ВЛИЯНИЕ ДИМЕТИЛСУЛЬФОКСИДА НА ПОПУЛЯЦИЮ КЛЕТОК

ÝÍÇÎÎÒÈÈ
дегидом на фосфатном буфере рН 6,8–7,0
с последующим обезвоживанием в возрастающей концентрации спиртов 50°, 70°, 96°,
100° и пропиленоксида.
Препараты для сканирующей электронной микроскопии напыляли золотом и
просматривали на электронном микроскопе Hitachi 800.
В сканирующем электронном микроскопе на фрагментах комбикормов наблюдали адгезию единичных клеток M. avium,
а так же образование колоний, на поверхностях которых выявлялся массивный слоистый покров.
На препаратах из зерен сои также было
выявлено формирование колоний, закрытых покровами. В отдельных участках просматривались концевые отделы клеток.
На фрагментах скорлупы яйца с внутренней и наружной стороны выявлены удлиненные клетки, некоторые из которых
находились на стадии деления. В участках
скопления клеток выявлен межклеточный
матрикс. Процесс колонизации сопровождался образованием покровов на поверхности клеток. На препаратах, приготовленных из кожи кур, также выявлена адгезия единичных клеток M. avium и образование колоний, закрытых с поверхности
покровами.
Наши исследования показали, что взаимодействие микобактерий с исследуемыми
тест-объектами начинаются с процесса адгезии клеток к субстрату, о чем свидетельствовало наличие делящихся клеток. Процесс адгезии идет по типу лиганд-рецепторного взаимодействия. Во взаимодействии
микобактерий с субстратом участвуют ли-
гандные молекулы (адгезины), находящиеся на поверхности бактерий, которые взаимодействуют с комплементарными молекулами (рецепторами) на поверхности
клеток биологического субстрата. По данным литературы адгезины у микобактерий
имеют сложную пептидогликолипидную
природу. В процессе адгезии клеток идет
формирование межклеточного матрикса и
покровов на поверхностях клеток, что приводит к увеличению биомассы бактерий на
тест-объектах.
Исследования, проведенные с использованием методов сканирующей электронной микроскопии показали, что в процессах адгезии и колонизации особая роль
принадлежит экзопродуктам клеток микобактерий. Покровы на поверхности колоний являются также формой защиты бактерий от воздействия абиотических и биотических факторов окружающей среды.
В заключение следует отметить, что
патогенные микобактерий способны не
только выживать, но и размножаться на
объектах окружающей среды. Важным
экологическим фактором в развитии, адгезии и колонизации патогенных микобактерий являются такие необходимые условия
как наличие питательного субстрата, оптимальной влажности и температуры.
Полученные данные свидетельствуют
о том, что выживание, размножение и образование колоний патогенных микобактерий на поверхностях объектов окружающей среды представляют серьезную санитарно-эпидемиологическую опасность
как возможный резервуар туберкулезной
инфекции для животных и человека.
УДК 636.03:579.842.23
Н.Д. Архипова
(Всероссийский НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии)
ВЛИЯНИЕ ДИМЕТИЛСУЛЬФОКСИДА
НА ПОПУЛЯЦИЮ КЛЕТОК МИКОБАКТЕРИЙ
Широкое распространение туберкулезной инфекции среди животных и человека
ставит проблему изыскания эффективных
препаратов для дезинфекции животноводческих помещений и других объектов окружающей среды. Исследования строения,
роста и изменчивости популяций бактерий
при их естественном развитии и воздействии на них биотических и абиотических
факторов являются одним из малоизученных разделов экологии бактерий.
Ветеринарная патология. № 3. 2003
Целью данного исследования было изучение действия препарата ди-метилсульфоксида (ДМСО), применяемого в медицинской практике под названием «димексид».
В качестве тест-объекта в опытах использовали сапрофитный штамм микобактерий В-5. Для изучения морфологии
клеток в колониях применяли мембранные фильтры «Владипор», помещенные
на слой питательной среды в чашки Пет89
ÝÍÇÎÎÒÈÈ
ри. После инкубации культуры при 37° С
в течение 2–3 суток фильтры с выросшей
культурой помещали в чистые чашки Петри. На поверхность колоний наносили 1–
5% раствор ДМСО на 1–2 ч. По истечению
указанного времени колонии фиксировали парами глутарового альдегида, обезвоживали в парах пропиленоксида и изучали
в световом и сканирующем электронном
микроскопах.
Исследования показали, что клетки микобактерий контрольных препаратов имеют хорошо развитый межклеточный матрикс, колонии бактерий закрыты с поверхности плотным покровом.
После обработки колоний ДМСО выявлено нарушение межклеточных связей
в колониях, частичное или полное разрушение внешних покровов, а также дефектность клеточных стенок с явлениями гетероморфизма и L-трансформации.
Полученные данные свидетельствуют о том, что диметилсульфоксид активно
растворяет продуцируемые клетками липиды, вызывая разрушение межклеточного матрикса, покровов и клеточной стенки,
что значительно снижает колониеобразующую активность популяции микобактерий, предотвращая развитие инфекционного очага. Проведенные исследования
показывают возможность использования
ДМСО как компонента при разработке дезинфекционных препаратов при туберкулезной инфекции.
УДК 619:579.842.14:543.545
P.M. Ахмадеев, Л.И. Зайнуллин, A.M. Алимов
(Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт)
ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИПЕПТИДНЫХ ПРОФИЛЕЙ
РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ САЛЬМОНЕЛЛ
В эпизоотических очагах выделяются
разные виды и серотипы сальмонелл, дифференциация которых является трудоемкой. В этом аспекте значительный интерес
представляет изучение полипептидного
состава возбудителей сальмонеллеза, так
как антигенные свойства во многом обусловлены белками микробов.
Полипептидный состав изучали при
разгонке лизированных микробных клеток с использованием ДСН в градиенте
концентрации ПААГ (10–20%) по Laemmli U.K. (1970). Гели окрашивали Кумасси
R-250 и импрегнацией серебром по Marshall Т (1984).
Денситометрирование электрофореграмм проводили на сканере Sharp 330Yx,
с дальнейшим определением молекулярных масс и процентного содержания белковых фракций по программе «ImageMaster ID prime».
В результате проведенных исследований получены сравнительные характеристики электрофоретических профилей патогенных (S. cholerae suis 370, S. typhimurium 371, S. enteritidis 418, S. dublin) и вакцинных (S. cholerae suis TC-177, S. typhimurium3) штаммов. У сальмонелл обнаруживались от 31 до 41 фракций полипептидов с
молекулярной массой от 2 до 227 кДа. Полипептиды изучаемых штаммов сальмо90
нелл характеризовались различной относительной подвижностью (Rf), которые
можно подразделить на три группы: малоподвижные (Rf от 0 до 0,2), среднеподвижные (Rf от 0,2 до 0,8) и легкоподвижные
(Rf от 0,8 до 1,0). Наибольшее количество
фракций (от 19 до 23) приходилось на группу со средней подвижностью.
Сравнительный анализ качественного
и количественного состава полипептидов
позволил установить определенные сходства и различия в зависимости от штаммовой принадлежности микроорганизмов.
Так, у S. cholerae suis шт. 370 выявлялось
до 34 фракций, у штаммов S. typhimurium
шт. 371 и у S. dublin — 34 и 36 фракций соответственно. Электрофоретические профили шт. 370 (вирулентный) и шт. ТС-177
(вакцинный) характеризовались наличием 12 общих мажорных фракций с молекулярными массами от 6 до 72 кДа. В то же
время обнаружены и некоторые отличия
между ними в качественном и количественном содержании отдельных полипептидов. У вирулентного штамма S. cholerae suis 370 концентрация полипептидов с молекулярными массами 50 и 149 кДа составляла 5,3% и 5,8% соответственно, тогда как
у вакцинного ТС-177 эти полипептиды обнаружены в незначительном количестве
(1,3% и 0,2%).
Ветеринарная патология. № 3. 2003