ПЦР-диагностика, её преимущества Изящность, простота

ПЦР-диагностика, её преимущества
Изящность, простота исполнения, непревзойденные показатели чувствительности
и специфичности ПЦР принесли этому методу высокую популярность. За довольно
короткое время ПЦР-анализ распрострнился по всему миру. Он быcтpo вышел из
лабораторий научных институтов в сферу практического клинического
использования. На сегодняшний день ПЦР-анализ является наиболее динамично
развивающейся технологией. Ежегодно на рынке появляются десятки новых тестсистем, предназначенных как для выявления нуклеотидных последовательностей
различных микроорганизмов – возбудителей заболеваний, так и для исследования
генов человека.
Количество ПЦР-лабораторий во всем мире, в том числе и в России, растет очень
быстро, и, видимо, в ближайшее время ПЦР-анализ станет одним из самых
распространенных методов лабораторной диагностики.
Главным фактором, определившим широкое применение ПЦР, является
принципиальная возможность неограниченной амплификации фрагментов ДНК и
точной детекции образовавшегося продукта.
Эффективность ПЦР не имеет себе равных: за 2-3 часа с одной молекулы ДНК
или РНК может быть получено несколько миллионов копий исследуемого фрагмента.
При этом ПЦР позволяет обнаружить единичных возбудителей или единичные
молекулы ДНК в биопробе. В отличие от иммунологических тест-систем, ПЦР
позволяет избежать проблем, связанных с перекрестно реагирующими антигенами,
таким образом обеспечивая абсолютную специфичность соответствующего
исследования.
Немаловажно и то, что определение можно проводить не только непосредственно
в клиническом материале (кровь, сыворотка, мокрота, слюна, желудочный сок,
биопсийный материал, мазки, смывы), но и в фиксированных тканях.
Благодаря всему этому ПЦР находит широкое применение в самых разных
областях клинической лабораторной диагностики. Она используется для диагностики
инфекционных заболеваний, в том числе вызванных агентами, трудно поддающимися
культивированию, такими, как хламидии, нейссерии, микоплазмы, вирусы и др. ПЦР
позволяет обнаружить данные микроорганизмы в тех случаях, когда другими
способами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) их
выявление не представляется возможным. ПЦР-диагностикумы позволяют избежать
основной трудности, связанной с неспособностью таких микроорганизмов
размножаться в лабораторных условиях, поскольку размножению подвергается не
бактерия, а только ее ДНК, причем не вся молекула ДНК, а только определенный ее
фрагмент, являющийся маркером данного возбудителя.
ПЦР применяется при генотипировании микроорганизмов, оценке их
вирулентности, определении устойчивости микрофлоры к антибиотикам и т.д. Она
используется также с целью контроля качества наборов для ИФА.
Широкое распространение ПЦР при обретает в сфере диагностики
неинфекционных заболеваний, связанных с генными мутациями и особенностями
антигенов главной системы гистосовместимости, которые, как установлено, в
некоторых случаях четко коррелируют с рядом заболеваний, таких, как лейкозы,
сахарный диабет, ревматизм, язвенная болезнь, атеросклероз и др.
Генодиагностика и генетическая дактилоскопия, пренатальная диагностика,
биологический контроль препаратов крови - вот далеко не полный перечень
направлений медицины, где с успехом применяется ПЦР. Ее используют в
генетических исследованиях, типировании тканей при пересадке органов и тканей,
диагностике наследственных болезней и болезней, связанных с точечными и иными
мутациями, например с заменой одного азотистого основания и др. Разработаны и
широко применяются различные варианты данного метода, позволяющие быстро и
эффективно идентифицировать мутации, изучать ДНК-полиморфизмы для
молекулярного маркирования мутантных хромосом.
Методы идентификации уже известных мутаций в исследуемом гене, основанные
на принципе ПЦР, включают: метод аллель-специфических олигонуклеотидов (ASO);
метод ПЦР-опосредованного сайт-направленного мутагенеза; метод амплификации
рефрактерной мутационной системы (ARМS); метод гетеродуплексного анализа.
Первичную идентификацию мутаций также про водят с использованием
вариантов ПЦР (метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК
- SSCP; метод денатурирующего градиентного гель-электрофореза - DGGE; метод
химического расщепления некомплементарных сайтов - СМС).
Преподаватель микробиологии Потехина Е.Ф.