очагах поражения. Трепонемы в очагах обнаруживаются редко, чем объясняется малая заразительность больных в этом периоде. Через 9-10 лет при отсутствии лечения развивается поражение ЦНС. Дегенеративные изменения локализуются в сосудах, оболочках, в самом веществе головного (прогрессирующий паралич) и спинного мозга (спинная сухотка). В мозговой ткани в этот период выявляют огромное количество трепонем. Механизм саногенеза. Для сифилиса характерен инфекционный (нестерильный) иммунитет, который формируется через 10-11 сут после появления твердого шанкра. В этот период повторное заражение не происходит либо новый образовавшийся шанкр протекает абортивно (суперинфекция). Суперинфекция объясняется ослаблением инфекционного иммунитета. Возможно повторное заражение сифилисом излечившегося человека (реинфекция) и, таким образом, утратившего иммунитет. В случае реинфекции инкубационный период короче, чаще образуются множественные язвы, во вторичном периоде папулы нередко эрозируются в связи с формированием ГЗТ. В сыворотке больных сифилисом обнаруживаются противотрепонемные антитела вначале классов Ig M и Ig A, а затем Ig G, а также Ig E (реагины). Напряженность гуморального иммунитета недостаточна 2 для обеспечения гибели всех трепонем, хотя в некоторых случаях наблюдается самоизлечение. В месте внедрения бледной трепонемы развиваются реакции клеточного и гуморального иммунитета, формирующие лимфоплазмоцитарную гранулему (твердый шанкр), основной морфологической единицей которой является плазматическая клетка. Разрешение высыпаний и очищение от трепонем во многом зависит от клеточно-опосредованного иммунитета, включающего фагоцитоз трепонем активированными макрофагами. Активация последних индуцируется лимфокинами ИЛ-2, IFNY ИЛ-12, продуцируемые антигенспецифическими Т-клетками. Локальные защитные реакции при сифилисе (элиминация бледных трепонем с поверхности твердого шанкра) обусловлены активацией моноцитов-макрофагов, В-клеток и клеток эндотелия липопротеинами мембраны возбудителя. Длительно персистирующая инфекция приводит к развитию аутоиммунных реакций, лежащих в основе клинических проявлений позднего сифилиса. Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал – тканевая жидкость твердого шанкра или высыпаний, пунктат регионарных лимфатических узлов для обнаружения трепонем, сыворотка крови больного для выявления антител серологическими реакциями. Микроскопический метод. Применяют при первичном и вторичном сифилисе. Из указанного исследуемого материала готовят препарат «раздавленная капля» и исследуют в темнопольном микроскопе. Можно использовать окрашивание фиксированных мазков по Романовскому-Гимзе, по Бури, серебрением и метод иммунофлюоресценции. Следует дифференцировать возбудителя сифилиса с непатогенными трепонемами, обитающими на наружных половых органах ( T. refringens) и в полости рта (T. microdentium). Бледная трепонема отличается ровными завитками, плавными движениями, она тоньше других трепонем. Решающее диагностическое значение имеет обнаружение трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов. Бактериологический метод не используется из-за трудности выращивания возбудителя на питательных средах. Биологический метод не используется. Серологический метод применяют для диагностики сифилиса и для оценки проводимого лечения. Серопозитивный сифилис наступает через 2-3 нед после появления твердого шанкра или на 5-6 нед от момента заражения. В диагностике сифилиса стандартной серологической реакцией является реакция связывания комплемента ( реакция Вассермана): реакция с кардиолипидным антигеном, реакция с трепонемным антигеном. К специфическим серологическим реакциям относится реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Эта чувствительная реакция становится положительной уже при серонегативносм периоде сифилиса. В диагностике скрытого сифилиса, при поражении внутренних органов, нервной системы, у беременных особое значение имеет реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ). Принцип реакции заключается в угнетении движения бледных трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови больного в присутствии комплемента. Используются также реакция пассивной гемм агглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция микропреципитации (РМП). Согласно действующему приказу МЗ РФ «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» № 87 от 26.03.2001 г. в России рекомендуют применять следующие методы: РМП (отборочная), ИФА ( диагностический и отборочный), РПГА (диагностическая и отборочная), РИФ диагностическая), РИТ (диагностическая), РСК (Вассермана) – только по показаниям. 3 Аллергологический метод не применяется. Профилактика предусматривает раннее выявление больных, их современное и эффективное лечение (пенициллин и его производные, эритромицин, препараты висмута, мышьяка, ртути), воздержание от случайных половых связей. Специфическая профилактика не разработана. Возбудители иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма) Borrelia burgdorferi, Borrelia garinii, Borrelia afzelii Возбудители иксодового клещевого боррелиоза относятся к семейству Spirochaetaceae, роду – Borrelia. Морфология. Боррелии относятся к прокариотам. Представляют собой извитую спираль длиной от 15 до 25 мкм и толщиной от 0,2 до 0,3 мкм. Имеют пенистую эластичную оболочку и цитоплазматическую мембрану, между которыми лежат 15-20 параллельных фибрилл, обвивающих тело клетки. Содержат до 20 кольцевых и линейных плазмид. Тинкториальные свойства. Грамотрицательны, сравнительно легко окрашиваются анилиновыми красителями. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в фиолетовый цвет. Культуральные свойства. Боррелии являются облигатными анаэробами. Крайне требовательны к условиям культивирования. Оптимальная температура роста 33-37ºС, время генерации составляет 12 ч. Бореллии культивируются в средах, обогащенных аминокислотами, витаминами, альбуминами бычьей и кроличьей плазмы. В настоящее время создана среда BSK-II, пригодная для изоляции и культивирования возбудителей болезни Лайма. Спирохеты, выращенные в среде, удовлетворительно сохраняются в низкотемпературном холодильнике (-700 – -900С) до нескольких лет, не теряя своих свойств, что позволяет создавать банки штаммов. Токсинообразование. Белковых токсинов не продуцируют. Антигенная структура. Возбудители болезни Лайма обладают сложной антигеннной структурой. Они имеют белковые антигены фибриллярного аппарата (p41) и цитоплазматического цилиндра (p93), антитела к которым появляются на ранних стадиях заболевания, но не обладают защитными свойствами. Протективной активностью обладают антигены, представленные липидмодифицированными интегральными белками наружной мембраны, обозначаемые как osp (outer surface protein) A,B,C,D,E,F, детерминация синтеза которых осуществляется группой плазмид. OspA-антиген обладает антигенной вариабельностью, подразделяясь на 7 сероваров, и является видоспецифическим. В процессе жизненного цикла боррелий антигенный состав меняется. При их культивировании на питательных средах и в организме человека на поздних стадиях болезни у боррелий доминирует антиген ospA, тогда как при пребывании в клеще и в организме человека в раннем периоде заболевания у них преобладает антиген ospC. Патогенность для животных. Круг поражаемых хозяев достаточно широк: птицы, грызуны, собаки, лошади, другие домашние и дикие животные. Патогенез. Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное природноочаговое заболевание. Природные очаги ИКБ характерны для лесных ландшафтам умеренного климатического пояса. Возбудителем болезни Лайма в Северной Америке является вид B. burgdorferi, на Евро-Азиатском континенте – B. garinii и B. afzelii. Эти виды различаются между собой по антигенной структуре. География ИКБ в России тесно связана с ареалами основных переносчиков возбудителя – иксодовых клещей Ixodes ricinus и Ixodes persulcatus. 4 Резервуаром возбудителей в природе являются мелкие млекопитающие, главным образом лесные мыши. Механизм заражения – трансмиссивный, путь передачи – инокуляционный. Заболевание передается человеку через укусы клещей рода Ixodes, выступающими также важнейшими резервуарами инфекции. В одном клеще могут находиться возбудители нескольких инфекций (различные боррелии, эрлихии, вирусы). При этом переносчик может передавать их человеку одновременно. Таким образом, боррелиозная инфекция может протекать как моноинфекция, так и микст-инфекция. Заражение происходит преимущественно в летний период. Восприимчивость людей высокая. От человека человеку заболевание не передается. Антигенные различия возбудителей объясняют региональные особенности клинической картины боррелиозов Лайма. Считается, что ревматологические проявления болезни связаны, в основном, с B. burgdorferi, неврологические – с B. garinii и поздние кожные – с B. afzelii. Однако, несмотря на региональные различия, основные проявления заболевания сходны во всех странах. В течении боррелиозной инфекции выделяют три стадии развития болезни: ● I стадия локальной инфекции с развитием патологического процесса в месте внедрения возбудителей; ● II стадия диссеминации (распространения) боррелий по организму от места его первичного внедрения; ● III стадия органных поражений как результат длительного патогенного воздействия возбудителей на органы и системы. Разделение на стадии во многом условно. Заболевание может переходить последовательно из одной стадии в другую, или миновать какую-либо из них, а также впервые проявляться в любой стадии без наличия предшествующей. Инкубационный период длится от 3 до 32 дней с момента укуса клеща. В месте укуса обычно развивается комплекс воспалительно-аллергических изменений кожи, проявляющихся в виде специфической, характерной для ИКБ мигрирующей кольцевой эритемы. Липидмодифицированные белки наружной мембраны обеспечивают способность боррелий прикрепляться и проникать в клетки хозяина. Локальное нахождение возбудителя на протяжении определенного периода времени обусловливает особенности клиники: относительно удовлетворительное самочувствие, слабовыраженный синдром общей интоксикации, отсутствие других характерных для ИКБ проявлений. Способность боррелий к самостоятельным поступательным движениям в тканях находит свое отражение в особенностях местного воспаления. В месте первоначального накопления возбудителя в центре эритемы боррелии подвергаются активному воздействию факторов воспаления, они теряют свою подвижность, их количество уменьшается, центр эритемы просветляется (кольцевидная эритема). Возникновение новых колец эритемы (мигрирующая эритема) связано с новыми генерациями боррелий. В дальнейшем, гематогенно и лимфогенно возбудитель из первичного очага распространяется на другие участки кожи и внутренние органы (сердце, ЦНС, суставы). В ряде случаев заболевание на этой стадии, может переходить в латентную форму. Генерализация инфекции клинически сопровождается лихорадкой, симптомами общей интоксикации и полисистемными проявлениями (поражение лимфатических узлов, печени, селезенки, сердца, мышц, суставов, почек, головного мозга с вовлечением в воспалительный процесс мозговых оболочек и др.). В результате взаимодействия боррелий с макрофагами 5 происходит выделение ИЛ-1, который индуцирует воспалительный процесс. OspА-протеин принимает участие в развитии иммунопатологических реакций, индуцирующих артриты. Боррелии в течение длительного времени могут сохраняться в организме человека. Заболевание протекает доброкачественно. Прогноз благоприятный. Саногенез. Для ИКБ характерно запаздывание гуморального иммунного ответа, возможно из-за длительного нахождения возбудителя в воротах инфекции при минимальном антигенном раздражении иммунной системы. Количество B-лимфоцитов, а также концентрация Ig M, Ig G, субкомпонентов С 3; С 5b; C 9 комплемента в сыворотке крови увеличиваются медленно. Пик Ig M приходится на период от 3 до 6 недель. Наибольшее значение имеют антитела к белку жгутиков osp C. Новый подъем антител рассматривают как прогрессирование болезни. Конечным этапом функционирования клеточного, гуморального иммунитета и системы комплемента является образование комплексов антиген-антитело с последующей их элиминацией или лизисом боррелий. В процессе защитной воспалительной реакции большинство боррелий элиминируется. Однако в ряде случаев клеточные и гуморальные факторы резистентности не в состоянии справиться с возбудителем. Некоторые штаммы боррелий обладают повышенной устойчивостью к неспецифическим факторам защиты. Достаточно продолжительный период преиммунной стадии позволяет боррелиям «уклоняться» от медленно образующихся антител в местах, где воздействие иммуноглобулинов затруднено (эндотелиальные клетки, фибробласты, ЦНС. связочно-суставной аппарат). Проникновение возбудителя за гемато-эцефалический барьер позволяет ему избегать контактов с иммунной системой организма. Кроме того, при боррелезной инфекции образование антител происходит медленно и в низких титрах, что недостаточно для элиминации возбудителя. Высокая изменчивость боррелий также снижает эффективность гуморального иммунитета. У пациентов с хроническим течением ИКБ возможно формирование гиперреактивности к антигенам боррелий, в основе которой лежит клеточный тип иммунного ответа. Это связано с тем, что по мере прогрессирования болезни все более возрастает активность лимфоцитов к широкому спектру белков боррелий (в том числе низкоспецифичных), что может привести к развитию аутоиммунных реакций. Иммунитет при ИКБ нестерильный. Возможно повторное заражение человека при инфицировании другим генотипом боррелий. Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат биоптаты кожи, синовиальная жидкость суставов, ликвор, сыворотка крови. Микроскопический метод не используется. Бактериологический метод проводится на 1 стадии заболевания (мигрирующая эритема, гриппоподобный комплекс, лимфаденит) – 1-3 нед. Для обнаружения боррелий в ликворе и суставной жидкости используется ПЦР: праймеры к ospA gene и p66gene B. burgdorferi. Биологический метод не применяется. Серологический метод осуществляется, начиная с 3-4 недели заболевания. С помощью ИФА или РИФ определяют IgM или нарастание титра IgG. Проблемой диагностики ИКБ является наличие у боррелий поверхностных белков перекрестнореагирующих с эпитопами многих инфекционных агентов, а также с некоторыми воспалительными и ревматоидными факторами при различных соматических заболеваниях. Используют иммуноблотинг. Аллергологический метод недостаточно разработан. Профилактика и лечение. Неспецифическая профилактика сводится к использованию защитной одежды и борьбе с клещами. Специфическая профилактика не разработана. 6 Этиотропное лечение проводится антибиотиками тетрациклинового ряда. Возбудитель лептоспироза – Leptospira interrhogans Возбудитель лептоспироза относится к семейству Leptospiraceae, роду – Leptospira. Морфология. Лептоспиры представляют собой нежные, спирально извитые микроорганизмы с 12-18 мелкими первичными завитками. Концы лептоспир утолщены и загнуты в виде крючков (вторичные завитки) и придают им S- или С-образную форму. Встречаются с одним крючком и бескрючковые штаммы лептоспир. Длина лептоспир – 6-20 мкм, толщина – 0,1 мкм. Спор, капсул и жгутиков не образуют. Лептоспиры имеют ультраструктуру, типичную для прокариотической клетки. Характерной особенностью является наличие локомоторного аппарата – осевой нити (аксостиля). Осевая нить представлена 1-2 фибриллами, состоит из белка флагеллина и обеспечивает движение лептоспир. С активной подвижностью лептоспир связана их высокая инвазионная способность. Тинкториальные свойства. Лептоспиры плохо воспринимают анилиновые красители, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. Обычно их изучают в живом состоянии с использованием темнопольной и фазовоконтрастной микроскопии. Культуральные свойства. Лептоспиры – хемоорганотрофы, основными источниками энергии и углерода служат липиды, поскольку лептоспиры не обладают способностью синтезировать жирные кислоты. Являются микроаэрофилами. Культивируются на питательных средах, содержащих сыворотку или сывороточный альбумин. Рост медленный, при оптимальной температуре 28-30˚ С появляется на 5-7 сут культивирования, иногда позже. Лептоспиры не вызывают помутнения питательной среды и выявляются в темном поле зрения. Ферментативные свойства. Синтезируют ферменты оксидазу и каталазу. Токсинообразование. Лептоспиры содержат эндотоксин, вырабатывают ряд факторов агрессии: гиалуронидазу, фибринолизин, гемолизин, лецитиназу, липазу. Антигенная структура. Род лептоспир состоит из одного вида, включающего 39 серогрупп и свыше 200 сероваров. Лептоспиры содержат общеродовой антиген белковой природы, а также вариантоспецифический поверхностный антиген липополисахаридной природы. Представители одних серогрупп ( L. icterohaemorragiae) вызывают желтушный лептоспироз, других (L. pomona, L. grippotyphosa) – безжелтушную форму заболевания. Кроме патогенных в природе обитают и сапрофитные лептоспиры (L. biflexa). Патогенность для животных. В естественных условиях резервуаром лептоспир являются грызуны (полевки, хомяки, мыши, крысы и др.), домашние животные (крупный и 7 мелкий рогатый скот, свиньи, собаки), промысловые животные (лисицы, песцы, нутрии). Среди животных наблюдаются эпизоотии, во время которых отмечаются заболевания лептоспирозом в острой и хронической форме. В организме животных лептоспиры концентрируются, главным образом в почках ( в извитых канальцах) и выделяются наружу с мочой, загрязняя внешнюю среду, где лептоспиры сохраняют жизнеспособность в течение нескольких недель. Из лабораторных животных наиболее чувствительны к лептоспирам золотистые хомяки, морские свинки и кролики-сосунки. Патогенез. Основным источником лептоспир в природных очагах являются дикие грызуны. Из сельскохозяйственных животных – свиньи и крупный рогатый скот. Больные животные выделяют лептоспиры во внешнюю среду с мочой и инфицируют воду, корма, пастбища, почву и другие объекты внешней среды, через которые заражаются здоровые животные и люди. Механизмы передачи возбудителя – алиментарный, контактный. Основные пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой, прямой и непрямой контакт. Заражение лептоспирами человека происходит при употреблении воды и пищевых продуктов, инфицированных мочой больных животных, а также при купании в зараженных водоемах. Человек как источник инфекции существенной роли не играет. Заболевание носит сезонный характер (пик – июль-август). Наиболее частыми в России возбудителями лептоспироза являются серовары L. pomona, L. monijkov, L. grippothyphosa, L. tarassovi, L.canicola, L.icterohaemorragiae. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки пищеварительного тракта, глаз, носа, поврежденные кожные покровы. Инкубационный период при лептоспирозе равен 5-10 сут. Лептоспироз представляет собой циклически развивающийся инфекционный процесс и в его патогенезе можно выделить несколько фаз. В первой фазе происходит заражение. Первичный аффект на месте внедрения отсутствует. Во второй фазе лептоспиры по лимфатическим путям проникают в кровь, вызывая кратковременную бактериемию, а затем в макрофаги печени, селезенки, почек, легких, где размножаются, особенно интенсивно в печени. Первая и вторая фаза соответствуют инкубационному периоду. В третьей фазе (совпадает с началом болезни) – повторной бактериемии и токсинемии – лептоспиры, размножившиеся в паренхиматозных органах, повторно проникают в кровь. Происходит распад возбудителя с освобождением токсических субстанций и продуктов метаболизма, за счет которых наступает резкая интоксикация организма, генерализованное поражение кровеносных капилляров с развитием отека и множественных геморрагий на кожных покровах и внутренних органах. Может развиваться желтуха за счет гемолиза эритроцитов. Наиболее тяжело протекает процесс, вызванный сероварами L. icterohaemorrhagiae. Основным фактором патогенности лептоспир является эндотоксин, выделяющийся при разрушении возбудителя и вызывающий общую интоксикацию, а также кровоизлияния за счет повышения проницаемости сосудов, разрушения эндотелия и выпотевания крови из сосудов в ткани. Некоторые серовары продуцируют плазмокоагулазу, фибринолизин, цитотоксины. 8 В четвертой фазе лептоспиры, неразрушенные в кровеносном русле, проникают повторно во внутренние органы, вызывая дегенеративные и некротические изменения печеночной паренхимы, повреждение эпителия почечных канальцев с возможным развитием острой почечной недостаточности. Реже развиваются менингоэнцефалит, поражение легких и других органов. В пятой фазе формируется гуморальный и клеточный иммунитет, организм очищается от возбудителя и наступает выздоровление. Лептоспиры выделяются из организма больного с мочой. Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – кровь, моча, спинномозговая жидкость, сыворотка крови больного, секционный материал, пробы воды. В первые 5 дней заболевания проводят бактериоскопическое, бактериологическое и биологическое исследование крови и ликвора, с 10 сут – бактериоскопию мочи, а с конца первой недели – серологический анализ. Микроскопический метод. Из исследуемого материала готовят препарат «раздавленной капли» и микроскопируют его в темном поле зрения. В положительном случае видны серебристо-белые лептоспиры с активным и разнообразным движением (поступательным, вращательным и сгибательным). Для обнаружения лептоспир в исследуемом материале можно использовать окраску мазков методами негативного контрастирования (с конго красным) и иммунофлюоресценции. Бактериологический метод. Кровь, ликвор, мочу засевают в жидкие питательные среды (Ферворта-Вольфа и ее модификации, Терских и др.). В качестве основного компонента этих сред используют инактивированную кроличью сыворотку. Посевы ставят в термостат при температуре 28-30˚С. Для определения роста лептоспир каждые 7-10 дней в течение 2 мес микроскопируют в темном поле. При отсутствии роста в течение 3 мес результаты считают отрицательными. Серогруппу и серовар выделенной культуры устанавливают в РА с набором диагностических сывороток. Биологический метод. Внутрибрюшинного или подкожно заражают исследуемым материалом морских свинок, крольчат, и золотистых хомяков 2-3 недельного возраста. В положительном случае, примерно, через неделю животные заболевают. Препараты из крови мочи и органов микроскопируют в темном поле и делают посевы для выделения чистой культуры лептоспир. Серологический метод. В крови больного лептоспирозом к концу 1 нед появляются антитела. Ставят реакцию агглютинации – лизиса с сывороткой больного и эталонными культурами лептоспир разных серогрупп и сероваров. Учет результатов реакции проводят в препаратах «раздавленная капля» в темном поле. В положительном случае в первых разведениях сыворотки наблюдается полное растворение лептоспир, в последующих разведениях – агглютинация лептоспир и появление аггломератов в виде «паучков». Положительными считаются титры 1:100 и выше. Реакцию рекомендуется ставить повторно для установления нарастания титра антител. Применяют также РПГА, в которой используют диагностикум из эритроцитами с адсорбированными на них лептоспирами. В последние годы для диагностики лептоспирозов разрабатываются реакция иммунодиффузии, ПЦР. Аллергологический метод не применяется. Профилактика и лечение. Охрана источников водоснабжения от загрязнения, обеззараживание воды, запрещение купания в водоемах, расположенных в эндемической местности и употребление воды из открытых водоемов. Борьба с грызунами. Ношение 9 спецодежды при уходе за больными животными. Вакцинация сельскохозяйственных животных. Лица высокого риска заражения подлежат иммунизации убитой корпускулярной вакциной. Вакцина содержит лептоспиры четырех наиболее распространенных сероваров, вводится подкожно, двукратно с интервалом в 7 дней. Через год проводится ревакцинация. Для специфического лечения применяют иммуноглобулин из крови гипериммунизированных волов, содержащий антитела к различным сероварам лептоспир. Эффективны также антибиотики (пенициллин, тетрациклины). 10
