Основа агара для теста на токсигенность коринебактерий

Основа агара для теста на токсигенность коринебактерий
Diphtheria Virulence Agar Base (Modified)
Основа агара для определения токсигенности дифтерийных
М882R
микроорганизмов (модифицированная)
Эту среду используют для проверки токсигенности Corynebacterium diphtheriae.
Состав**:
Ингредиенты
грамм/литр
Вытяжка из мозга теленка
10,00
Вытяжка из бычьего сердца
10,00
Натрия хлорид
5,00
Натрия карбонат
0,60
Агар
10,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,8 ± 0,2
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 35,6 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до
кипения для полного растворения частиц и разлить по 17 мл. в соответствующие
пробирки . Стерилизовать автоклавированием при 110°С в течение 30 мин.
Остудить до 45-50°С. Асептично добавить 3 мл лошадиной сыворотки (RM1239)
или сыворотки КРС (Рекомендуется использовать свободную от бактерий и
вирусов лощадиную сыворотку или сыворотку КРС) в каждую пробирку.
Перемешать и быстро вылить в чашку Петри.
Принцип и оценка результата:
Эта среда предложена Hermann и соавт. (1) для получения обильного
роста Corynebacterium diphtheriae. Илек (2) показал возможность использования
техники диффузии в агаре для выявления дифтерийного токсина in vitro.
Стандартизацию метода в сравнительных опытах на животных провел King и
соавт. (3). Однако было показано, что сыворотки животных разных видов дают
разные результаты, и Hermann и соавт. (1) разработали среду, на которой этого
удается избежать. В соответствии с их предложением, среда обогащается 1 г
кислотного гидролизата казеина, 1 мл глицерина и 1 мл твина-80 (4). После
инкубирования токсигенных штаммов в среде образуется линия преципитата.
Теллурит калия подавляет рост большинства грамотрицательных
микроорганизмов и большинство представителей нормальной микрофлоры
верхних дыхательных путей, но не действует на дифтерийную палочку, а
также Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, энтерококки и некоторые
штаммы Staphylococcus epidermidis.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет янтарную окраску, слегка опалесцирует, когда в чашках Петри
образуется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (3,75% вес/об) имеет рН 7,8 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-72 ч при 35-37°С.
Штаммы микроорганизмов
Линия
Рост
(АТСС)
преципитата
Corynebacterium diphtheriae gravis
Обильный
+
Corynebacterium diphtheriae
intermedius
Обильный
+
Corynebacterium diphtheriae mitis
Обильный
+
Staphylococcus epidermidis (25923)
Отсутствует или
слабый
–
Bacillus subtilis (6633)
Подавляется
–
Ссылки:
1. Hermann, Moore and Parsons, 1958, Am. J. Clin. Path., 29:181.
2. Elek, 1948, Brit. Med. J., 1:493.
3. King, Frobisher and Parsons, 1949, Am. J. Pub. Health, 39:1314.
4. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of
Medical Bacteria. Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной
на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.