ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ ÇÄÐÀÂÎÎÕÐÀÍÅÍÈß ÐÅÑÏÓÁËÈÊÈ ÁÅËÀÐÓÑÜ

ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ ÇÄÐÀÂÎÎÕÐÀÍÅÍÈß ÐÅÑÏÓÁËÈÊÈ ÁÅËÀÐÓÑÜ
Ðàçðåøåíî Ìèíçäðàâîì Ðåñïóáëèêè
Áåëàðóñü äëÿ ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ
Ïåðâûé çàìåñòèòåëü ìèíèñòðà çäðàâîîõðàíåíèÿ, ïðåäñåäàòåëü êîìèññèè ïî ñïîñîáàì
ïðîôèëàêòèêè, äèàãíîñòèêè, ëå÷åíèÿ è
îðãàíèçàöèîííûì ôîðìàì ðàáîòû ÌÇ ÐÁ
__________________ Â.Ì. Îðåõîâñêèé
12 èþíÿ 2000 ã.
Ðåãèñòðàöèîííûé íîìåð ¹ 121–9911
ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÄÍÊÀÇÍÎÉ ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÈ ÏÐÅÏÀÐÀÒΠÑÛÂÎÐÎÒÎ×ÍÛÕ
IgG ÄËß ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÉ ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÈ ÇÀÁÎËÅÂÀÍÈÉ
ÙÈÒÎÂÈÄÍÎÉ ÆÅËÅÇÛ
(èíñòðóêöèÿ ïî ïðèìåíåíèþ)
Ó÷ðåæäåíèå-ðàçðàáîò÷èê: Âèòåáñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò
Àâòîðû: Å.Â. Êóíäåð (Ñèäîðñêàÿ), È.È. Ãåíåðàëîâ, ïðîô. À.Í. Îêîðîêîâ
1
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
Îãëàâëåíèå
ÏÎÊÀÇÀÍÈß Ê ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÞ ............................................................................................................ 3
ÏÅÐÅ×ÅÍÜ ÍÅÎÁÕÎÄÈÌÎÃÎ ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÎÃÎ ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈß,
ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÈÕ ÏÐÅÏÀÐÀÒÎÂ, ÈÍÑÒÐÓÌÅÍÒÀÐÈß .................................................................. 4
ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÒÅÕÍÎËÎÃÈÈ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈß ÌÅÒÎÄÀ ........................................................... 6
ÂÎÇÌÎÆÍÛÅ ÎÑËÎÆÍÅÍÈß È ÎØÈÁÊÈ.................................................................................... 13
2
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
ÏÎÊÀÇÀÍÈß Ê ÏÐÈÌÅÍÅÍÈÞ
Îïðåäåëåíèå êàòàëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïðåïàðàòîâ èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G
ñûâîðîòêè êðîâè èñïîëüçóåòñÿ äëÿ èììóíîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè çàáîëåâàíèé ùèòîâèäíîé
æåëåçû (äèôôóçíîãî òîêñè÷åñêîãî çîáà, àóòîèììóííîãî òèðåîèäèòà è ïîäîñòðîãî
òèðåîèäèòà).
 êà÷åñòâå äèàãíîñòè÷åñêîãî êðèòåðèÿ ïðåäëàãàåòñÿ îöåíêà óðîâíåé ýíäîíóêëåàçíîé
(ÄÍÊàçíîé) àêòèâíîñòè ïðåïàðàòîâ ñûâîðîòî÷íûõ IgG. Ýòîò òåñò äîïîëíÿåò ëàáîðàòîðíóþ
äèàãíîñòèêó âûøåïåðå÷èñëåííûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèé. Åãî ìîæíî èñïîëüçîâàòü êàê
óòî÷íÿþùèé êðèòåðèé â ñëó÷àå íåâîçìîæíîñòè âûïîëíåíèÿ áèîïñèè òêàíè ùèòîâèäíîé
æåëåçû, à òàêæå ïðè ðàçíîðå÷èâîñòè äðóãèõ ðåçóëüòàòîâ ëàáîðàòîðíûõ è èíñòðóìåíòàëüíûõ
èññëåäîâàíèé.
3
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
ÏÅÐÅ×ÅÍÜ ÍÅÎÁÕÎÄÈÌÎÃÎ ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÎÃÎ ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈß,
ÌÅÄÈÖÈÍÑÊÈÕ ÏÐÅÏÀÐÀÒÎÂ, ÈÍÑÒÐÓÌÅÍÒÀÐÈß
Âåñû ðàâíîïëå÷èå ðó÷íûå ÂÐ-100 ïî ÃÎÑÒ 395-54.
Âåñû ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 19491-74.
Âîðîíêè ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 86-13-64.
Êîëáû ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 10394-72.
Ìàãíèòíûé ñìåñèòåëü ñ ìàãíèòîì öèëèíäðè÷åñêèì ÌÌÇ-94-5245.
Íîæíèöû ìåäèöèíñêèå ïî ÃÎÑÒ 21239-77.
Ïðîáêè êîíóñíûå ïî ÃÎÑÒ 7852-76.
Ïðîáèðêè öåíòðèôóæíûå ñòåêëÿííûå.
Ñòàêàíû ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 10973-75.
Òåðìîñòàò ýëåêòðè÷åñêèé ñ àâòîìàòè÷åñêèì òåðìîðåãóëÿòîðîì äî òåìïåðàòóðû 50°Ñ ñ
öåíîé äåëåíèÿ 0,2°Ñ.
Õîëîäèëüíèê áûòîâîé ýëåêòðè÷åñêèé ñ òåìïåðàòóðîé â êàìåðå 4–6°Ñ.
Öåíòðèôóãà ñ óãëîâûì ðîòîðîì ÖËÊ-2.
Öåíòðèôóãà ñ áàêåòíûì ðîòîðîì ÎÏÍ-ÇÓ4.2
Ñïåêòðîôîòîìåòð ÑÔ-26 èëè ÑÔ-46 (ïðîèçâîäñòâà ËÎÌÎ, Ðîññèÿ).
ðÍ-ìåòð «ðÍ-121».
Óñòðîéñòâî äëÿ äèàëèçà.
Âîäà äèñòèëëèðîâàííàÿ ïî ÃÎÑÒ 7609-72.
Ãèäðîôîñôàò íàòðèÿ äâóõâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 245-76.
Äèãèäðîôîñôàò íàòðèÿ äâåíàäöàòèâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 4172-76.
Òðèòîí Õ-305 (Merck) èëè Òðèòîí Õ-100 (Ferak).
Ãëèöèí (Reanal) èëè êèñëîòà àìèíîóêñóñíàÿ (íàòðèåâàÿ ñîëü) ïðîèçâîäñòâà «Ðåàõèì».
4
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
Òðèñ-(ãèäðîêñèìåòèë)-àìèíîìåòàí (ïðîèçâîäñòâà Reanal èëè «Îëàéíáèîôàðì»).
Ýòàêðèäèíà ëàêòàò (ðèâàíîë).
Àêòèâèðîâàííûé óãîëü.
Àììîíèÿ ñóëüôàò (Ðåàõèì) ïî ÃÎÑÒ3769-78.
Õëîðèä íàòðèÿ (Ðåàõèì).
Àãàðîçà, êîíúþãèðîâàííàÿ ñ áåëêîì À çîëîòèñòîãî ñòàôèëîêîêêà (ïðîèçâîäñòâà èíñòèòóòà
èì. Ïàñòåðà, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, Ðîññèÿ).
Äåçîêñèðèáîíóêëåèíîâàÿ êèñëîòà (Sigma).
Ñîëÿíàÿ êèñëîòà 0,1í è 1í (ôèêñàíàë).
Ìàòðèöû äëÿ DEAE-õðîìàòîãðàôèè Toyopearl 650M («Toyosoda», Japan) èëè Ìîëñåëåêò
DEAE À50 (Reanal).
Íàáîð ïèïåòîê àâòîìàòè÷åñêèõ îò 0,02 äî 1,0 ìë.
Óíèâåðñàëüíàÿ èíäèêàòîðíàÿ áóìàãà ðÍ 0–12 (ïðîèçâîäñòâà «Lachema» èëè «Ðåàõèì»).
Áóìàæíûå ôèëüòðû (ïðîèçâîäñòâà «Filtrak»).
5
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÒÅÕÍÎËÎÃÈÈ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈß ÌÅÒÎÄÀ
1. Âûäåëåíèå IgG èç ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ çàáîëåâàíèÿìè ùèòîâèäíîé
æåëåçû, à òàêæå çäîðîâûõ ëèö (äîíîðîâ êðîâè)
À. Ïðèãîòîâëåíèå èñõîäíûõ ðàñòâîðîâ è îáîðóäîâàíèÿ äëÿ âûäåëåíèÿ ñûâîðîòî÷íûõ
èììóíîãëîáóëèíîâ
Ïðèãîòîâëåíèå 0,4 ìîëü ôîñôàòíîãî áóôåðà (ÔÁÐ) ðÍ 7,4.
57,2 ã Na2HPO4 äîâåñòè äî 450 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé (ðàñòâîð ¹1). Îòäåëüíî 6 ã
NaH2PO4 äîâåñòè äî 100 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé (ðàñòâîð ¹2). 400 ìë ðàñòâîðà ¹1
ñìåøàòü ñ 100 ìë ðàñòâîðà ¹2. Êîíòðîëü ðÍ îñóùåñòâëÿåòñÿ íà ðÍ-ìåòðå.
Ïðèãîòîâëåíèå 0,1 ìîëü ôîñôàòíîãî áóôåðíîãî ðàñòâîðà ðÍ 7,4.
100 ìë 0,4 ìîëü ôîñôàòíîãî áóôåðà ðÍ 7,4 äîâåñòè äî 400 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé.
Òùàòåëüíî ïåðåìåøàòü.
Ïðèãîòîâëåíèå 0,1 ìîëü ôîñôàòíîãî áóôåðà ðÍ 7,4 ñ 1% ðàñòâîðîì òðèòîíà Õ-305.
4 ã òðèòîíà Õ-305 ðàñòâîðèòü â 400 ìë 0,1 ìîëü ôîñôàòíîãî áóôåðà ðÍ 7,4.
Ïðèãîòîâëåíèå ãëèöèí-HCl áóôåðà ðÍ 2,8.
2,28 ãðàììà ãëèöèíà ðàñòâîðèòü â 280 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Çàòåì ê 280 ìë
ïîëó÷åííîãî ðàñòâîðà äîáàâèòü 120 ìë 0,1Í HCl. Îáùèé îáúåì äîëæåí ñîñòàâèòü 400 ìë.
Êîíòðîëü ðÍ îñóùåñòâëÿåòñÿ íà ðÍ-ìåòðå.
Íàáèâêà êîëîíêè, ñîäåðæàùåé àêòèâèðîâàííûé óãîëü.
Ìåëêîäèñïåðñíûé óãîëü îáúåìîì 5 ìë àêêóðàòíî ââîäÿò â êîëîíêó, ïåðèîäè÷åñêè
ïîòðÿõèâàÿ åå äëÿ ëó÷øåãî çàïîëíåíèÿ. Óðàâíîâåøèâàþò 0,01 ìîëü ôîñôàòíûì áóôåðîì ðÍ
7,4, êîòîðûé ïðîïóñêàþò ÷åðåç êîëîíêó.
Íàáèâêà êîëîíêè, ñîäåðæàùåé ÄÝÀÝ-ñîðáåíò.
6
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
ÄÝÀÝ-ìàòðèöó, õðàíÿùóþñÿ â 0,01 ìîëü ôîñôàòíîì áóôåðå ðÍ 7,4, àêêóðàòíî ââîäÿò â
êîëîíêó â îáúåìå 5–6 ìë.
Íàáèâêà êîëîíêè äëÿ àôôèííîé õðîìàòîãðàôèè, ñîäåðæàùåé àãàðîçó, êîíúþãèðîâàííóþ
ñ ïðîòåèíîì À çîëîòèñòîãî ñòàôèëîêêîêà
Àãàðîçó, êîíúþãèðîâàííóþ ñ ïðîòåèíîì À çîëîòèñòîãî ñòàôèëîêîêêà, àêêóðàòíî
íàñëàèâàþò íà áóìàæíûé ôèëüòð è çàïîëíÿþò êîëîíêó äî 3–4 ìë îáúìà ãðàíóë àãàðîçû.
Ïðîìûâàþò êîëîíêó 0,01 ìîëü áóôåðîì ðÍ 7,4 è óðàâíîâåøèâàþò 0,1ìîëü áóôåðîì ðÍ 7,4.
Äëÿ õðàíåíèÿ êîëîíîê äëÿ àôôèííîé õðîìàòîãðàôèè äîáàâëÿþò 0,5 ìë 1% ðàñòâîðà àçèäà
Na 5 ìë îáúåìà êîëîíêè (äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ 1% ðàñòâîðà 1ã àçèäà Na äîâîäÿò äî 100 ìë
äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé) è õðàíÿò â õîëîäèëüíèêå ïðè òåìïåðàòóðå 4°C.
Â. Âûäåëåíèå ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ G
7
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
Íåãåïàðèíèçèðîâàííóþ ÷åëîâå÷åñêóþ êðîâü ( íå ìåíåå 10–20 ìë) èíêóáèðóþò â òå÷åíèå
2 ÷àñîâ ïðè òåìïåðàòóðå 4°C äî îáðàçîâàíèÿ ñãóñòêà. Çàòåì öåíòðèôóãèðóþò 10–15 ìèí â
öåíòðèôóæíûõ ïðîáèðêàõ â öåíòðèôóãå ñ áàêåòíûì ðîòîðîì (1500 îá./ìèí). Àêêóðàòíî
çàáèðàþò ÷èñòóþ ñûâîðîòêó. Ê íåé ïðèáàâëÿþò îõëàæäåííûé äî 4°C 0,75% ðàñòâîð ðèâàíîëà
â ñîîòíîøåíèè 1 îáúì ðèâàíîëà ê 2 îáúåìàì ñûâîðîòêè. Ñìåñü èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå
4°C íå ìåíåå 2 ÷. Îñàäîê îòáðàñûâàþò, íàäîñàäî÷íóþ æèäêîñòü ïðîïóñêàþò ÷åðåç êîëîíêó,
çàïîëíåííóþ àêòèâèðîâàííûì óãëåì. Ïîëó÷åííûé ïîñëå ýòîãî ïðåïàðàò ïîäâåðãàþò DEAEõðîìàòîãðàôèè íà ìàòðèöå Ìîëñåëåêò DEAE À50, óðàâíîâåøåííîé 0,01ìîëü ôîñôàòíûì
áóôåðîì ðÍ 7,4 ñî ñêîðîñòüþ 0,3 ìë/ìèí. Ñîáèðàþò ïðîõîäÿùèé ÷åðåç êîëîíêó îáúåì.
Äîïîëíèòåëüíî êîëîíêó ïðîìûâàþò ýòèì æå áóôåðîì â îáúåìå, ðàâíîì îáúåìó êîëîíêè.
Ýëþàòû îáúåäèíÿþò. Äàëåå ïðîâîäÿò àôôèííóþ õðîìàòîãðàôèþ, ïðîïóñêàÿ ïðåïàðàò ÷åðåç
êîëîíêó ñ àãàðîçîé, êîíúþãèðîâàííîé ñ ïðîòåèíîì À çîëîòèñòîãî ñòàôèëîêîêêà,
óðàâíîâåøåííóþ 0,1 ìîëü ôîñôàòíûì áóôåðîì ñî ñêîðîñòüþ 6–7 êàïåëü â ìèí. Ïîñëå ýòîãî
êîëîíêó ïîñëåäîâàòåëüíî ïðîìûâàþò 0,1 ìîëü ôîñôàòíûì áóôåðîì ðÍ 7,4 áåç äåòåðãåíòà, à
çàòåì ñ 1% ðàñòâîðîì òðèòîíà Õ-305 â êîëè÷åñòâå 5–6 îáúåìîâ êîëîíêè äî èñ÷åçíîâåíèÿ
áåëêà â ýëþåíòå. Ýëþöèþ ñâÿçàâøèõñÿ èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G (G1, G2, G4) âåäóò 0,1
ìîëü ãëèöèí-HCl áóôåðîì ðÍ 2,8 äî èñ÷åçíîâåíèÿ áåëêà â ïðîáå (îòáèðàþò îòäåëüíî ôðàêöèè
ïî 1,5–2 ìë). Ôðàêöèè, ñîäåðæàùèå íàèáîëåå âûñîêèå êîíöåíòðàöèè áåëêà, îáúåäèíÿþò.
Êîëîíêó ïîñëå ýëþöèè ïðîìûâàþò 0,1 ôîñôàòíûì áóôåðîì ñ 1% ðàñòâîðîì òðèòîíà Õ-305
ðÍ 7,4 â êîëè÷åñòâå, ðàâíîì 10–15 îáúåìàì êîëîíêè, à çàòåì 0,01 ìîëü ôîñôàòíûì áóôåðîì
áåç äåòåðãåíòà ñ ðÍ 7,4 â êîëè÷åñòâå, ðàâíîì 20–30 îáúåìàì êîëîíêè, äî èñ÷åçíîâåíèÿ áåëêà
â ýëþåíòå (îïðåäåëÿþò ïî ìåòîäó Áðåäôîðä). Äàëåå èììóíîãëîáóëèíû âûäåëÿþò
ïåðåîñàæäåíèåì â 40% ðàñòâîðå ñóëüôàòà àììîíèÿ. Ïðåöèïèòèðîâàâøèå èììóíîãëîáóëèíû
îñàæäàþò â öåíòðèôóãå ñ óãëîâûì ðîòîðîì ïðè 6000 îá./ìèí â òå÷åíèå 15 ìèí. Íàäîñàäî÷íóþ
8
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
æèäêîñòü ñëèâàþò. Îñàäîê ðàñòâîðÿþò â ìèíèìàëüíîì îáúåìå äèñòèëëèðîâàííîé âîäû è
÷åòûðåõêðàòíî äèàëèçóþò ïðîòèâ èçîòîíè÷åñêîãî ðàñòâîðà õëîðèäà íàòðèÿ. Ïîëó÷åííûé
ïðåïàðàò ïîñëå äèàëèçà îñâåòëÿþò, öåíòðèôóãèðóÿ â öåíòðèôóãå ñ áàêåòíûì ðîòîðîì ïðè
1500 îá./ìèí â òå÷åíèå 10 ìèí. Êîíöåíòðàöèþ áåëêà â ïðåïàðàòå îïðåäåëÿþò
ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè íà äëèíå âîëíû 280 íì. Õðàíÿò ïðåïàðàòû èììóíîãëîáóëèíîâ â
ïëàñòèêîâûõ ïðîáèðêàõ â ìîðîçèëüíèêå ïðè -20°Ñ.
Ñ. Êîíòðîëü ÷èñòîòû ïîëó÷åííûõ ïðåïàðàòîâ
Ïîëó÷åííûé ïðåïàðàò IgG ñëåäóåò òåñòèðîâàòü íà ÷èñòîòó ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîôîðåçà â
ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå â äèññîöèèðóþùèõ óñëîâèÿõ ñ îêðàñêîé íèòðàòîì ñåðåáðà.
Ýëåêòðîôîðåç ïðîâîäÿò â ïðèáîðå äëÿ âåðòèêàëüíîãî ýëåêòðîôîðåçà â ïëàñòèíàõ â
ãðàäèåíòíîì 4–20% ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå íà 0,025 ìîëü òðèñ-HCl-áóôåðå, pH 8,3,
ñîäåðæàùåì 0,1% äîäåöèëñóëüôàò íàòðèÿ (ÄÄÑ-Na) è 0,1% ìåðêàïòîýòàíîë ïðè íàïðÿæåíèè
200 Â. Ïðîáû Èà ïðåäâàðèòåëüíî äèññîöèèðóþò êèïÿ÷åíèåì â òå÷åíèå 3 ìèí â ïðèñóòñòâèè
1% ÄÄÑ-Na è 2% ìåðêàïòîýòàíîëà. Íà êàæäûé òðåê íàíîñÿò 5 ìêë ïðåïàðàòà â êîíöåíòðàöèè
2 ìã/ìë.
9
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
Ïî îêîí÷àíèè ýëåêòðîôîðåçà èõ ôèêñèðóþò è îäíîâðåìåííî âûìûâàþò ÄÄÑ-Na ñíà÷àëà
ðàñòâîðîì, ñîäåðæàùèì 12% ÑÍ3ÑÎÎÍ è 50% ýòàíîëà (10 ìèí), ïîòîì äâàæäû ïî 5 ìèí —
5% ÑÍ3ÑÎÎÍ ñ 10% ýòàíîëà. Äàëåå äëÿ óëó÷øåíèÿ ðàâíîìåðíîñòè îêðàñêè ãåëü âûìà÷èâàþò
5 ìèí â 0,5% ðàñòâîðå æåëåçîñèíåðîäèñòîãî êàëèÿ (êðàñíîé êðîâÿíîé ñîëè). Ïîñëå
òðåõêðàòíîãî îïîëàñêèâàíèÿ â âîäå ãåëü çàëèâàþò ðàñòâîðîì, ñîäåðæàùèì 0,2 ã íèòðàòà
ñåðåáðà, 0,2 ã íèòðàòà àììîíèÿ 0,5 ìë 37% ôîðìàëüäåãèäà è 0,06 ìã áåíçîòðèàçîëà
(àíòèâóàëèðóþùåãî ñðåäñòâà äëÿ ôîòîãðàôèè) â 100 ìë âîäû. Ãåëü â ðàñòâîðå îñâåùàþò
ëàìïîé íàêàëèâàíèÿ ìîùíîñòüþ 500 Âò â òå÷åíèå 30 ìèí. Çàòåì ðàñòâîð ñëèâàþò è ãåëü, íå
ñïîëàñêèâàÿ, çàëèâàþò 200 ìë 3% ðàñòâîðà Na2ÑÎ3, ñîäåðæàùåãî 0,1 ìë ôîðìàëüäåãèäà è
0,12 ìã áåíçîòðèàçîëà. Íå ïðåêðàùàÿ îñâåùåíèÿ, ðàñòâîð ñìåíÿþò 2–3 ðàçà äî äîñòèæåíèÿ
æåëàåìîé èíòåíñèâíîñòè îêðàñêè áåëêîâ. Ïðîöåññ îêðàøèâàíèÿ ïðåðûâàþò ïîãðóæåíèåì
ãåëÿ íà 5 ìèí â 1% ðàñòâîð ÑÍ3ÑÎÎÍ, à çàòåì ïðîìûâàþò åãî âîäîé.
 ðåçóëüòàòå â ïðåïàðàòå äîëæíû áûòü îáíàðóæåíû 2 ïîëîñû, ñîîòâåòñòâóþùèå ëåãêîé è
òÿæåëîé öåïÿì IgG.
Ïðè ïîñëåäóþùåé îöåíêå àáçèìíîé àêòèâíîñòè ïîëó÷åííûõ ïðåïàðàòîâ IgG
ðåêîìåíäóåòñÿ ïðîâåñòè ãåëü-ôèëüòðàöèþ êàòàëèòè÷åñêè àêòèâíûõ èììóíîãëîáóëèíîâ â
äèññîöèèðóþùèõ óñëîâèÿõ (â ïðèñóòñòâèè 0,1 ìîëü ãëèöèí-HCl-áóôåðà ñ ðÍ 2,5–2,8) íà
ìàòðèöå Toyopearl HW 55 (Toyosoda, ßïîíèÿ).
 ñëó÷àå ïðèíàäëåæíîñòè êàòàëèòè÷åñêîé àêòèâíîñòè âûäåëåííîìó
èììóíîãëîáóëèíîâîìó ïðåïàðàòó ìàêñèìóì ôåðìåíòàòèâíîé àêòèâíîñòè áóäåò ñîâïàäàòü ñ
âåðøèíîé õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ïèêà, ñîîòâåòñòâóþùåãî IgG.
10
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
2. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÝÍÄÎÍÓÊËÅÀÇÍÎÉ (ÄÍÊÀÇÍÎÉ) ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÈ IGG
À. Ïðèãîòîâëåíèå èñõîäíûõ ðàñòâîðîâ
Ïðèãîòîâëåíèå 0,02 ìîëü òðèñ-HCl áóôåðà ðÍ 7,4 ñ 0,0004 ìîëü MgCl2.
Òðèñ â êîëè÷åñòâå 0,6 ã ðàñòâîðÿþò â 25 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ïîëó÷åííûå 25 ìë
ðàñòâîðà òðèñ ñìåøèâàþò ñ 37 ìë 0,1í HCl è äîâîäÿò îáùèé îáúåì äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé
äî 200 ìë. Íà 100 ìë ïðèãîòîâëåííîãî áóôåðà áåðóò 203 ìêë 1Ì ðàñòâîðà MgCl2. Êîíòðîëü
ðÍ îñóùåñòâëÿåòñÿ íà ðÍ-ìåòðå.
Ïðèãîòîâëåíèå ðàñòâîðà ÄÍÊ.
1ìã ÄÍÊ îñòîðîæíûì ïèïåòèðîâàíèåì ðàñòâîðÿþò â 1ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. 1 ìë
ïîëó÷åííîãî ðàñòâîðà ñìåøèâàþò ñ 2 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
Ïðèãîòîâëåíèå ðàñòâîðà ðèâàíîëà
750 ìã ýòàêðèäèíà ëàêòàòà ðàñòâîðÿþò ïðè íàãðåâàíèè â 100 ìë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.
Õðàíÿò â õîëîäèëüíèêå ïðè òåìïåðàòóðå 4°Ñ.
Á. Ïîñòàíîâêà è îöåíêà ðåàêöèè
Ðåàêöèÿ ñòàâèòñÿ â äóáëÿõ. Ê 0,2 ìë ðàñòâîðà ÄÍÊ (300–350 ìêã/ìë) äîáàâëÿþò 0,1 ìë
ïðåïàðàòà IgG (1 ìã/ìë) è 0,1 ìë 0,02 ìîëü òðèñ-HCl áóôåðà ðÍ 7,4 ñ 0,0004 ìîëü MgCl2.
11
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
 êîíòðîëå âìåñòî 0,1ìë èììóíîãëîáóëèíîâ èñïîëüçóþò 0,1 ìë 0,9% NaCl. Ïîñòàíîâêà
ðåàêöèè îñóùåñòâëÿåòñÿ â öåíòðèôóæíûõ ïðîáèðêàõ. Ïîñëå èíêóáàöèè â òå÷åíèå 20 ÷àñîâ
ïðè 37°Ñ íà ïîâåðõíîñòü ïðîá íàñëàèâàåòñÿ 20 ìêë 0,75% ðàñòâîðà ðèâàíîëà, âñå âñòðÿõèâàþò
äî ïîëó÷åíèÿ ñãóñòêà. Çàòåì ñãóñòîê äâóêðàòíî îòìûâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è
ðàñòâîðÿþò ïðè íàãðåâàíèè â 0,5 ìë 1í HCl, ïîñëå ÷åãî îáúåì äîâîäÿò äî 2 ìë
äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé. Ïðîâîäÿò ñïåêòðîôîòîìåòðèþ ïðè 410 íì. Èç ñðåäíåãî çíà÷åíèÿ
îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè êîíòðîëüíûõ ïðîá âû÷èòàþò ñðåäíåå çíà÷åíèå îïûòíûõ ïðîá è äåëÿò
ýòîò ïîêàçàòåëü íà ñðåäíåå çíà÷åíèå êîíòðîëåé. Ïîëó÷åííîå çíà÷åíèå (â ïðîöåíòàõ) ïåðåâîäÿò
â åäèíèöû àêòèâíîñòè ôåðìåíòà. Äëÿ ýòîãî åãî ñðàâíèâàþò ñ êàëèáðîâî÷íîé êðèâîé,
ïîñòðîåííîé ïî ñòàíäàðòíîìó ïðåïàðàòó ÄÍÊàçû ëèáî äàííîå çíà÷åíèå (DNASE)
ïîäñòàâëÿþò â óðàâíåíèå ðåãðåññèè âèäà Åä=0,0181(DNASE)0,2644 è îïðåäåëÿþò åäèíèöû
àêòèâíîñòè ñ ïîìîùüþ êîìïüþòåðà.
Îáíàðóæåíèå ÄÍÊàçíîé àêòèâíîñòè IgG ñâûøå 0,045 åä. ïîäòâåðæäàåò íàëè÷èå â
òèðåîèäíîé ïàòîëîãèè àóòîèììóííîãî êîìïîíåíòà, à óðîâåíü àêòèâíîñòè ñâûøå 0,049–0,05
åä. ïîçâîëÿåò äèôôåðåíöèðîâàòü àóòîèììóííûé òèðåîèäèò îò äðóãèõ çàáîëåâàíèé
ùèòîâèäíîé æåëåçû.
12
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
Ðåàáèëèòàöèîííûå èíäèâèäóàëüíûå ïðîãðàììû äëÿ áîëüíûõ è èíâàëèäîâ âñëåäñòâèå õðîíè÷åñêîãî
îáñòðóêòèâíîãî áðîíõèòà
ÂÎÇÌÎÆÍÛÅ ÎÑËÎÆÍÅÍÈß È ÎØÈÁÊÈ
Ïðè î÷èñòêå ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ âîçìîæíû ñëåäóþùèå îøèáêè è
çàòðóäíåíèÿ.
Íåëüçÿ èñïîëüçîâàòü õèëåçíóþ ñûâîðîòêó èëè ñûâîðîòêó ïîñëå ãåìîëèçà.
Âîçìîæíà íåêà÷åñòâåííàÿ ôèëüòðàöèÿ ÷åðåç àêòèâèðîâàííûé óãîëü (ïðèìåñü ÷àñòè÷åê
óãëÿ â ïðåïàðàòå). Ðåêîìåíäóåòñÿ àêêóðàòíî óëîæèòü ôèëüòð íà äíî êîëîíêè è ïðîâåðèòü
êà÷åñòâî ôèëüòðàöèè, ïðåäâàðèòåëüíî ïðîïóñòèâ ÷åðåç êîëîíêó äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó.
×àñòè÷êè óãëÿ ïîñëå íåêà÷åñòâåííîé ôèëüòðàöèè ìîæíî çàäåðæàòü ïðè ÄÝÀÝ õðîìàòîãðàôèè
â âåðõíåì ñëîå àíèîíîîáìåííèêà, êîòîðûé çàòåì ñëåäóåò óäàëèòü.
Ïðè îïðåäåëåíèè ÄÍÊàçíîé àêòèâíîñòè âîçìîæíû ñëåäóþùèå îñëîæíåíèÿ.
 êîíòðîëüíûõ ïðîáàõ ÷åðåç 24 ÷ íå îáðàçóåòñÿ ñãóñòîê ÄÍÊ. Ðåêîìåíäóåòñÿ ïðîâåðÿòü
ñãóñòêîîáðàçîâàíèå â êîíòðîëüíûõ ïðîáàõ ïåðåä ïîñòàíîâêîé ðåàêöèè. Çíà÷åíèå îïòè÷åñêîé
ïëîòíîñòè êîíòðîëüíûõ ñãóñòêîâ äîëæíî íàõîäèòüñÿ â ïðåäåëàõ 0,3–0,45 åä. îïòè÷åñêîé
ïëîòíîñòè ïðè äëèíå âîëíû 410 íì.
13
Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ