Наборы для ПЦР-диагностики инфекций экспресс

Наборы для ПЦР-диагностики инфекций экспрессдетектированием с помощью тест-полоски с ДНКзондами
Молекулярные методы используются в качестве более быстрой альтернативы традиционным методам ввиду
высокой чувствительности и скорости анализа. Часто в ПЦР-наборах используют дорогостоящие или недостаточно
чувствительные системы детекции.
Наборы Speed-Oligo (Vircell, Испания) используют ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе,
обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение патогенов. Благодаря двойной
гибридизации продуктов амплификации увеличиваются специфичность и чувствительность их детекции.
Порядок работы с набором
В зависимости от принятых в лаборатории автоматизированной или ручных методик пробоподготовки и модели
циклера, выделение ДНК занимает от 20 мин до 1 часа, амплификация - до 1,5 час, а для детекции результатов на стрипе
требуется всего 5-10 мин. Реакционная смесь для ПЦР поставляется в лиофилизованном виде, что облегчает
транспортировку и хранение.
Процедура включает три этапа:
1.Экстракция ДНК из исследуемого материала (с помощью коммерчески доступных наборов, приобретаемых
лабораторией),
2.Специфическая амплификация;
3.Детекция ампликонов, реагенты которые входят в состав тест-набора. Тест включает внутренний контроль на
отсутствие ингибиторов и правильную сборку смеси для амплификации.
Для детекции используется стрип с нанесёнными ДНК-зондами. По завершении амплификации, контрольный и
исследуемые ампликоны денатурируют. Продукты ПЦР взаимодействуют с комплементарными олигонуклеотидами,
конъюгированными с частицами коллоидного золота на стрипе. Этот комплекс перемещается по мембране стрипа до зон
с нанесёнными зондами, специфичными к контрольным и исследуемым ампликонам, где, при наличии
комплементарности, происходит вторая гибридизация. Избыток конъюгата с коллоидным золотом гибридизуется в
отдельной полосе (контроль конъюгата, КК). При наличии гибридизации на мембране появляется полоса красного
цвета.
Этот метод более чувствительнее и специфичнее чем традиционная ПЦР. Двойная гибридизация дискриминирует
продукты специфической и неспецифической амплификации. В качестве исследуемого материала используются
клинические образцы и образцы культуры (мультиплексный анализ
микобактерий).
Интерпретация результатов:
Полоса контроля конъюгата: должна быть окрашена всегда и это свидетельствует о том, что олигонуклеотидный
конъюгат с коллоидным золотом стабилен и гибридизируется в соответствии с заявленными условиями, а
гибридизационный раствор сохраняет необходимые характеристики.
Полоса контрольного ампликона (контроль амплификации): отсутствие красной полосы в этой зоне свидетельствует
о присутствии в образце ингибиторов ПЦР. В этом случае необходимо повторить анализ с вновь отобранным образцом.
Однако отсутствие полосы контрольного ампликона при наличии сильного положительного специфического результата
не говорит об недостоверности анализа – имеет место конкуренция матричных ДНК за фермент.
Полоса специфического ампликона (ПСА): наличие красной окраски этой зоны свидетельствует о наличии в
исследуемом образце искомого патогенна, результат анализа - положительный.
Несмотря на появление и широкое распространение антибактериальных средств и наличие вакцин против некоторых
возбудителей, острые бактериальные менингиты остаются одной из серьёзных причин смертности и нейрологических
осложнений. Они остаются в списке десяти главных причин детской смертности в развитых странах. В своё время тремя
главными возбудителями менингитов были Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis и Streptococcus pneumoniae.
Быстрая и точная диагностика имеет важное значение для выбора лечения и помогает снизить смертность и остановить
развитие долгосрочных нейрологических поражений. Выделение культуры рассматривается в качестве золотого
стандарта диагностики бакменингитов. Однако, этот метод требует больших затрат времени (идентификация патогена
обычно занимает 1-2 дня), наличия жизнеспособных микроорганизмов для культивирования, а на чувствительность
напрямую влияет начало антибиотикотерапии. Латексно-агглютинационный тест проводится быстрее, но недостаток
чувствительности ограничивает его клиническое использование.
Набор бактериальные менингиты Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе,
обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение: Haemophilus influenzae, Neisseria
meningitidis и Streptococcus pneumoniae в образцах спинномозговой жидкости.
Рутинный пренатальный скрининг на стрептококковые инфекции (GBS; Streptococcus agalactiae) приводит к
снижению количества заболевших. Однако, они остаются ведущей причиной неонатальной смертности.
Стрептококковые инфекции регистрируются в самом раннем возрасте – около 80% детей заболевают в течение первых
дней жизни. Инфекция характеризуется сепсисом и пневмонией. Инфекционные заболевания с отложенным началом
возникают у детей в возрасте от 1 недели до трёх месяцев и протекают с развитием менингита и сепсиса.
Новорожденные с ранней формой заболевания получают возбудителя интранатально от матерей. Предотвратить
заболевание можно путём интранатальной профилактики антибиотиками. У женщин в предродовой и послеродовой
период стрептококковая инфекция вызывает клиническую картину в диапазоне от сглаженных проявлений инфекции
мочевыводящих путей до угрожающих жизни сепсиса и менингита. Заболевания могут наблюдаться у взрослых
пациентов с ослабленным иммунным статусом.
При скрининге беременных, детекция стрептококков имеет первостепенное значение. Женщины с положительными
результатами пренатального скрининга являются кандидатами на интранатальную антибиотическую профилактику.
Быстрый метод детекции важен для определения группы риска среди детей, рождённых матерями с неопределённым
инфекционным статусом. Выделение культуры имеет ограничения по времени анализа, так как требует не менее 36
часов. Детекция антигенов в целом показывает результаты низкой точности.
Вместо этих методов для высокочувствительного обнаружения микроорганизма можно использовать ПЦР. Тест
Speed-Oligo на стрептококковую инфекцию обеспечивает быстрое, высокочувствительное и специфическое
обнаружение S. agalactiae в мазках из влагалища и аноректальной области. Образцы для неонатальных исследований
берут с поверхности тела перед первым купанием, используют также мазки из глотки, задних отверстий полости носа,
внешних слуховых проходов, ануса или пупка, кровь и спинномозговую жидкость.
Комбинированный тест на бактериальные пневмонии Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией
ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение Chlamydophila
pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae и Legionella pneumophila в клинических образцах.
Для анализа можно использовать мазки из носоглотки, выделения из носа и глотки, мокроту, стимулированную
мокроту, смывы из бронхов, ткани, инфицированные клетки или культуры.
«Vircell» предлагает также наборы для независимой детекции этих возбудителей.
Микобактерии – одна из групп патогенов, имеющих важное клиническое значение. Около трети населения Земли
инфицировано бациллами туберкулёза. С практической точки зрения в пределах рода микобактерий можно выделить 3
группы:
1) комплекс возбудителей туберкулёза, включающий виды M. tuberculosis, M. bovis (включая BCG), M.
africanum, M. microti;
2) M. leprae – возбудитель проказы;
3) прочие менее патогенные возбудители (часто оппортунистических инфекций или сапрофитные), дающие
нетуберкулёзную симптоматику.
M. tuberculosis complex
Естественным резервуаром для M. tuberculosis является человек, M. bovis - крупный рогатый скот. Туберкулёз –
хроническое гранулематозное заболевание, поражающее, как правило, лёгкие, но может локализоваться и в других
частях тела или быть диссеминированным.
M. avium-intracellulare complex
Широко распространённый в природе вид микобактерий. Встречается, главным образом, у пациентов с пониженным
иммунным статусом или больных СПИД, поражая локализовано или рассеянно: лёгкие, желудочно-кишечный тракт или
лимфоузлы.
M. Scrofulaceum
Является возбудителем лимфаденита у детей.
M. Kansasii
Вызывает у человека хроническое лёгочное заболевание, напоминающее туберкулёз. Диссеминированная инфекция
встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. abscessus
Может быть возбудителем хронической лёгочной инфекции, колонизировать хирургические раны и место ввода
катетеров. Диссеминированная инфекция встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. chelonae
Патоген с высокой резистентностью, часто высевается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. fortuitum
Может колонизировать хирургические раны и места ввода катетеров, встречается у больных остеомиелитом и
целлюлитом.
M. gordonae
Обычно выявляется в качестве контаминанта микробиологических лабораторий, хотя иногда является причиной
патологий у пациентов с пониженным иммунным статусом. Тест на обнаружение микобактерий Speed-Oligo использует
ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое
обнаружение рода Mycobacterium и 12 различных видов бактерий: M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M.
microti, M. africanum), M. avium-intracellulare-scrofulaceum complex, M. chelonae-abscessus complex, M. kansasii, M.
fortuitum и M. gordonae.
Для анализа используют ДНК из бактерий, растущих как на агаризованной, так и в жидкой среде.
Информация для заказа:
SPEED-OLIGO BACTERIAL MENINGITIS
SPEED-OLIGO BACTERIAL PNEUMONIA COMBI
SPEED-OLIGO BORDETELLA
SPEED-OLIGO CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE
SP006
SP008
SP011
SP003
К-во
тестов
24 теста
24 теста
40 тестов
40 тестов
SPEED-OLIGO DIRECT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
SP016
40 тестов
SPEED-OLIGO GROUP B STREPTOCOCCUS
SPEED-OLIGO LEGIONELLA PNEUMOPHILA
SPEED-OLIGO MYCOBACTERIA
SPEED-OLIGO MYCOPLASMA PNEUMONIAE
SPEED-OLIGO NOVEL INFLUENZA A H1N1
SP004
SP002
SP005
SP001
SP015
40 тестов
40 тестов
40 тестов
40 тестов
40 тестов
Набор
Кат.№