О тестах на ВИЧ

Лабораторные исследования
Первый тест на ВИЧ появился после идентификации вируса в 1984 году. ВИЧинфекция определяется по наличию антител на вирус или при обнаружении вирусных
антигенов посредством тестов на базе нуклеиновых кислот или посредством выделения
культуры вируса. Стандартный тест представляет собой серологическое определение
антител к ВИЧ. Существует два типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые гомологичны по
аминокислотному составу на 40—60 %. ВИЧ-1 подразделяется на 2 группы (М и О), а
группа М подразделяется на подгруппы от А до I1'.
Тесты на ВИЧ-антитела
• ELISA/ELA (ИФА) (enzyme-linked immunosorbent assay — твердофазный
иммуноферментный анализ). Наиболее распространенным тестом для определения
антител к IgG ВИЧ в сыворотке пациента является иммуноферментный анализ (ИФА). В
этой реакции ВИЧ-антитела пациента связываются с антигеном ВИЧ в присутствии
фермента, преобразующего бесцветный субстрат в окрашенный продукт, который затем
анализируют спектрофотометрически. Рекомендуется подтверждение первичной
реактивности образца путем повторного теста с использованием вирусных антигенов
и/или тест-системы иного типа, прежде чем объявить окончательный положительный
результат.
• Иммуноблоттинг (вестерн блоттинг). Этот тест предназначен для определения антител к
ВИЧ-1. Кроме того, он позволяет путем электрофореза определить специфический
антиген, против которого направлены антитела. Хотя точные критерии того, что
является положительным результатом иммуноблоттинга противоречивы, этот тест
широко используется для подтверждения положительного теста ИФА, однако, не
считается обязательно необходимым. Чувствительность и специфичность комбинации
ИФА и подтверждающего его иммуноблоттинга для ИФА-положительных образцов
превышает 99,9%.
Тесты на антиген ВИЧ
 Тест на антиген ВИЧ р-24. В этом тесте измеряется количество свободного вирусного
белка (р-24), присутствующего в плазме или в надосадочной жидкости культуры ткани,
на ранней стадии ВИЧ-инфекции, а затем снова при прогрессировании СПИДа.
Методики получения вирусной культуры
• Мононуклеары периферической крови (РВМС — peripheralblood mononuclear cells)
являются ко-культурой для выделения ВИЧ-1. Процедура выделения вируса в культуре
ткани является очень дорогостоящей методикой, требующей больших затрат времени и
труда при переменном успехе, поэтому для диагностики инфекции ее использовать
нецелесообразно.
ПЦР (полимеразная цепная реакция)
• ПЦР была внедрена в практику в конце 80-х годов и явилась существенным прогрессом
в
диагностике
многих
заболеваний,
включая
ВИЧ-инфекцию.
Эта
высокочувствительная методика позволяет увеличить содержание целевых ДНК или
РНК, существующих в очень малых количествах (даже при наличии одной копии ВИЧ
на 100 000 клеток) посредством серии бинарных циклов репликации.
Однако основной проблемой амплификации при ПЦР является, как ни странно, ее
невероятная чувствительность. К сожалению, неизбежное загрязнение реагентов или
целевой ДНК может приводить к ложноположительным результатам. Тем не менее, при
соответствующем проведении реакции в лабораториях и наличии опытного персонала,
эта методика позволяет обнаружить инфекцию на ранней стадии, когда серологический
ответ еще не сформировался.
Измерение вирусной нагрузки с помощью такого количественного метода, как ПЦР стало
стандартной методикой определения стадий заболевания и оценки эффективности
антиретровирусной терапии. ПЦР играет определенную роль и в диагностике первичной
ВИЧ-инфекции, хотя здесь следует действовать с осторожностью.
Точность
• Самые новые и более чувствительные тесты уменьшают период «окна» до 3—4 недель.
Несмотря на то, что точность серологических реакций на ВИЧ тоже очень высока, их
результаты могут быть положительными, отрицательными и неопределенными.
Критериями положительности теста является повторно положительный ИФА с
последующим положительным иммуноблоттингом. Неопределенный результат чаще
всего — это положительная реакция в ИФА и наличие в иммуноблоттинге антител лишь
к одному белку, обычно к р-24. Среди многих причин неопределенных результатов
следует упомянуть сероконверсию и перекрестное реагирование аллоантител или
аутоантител.
• Пациенты из категорий с малым риском заражения при наличии промежуточных
результатов почти никогда не оказываются инфицированными ни ВИЧ-1, ни ВИЧ-2,
однако,
неопределенный
результат
следует
перепроверить,
повторив
тестирование через 3—12 недель.
Период «окна»
• Это период от момента инфицирования ВИЧ до сероконверсии и обычно он составляет
менее 3-4 месяцев. Лишь в редких случаях этот период может быть длиннее.
ВИЧ-2
• ВИЧ-2 первично был обнаружен в странах западной Африки. Обычно в коммерческих
тест-системах для ИФА содержатся антигены ВИЧ-2, и, если исследуемая сыворотка
взята у лица, инфицированного ВИЧ-2, реакция будет положительной.
Ложноположительные реакции на ВИЧ
• Административная ошибка в клинике или лаборатории (на пример, путаница в
маркировке образцов или бланков) может привести к неверным результатам,
сообщаемым лицам, проходящим тестирование на ВИЧ-инфекцию. Поэтому
рекомендуется у всех пациентов с положительной реакцией на наличие антител к ВИЧ
взять еще одну пробу крови и исследовать ее на антитела к ВИЧ по той же методике.
• Под ложноположительным тестом на ВИЧ понимают комбинацию положительного
ИФА и иммуноблоттинга. При скрининге популяций с низким уровнем
распространения инфекции доля регистрируемых ложноположительных результатов
тестирования составляет от 0,0004 до 0,0007%.
• Наиболее распространенной причиной ложноположительного теста является
вакцинация. Однако описан один случай такого результата при заболевании системной
красной волчанкой и в терминальной стадии заболевания почек.
• При скрининге на обнаружение в плазме крови РНК ВИЧ также могут быть получены
Ложноположительные результаты, поэтому в таких случаях требуется их
подтверждение обычными серологическими методами.