Loeffler Medium Base

Loeffler Medium Base
Основа среды Леффлера
M537
Эту среду с добавлением лошадиной сыворотки используют для культивирования
Corynebacterium diphtheriae из клинического материала и пересевов чистых культур этих
микроорганизмов.
Состав**:
Ингредиенты
Пептон специальный
Мясной экстракт
Натрия хлорид
Глюкоза
грамм/литр
2,50
2,50
1,25
2,50
Конечное значение рН (при 25ºС) 7,3 ± 0,2
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 8,8 г порошка в 250 мл дистиллированной воды до полного растворения
частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,7 атм (115ºС) в течение 20 мин. Остудить
до 50-55ºС и асептично добавить 750 мл стерильной лошадиной сыворотки (FD074).
Тщательно перемешать и асептично разлить в стерильные пробирки. Стерилизовать в
свертывателе дробно не менее 3 дней подряд по 2 часа при 80-85º или текучим паром.
Принцип и оценка результата:
Эта среда первоначально была разработана Loeffler (1). Дальнейшие модификации
вносили Perry и Petran (2) и Buck (3). Среда Леффлера улучшает первичную и вторичную
выделяемость прихотливых микроорганизмов, особенно из носового и глоточного
секрета. Кроме того, на ней восстанавливаются вирулентные и другие дифференциальные
свойства
(морфологические,
культуральные),
утраченные
при
длительном
субкультивировании.
Высокая концентрация сыворотки помогает определить протеолитическую активность
микроорганизмов, а также пигментообразование и способность к образованию аскоспор.
Пептон и мясной экстракт обеспечивают микроорганизмы важнейшими питательными
веществами. Глюкоза является ферментируемым субстратом и источником энергии.
Засевают материал тампоном, непосредственно растирая его по поверхности среды. После
инкубирования готовят мазки со скошенной поверхности. Для определения
протеолитической активности засевают скос и перед инкубированием заливают его
Тиогликолевой средой по Бреверу (М019). Посевы выдерживают 3-4 дня и более до
появления признаков протеолиза. Для селективного выделения коринебактерий Среду
Леффлера рекомендуется использовать параллельно с Сывороточно-теллуритовым агаром
(4).
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Основа среды имеет светло-янтарную окраску, прозрачна. После добавления сыворотки и
ее коагуляции в пробирках образуются опалесцирующие косячки.
Кислотность среды:
При 25ºС водный раствор (3,52% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 3-4 дней при 35ºС.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Corynebacterium diphtheriae (11913)
Pseudomonas aeruginosa (10145)
Staphylococcus aureus (25923)
Рост
Хороший или средний
Хороший (зеленые колонии, протеолиз)
Хороший (желтые или золотистые колонии)
Ссылки:
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25ºС. Использовать до даты, указанной на
этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8ºС.