Влияние сверхкритических и водно

ÓÄÊ 57.04 + 57.08
ÂËÈßÍÈÅ ÑÂÅÐÕÊÐÈÒÈ×ÅÑÊÈÕ È ÂÎÄÍÎ-ÑÏÈÐÒÎÂÛÕ
ÝÊÑÒÐÀÊÒÎÂ ÀÑÖÈÄÈÈ HALOCYNTHIA AURANTIUM ÍÀ
ÃÀÌÅÒÛ, ÇÈÃÎÒÛ È ÝÌÁÐÈÎÍÛ ÌÎÐÑÊÎÃÎ ÅÆÀ
1
À. Ë. Äðîçäîâ*, 2 Ò. Ë. ×èæîâà, 2Â. Ì. ×óäíîâñêèé, 2,3 Â. È. Þñóïîâ,
Î. È. Ïîêðîâñêèé, 3 Î. Î. Ïàðåíàãî, 4Í. Ã. Áóñàðîâà, 4 Ñ. Â. Èñàé,
5
Â. Í. Áàãðàòàøâèëè
3
1
Èíñòèòóò áèîëîãèè ìîðÿ èì. À.Â. Æèðìóíñêîãî ÄÂÎ ÐÀÍ, Âëàäèâîñòîê, Ðîññèÿ
2
Òèõîîêåàíñêèé îêåàíîëîãè÷åñêèé èíñòèòóò èì. Â.È. Èëüè÷åâà ÄÂÎ ÐÀÍ,
Âëàäèâîñòîê, Ðîññèÿ
3
Èíñòèòóò îáùåé è íåîðãàíè÷åñêîé õèìèè èì. Í.Ñ. Êóðíàêîâà ÐÀÍ, Ìîñêâà, Ðîññèÿ
4
Òèõîîêåàíñêèé èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÄÂÎ ÐÀÍ, Âëàäèâîñòîê, Ðîññèÿ
5
Èíñòèòóò ïðîáëåì ëàçåðíûõ è èíôîðìàöèîííûõ òåõíîëîãèé ÐÀÍ,
Òðîèöê, Ìîñêîâñêàÿ îáëàñòü, Ðîññèÿ
*[email protected]
Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ 9.03.2009 ã.
Èññëåäîâàíî âëèÿíèå ñâåðõêðèòè÷åñêèõ è âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ òóíèêè
àñöèäèè ãàëîöèíòèè ïóðïóðíîé Halocynthia aurantium (Ascidiaceae, Tunicata) íà
ãàìåòû, ýìáðèîíû è ëè÷èíêè ìîðñêîãî åæà Strongylocentrotus intermedius. Ïîêàçàíî, ÷òî âîäíî-ñïèðòîâîé ýêñòðàêò íå îêàçûâàåò ñóùåñòâåííîãî âëèÿíèÿ íà
ýìáðèîíû è ëè÷èíêè ìîðñêîãî åæà. Ïðè äîáàâëåíèè ñâåðõêðèòè÷åñêîãî ýêñòðàêòà íà ñòàäèè ñëèÿíèÿ ãàìåò äðîáëåíèå íå îòëè÷àåòñÿ îò êîíòðîëÿ, íî ïðîöåññ ãàñòðóëÿöèè íàðóøàåòñÿ: îáðàçóþòñÿ ýêçîãàñòðóëû. Êðîìå òîãî, â ñðåäå ñî
ñâåðõêðèòè÷åñêèìè ýêñòðàêòàìè ïîäàâëÿåòñÿ ðàçâèòèå èíôóçîðèé. Ðàçëè÷èÿ áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âîäíî-ñïèðòîâûõ è ñâåðõêðèòè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ òóíèêè
ïóðïóðíîé àñöèäèè, ïî-âèäèìîìó, ñëåäóåò èñêàòü âî ôðàêöèÿõ ïåïòèäîâ è âòîðè÷íûõ ìåòàáîëèòîâ, ïîñêîëüêó â ëèïèäíîé ôðàêöèè ñóùåñòâåííûõ ðàçëè÷èé
íå îáíàðóæåíî.
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ñâåðõêðèòè÷åñêèå è âîäíî-ñïèðòîâûå ýêñòðàêòû, àñöèäèè,
Halocynthia aurantium, áèîòåñòèðîâàíèå, ìîðñêèå åæè, ýìáðèîíû, ýêçîãàñòðóëÿöèÿ, èíôóçîðèè.
ÂÂÅÄÅÍÈÅ
 íàñòîÿùåå âðåìÿ âñå áîëåå øèðîêîå ïðèìåíåíèå íàõîäÿò ðàçëè÷íûå âåùåñòâà, ïîëó÷åííûå èç ðàñòèòåëüíîãî ñûðüÿ ýêñòðàêöèåé ñæèæåííûì è ñâåðõêðèòè÷åñêèì (ÑÊ) äèîêñèäîì óãëåðîäà. Îäíàêî òåõíîëîãèÿ ýêñòðàêöèè, àññîðòèìåíò
ñûðüÿ è îáëàñòè ïðîìûøëåííîãî ïðèìåíåíèÿ ÑÎ2-ýêñòðàêòîâ â Ðîññèè îãðàíè÷åíû 2 — 3 îòðàñëÿìè è ïðàêòè÷åñêè íå èñïîëüçóþòñÿ â ôàðìàêîëîãèè è ïðè
ïîëó÷åíèè ïðîäóêòîâ ãåðîäèåòè÷åñêîãî ïèòàíèÿ.  ñâÿçè ñ ýòèì ñîâåðøåíñòâîâàíèå òåõíîëîãèè ïðîèçâîäñòâà èç ðàçíîîáðàçíîãî ñûðüÿ ÑÎ2-ýêñòðàêòîâ, èñïîëüçóåìûõ â ïðîäóêòàõ ôóíêöèîíàëüíîãî íàçíà÷åíèÿ, âåñüìà àêòóàëüíî. ÑÎ2 â æèäêîì è ÑÊ ñîñòîÿíèÿõ ÿâëÿåòñÿ ýôôåêòèâíûì ðàñòâîðèòåëåì äëÿ ãèäðîôîáíûõ
âåùåñòâ. Êàê ïðàâèëî, âåùåñòâà, ïîëó÷åííûå ïî òåõíîëîãèè ñâåðõêðèòè÷åñêîé
16
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
Âëèÿíèå ñâåðõêðèòè÷åñêèõ è âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ
àñöèäèè halocynthia aurantium íà ãàìåòû, çèãîòû è ýìáðèîíû ìîðñêîãî åæà
óãëåêèñëîòíîé ýêñòðàêöèè, îòëè÷àþòñÿ îò âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ áîëåå
ñëîæíûì ñîñòàâîì. Ñ åå ïîìîùüþ ìîæíî ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ èçâëåêàòü èç
ñûðüÿ êîìïëåêñ êàê íàñûùåííûõ, òàê è íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò, à òàêæå æèðîðàñòâîðèìûå âèòàìèíû, âîñêà, òåðïåíû è òåðïåíîèäû, ôåíîëñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ, ïèãìåíòû, àëêàëîèäû, ôèòîñòåðèíû.
Àñöèäèè ðàññìàòðèâàþòñÿ êàê î÷åíü ïåðñïåêòèâíûé èñòî÷íèê ïðîòèâîîïóõîëåâûõ ïðåïàðàòîâ ñ óíèêàëüíûìè ìåõàíèçìàìè äåéñòâèÿ [1 — 3]. Èç ðàçíûõ
âèäîâ àñöèäèé âûäåëåíî íåñêîëüêî ïîëèöèêëè÷åñêèõ àðîìàòè÷åñêèõ àëêàëîèäîâ, îáëàäàþùèõ âûðàæåííîé ïðîòèâîîïóõîëåâîé àêòèâíîñòüþ [4 — 10]. Ìåõàíèçìû äåéñòâèÿ ýòèõ ñîåäèíåíèé íå ÿñíû, íî ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî îíè îòëè÷àþòñÿ îò ìåõàíèçìà äåéñòâèÿ èçâåñòíûõ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ ïðåïàðàòîâ.
Îáíàðóæåíî, ÷òî àñöèäèäåìèí, îòíîñÿùèéñÿ ê êëàññó ïèðèäîàêðèäîíîâ, íàðóøàåò òðàíñïîðò èîíîâ Ñà2 èç âíóòðèêëåòî÷íûõ äåïî (ìèòîõîíäðèè è ñàðêîïëàçìàòè÷åñêèé ðåòèêóëóì) â öèòîïëàçìó [8], íî îí òàêæå äåéñòâóåò è íà
ÄÍÊ êëåòîê, âûçûâàÿ åå ôðàãìåíòàöèþ, ÷òî ïðèâîäèò ê àïîïòîçó êëåòîê. Ýêòåèíàñöèäèíû, âåðîÿòíî, èíãèáèðóþò òðàíñêðèïöèþ, ñïåöèôè÷åñêè ñâÿçûâàÿñü
ñ ÄÍÊ-ïðîìîòîðîì [7, 9].
 àñöèäèÿõ òàêæå ñîäåðæàòñÿ è àíòèáèîòèêè. Íàïðèìåð, èç ãåìîöèòîâ ãàëîöèíòèè ïóðïóðíîé (Halocynthia aurantium) âûäåëåí àíòèìèêðîáíûé ïåïòèä ãàëîöèäèí [12].
 1970—1990 ãã. èññëåäîâàòåëÿìè ðàçíûõ ñòðàí ðàçðàáîòàíà ìåòîäîëîãèÿ áèîòåñòèðîâàíèÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ãàìåò, çàðîäûøåé è ëè÷èíîê ìîðñêèõ åæåé — «Sea
Urchin Test System» [13 — 15]. Íàèáîëåå øèðîêîå ïðèìåíåíèå ïîëó÷èë ìåòîä,
îñíîâàííûé íà àíàëèçå ýìáðèîíàëüíîãî è ðàííåãî ëè÷èíî÷íîãî ðàçâèòèÿ ìîðñêèõ åæåé — «Sea Urchin Embryo Test». Åãî ÷àñòî èñïîëüçóþò äëÿ òåñòèðîâàíèÿ
ðàçëè÷íûõ âåùåñòâ [16, 17].
Íàñòîÿùàÿ ðàáîòà ñâÿçàíà ñ ñîçäàíèåì íîâûõ âèäîâ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ
âåùåñòâ, îáëàäàþùèõ àíòèòåðàòîãåííûìè, ñîðáöèîííûìè, ïðîòèâîîïóõîëåâûìè è èììóíîìîäóëèðóþùèìè ñâîéñòâàìè. Ìîðñêèå ãèäðîáèîíòû, âêëþ÷àÿ àñöèäèé, ÿâëÿþòñÿ áîãàòûì èñòî÷íèêîì áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ. Èç íèõ
âûÿâëåíû ñîåäèíåíèÿ, îáëàäàþùèå êîìïëåêñîì äàííûõ áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ.
 íàñòîÿùåå âðåìÿ íà Äàëüíåì Âîñòîêå èíòåíñèâíî èçó÷àþòñÿ ïðåïàðàòû, ïîëó÷àåìûå èç òðåïàíãà, êóêóìàðèè, ãàíãëèåâ êàëüìàðà, ìûøå÷íîé òêàíè ìîëëþñêîâ è äðóãèõ ãèäðîáèîíòîâ. Àñöèäèÿ ïóðïóðíàÿ — îäèí èç òàêèõ îáúåêòîâ, îòîáðàííûõ â ïðîöåññå ñêðèíèíãà íà ñòðåññ-ìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå ñïèðòîâûõ
ýêñòðàêòîâ èç ìàññîâûõ âèäîâ ìîðñêèõ áåñïîçâîíî÷íûõ â çàëèâå Ïåòðà Âåëèêîãî.
Ýòè ôèëüòðóþùèå æèâîòíûå îòíîñÿòñÿ ê òèïó õîðäîâûõ, ïîäòèïó îáîëî÷íèêîâ.
Îíè øèðîêî ðàñïðîñòðàíåíû â äàëüíåâîñòî÷íûõ è àðêòè÷åñêèõ ìîðÿõ íà ãëóáèíå îò 4 äî 400 ìåòðîâ. Ôàðìàêîëîãè÷åñêè íàèáîëåå ïîëíî èçó÷åí ñïèðòîâîé
ýêñòðàêò èç òóíèêè àñöèäèè ïóðïóðíîé, íàçâàííûé õàóðàíòèíîì [17 — 19].
Õàóðàíòèí ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé âîäíî-ñïèðòîâîé ýêñòðàêò (1 : 1) èç ñóõîé
òóíèêè àñöèäèè. Â íåì îáíàðóæåíî 15 àìèíîêèñëîò, èç êîòîðûõ 7 ÿâëÿþòñÿ íåçàìåíèìûìè. Â ñîñòàâ ýêñòðàêòà âõîäÿò ôîñôîëèïèäû, æèðíûå êèñëîòû, íåéòðàëüíûå ëèïèäû. Ëèïèäû îáëàäàþò áîëüøîé íåíàñûùåííîñòüþ, îáóñëîâëåííîé ïîëèåíîâûìè æèðíûìè êèñëîòàìè. Â ýêñòðàêòå îáíàðóæåíû ïðîñòàãëàíäèíû,
êàðîòèíîèäû, âèòàìèí Ñ. Ïîëó÷àþò õàóðàíòèí ïî èçâåñòíîé òåõíîëîãèè ãàëåíîâûõ ïðåïàðàòîâ ìåòîäîì âîäíî-ñïèðòîâîé ýêñòðàêöèè. Ýòî íå ãàðàíòèðóåò äîñòàòî÷íóþ ïîëíîòó èçâëå÷åíèÿ äåéñòâóþùèõ âåùåñòâ, ïîýòîìó ïîèñê ñîâðåìåííûõ
ìåòîäîâ èçâëå÷åíèÿ êîìïëåêñîâ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ èç àñöèäèè â
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
17
À. Ë. Äðîçäîâ, Ò. Ë. ×èæîâà, Â. Ì. ×óäíîâñêèé, Â. È. Þñóïîâ,
Î. È. Ïîêðîâñêèé, Î. Î. Ïàðåíàãî, Í. Ã. Áóñàðîâà, Ñ. Â. Èñàé, Â. Í. Áàãðàòàøâèëè
íàñòîÿùåå âðåìÿ àêòóàëåí. Íàìè ïðåäëîæåí íîâûé ñïîñîá èçâëå÷åíèÿ äåéñòâóþùèõ âåùåñòâ èç ñóõîé òóíèêè àñöèäèè — ÑÊÔ ýêñòðàêöèÿ.
 íàñòîÿùåé ñòàòüå îïèñàíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ïî ïîëó÷åíèþ ýêñòðàêòîâ ñâåðõêðèòè÷åñêèì äèîêñèäîì óãëåðîäà èç ÿïîíîìîðñêîé àñöèäèè è òåñòèðîâàíèþ èõ áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè â ñðàâíåíèè ñ âîäíî-ñïèðòîâûì ýêñòðàêòîì.
ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÀß ×ÀÑÒÜ
Àñöèäèþ ãàëîöèíòèþ ïóðïóðíóþ (Halocynthia aurantium) (Tunicata, Ascidiaceaå,
Pleurobranchiata, Pyuridae) ñîáèðàëè â çàëèâå Ïåòðà Âåëèêîãî ßïîíñêîãî ìîðÿ
íà ãëóáèíå 5—20 ìåòðîâ.  êà÷åñòâå òåñòèðóþùåãî îáúåêòà â ýêñïåðèìåíòàõ èñïîëüçîâàëñÿ ñåðûé ìîðñêîé ¸æ Strongylocentrotus intermedius. Ìîðñêèõ åæåé èç ßïîíñêîãî ìîðÿ ñîäåðæàëè â àêâàðèàëüíîé ëàáîðàòîðèè Èíñòèòóòà áèîëîãèè ìîðÿ
ÄÂÎ ÐÀÍ. Îòáèðàëèñü ïîëîâîçðåëûå ýêçåìïëÿðû ïðèìåðíî îäíîãî ðàçìåðà íà
ñòàäèè òåêó÷åñòè ãîíàä. Îïûòû ïðîâîäèëèñü íà ÿéöåêëåòêàõ, ñïåðìàòîçîèäàõ,
ýìáðèîíàõ è òîëüêî ÷òî îïëîäîòâîðåííûõ êëåòêàõ. Ê çðåëûì ÿéöåêëåòêàì äîáàâëÿëè ñóñïåíçèþ ïîäâèæíûõ ñïåðìàòîçîèäîâ, è â ÷àøêó ñ ãàìåòàìè äîáàâëÿëè
âîäíî-ñïèðòîâûå è ñâåðõêðèòè÷åñêèå ýêñòðàêòû òóíèêè àñöèäèè ãàëîöèíòèè
ïóðïóðíîé. Ýêñïåðèìåíòû ïðîâîäèëè íà çèãîòàõ â ïðîöåññå îïëîäîòâîðåíèÿ (200—
250 ÿèö) è ëè÷èíêàõ (50 — 100 ëè÷èíîê â êàæäîì îïûòå): ðàííÿÿ è ñðåäíÿÿ
áëàñòóëû, ðàííÿÿ, ñðåäíÿÿ è ïîçäíÿÿ ãàñòðóëû è ïëóòåóñû. Ãàìåòû, ýìáðèîíû è
ëè÷èíêè ïîìåùàëèñü â ÷àøêè Ïåòðè ñ ìîðñêîé âîäîé ïðè òåìïåðàòóðå 19 —
20 Ñ. Â ýêñïåðèìåíòàõ èñïîëüçîâàëèñü êóëüòóðû ýìáðèîíîâ, â êîòîðûõ ïðîöåíò
îïëîäîòâîðåíèÿ ñîñòàâëÿë 98 %. Â ìîðñêóþ âîäó äîáàâëÿëè â ðàçíûõ îïûòàõ
0,4 — 0,1 ìã/ìë òåñòèðóåìûõ âåùåñòâ.
Êîíòðîëåì ñëóæèëè çàðîäûøè è ëè÷èíêè ñîîòâåòñòâóþùèõ ñòàäèé ðàçâèòèÿ,
íå ïîäâåðãàâøèåñÿ âîçäåéñòâèþ. Îïûòû ïðîâåäåíû â òðåõ ïîâòîðíîñòÿõ. Ñõåìà
ïîñòàíîâêè îïûòà áûëà îäèíàêîâà äëÿ âñåõ èññëåäóåìûõ ñòàäèé ðàçâèòèÿ.
 êà÷åñòâå âîäíî-ñïèðòîâîãî ýêñòðàêòà òóíèêè àñöèäèè ãàëîöèíòèè ïóðïóðíîé èñïîëüçîâàëè õàóðàíòèí, êîòîðûé èçãîòàâëèâàåòñÿ èç ñóøåíîé òóíèêè àñöèäèé ñ èñïîëüçîâàíèåì 70 % ñïèðòà. Ïåðåä îïûòàìè ïî áèîòåñòèðîâàíèþ ýêñòðàêò âûïàðèâàëè íà âàêóóìíîì èñïàðèòåëå.
Ýêñòðàêöèþ èçìåëü÷åííîé òóíèêè ãàëîöèíòèè ÑÊ äèîêñèäîì óãëåðîäà ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ýêñòðàêöèîííîé óñòàíîâêè SFE 1000 ïðîèçâîäñòâà
êîìïàíèè Thar Technologies. Äàííàÿ óñòàíîâêà ïîçâîëÿåò ïðîâîäèòü ýêñòðàêöèþ
â ïðîòî÷íîì ðåæèìå ñ èñïîëüçîâàíèåì ðàçëè÷íûõ ìîäèôèêàòîðîâ ïîëÿðíîñòè ñî
ñêîðîñòÿìè ïîòîêà ôëþèäà äî 200 ã/ìèí, äàâëåíèåì äî 650 áàð è òåìïåðàòóðîé
äî 120 Ñ.  ñîñóä åìêîñòüþ 200 ìë çàãðóæàëè íàâåñêó èçìåëü÷åííîé òóíèêè
ìàññîé 160 ã. Ãåðìåòèçèðîâàëè ñîñóä, ïðåäâàðèòåëüíî åãî òåðìîñòàòèðîâàëè, ïîñëå
÷åãî çàïóñêàëè ñèñòåìó. Âðåìåíåì íà÷àëà ýêñòðàêöèè ñ÷èòàëè âðåìÿ âûõîäà íà
ðåæèì âñåõ ðàáî÷èõ ïàðàìåòðîâ ýêñòðàêöèè. Ýêñïåðèìåíò ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ÷èñòîãî ÑÎ2 (99,8 %, ÃÎÑÒ 8050-85, ÎÀÎ «Ëèíäå Ãàç Ðóñ»), áåç ìîäèôèêàòîðîâ ïîëÿðíîñòè, â ñëåäóþùèõ óñëîâèÿõ:
— äàâëåíèå 300 áàð;
— òåìïåðàòóðà ýêñòðàêöèîííîãî ñîñóäà 40 Ñ;
— òåìïåðàòóðà ñáîðíèêà ôðàêöèé 35 Ñ;
— ñêîðîñòü ïîòîêà 30 ã/ìèí;
— âðåìÿ ýêñòðàêöèè 120 ìèí.
18
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
Âëèÿíèå ñâåðõêðèòè÷åñêèõ è âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ
àñöèäèè halocynthia aurantium íà ãàìåòû, çèãîòû è ýìáðèîíû ìîðñêîãî åæà
Ïî îêîí÷àíèè ýêñòðàêöèè ñáðàñûâàëè äàâëåíèå â ñèñòåìå, èçâëåêàëè òåôëîíîâûé ñîñóä èç ñáîðíèêà ôðàêöèé è ïðîâîäèëè äåãàçàöèþ â òå÷åíèå 3 ÷àñîâ.
Èçâëå÷åíèå ëèïèäîâ èç ýêñòðàêòîâ. Âûäåëåíèå ëèïèäíîé ÷àñòè âñåõ ýêñòðàêòîâ
ïðîâîäèëè ïî ìåòîäó Áëàÿ è Äàåðà [21]. Ïîðîøêîâóþ ìàññó çàëèâàëè ñìåñüþ
ìåòàíîë—õëîðîôîðì 1:1 (3 ìë ðàñòâîðèòåëÿ íà 1 ã ýêñòðàêòà), ãîìîãåíèçèðîâàëè
äàííóþ ñìåñü â áëåíäåðå Óîðèíãà ñ èñïîëüçîâàíèåì óëüòðàçâóêîâîãî óñèëåíèÿ â
òå÷åíèå 2 ìèíóò. Ïðîöåäóðó ïîâòîðÿëè äâàæäû, ïîñëå ÷åãî âûòÿæêè îáúåäèíÿëè
è äîáàâëÿëè íåçíà÷èòåëüíîå êîëè÷åñòâî âîäû äëÿ èíèöèàöèè ðàññëîåíèÿ ôàç.
Ýêñòðàêò ôèëüòðîâàëè äëÿ óäàëåíèÿ íåðàñòâîðåííûõ ÷àñòèö, çàòåì öåíòðèôóãèðîâàëè â òå÷åíèå 15 ìèíóò ïðè 3000 îá/ìèí äëÿ äîñòèæåíèÿ ïîëíîãî ðàçäåëåíèÿ
îðãàíè÷åñêîé è âîäíî-ñïèðòîâîé ôàç. Íèæíèé îðãàíè÷åñêèé ñëîé îòáèðàëè ïèïåòêîé, ïåðåíîñèëè â êîëáó è óïàðèâàëè îñíîâíîé îáúåì ðàñòâîðèòåëÿ. Êîíöåíòðèðîâàííûé ýêñòðàêò ïåðåíîñèëè â 2-ìèëëèëèòðîâûå ôëàêîíû è èñïàðÿëè
îñòàòêè ðàñòâîðèòåëÿ ñòðóåé èíåðòíîãî ãàçà.
ÃÕ-ÌÑ àíàëèç ìåòèëîâûõ ýôèðîâ æèðíûõ êèñëîò. Ãèäðîëèç æèðíûõ êèñëîò ñ
ïîñëåäóþùèì ìåòèëèðîâàíèåì îñóùåñòâëÿëè ïî ìåòîäó, îïèñàííîìó Õàðòìàíîì
[22]. Àíàëèç ïðîâîäèëè íà õðîìàòîãðàôå HP GC/MSD 5393 ñ èñïîëüçîâàíèåì
êàïèëëÿðíîé êîëîíêè HP-5-MS ïðè íàãðåâå ñî ñêîðîñòüþ 5 Ê/ìèí îò 100 äî
230 Ñ. Ðàñøèôðîâêó ñïåêòðîâ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì áàçû äàííûõ ìàñññïåêòðîâ US NBS.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ
Ïðè äîáàâëåíèè â ÷àøêè Ïåòðè, â êîòîðûõ ñîäåðæàëèñü ñïåðìàòîçîèäû, îïëîäîòâîðÿþùèåñÿ ÿéöåêëåòêè, äðîáÿùèåñÿ ýìáðèîíû, ýìáðèîíû íà ñòàäèè ðàííåé
è ñðåäíåé ãàñòðóëû, ëè÷èíêè íà ñòàäèè ðàííåãî ïëóòåóñà, âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ è èçìåëü÷åííîé òóíèêè ïîñëå åå ýêñòðàãèðîâàíèÿ ñâåðõêðèòè÷åñêèì äèîêñèäîì óãëåðîäà âèäèìûõ ðàçëè÷èé ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì íå îáíàðóæåíî. Ñïåðìàòîçîèäû ñîõðàíÿëè ïîäâèæíîñòü, áûë íîðìàëüíûé ïðîöåíò (îêîëî 98)
îïëîäîòâîðåíèÿ, äðîáëåíèå øëî áåç îòêëîíåíèé, ôîðìèðîâàëèñü íîðìàëüíàÿ ãàñòðóëà è ðàííèå ïëóòåóñû. Ëèøü ïðè äîáàâëåíèè âîäíî-ñïèðòîâîãî ýêñòðàêòà îòìå÷àëîñü
íåçíà÷èòåëüíîå óìåíüøåíèå ñêîðîñòè äðîáëåíèÿ, êîòîðîå íà ñòàäèè ïîçäíåé áëàñòóëû ñòàíîâèëîñü íåçàìåòíûì. Ãàñòðóëÿöèÿ ïðîèñõîäèëà áåç îòêëîíåíèé îò êîíòðîëÿ.
Ïðè äîáàâëåíèè ê òàêèì æå îáðàçöàì (ñïåðìèÿì, ýìáðèîíàì è ëè÷èíêàì)
ñâåðõêðèòè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ èç òóíèêè àñöèäèè ãàëîöèíòèè ïóðïóðíîé òàêæå
íå íàáëþäàëîñü îòêëîíåíèé â ðàçâèòèè ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì. Îäíàêî ïðè
äîáàâëåíèè â ñðåäó ñâåðõêðèòè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ â ìîìåíò, êîãäà ïðîèñõîäèëî
ñëèÿíèå ãàìåò, ðàçâèòèå íàðóøàëîñü. Îáðàçîâàíèå îáîëî÷êè îïëîäîòâîðåíèÿ è
äðîáëåíèå ïðîòåêàëè íîðìàëüíî, íî ïðîöåññ ãàñòðóëÿöèè íàðóøàëñÿ. Âìåñòî
ôîðìèðîâàíèÿ íîðìàëüíîãî àðõåíòåðîíà ïóòåì âïÿ÷èâàíèÿ áëàñòîìåðîâ âåãåòàтивной части бластулы, как это происходит в контроле (рис. 1а), ôîðìèðîâàëèñü
ýêçîãàñòðóëû (ðèñ. 1á). Ïðè ýêçîãàñòðóëÿöèè íå ïðîèñõîäèò èíâàãèíàöèè áëàñòîìåðîâ âåãåòàòèâíîãî ïîëþñà âíóòðü áëàñòîöåëÿ, íî îíè, íàîáîðîò, âûïÿ÷èâàþòñÿ
íàðóæó. Òàêèå ýêçîãàñòðóëû â äàëüíåéøåì íå ðàçâèâàþòñÿ, íî îñòàþòñÿ æèâûìè
â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ñóòîê, ñîõðàíÿÿ ïîäâèæíîñòü. Îíè ìîãóò íåçíà÷èòåëüíî
óâåëè÷èâàòüñÿ â ðàçìåðàõ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè ïîçäíèìè áëàñòóëàìè è
ñòàíîâèòüñÿ áîëåå ïðîçðà÷íûìè âñëåäñòâèå èçðàñõîäîâàíèÿ æåëòî÷íûõ ãðàíóë.
Äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ýìáðèîíîâ è ëè÷èíîê ìîðñêóþ âîäó áðàëè â àêâàðèàëüíîé Èíñòèòóòà áèîëîãèè ìîðÿ ÄÂÎ ÐÀÍ, êóäà îíà ïîñòóïàåò èç Àìóðñêîãî
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
19
À. Ë. Äðîçäîâ, Ò. Ë. ×èæîâà, Â. Ì. ×óäíîâñêèé, Â. È. Þñóïîâ,
Î. È. Ïîêðîâñêèé, Î. Î. Ïàðåíàãî, Í. Ã. Áóñàðîâà, Ñ. Â. Èñàé, Â. Í. Áàãðàòàøâèëè
à
á
â
ã
Ðèñ. 1. Ýìáðèîíû è ëè÷èíêè ìîðñêîãî åæà. Ìàñøòàá 50 ìêì:
à — êîíòðîëüíûå ýìáðèîíû ìîðñêîãî åæà ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå îñåìåíåíèÿ. Íîðìàëüíàÿ ãàñòðóëà; á — ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå îñåìåíåíèÿ â ïðèñóòñòâèè ñâåðõêðèòè÷åñêîãî ýêñòðàêòà. Ïðîèñõîäèò
íàðóøåíèå ãàñòðóëÿöèè è ôîðìèðîâàíèå ýêçîãàñòðóë; â — êîíòðîëü ÷åðåç 73 ÷àñà ïîñëå îñåìåíåíèÿ.  êóëüòóðàëüíîé ñðåäå ðàçìíîæàþòñÿ ìíîãî÷èñëåííûå èíôóçîðèè, à ýìáðèîíû ìîðñêîãî
åæà ëèçèðóþòñÿ; ã — ëè÷èíêè ìîðñêîãî åæà íà ñòàäèè ðàííåãî ïëþòåóñà ÷åðåç 73 ÷àñà ïîñëå
îñåìåíåíèÿ. Ñâåðõêðèòè÷åñêèé ýêñòðàêò äîáàâëåí ÷åðåç 24 ÷àñà ê ýìáðèîíàì íà ñòàäèè ïîçäíåé
ãàñòðóëû. Ïðîèñõîäèò íîðìàëüíîå ðàçâèòèå, à â êóëüòóðàëüíîé ñðåäå ïîëíîñòüþ îòñóòñòâóþò
èíôóçîðèè
çàëèâà.  ýòîé âîäå ñîäåðæèòñÿ áîëüøîå êîëè÷åñòâî áàêòåðèé è îäíîêëåòî÷íûõ
ýóêàðèîò, êîòîðûå èíòåíñèâíî ðàçìíîæàþòñÿ â ÷àøêàõ Ïåòðè ñ ýìáðèîíàìè
ìîðñêèõ åæåé. Îñîáåííî áûñòðî óâåëè÷èâàåòñÿ ÷èñëåííîñòü èíôóçîðèé. Íà ÷åòâåðòûå-ïÿòûå ñóòêè â êîíòðîëüíûõ êóëüòóðàõ èõ ñòàíîâèëîñü íàñòîëüêî ìíîãî, ÷òî
îíè ñúåäàëè ýìáðèîíîâ è ëè÷èíîê åæåé (ðèñ. 1â). Àíàëîãè÷íàÿ êàðòèíà íàáëþäàëàñü è ïðè äîáàâëåíèè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó âîäíî-ñïèðòîâîãî ýêñòðàêòà è èçìåëü÷åííûõ îñòàòêîâ òóíèêè ïîñëå ÑÊ ýêñòðàêöèè. Îäíàêî äîáàâëåíèå ÑÊ ýêñòðàêòà â ñðåäó ñ ýìáðèîíàìè, çàâåðøèâøèìè ãàñòðóëÿöèþ, ïîäàâëÿëî ðàçâèòèå
èíôóçîðèé, è ëè÷èíêè ðàçâèâàëèñü â ÷èñòîé ñðåäå ñ ìèíèìàëüíûì êîëè÷åñòâîì
îäíîêëåòî÷íûõ ýóêàðèîò, íå ïðåïÿòñòâîâàâøèõ ðàçâèòèþ ýìáðèîíîâ (ðèñ. 1ã).
Èññëåäîâàíèå ýêñòðàêòîâ ìåòîäàìè ãàçîâîé õðîìàòîãðàôèè ñ ìàññ-ñïåêòðîìåòðè÷åñêèì àíàëèçîì áûëî ïðîâåäåíî ñ ïðåäâàðèòåëüíîé ïîäãîòîâêîé ïðîá äëÿ
èññëåäîâàíèÿ íåïîëÿðíûõ ñîåäèíåíèé. Íà ðèñ. 2 ïðèâåäåíû ãàçîâûå õðîìàòîãðàììû ñâåðõêðèòè÷åñêîãî (ðèñ. 2à) è âîäíî-ñïèðòîâîãî (ðèñ. 2á) ýêñòðàêòîâ òóíèêè
àñöèäèè. Íà îáåèõ õðîìàòîãðàììàõ âèäíû ìíîãî÷èñëåííûå ïèêè æèðíûõ êèñëîò
è óãëåâîäîðîäîâ.
20
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
Âëèÿíèå ñâåðõêðèòè÷åñêèõ è âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ
àñöèäèè halocynthia aurantium íà ãàìåòû, çèãîòû è ýìáðèîíû ìîðñêîãî åæà
à
á
Ðèñ. 2. Ãàçîâûå õðîìàòîãðàììû ýêñòðàêòîâ òóíèêè àñöèäèè:
à — ñâåðõêðèòè÷åñêîãî; á — âîäíî-ñïèðòîâîãî
ÎÁÑÓÆÄÅÍÈÅ ÐÅÇÓËÜÒÀÒÎÂ È ÂÛÂÎÄÛ
Îïëîäîòâîðåíèå — íàèáîëåå ÷óâñòâèòåëüíûé ïåðèîä ðàçâèòèÿ ìîðñêèõ åæåé.
Ïîñêîëüêó ïðîöåññ ñëèÿíèÿ ãàìåò â ïðèñóòñòâèè ÑÊ ýêñòðàêòà ïðîèñõîäèò, òî
ìîæíî ñêàçàòü, ÷òî êîìïîíåíòû ýêñòðàêòà íå îêàçûâàþò âëèÿíèÿ íåïîñðåäñòâåííî íà ñïîñîáíîñòü ñïåðìàòîçîèäà ïðîíèêàòü ñêâîçü îáîëî÷êè ÿéöà, íî âîçäåéñòâóþò ïîçæå. Ýêñòðàêò íå îêàçûâàåò çàìåòíîãî âëèÿíèÿ íè íà ñïåðìàòîçîèäû, íè íà ÿéöåêëåòêè, íè íà ýìáðèîíû è ëè÷èíêè, è ìîæíî ñäåëàòü âûâîä,
÷òî ýôôåêò ÑÊ ýêñòðàêòà ïðîÿâëÿåòñÿ èìåííî â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ïåðâûõ
ìèíóò îïëîäîòâîðåíèÿ, òî åñòü îí âëèÿåò íà ïðîöåññ ñëèÿíèÿ ÿéöåêëåòêè è
ñïåðìàòîçîèäà.
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
21
À. Ë. Äðîçäîâ, Ò. Ë. ×èæîâà, Â. Ì. ×óäíîâñêèé, Â. È. Þñóïîâ,
Î. È. Ïîêðîâñêèé, Î. Î. Ïàðåíàãî, Í. Ã. Áóñàðîâà, Ñ. Â. Èñàé, Â. Í. Áàãðàòàøâèëè
×òî ïðîèñõîäèò â öèòîïëàçìå çèãîòû ñðàçó ïîñëå êîíòàêòà ãàìåò? Â ÿéöå è â
ñïåðìàòîçîèäå ïðîèñõîäèò âûñâîáîæäåíèå èîíîâ êàëüöèÿ, ÷òî ïðèâîäèò ê àêðîñîìíîé è êîðòèêàëüíîé ðåàêöèÿì. Äâèæåíèå èîíîâ êàëüöèÿ ìîæåò íàðóøàòüñÿ â
ïðèñóòñòâèè ÑÊ ýêñòðàêòà. Äåïîëÿðèçàöèÿ ìåìáðàíû ÿéöåêëåòêè âûçûâàåò ïîòåíöèàë àêòèâàöèè, êîòîðûé èíèöèèðóåò ôîðìèðîâàíèå â êîðòåêñå çèãîòû ñåòè
èç ïó÷êîâ ñïèðàëüíûõ àêòèíîâûõ ìèêðîôèëàìåíòîâ, êîòîðàÿ îáåñïå÷èâàåò âûäåëåíèÿ ñîäåðæèìîãî êîðòèêàëüíûõ ãðàíóë è ñòàáèëèçàöèþ ìîðôîãåíåòè÷åñêèõ
äåòåðìèíàíòîâ [23—24]. Ýòîò ïåðèîä ýìáðèîãåíåçà ÿâëÿåòñÿ âåñüìà ÷óâñòâèòåëüíûì ê äåéñòâèþ àëüòåðèðóþùèõ ôàêòîðîâ [25— 28]. Ýìáðèîíû â ïåðâûå ìèíóòû
ñëèÿíèÿ ãàìåò ÷óâñòâèòåëüíû è ê äåéñòâèþ ÑÊ ýêñòðàêòà. Ìåõàíèçì äàííîãî
ýôôåêòà çàêëþ÷àåòñÿ â ïðîöåññàõ, ïðîèñõîäÿùèõ îò ìîìåíòà êîíòàêòà ñïåðìèÿ
ñ ÿéöåêëåòêîé è äî ôîðìèðîâàíèÿ ïåðâîé áîðîçäû äðîáëåíèÿ, êîòîðûå ïðèâîäÿò ê îáúåäèíåíèþ ãàìåò.
Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ýôôåêò ÑÊ ýêñòðàêòà â ïåðâûå ìèíóòû
ïðîöåññà îïëîäîòâîðåíèÿ íàðóøàåò ïîòîêè èîíîâ êàëüöèÿ è ïðåïÿòñòâóåò íîðìàëüíîé ñáîðêå ïó÷êîâ àêòèíîâûõ ôèëàìåíòîâ, ÷òî ïîçæå ïðîÿâëÿåòñÿ â íàðóøåíèè ïðîöåññà ãàñòðóëÿöèè: âìåñòî íîðìàëüíîé èíâàãèíàöèè ïðîèñõîäèò ýêçîãàñòðóëÿöèÿ. Ýêçîãàñòðóëÿöèÿ — ýòî íåñïåöèôè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ ýìáðèîíîâ ìîðñêèõ
åæåé â îòâåò íà äåéñòâèå ðàçëè÷íûõ àëüòåðèðóþùèõ ôàêòîðîâ (íàïðèìåð, íåäîñòàòîê èîíîâ êàëüöèÿ â ìîðñêîé âîäå [29, 30]).
Âàæíûì ðåçóëüòàòîì ÿâëÿåòñÿ ñïîñîáíîñòü ÑÊ ýêñòðàêòà îêàçûâàòü èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå íà èíôóçîðèé, âî ìíîæåñòâå ðàçìíîæàþùèõñÿ â ìîðñêîé âîäå,
â êîòîðîé êóëüòèâèðóþòñÿ ýìáðèîíû. Î÷åâèäíî, ÷òî â ÑÊ ýêñòðàêòàõ ñîäåðæàòñÿ âåùåñòâà, òîêñè÷íûå äëÿ èíôóçîðèé.  âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòàõ ýòè ñîåäèíåíèÿ ëèáî îòñóòñòâóþò, ëèáî íåàêòèâíû.
Ãàçîâàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ïîêàçûâàåò íåêîòîðûå ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå âîäíî-ñïèðòîâûõ è ÑÊ ýêñòðàêòîâ (ðèñ. 2). Ýòè ôðàêöèè ìàëî îòëè÷àþòñÿ ïî ñîñòàâó æèðíûõ êèñëîò. Èõ êà÷åñòâåííûé ñîñòàâ â îñíîâíîì ñîâïàäàåò (ðèñ. 2à, á).  îáîèõ
ýêñòðàêòàõ ñîäåðæàòñÿ æèðíûå êèñëîòû Ñ14 — Ñ22, ðàçâåòâëåííûå êàðáîíîâûå
êèñëîòû è óãëåâîäîðîäû Ñ11 — Ñ26 . Ðàçëè÷èÿ â êîëè÷åñòâåííîì ñîñòàâå âåñüìà
ñóùåñòâåííû, íî, ïî-âèäèìîìó, ýòî ñâÿçàíî ñ òåì, ÷òî ïðè ïðîâåäåíèè ÑÊ
ýêñòðàêöèè íå áûëî îñóùåñòâëåíî ïîëíîå èçâëå÷åíèå ëèïèäíîé ôðàêöèè èç
òóíèêè. Îòñóòñòâèå îïðåäåëåííûõ êîìïîíåíòîâ, íàëè÷åñòâóþùèõ â âîäíî-ñïèðòîâîì ýêñòðàêòå, ãîâîðèò î òîì, ÷òî óñëîâèÿ ïðîâåäåíèÿ ïðîòî÷íîé ýêñòðàêöèè
ñâåðõêðèòè÷åñêèì ÑÎ2 äàëåêè îò îïòèìàëüíûõ.
Ðàçëè÷èÿ áèîëîãè÷åñêîãî äåéñòâèÿ âîäíî-ñïèðòîâûõ è ñâåðõêðèòè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ òóíèêè ïóðïóðíîé àñöèäèè, ïî-âèäèìîìó, ñëåäóåò èñêàòü íå â ëèïèäíîé ôðàêöèè, à âî ôðàêöèÿõ ïåïòèäîâ è âòîðè÷íûõ ìåòàáîëèòîâ.  ïîëüçó ýòîãî
ïðåäïîëîæåíèÿ ãîâîðèò è òî, ÷òî èç ãàëîöèíòèè ïóðïóðíîé âûäåëåí ïåïòèä
ãàëîöèäèí, îáëàäàþùèé àíòèìèêðîáíûìè ñâîéñòâàìè [12].
Ðàáîòà ïîääåðæàíà ãðàíòîì ÐÔÔÈ ¹ 08-02-00528a.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1.
2.
3.
22
Mayer A.M.S., Gustafson K.R. Intern. J. Cancer. 2003. Vol. 105. P. 291.
Yoshida T., Maoka T., Das S.K., Kanazawa K., Horinaka M., Wakada M., Satomi Y.,
Nishino H., Sakai T. Mol. cancer res. 2007. Vol. 5. No. 6. P. 615.
Konishi I., Hosokawa M., Sashima T., Maoka T., Miyashita K. J. of Oleo Science. 2008.
Vol. 57. No. 3. P. 181.
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
Âëèÿíèå ñâåðõêðèòè÷åñêèõ è âîäíî-ñïèðòîâûõ ýêñòðàêòîâ
àñöèäèè halocynthia aurantium íà ãàìåòû, çèãîòû è ýìáðèîíû ìîðñêîãî åæà
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
Kobayashi J., Cheng J.-F., Ishibashi M. et al. Tetrahedron Lett. 1988. Vol. 29. P. 1177.
Bonnard I., Bontemps N., Lahmy S. et al. Anticancer Drug Des. 1995. Vol. 10. P. 333.
Rinehart K.L., Holl T.G., Fregeau N.L. et al. J. Org. Chem. 1990. Vol. 55. P. 4512.
Bontemps N., Lahmy S. et al. Anticancer Drug Des. 1995. Vol. 10. P. 333.
Kastan M.B. Bioñhem. Biophys. Acta. 1999. Vol. 1424. P. R37.
Dassonneville L., Wattez N., Baldeyrou B. et al. Biochem. Pharm. 2000. Vol. 60. P. 527.
Erba E., Bergamaschi D., Bassano L. et al. Eur. J. Cancer. 2001. Vol. 37. P. 97.
Fayette J., Coquard I.R., Alberti L. et al. Oncologist. 2005. Vol. 10. P. 827.
Woong S.J., Kim K.N., Lee Y.Sh., Nam M.H., Lee I.H. FEBS letters. 2002. Vol. 521. No. 1—3.
P. 81.
Äèííåë Ï.À. Áèîë. ìîðÿ. 1995. Ò. 21. ¹ 6. Ñ. 390.
Êîáàÿñè Í., Íàéäåíêî Ò.Õ., Âàùåíêî Ì.À. Áèîë. ìîðÿ. 1994. Ò. 20. ¹ 6. Ñ. 457.
Manzo S. Ecotoxicology and Environmental Safety. 2004. Vol. 57. No. 2. P. 123.
Semenova M.N., Kiselyov A., Semenov V.V. BioTechniques. 2006. Vol. 40. P. 1.
Buznikov G.A., Nikitina L.A., Rakić L.M., Miloševi I., Bezuglov V.V., Lauder J.M., Slotkin Th.A.
Brain Res. Bull. 2007. Vol. 74. No. 4. P. 221.
Äîáðÿêîâ Þ.È., Ïîíîìàðåâà Ò.È., Äîáðÿêîâ Å.Þ. Âàëåîëîãèÿ: Äèàãíîñòèêà, ñðåäñòâà
è ïðàêòèêà îáåñïå÷åíèÿ çäîðîâüÿ. Âûï. 4. Âëàäèâîñòîê: Äàëüíàóêà, 2000. Ñ. 140.
Äîëìàòîâà Ë.Ñ., Äîáðÿêîâ Þ.È., Áîêëà÷ Ê.Â. Íåéðîèììóíîëîãèÿ. 2005. Ò. III. ¹ 2.
Ñ. 162.
Ïîíîìàðåâà Ò.È., Äîáðÿêîâ Þ.È. Ôèçèîëîãèÿ è ïàòîëîãèÿ èììóííîé ñèñòåìû. 2003.
Ò. 5. ¹ 2. Ñ. 231.
Bligh E.G., Dyer W.J. Can. I. Biochem. Physiol. 1959. Vol. 37. P. 911.
Hartmann L., Lago C.A., Regino N. Lab. Pract. 1973. Vol. 22. P. 475.
Äðîçäîâ À.Ë., Èñàåâà Â.Â., Ïîäãîðíàÿ Î.È. Öèòîëîãèÿ. 1987. Ò. 29. ¹ 3. Ñ. 267.
Äðîçäîâ À.Ë., Ñâÿòîãîð Ã.Ï. Îíòîãåíåç. 1987. Ò. 18. ¹ 5. Ñ. 540.
Drozdov A.L. Proceedings of the 7 th Internat. Echinoderm conference. Rotterdam:
A.A. Balkema Brookfield, 1991. P. 517.
Øêóðàòîâ Ä.Þ., Äðîçäîâ À.Ë. Íîâûå ìåäèöèíñêèå òåõíîëîãèè íà Äàëüíåì Âîñòîêå:
Ìàòåð. II Äàëüíåâîñò. ðåãèîíàëüíîé êîíô. ñ âñåðîññèéñêèì ó÷àñòèåì. 27—29 àïð. 1998 ã.
Âëàäèâîñòîê: Äàëüíàóêà, 1998. Ñ. 35.
Øêóðàòîâ Ä.Þ., Êàøåíêî Ñ.Â., Äðîçäîâ À.Ë. Áèîôèçèêà. 1998. Ò. 43. Âûï. 6. Ñ. 1097.
Äðîçäîâ Ê.À., Õëèñòóí Î.À., Äðîçäîâ À.Ë. Áèîôèçèêà. 2008. Ò. 53. Âûï. 3. Ñ. 513.
Okazaki K. Embryologia. 1956. Vol. 3. P. 23.
Takahashi T., Hoshi M., Asahima E. Development, Growth & Differentiation. 1976. Vol. 19.
No. 2. P. 131.
INFLUENCE OF SUPERCRITICAL AND WATER-ALCOHOL EXTRACTS
FROM HALOCYNTHIA AURANTIUM ONTO GAMETES, ZYGOTES AND
EMBRYO OF SEA URCHIN
1
À. L. Drozdov, 2 Ò. L. Chizhova, 2V. M. Chudnovskiy, 2,3 V. I. Yusupov,
3
O. I. Pokrovskiy, 3 O. O. Parenago, 4 N. G. Busarova, 4 S. V. Isai,
5
V. N. Bagratashvili
1
Institute of Marine Biology, FEB RAS, Vladivostok, Russia
Pacific Oceanological Institute, FEB RAS, Vladivostok, Russia
3
Institute of General and Inorganic Chemistry, RAS, Moscow, Russia
4
Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, FEB RAS, Vladivostok, Russia
5
Institute of Laser and Information Technologies, RAS, Troitsk, Moscow region, Russia
2
An influence of supercritical (SC) and water-alcohol extracts of Halocynthia aurantium
(Ascidiaceae, Tunicata) tunic onto gametes, embryo and larvae of sea urchin
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009
23
À. Ë. Äðîçäîâ, Ò. Ë. ×èæîâà, Â. Ì. ×óäíîâñêèé, Â. È. Þñóïîâ,
Î. È. Ïîêðîâñêèé, Î. Î. Ïàðåíàãî, Í. Ã. Áóñàðîâà, Ñ. Â. Èñàé, Â. Í. Áàãðàòàøâèëè
Strongylocentrotus intermedius is studied. It is showen that water-alcohol extract has no
remarkable effect onto gametes, process fertilization, development of embryo and
larvae of sea urchin. If the SC extract is added during the gamete fusion, the fertilization
and cell-division of blastomers are not affected, but the gastrulation becomes abnormal —
the exogastrulas are formed. Moreover, during the cultivation of embryo in a cultural
medium with SC extracts, the growth of Infusoria is depressed. It is likely that the
origin of differences in the biological effects of SC and water-alcohol extracts ought to
look for in peptide or secondary metabolite fractions, since no distinct differences in
li pid fractions are detected.
K e y w o r d s: supercritical and water-alcoholic extracts, Ascidia, Halocynthia
aurantium, bio-test, sea urchins, embryo, exogastrulation, Infusoria.
«Ñâåðõêðèòè÷åñêèå Ôëþèäû: Òåîðèÿ è Ïðàêòèêà». Òîì 4. ¹ 3. 2009