Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической
реклама
Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови Т- и В-лимфоциты идентифицируют на основании выявления характерных для каждого типа клеток поверхностных структур - рецепторов или маркеров. Использование для идентификации иммунокомпетентных клеток моноклональных антител (МКАТ) к различным СD-антигенам в настоящее время является наиболее точным методом. Принцип идентификации СD-антигенов заключается в следую-щем. Выделенные из крови мононуклеары обрабатывают соответствующими МКАТ. После этого визуализируют результаты реакции с помощью флуоресцентной или ферментной метки. При использовании флуоресцентной метки с люминесцентной микроскопией клетки с соответствующими СD-антигенами имеют светящиеся ободки. При визуализации ферментной меткой (например, пероксидазой) в световом микроскопе определяется цветная реакция взаимодействия СD-антигенов клеток и соответствующих меченых антител. Присоединение МКАТ к определенным типам клеток можно фиксировать также при помощи лим-фоцитотоксического теста. Последний основан на способности МКАТ класса IgM и IgG и комплемента оказывать цитотоксическое воздействие на соответствующую популяцию лимфоцитов, что выявляется с помощью красителя. Универсальным методом исследования дифференцировочных антигенов лейкоцитов является лазерная проточная цитометрия, которая позволяет на основе иммунофлюоресценции определить численность различных популяций и субпопуляций лимфоцитов, а также плотность рецепторов на клеточной мембране. Наиболее широко используемым в клинике и в то же время достаточно информативным и дешевым методом определения численности популяций лимфоцитов является метод розеткообразования. Для идентификации Т-лимфоцитов человека используется способность Т-клеточного антигена (CD2) этих клеток взаимодействовать с эритроцитами барана и образовывать так называемые розетки в реакции розеткообразования Е-РОК. Послед-няя заключается в «прилипании» эритроцитов барана к поверхности Т-лимфоцитов человека при их смешивании с образованием розеток, в центре которых находится лимфоцит, а по периферии эритроциты. Аналогичным методом с помощью эритроцитов мыши определяются В-лимфоциты. 1/2 Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови Как правило, определяют количество Т-общих лимфоцитов (общее количество лимфоцитов с маркерами CD2) и количество Т-активных лимфоцитов. Субкласс активных Т-лимфоцитов относится к менее зрелым клеткам, хорошо коррелирует с Т-клеточной функцией, клиническим течением заболевания, то есть отражает функциональную активность Т-клеточного звена иммунитета. Определяют данный субкласс путем изменения условий постановки реакции определения Т-общих лимфоцитов (соотношение между лимфоцитами и индикаторными частицами, время инкубации). Число Т-лимфоцитов в периферической крови здорового человека составляет 40-60%, или от 1200 до 1600 в 1 мкл крови. В норме величина соотношения общих и активных Т-лимфоцитов составляет 0,57+0,03. Число В-лимфоцитов в периферической крови в норме составляет 25-35%. 2/2
