2 255 756(13) C1

ÐÎÑÑÈÉÑÊÀß ÔÅÄÅÐÀÖÈß
(19)
RU
(51)
ÌÏÊ 7
(11)
2 255 756
(13)
C1
A 61 K 38/00
ÔÅÄÅÐÀËÜÍÀß ÑËÓÆÁÀ
ÏÎ ÈÍÒÅËËÅÊÒÓÀËÜÍÎÉ ÑÎÁÑÒÂÅÍÍÎÑÒÈ,
ÏÀÒÅÍÒÀÌ È ÒÎÂÀÐÍÛÌ ÇÍÀÊÀÌ
(12)
ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß Ê ÏÀÒÅÍÒÓ
(21), (22) Çà âêà: 2004118699/15, 22.06.2004
(72) Àâòîð(û):
Õàâèíñîí Â.Õ. (RU),
Ðûæàê Ã.À. (RU),
Ãðèãîðüåâ Å.È. (RU),
Ð äíîâà È.Þ. (RU)
(24) Äàòà íà÷àëà äåéñòâè ïàòåíòà: 22.06.2004
(45) Îïóáëèêîâàíî: 10.07.2005 Áþë. ¹ 19
(73) Ïàòåíòîîáëàäàòåëü(ëè):
Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêà Îáùåñòâåííà îðãàíèçàöè "Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêèé Èíñòèòóò
áèîðåãóë öèè è ãåðîíòîëîãèè ÑÇÎ ÐÀÌÍ" (RU)
C 1
2 2 5 5 7 5 6
R U
Ñòðàíèöà: 1
RU
C 1
(54) ÏÅÏÒÈÄÍÎÅ ÑÎÅÄÈÍÅÍÈÅ, ÂÎÑÑÒÀÍÀÂËÈÂÀÞÙÅÅ ÔÓÍÊÖÈÞ ÌÈÎÊÀÐÄÀ
(57) Ðåôåðàò:
ôàðìàêîëîãè÷åñêîå ñðåäñòâî, ñîäåðæàùåå â
Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê ëåêàðñòâåííûì
êà÷åñòâå
àêòèâíîãî
ïåïòèäíîãî
àãåíòà
ñðåäñòâàì äë ëå÷åíè çàáîëåâàíèé ñåðäå÷íîýôôåêòèâíîå êîëè÷åñòâî òåòðàïåïòèäà àëàíèëñîñóäèñòîé ñèñòåìû è ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíî
ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí îáùåé ôîðìóëû Alaêàê
ñðåäñòâî,
âîññòàíàâëèâàþùåå
ôóíêöèþ
Glu-Asp-Arg ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1 [SEQ ID NO:1],
ìèîêàðäà, ïðè ëå÷åíèè ðàçëè÷íûõ ôîðì äàííîé
îáëàäàþùèé
áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòüþ,
ïàòîëîãèè. Ïðåäëàãàåòñ íîâûé òåòðàïåïòèä
ïðî âë þùåéñ â âîññòàíîâëåíèè ôóíêöèè
àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí îáùåé
ìèîêàðäà. Èñïîëüçîâàíèå íîâîãî òåòðàïåïòèäà Alaôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1
Glu-Asp-Arg
â
ìåäèêàìåíòå
ñïîñîáñòâóåò
[SEQ ID NO:1], îáëàäàþùèé áèîëîãè÷åñêîé
âîññòàíîâëåíèþ ôóíêöèè ìèîêàðäà. 3 í. è 1 ç.ï. ôàêòèâíîñòüþ, ïðî âë þùåéñ â âîññòàíîâëåíèè
ëû, 9 òàáë., 1 èë.
ôóíêöèè
ìèîêàðäà.
Ïðåäëàãàåòñ 2 2 5 5 7 5 6
Àäðåñ äë ïåðåïèñêè:
197110, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, ïð. Äèíàìî, 3, ÑÏá
ÎÎ "Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêèé Èíñòèòóò
áèîðåãóë öèè è ãåðîíòîëîãèè ÑÇÎ ÐÀÌÍ", ïàò.
ïîâ. È.Þ. Ñïåñèâöåâîé
R U
(56) Ñïèñîê äîêóìåíòîâ, öèòèðîâàííûõ â îò÷åòå î
ïîèñêå: RU 1417242 A1, 27.10.1995. RU 2157233
C1, 10.10.2000. ÅÐ 0405506 À1, 02.01.1991.
ÅÐ 0312157 À2, 19.04.1989. RU 2061484 C1,
10.06.1996. RU 2032422 Ñ1, 10.04.1995.
RUSSIAN FEDERATION
(19)
RU
(51) Int.
Cl. 7
(11)
2 255 756
(13)
C1
A 61 K 38/00
FEDERAL SERVICE
FOR INTELLECTUAL PROPERTY,
PATENTS AND TRADEMARKS
(12)
ABSTRACT OF INVENTION
(21), (22) Application: 2004118699/15, 22.06.2004
(24) Effective date for property rights: 22.06.2004
(45) Date of publication: 10.07.2005 Bull. 19
2 2 5 5 7 5 6
R U
Ñòðàíèöà: 2
EN
C 1
(54) PEPTIDE COMPOUND RECOVERING FUNCTION OF MYOCARDIUM
(57) Abstract:
tetrapeptide
alanyl-glutamyl-aspartyl-arginine
of
FIELD:
chemistry
of
peptides,
medicine,
the general formula: Ala-Glu-Asp-Arg as an active
cardiology, pharmacy.
peptide agent of the sequence 1 [SEQ ID NO:1]
SUBSTANCE: invention relates to medicinal
that elicits biological activity and displaying
agents used for treatment of cardiovascular
in recovery of function of myocardium. Using new
system
diseases.
Invention
proposes
new
tetrapeptide Ala-Glu-Asp-Arg as component of
tetrapeptide
alanyl-glutamyl-aspartyl-arginine
of
medicinal agent promotes to recovery of function
the general formula: Ala-Glu-Asp-Arg of the
of myocardium. Invention can be used as an agent
sequence 1 [SEQ ID NO:1] eliciting biological
recovering function of myocardium in treatment of
activity and displaying in recovery of function
different form of this pathology.
of myocardium. Invention proposes pharmacological
EFFECT: valuable medicinal properties of peptide.
agent
comprising
the
effective
dose
of
4 cl, 9 tbl, 1 dwg, 9 ex
2 2 5 5 7 5 6
C 1
(73) Proprietor(s):
Sankt-Peterburgskaja Obshchestvennaja
organizatsija "Sankt-Peterburgskij Institut
bioreguljatsii i gerontologii SZO RAMN" (RU)
R U
Mail address:
197110, Sankt-Peterburg, pr. Dinamo, 3, SPb
OO "Sankt-Peterburgskij Institut
bioreguljatsii i gerontologii SZO RAMN",
pat. pov. I.Ju. Spesivtsevoj
(72) Inventor(s):
Khavinson V.Kh. (RU),
Ryzhak G.A. (RU),
Grigor'ev E.I. (RU),
Rjadnova I.Ju. (RU)
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê ëåêàðñòâåííûì ñðåäñòâàì äë ëå÷åíè çàáîëåâàíèé ñåðäå÷íîñîñóäèñòîé ñèñòåìû è ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíî êàê ñðåäñòâî, âîññòàíàâëèâàþùåå
ôóíêöèþ ìèîêàðäà, ïðè ëå÷åíèè ðàçëè÷íûõ ôîðì äàííîé ïàòîëîãèè.
 íàñòî ùåå âðåì íå òåð åò àêòóàëüíîñòè ïðîáëåìà ïðîôèëàêòèêè è ëå÷åíè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòûõ çàáîëåâàíèé â ñâ çè ñ èõ ñåðüåçíîñòüþ è ðàñïðîñòðàíåííîñòüþ.
Îòìå÷åíà òåíäåíöè ê óâåëè÷åíèþ ðàçâèòè ïàòîëîãèè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé ñèñòåìû, ÷òî
âë åòñ ïðè÷èíîé íåòðóäîñïîñîáíîñòè è ñìåðòíîñòè âî âñå áîëåå ðàííåì âîçðàñòå. Â
ñâ çè ñ ýòèì âîçðàñòàþùóþ ñîöèàëüíóþ çíà÷èìîñòü ïðèîáðåòàåò ðàçðàáîòêà íîâûõ
ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ, ïðèìåí åìûõ äë ëå÷åíè çàáîëåâàíèé ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé
ñèñòåìû.
Íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûå ôîðìû ñåðäå÷íîé ïàòîëîãèè ñâ çàíû ñ èøåìèåé ñåðäöà,
âîçíèêàþùåé â ðåçóëüòàòå íàðóøåíèé â ñîñóäèñòîé ñèñòåìå, â ò æåëûõ ñëó÷à õ
ïðèâîä ùåé ê èíôàðêòó ìèîêàðäà - ëèäèðóþùåé ïðè÷èíå ñìåðòè â ñîâðåìåííîì îáùåñòâå.
Èøåìè÷åñêà áîëåçíü ñåðäöà ÷àñòî ïðèâîäèò ê òàêèì îñëîæíåíè ì êàê íàðóøåíè ñîêðàòèìîñòè, âîçáóäèìîñòè, ïðîâîäèìîñòè ìèîêàðäà. Ïîìèìî ýòîãî ñëåäóåò âûäåëèòü
îòäåëüíóþ ãðóïïó çàáîëåâàíèé ñåðäå÷íîé ìûøöû, ëå÷åíèå êîòîðûõ ñâîäèòñ , â îñíîâíîì,
ê îáùåóêðåïë þùåé òåðàïèè è îò÷àñòè âë åòñ ñèìïòîìàòè÷åñêèì. Ýòî
ìèîêàðäèîäèñòðîôèè, ìèîïàòèè, êàðäèîìèîïàòèè.
Ñðåäè ñðåäñòâ, èñïîëüçóåìûõ äë ïðîôèëàêòèêè èøåìèè ìèîêàðäà, èñïîëüçóþò
ôàðìàêîëîãè÷åñêèå ïðåïàðàòû ðàçëè÷íûõ ãðóïï, â òîì ÷èñëå àíòàãîíèñòû êàëüöè :
àìëîäèïèí, âåðàïàìèë, ôåëîäèïèí (Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ Ðîññèè. Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà, 2003. - Ñ.90, Ñ.180, Ñ.865) è áåòà-àäðåíîáëîêàòîðû,
òàêèå êàê ïðîïàíîëîë, ïèíäîëîë (Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ Ðîññèè. Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà, 2003. - Ñ.700, Ñ.659). Îñîáåííîñòüþ äåéñòâè ýòèõ
âåùåñòâ âë åòñ ñíèæåíèå ïîòðåáíîñòè ìèîêàðäà â êèñëîðîäå è îòðèöàòåëüíûé
èíîòðîïíûé ýôôåêò. Äðóãèì êëàññîì øèðîêî ïðèìåí åìûõ ïðåïàðàòîâ âë þòñ íèòðîïðåïàðàòû (ðàçëè÷íûå ôîðìû íèòðîñîðáèäà è ìîíîíèòðàòà, ïðåïàðàò ÷èñòîé
àýðîçîëüíîé ôîðìû íèòðîãëèöåðèíà - íèòðîìèíò) (Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ Ðîññèè.
Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà, 2003. - Ñ.588, Ñ.332, Ñ.587). Ïîìèìî
ýòèõ ïðåïàðàòîâ ìîæíî èñïîëüçîâàòü ïðèðîäíûå èëè ñèíòåòè÷åñêèå ñåðäå÷íûå ãëèêîçèäû
(ïðåïàðàòû íàïåðñò íêè, ñòðîôàíòà, ëàíäûøà) (Ìàøêîâñêèé Ì.Ä. Ëåêàðñòâåííûå
ñðåäñòâà. - Ì.: Íîâà âîëíà, 2004. - Ñ.215). Íàð äó ñ ñåðäå÷íûìè ãëèêîçèäàìè
äå òåëüíîñòü ñåðäöà óñèëèâàþò íåãëèêîçèäíûå êàðäèîòîíèêè.  êà÷åñòâå êàðäèîòîíèêîâ
íàçíà÷àþò ñèìïàòîìèìåòè÷åñêèå (àäðåíåðãè÷åñêèå) ïðåïàðàòû: äîáóòàìèí, äîïàìèí
(Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ Ðîññèè. Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà,
2003. - Ñ.296, Ñ.305).  îïðåäåëåííîé ìåðå êàðäèîòîíè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè îáëàäàþò
âåùåñòâà, îêàçûâàþùèå îáùåå ïîëîæèòåëüíîå âëè íèå íà ìåòàáîëè÷åñêèå ïðîöåññû
îðãàíèçìà.
Íåäîñòàòêîì ýòèõ ïðåïàðàòîâ âë åòñ òî, ÷òî ýòè ïðåïàðàòû íå ëèøåíû ïîáî÷íûõ
ýôôåêòîâ è ïðîòèâîïîêàçàíèé.  ÷àñòíîñòè, áîëüøèíñòâî ïðåïàðàòîâ îêàçûâàåò
ïîäàâë þùèé ýôôåêò íà ÷óâñòâèòåëüíîñòü ìèîêàðäà ê âîçáóæäåíèþ, âûçûâàþò àðèòìèè,
ñåðäå÷íóþ íåäîñòàòî÷íîñòü, ãèïîòîíèþ, áðàäèêàðäèþ, à òàêæå ñèíäðîì îòìåíû.
Ñðåäè èçâåñòíûõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, ïðèìåí åìûõ ïðè ëå÷åíèè èøåìèè
ìèîêàðäà, íåîáõîäèìî òàêæå óïîì íóòü àêòîâåãèí (Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ Ðîññèè.
Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà, 2003. - Ñ.63), êàê ïðåïàðàò,
äåéñòâóþùèé íà ìåòàáîëèçì êëåòêè è óëó÷øàþùèé ýíåðãîçàâèñèìûå ïðîöåññû îáìåíà â
òêàíè, îäíàêî åãî äåéñòâèå íå âë åòñ ñïåöèôè÷åñêèì.
Èçâåñòíû ïåïòèäíûå ïðåïàðàòû, äåéñòâóþùèå íà ôóíêöèþ ìèîêàðäà. Ê íèì îòíîñ òñ îïèîèäíûå ïåïòèäû (Óñûíèí À.Ô., Ïàâëåíêî B.C., Õëûñòîâ Â.Â. Èøåìè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå
ìèîêàðäà è âëè íèå íà íåãî íåêîòîðûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ ó êðûñ â
ýêñïåðèìåíòå. Àêòóàëüíûå âîïðîñû êàðäèîëîãèè. Âûï.2. - Òîìñê: Èçä-âî Òîìñêîãî óí-òà,
1987. - Ñ.116-118) è èõ ñèíòåòè÷åñêèé àíàëîã äàëàðãèí (Ðåãèñòð ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ
Ðîññèè. Ýíöèêëîïåäè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. - Ìîñêâà, 2003. - Ñ.249).
Ñòðàíèöà: 3
DE
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Èçâåñòíî ïðèìåíåíèå äàëàðãèíà äë ëå÷åíè èíôàðêòà ìèîêàðäà êàê ñïîñîá
ïðîôèëàêòèêè ôèáðèëë öèé æåëóäî÷êîâ ñåðäöà (ïàòåíò ÐÔ ¹2032422 “Ñïîñîá ëå÷åíè èíôàðêòà ìèîêàðäà”, ÌÊÈ6 À 61 Ê 38/00, 1995). Êðîìå òîãî, èçâåñòíî ñðåäñòâî,
óëó÷øàþùåå ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòî íèå ìèîêàðäà ïóòåì êîððåêöèè íàðóøåíèé
ìåòàáîëèçìà, îñíîâûâàþùååñ íà ñî÷åòàííîì ïðèìåíåíèè äàëàðãèíà è ñîëêîñåðèëà
(ïàòåíò ÐÔ 2061484 “Ñïîñîá ëå÷åíè îñòðîãî ïåðèîäà èíôàðêòà ìèîêàðäà”, ÌÊÈ 6 À 61 Ê
35/14, À 61 Ê 38/33, 1996).
Èçâåñòåí òàêæå ïðåïàðàò ïîëèïåïòèäíîé ïðèðîäû (ïàòåíò ÐÔ ¹1417242 íà èçîáðåòåíèå
"Ñïîñîá ïîëó÷åíè âåùåñòâà, âîññòàíàâëèâàþùåãî ôóíêöèþ ìèîêàðäà", ÌÊÈ À 61 Ê 35/24,
1989), ïîëó÷åííûé èç ñåðäöà æèâîòíûõ è îáëàäàþùèé àíàëîãè÷íîé áèîëîãè÷åñêîé
àêòèâíîñòüþ, êîòîðûé âë åòñ íàèáîëåå áëèçêèì àíàëîãîì, ïðèí òûì çà ïðîòîòèï ïî
îòíîøåíèþ ê ôàðìàêîëîãè÷åñêîìó ñðåäñòâó (ôàðìàöåâòè÷åñêîé êîìïîçèöèè).
Îäíàêî ïðèìåíåíèå ýòîãî ïðåïàðàòà îãðàíè÷åíî â ñâ çè ñî ñëîæíîñòüþ ñïîñîáà
ïîëó÷åíè , ìàëûì âûõîäîì àêòèâíûõ âåùåñòâ, çíà÷èòåëüíîé âàðèàáåëüíîñòüþ èõ ôèçèêîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ, à òàêæå èç-çà âîçìîæíîãî âîçíèêíîâåíè ó áîëüíûõ ïîáî÷íîãî
äåéñòâè â âèäå àëëåðãè÷åñêèõ ðåàêöèé.
Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî çà âë åìîå ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå - òåòðàïåïòèä - ñòðóêòóðíûõ
àíàëîãîâ íå èìååò.
Çà âë åìîå èçîáðåòåíèå íàïðàâëåíî íà ïîëó÷åíèå íîâîãî áèîëîãè÷åñêè àêòèâíîãî
ñîåäèíåíè ïåïòèäíîé ïðèðîäû, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ ìèîêàðäà.
Òåõíè÷åñêèé ðåçóëüòàò èçîáðåòåíè çàêëþ÷àåòñ â ñîçäàíèè íîâîãî ïåïòèäíîãî
ñîåäèíåíè , à òàêæå ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî ñðåäñòâà (ôàðìàöåâòè÷åñêîé êîìïîçèöèè),
ñîäåðæàùåãî ýòî ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå â êà÷åñòâå àêòèâíîãî ïåïòèäíîãî àãåíòà,
èñïîëüçîâàíèå êîòîðîãî â ìåäèêàìåíòå ñïîñîáñòâóåò âîññòàíîâëåíèþ ôóíêöèè ìèîêàðäà.
Âîçìîæíîñòü îáúåêòèâíîãî ïðî âëåíè òåõíè÷åñêîãî ðåçóëüòàòà ïðè èñïîëüçîâàíèè
èçîáðåòåíè ïîäòâåðæäåíà äîñòîâåðíûìè äàííûìè, ïðèâåäåííûìè â ïðèìåðàõ,
ñîäåðæàùèõ ñâåäåíè ýêñïåðèìåíòàëüíîãî õàðàêòåðà, ïîëó÷åííûå ïî ìåòîäèêàì,
ïðèí òûì â äàííîé îáëàñòè.
Íàñòî ùåå èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê íîâîìó òåòðàïåïòèäó àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèëàðãèíèí îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1 [SEQ ID NO:1].
Òåòðàïåïòèä ïîëó÷àþò êëàññè÷åñêèì ìåòîäîì ïåïòèäíîãî ñèíòåçà â ðàñòâîðå (ßêóáêå
Õ. - Ä., Åøêàéò X. Àìèíîêèñëîòû, ïåïòèäû, áåëêè: Ïåð. ñ íåì. - Ì.: Ìèð, 1985. - 456 ñ.).
Íàñòî ùåå èçîáðåòåíèå îòíîñèòñ ê òåòðàïåïòèäó àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí
îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1 [SEQ ID NO:1], îáëàäàþùåìó
áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ, ïðî âë þùåéñ â âîññòàíîâëåíèè ôóíêöèè ìèîêàðäà.
Äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg, íàïðàâëåííîå íà âîññòàíîâëåíèå ôóíêöèè
ìèîêàðäà, âû âëåíî ïðè åãî èçó÷åíèè â ýêñïåðèìåíòàëüíîé ïàòîëîãèè, â ÷àñòíîñòè ïðè
èñïîëüçîâàíèè ñëåäóþùèõ ìîäåëåé:
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå ýêñïåðèìåíòàëüíîãî èíôàðêòà ìèîêàðäà ïðè
ïåðåâ çêå êîðîíàðíîé àðòåðèè ó êðûñ;
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà ñîñòî íèå èçîëèðîâàííîãî ñåðäöà ïðè ïåðôóçèè è èøåìèè;
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå àäðåíàëèíîâîé äèñòðîôèè ìèîêàðäà ó êðûñ;
- âû âëåíèè ïðîòåêòîðíîãî äåéñòâè òåòðàïåïòèäà ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
òîêñèêîõèìè÷åñêèõ ìèîêàðäèîïàòè õ;
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå è èñõîä õëîðêàëüöèåâîé àðèòìèè ó êðûñ;
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà ðîñò ýêñïëàíòàòîâ îðãàíîòèïè÷åñêîé êóëüòóðû ñåðäöà
ïîëîâîçðåëûõ êðûñ;
- âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà áèîýíåðãåòèêó êàðäèîìèîöèòîâ.
Êàê èçâåñòíî, ïåðå÷èñëåííûå ïàòîëîãèè õàðàêòåðèçóþòñ ôîðìèðîâàíèåì çîí íåêðîçà
êàðäèîìèîöèòîâ, íåñáàëàíñèðîâàííûì ïðîòåêàíèåì êèñëîðîäçàâèñèìûõ ðåàêöèé â
ìèîêàðäå: ïðîöåññîâ áèîëîãè÷åñêîãî îêèñëåíè ñ ðîñòîì ýíåðãîäåôèöèòà, ïîâûøåííûé
ðàñõîä ìàêðîýðãè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé, íàêîïëåíèåì íåäîîêèñëåííûõ ñîåäèíåíèé, ïðîäóêòîâ
ïåðåêèñíîãî îêèñëåíè ëèïèäîâ. Íàðóøàþòñ òðàíñïîðò è îáìåí êàëüöè , åãî
Ñòðàíèöà: 4
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
ðàñïðåäåëåíèå ìåæäó êëåòî÷íûìè ïóëàìè è ìåæêëåòî÷íûì ïðîñòðàíñòâîì. Îòìå÷åííûå
èçìåíåíè ïðèâîä ò ê íàðóøåíèþ ñîêðàòèòåëüíîé ôóíêöèè ìèîêàðäà, àðèòìèè è âûçûâàþò
ðàçâèòèå ïàòîëîãèè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé ñèñòåìû.
 ðåçóëüòàòå ýêñïåðèìåíòàëüíîãî èçó÷åíè óñòàíîâëåíî, ÷òî òåòðàïåïòèä Ala-Glu-AspArg íå îáëàäàåò òîêñè÷íîñòüþ.
Íàñòî ùåå èçîáðåòåíèå òàêæå îòíîñèòñ ê ôàðìàêîëîãè÷åñêîìó ñðåäñòâó
(ôàðìàöåâòè÷åñêîé êîìïîçèöèè), âîññòàíàâëèâàþùåìó ôóíêöèþ ìèîêàðäà, ñîäåðæàùåìó
â êà÷åñòâå àêòèâíîãî ïåïòèäíîãî àãåíòà ýôôåêòèâíîå êîëè÷åñòâî òåòðàïåïòèäà àëàíèëãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1[SEQ ID
NO:1].
Ïîí òèå “ôàðìàêîëîãè÷åñêîå ñðåäñòâî”, èñïîëüçóåìîå â äàííîé çà âêå, ïîäðàçóìåâàåò
èñïîëüçîâàíèå òàêîé ëåêàðñòâåííîé ôîðìû, ñîäåðæàùåé ýôôåêòèâíîå êîëè÷åñòâî
òåòðàïåïòèäà îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg, êîòîðà ìîæåò íàéòè ïðîôèëàêòè÷åñêîå
è/èëè ëå÷åáíîå ïðèìåíåíèå â ìåäèöèíå â êà÷åñòâå ñðåäñòâà, âîññòàíàâëèâàþùåãî
ôóíêöèþ ìèîêàðäà.
Ïîí òèå "ýôôåêòèâíîå êîëè÷åñòâî", èñïîëüçóåìîå â äàííîé çà âêå, ïîäðàçóìåâàåò
èñïîëüçîâàíèå òàêîãî êîëè÷åñòâà àêòèâíîãî ïåïòèäíîãî àãåíòà, êîòîðîå â ñîîòâåòñòâèè ñ
åãî êîëè÷åñòâåííûìè ïîêàçàòåë ìè àêòèâíîñòè è òîêñè÷íîñòè, à òàêæå íà îñíîâàíèè
çíàíèé ñïåöèàëèñòà äîëæíî áûòü ýôôåêòèâíûì â äàííîé ëåêàðñòâåííîé ôîðìå.
Äë ïîëó÷åíè ôàðìàöåâòè÷åñêèõ êîìïîçèöèé, îòâå÷àþùèõ èçîáðåòåíèþ,
ïðåäëàãàåìûé òåòðàïåïòèä êàê àêòèâíûé èíãðåäèåíò ñìåøèâàåòñ ñ ôàðìàöåâòè÷åñêè
ïðèåìëåìûì íîñèòåëåì ñîãëàñíî ïðèí òûì â ôàðìàöåâòèêå ñïîñîáàì êîìïàóíäèðîâàíè .
Íîñèòåëü ìîæåò èìåòü ðàçëè÷íûå ôîðìû, êîòîðûå çàâèñ ò îò ëåêàðñòâåííîé ôîðìû
ïðåïàðàòà, æåëàåìîé äë ââåäåíè â îðãàíèçì, íàïðèìåð, ïàðåíòåðàëüíîãî èëè
ïåðîðàëüíîãî.
Ïðè èçãîòîâëåíèè êîìïîçèöèé â ïðåäïî÷òèòåëüíîé äîçèðîâàííîé ôîðìå äë ïåðîðàëüíîãî ïðèìåíåíè ìîãóò èñïîëüçîâàòüñ èçâåñòíûå ôàðìàöåâòè÷åñêèå
êîìïîíåíòû.
Äë ïàðåíòåðàëüíîãî ââåäåíè íîñèòåëü îáû÷íî âêëþ÷àåò ñòåðèëüíûé 0,9% ðàñòâîð
õëîðèäà íàòðè èëè ñòåðèëüíóþ âîäó, õîò ìîãóò áûòü âêëþ÷åíû äðóãèå èíãðåäèåíòû,
ñïîñîáñòâóþùèå ñòàáèëüíîñòè ïðåïàðàòà.
Ñóùíîñòü èçîáðåòåíè ïî ñí åòñ òàáëèöàìè, ïðèâåäåííûìè â êîíöå îïèñàíè .
 Òàáëèöå 1 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà áèîõèìè÷åñêèå
ïîêàçàòåëè â ìèîêàðäå êðûñ ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîì èíôàðêòå (âàðèàíò ëå÷åíè ).
 Òàáëèöå 2 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ñîñòî íèå
èçîëèðîâàííîãî ñåðäöà ìîðñêèõ ñâèíîê (âàðèàíò ëå÷åíè ).
 Òàáëèöå 3 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ïîêàçàòåëè
ñîêðàòèòåëüíîé ñïîñîáíîñòè èçîëèðîâàííîãî ñåðäöà êðûñ ïîñëå èøåìèè.
 Òàáëèöå 4 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ïîêàçàòåëè ïåðåêèñíîãî
îêèñëåíè ëèïèäîâ â ìèîêàðäå êðûñ ïðè àäðåíàëèíîâîé äèñòðîôèè ÷åðåç ñóòêè ïîñëå åå
ñîçäàíè .
 Òàáëèöå 5 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà àêòèâíîñòü
äåãèäðîãåíàç è ñîäåðæàíèå ãëèêîãåíà â ìèîêàðäå êðûñ ÷åðåç 4 ÷àñà ïîñëå àäðåíàëèíîâîé
äèñòðîôèè.
 Òàáëèöå 6 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà öèòîìîðôîëîãè÷åñêèå
ïîêàçàòåëè â ìèîêàðäå ïðè îòðàâëåíèè êðûñ òåòðàìåòèëóðàìäèñóëüôèäîì.
 Òàáëèöå 7 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ïîêàçàòåëè òå÷åíè è
èñõîäà õëîðêàëüöåâîé àíåìèè ó êðûñ.
 Òàáëèöå 8 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ðîñò îðãàíîòèïè÷åñêèõ
ýêñïëàíòàòîâ òêàíè ìèîêàðäà.
 Òàáëèöå 9 ïîêàçàíî âëè íèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg íà ìîðôîëîãè÷åñêèå è
áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ìîðñêèõ ñâèíîê.
Íàñòî ùåå èçîáðåòåíèå èëëþñòðèðóåòñ ïðèìåðîì ñèíòåçà òåòðàïåïòèäà ôîðìóëû AlaÑòðàíèöà: 5
RU 2 255 756 C1
5
Glu-Asp-Arg (ïðèìåð 1), ïðèìåðàìè, ïîäòâåðæäàþùèìè áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü
òåòðàïåïòèäà (ïðèìåðû 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8), ïðèìåðîì èñïûòàíè òåòðàïåïòèäà íà
òîêñè÷íîñòü (ïðèìåð 9), äåìîíñòðèðóþùèìè åãî ôàðìàêîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà è
ïîäòâåðæäàþùèìè òåðàïåâòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü ôàðìàöåâòè÷åñêîé êîìïîçèöèè.
Ïðèìåð 1. Ñèíòåç òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg.
1. Íàçâàíèå ñîåäèíåíè : L-àëàíèë-L-ãëóòàìèë-L-àñïàðòèë-L-àðãèíèí
2. Ñòðóêòóðíà ôîðìóëà: H-Ala-Glu-Asp-Arg-OH
10
15
20
3. Áðóòòî-ôîðìóëà áåç ïðîòèâîèîíà: C18H31N7O9
4. Ìîëåêóë ðíûé âåñ áåç ïðîòèâîèîíà: 489,48
5. Ïðîòèâîèîí: àöåòàò
6. Âíåøíèé âèä: áåëûé àìîðôíûé ïîðîøîê áåç çàïàõà
7. Ñïîñîá ñèíòåçà: ïåïòèä ïîëó÷åí êëàññè÷åñêèì ìåòîäîì ñèíòåçà â ðàñòâîðå ïî ñõåìå
25
30
35
40
45
50
Z - áåíçèëîêñèêàðáîíèëüíà ãðóïïà;
ÂÎÑ - òðåò.áóòèëîêñèêàðáîíèëüíà ãðóïïà;
OSu - N-îêñèñóêöèíèìèäíûé ýôèð;
OBzl - áåíçèëîâûé ýôèð;
DCC -N,N'-äèöèêëîãåêñèëêàðáîäèèìèä;
ÍÎÂÒ - N-îêñèáåíçîòðèàçîë.
 êà÷åñòâå ðàñòâîðèòåë èñïîëüçóþò N,N'-äèìåòèëôîðìàìèä, ïðè ââåäåíèè
àñïàðàãèíîâîé êèñëîòû èñïîëüçóþò çàùèòó α-ÑÎÎÍ ãðóïïû ñîëåîáðàçîâàíèåì ñ
òðèýòèëàìèíîì. Äåáëîêèðîâàíèå ÂÎÑ-çàùèòíîé ãðóïïû ïðîâîä ò ðàñòâîðîì
òðèôòîðóêñóñíîé êèñëîòû (TFA), Z-çàùèòíîé ãðóïïû - êàòàëèòè÷åñêèì ãèäðîãåíîëèçîì.
Âûäåëåíèå è î÷èñòêó ïðåïàðàòà îñóùåñòâë þò ìåòîäîì ïðåïàðàòèâíîé ÂÝÆÕ íà êîëîíêå ñ
îáðàùåííîé ôàçîé. 8. Õàðàêòåðèñòèêè ãîòîâîãî ïðåïàðàòà:
- àìèíîêèñëîòíûé àíàëèç: Glu 1,08; Asp 1,08; Ala 1,00; Arg 1,07;
- ñîäåðæàíèå îñíîâíîãî âåùåñòâà 98,01% (ïî ÂÝÆÕ, 220 íì);
- ÒÑÕ - èíäèâèäóàëåí, Rf=0,59 (àöåòîíèòðèë-óêñóñíà ê-òà-âîäà 5:1:3);
Ñòðàíèöà: 6
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
- ñîäåðæàíèå âëàãè: 8%;
- ðÍ 0,001% ðàñòâîðà: 4,58;
- óäåëüíîå îïòè÷åñêîå âðàùåíèå: [α]D 22: -24° (c=1, H2O).
Ïðèìåð ñèíòåçà:
1) BOC-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-OH (I), N-òðåò.áóòèëîêñèêàðáîíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)-àñïàðòàò.
N-îêñèñóêöèíèìèäíûé ýôèð N-òðåò.áóòèëîêñèêàðáîíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèíîâîé êèñëîòû
BOC-Glu(OBzl)-OSu 4,34 ã (0,01 ìîëü) ðàñòâîð þò â 20 ìë äèìåòèëôîðìàìèäà, äîáàâë þò
òðèýòèëàìèí 1,72 ìë (0,0125 ìîëü) è β-áåíçèëàñïàðòàò 2,80 ã (0,0125 ìîëü).
Ïåðåìåøèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 24 ÷àñ.
Ïðîäóêò âûñàæèâàþò 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (150 ìë), ýêñòðàãèðóþò â
ýòèëàöåòàò (3×30 ìë), ïðîìûâàþò 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (2×20 ìë) âîäîé, 5%
ðàñòâîðîì áèêàðáîíàòà íàòðè (1×20 ìë), âîäîé, 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (2×20
ìë), âîäîé è ñóøàò íàä áåçâîäíûì ñóëüôàòîì íàòðè . Ýòèëàöåòàò ôèëüòðóþò, óïàðèâàþò â
âàêóóìå ïðè 40°Ñ, îñòàòîê ñóøàò â âàêóóìå íàä P2O5. Ïîëó÷àþò ìàñëî 5,68 ã (≈100%).
Rf=0,42 (áåíçîë-àöåòîí 2:1, ïëàñòèíêè ÏÒÑÕ-Ï-Â-ÓÔ Sorbfil, ñèëèêàãåëü ÑÒÕ-1ÂÝ 8-12
ìêì, ïðî âëåíèå ÓÔ è õëîð/áåíçèäèí).
2) TFA-H-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-OH (II), òðèôòîðàöåòàò (γ-áåíçèë)-ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòàò.
N-òðåò.áóòèëîêñèêàðáîíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòàò (I) 5,68 ã (≈0,01 ìîëü)
ðàñòâîð þò â 20 ìë ñìåñè äèõëîðìåòàí-òðèôòîðóêñóñíà êèñëîòà (3:1). ×åðåç 2 ÷àñà
ðàñòâîðèòåëü óïàðèâàþò â âàêóóìå ïðè 40°Ñ, óïàðèâàíèå ïîâòîð þò ñ íîâîé ïîðöèåé
äèõëîðìåòàíà (2×10 ìë), îñòàòîê ñóøàò â âàêóóìå íàä NaOH. Ïîëó÷àþò ìàñëî 5,80
ã (≈100%). Rf=0,63 (í-áóòàíîë-ïèðèäèí-óêñóñíà êèñëîòà-âîäà, 15:10:3:12).
3) Z-Ala-Glu(OBz1)-Asp(OBz1)-OH (III), Nêàðáîáåíçîêñèàëàíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòàò.
Òðèôòîðàöåòàò(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòàò (II) 5,65 ã (0,01 ìîëü)
ðàñòâîð þò â 10 ìë äèìåòèëôîðìàìèäà, äîáàâë þò òðèýòèëàìèí 2,80 ìë (0,02 ìîëü) è Nîêñèñóêöèíèìèäíûé ýôèð N-êàðáîáåíçîêñèàëàíèíà 4,14 ã (0,013 ìîëü). Ñìåñü
ïåðåìåøèâàþò â òå÷åíèå 24 ÷àñîâ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå.
Ïðîäóêò âûñàæèâàþò 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (150 ìë), ýêñòðàãèðóþò â
ýòèëàöåòàò (3×30 ìë), ïðîìûâàþò 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (2×20 ìë), âîäîé, 5%
ðàñòâîðîì áèêàðáîíàòà íàòðè (1×20 ìë), âîäîé, 0,5 í ðàñòâîðîì ñåðíîé êèñëîòû (2×20
ìë), âîäîé è ñóøàò íàä áåçâîäíûì ñóëüôàòîì íàòðè . Ýòèëàöåòàò ôèëüòðóþò, óïàðèâàþò â
âàêóóìå ïðè 40°Ñ, îñòàòîê çàêðèñòàëëèçîâûâàþò â ñèñòåìå ýòèëàöåòàò/ãåêñàí. Ïðîäóêò
îòôèëüòðîâûâàþò è ñóøàò â âàêóóìå íàä Ð2O5. Âûõîä 4,10 ã (66%). Ò. ïë.=154°Ñ.
Rf=0,48 (áåíçîë-àöåòîí, 1:1), Rf=0,72 (í-áóòàíîë-ïèðèäèí-óêñóñíà êèñëîòà-âîäà, 15:10:
3:12).
4) Z-Ala-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Arg-OH (IV), N-êàðáîáåíçîêñèàëàíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòèëàðãèíèí.
Ðàñòâîð þò N-êàðáîáåíçîêñèàëàíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòàò (III) 5,0
ã (8 ììîëü) è N-îêñèáåíçîòðèàçîë 1,35 ã (10 ììîëü) â 20 ìë äèìåòèëôîðìàìèäà,
îõëàæäàþò ñìåñü äî 0°Ñ è äîáàâë þò îõëàæäåííûé ðàñòâîð N,N’äèöèêëîãåêñèëêàðáîäèèìèäà 2,0 ã (10 ììîëü) â 5 ìë, ïåðåìåøèâàþò â òå÷åíèå 20 ìèí.
Çàòåì äîáàâë þò îõëàæäåííóþ ñóñïåíçèþ HClH-Arg-OH, ãèäðîõëîðèäà àðãèíèíà 5,00 ã (24
ììîëü) â 15 ìë äèìåòèëôîðìàìèäà, ïåðåìåøèâàþò â òå÷åíèå 2 ÷àñîâ ðåàêöèîííóþ ñìåñü
ïðè 0°Ñ è îñòàâë þò íà íî÷ü ïåðåìåøèâàòüñ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Îñàäîê
äèöèêëîãåêñèëìî÷åâèíû è èçáûòîê àðãèíèíà îòôèëüòðîâûâàþò.  ôèëüòðàò âûëèâàþò 0,5 ë
2 í H2SO4 äî îáðàçîâàíè æåëòîãî îñàäêà, îñòàâë þò íà íî÷ü â õîëîäèëüíèêå. Îñàäîê
ðàñòâîð þò â 100 ìë í-áóòàíîëà, íàñûùåííîãî 2% óêñóñíîé êèñëîòîé, è íåñêîëüêî ðàç
ïðîìûâàþò 2% óêñóñíîé êèñëîòîé. Îðãàíè÷åñêèé ñëîé ïðîìûâàþò âîäîé äî íåéòðàëüíîãî
Ñòðàíèöà: 7
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
çíà÷åíè ðÍ è óïàðèâàþò â âàêóóìå. Îñòàòîê çàêðèñòàëëèçîâûâàþò â äèýòèëîâîì ýôèðå,
îòôèëüòðîâûâàþò è ñóøàò íàä P2O5. Âûõîä 2,5 ã (45%).
Rf=0,88 (í-áóòàíîë-óêñóñíà ê-òà-âîäà 4:1:1).
5) H-Ala-Glu-Asp-Arg-OH (V), àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí.
N-êàðáîáåíçîêñèàëàíèë-(γ-áåíçèë)ãëóòàìèë-(β-áåíçèë)àñïàðòèëàðãèíèí (III) 2,50 ã
ãèäðèðóþò â ñèñòåìå ìåòàíîë-âîäà (5:1) íàä êàòàëèçàòîðîì Pd/C. Êîíòðîëü çà ïîëíîòîé
äåáëîêèðîâàíè â ÒÑÕ ñèñòåìàõ áåíçîë-àöåòîí (2:1) è àöåòîíèòðèë-óêñóñíà êèñëîòà-âîäà
(5:1:3). Ïî îêîí÷àíèè ðåàêöèè êàòàëèçàòîð îòôèëüòðîâûâàþò, ôèëüòðàò óïàðèâàþò â
âàêóóìå è îñòàòîê çàêðèñòàëëèçîâûâàþò â ñèñòåìå âîäà/ìåòàíîë. Ïðîäóêò ñóøàò â âàêóóìå
íàä ÊÎÍ. Âûõîä 1,00 ã (70%).
Rf=0,59 (àöåòîíèòðèë-óêñóñíà ê-òà-âîäà, 5:1:3). Äë î÷èñòêè 250 ìã ïðåïàðàòà
ðàñòâîð þò â 4 ìë 0,01% òðèôòîðóêñóñíîé êèñëîòû è ïîäâåðãàþò âûñîêîýôôåêòèâíîé
æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèè íà êîëîíêå ñ îáðàùåííîé ôàçîé 50×250 ìì Diasorb-130-C16T,
7 mkm. Õðîìàòîãðàô Beckman System Gold, 126 Solvent Module, 168 Diode Array Detector
Module.
Óñëîâè õðîìàòîãðàôèðîâàíè - A: 0,1% TFA; Â: MeCN/0,l% TFA; ãðàäèåíò Â 0→10% çà
100 ìèí. Îáúåì ïðîáû 5 ìë, äåòåêöè ïðè 215 íì, ñêàíèðîâàíèå 190-600 íì, ñêîðîñòü
ïîòîêà 10 ìë/ìèí.
Îòáèðàþò ôðàêöèþ 49,0-54,0 ìèí. Ðàñòâîðèòåëü óïàðèâàþò â âàêóóìå ïðè òåìïåðàòóðå
íå âûøå 40°Ñ è ïîâòîð þò î÷èñòêó ìåòîäîì ÂÝÆÕ â òåõ æå óñëîâè õ. Îòáèðàþò ôðàêöèþ
32-48 ìèí. Ðàñòâîðèòåëü óïàðèâàþò, óïàðèâàíèå ìíîãîêðàòíî (5 ðàç) ïîâòîð þò ñ 10 ìë
10% ðàñòâîðà óêñóñíîé êèñëîòû. Îêîí÷àòåëüíî îñòàòîê ðàñòâîð þò â 20 ìë
äåèîíèçîâàííîé âîäû è ëèîôèëèçóþò. Ïîëó÷àþò 110 ìã î÷èùåííîãî ïðåïàðàòà â âèäå
àìîðôíîãî áåëîãî ïîðîøêà áåç çàïàõà.
6) Àíàëèç ãîòîâîãî ïðåïàðàòà.
- Ñîäåðæàíèå îñíîâíîãî âåùåñòâà îïðåäåë þò ìåòîäîì ÂÝÆÕ íà êîëîíêå Supelco LC18-DB 4,6×250 mm, gard. LC-18-DB. A: 0,1% TFA; Â: MeCN/0,1%TFA; grad. Â 0→10% çà 30
ìèí. Ñêîðîñòü ïîòîêà 1 ìë/ìèí. Äåòåêöè ïðè 220 íì, ñêàíèðîâàíèå 190-600 íì, ïðîáà
20 µl. Ñîäåðæàíèå îñíîâíîãî âåùåñòâà 98,01%;
- Àìèíîêèñëîòíûé àíàëèç ïðîâîä ò íà àíàëèçàòîðå ÀÀÀ "Ò-339" Prague. Ãèäðîëèç â 6 í
ÍÑl ïðè 125°Ñ 24 ÷àñ. Glu 1,08; Asp 1,08; Ala 1,00; Arg 1,07;
- ÒÑÕ: èíäèâèäóàëåí, Rf=0,59 (àöåòîíèòðèë-óêñóñíà ê-òà-âîäà, 5:1:3 ïëàñòèíêè ÏÒÑÕÏ-Â-ÓÔ Sorbfil, ñèëèêàãåëü ÑÒÕ-1ÂÝ 8-12 ìêì, ïðî âëåíèå õëîð/áåíçèäèí);
- Ñîäåðæàíèå âëàãè: 8% (îïðåäåë þò ãðàâèìåòðè÷åñêè ïî ïîòåðå ìàññû ïðè ñóøêå 20 ìã
ïðè 100°Ñ). ðÍ 0,001% ðàñòâîðà: 4,58 (ïîòåíöèîìåòðè÷åñêè);
- Óäåëüíîå îïòè÷åñêîå âðàùåíèå: [α]D 22:-24° (c=1, H2O), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.
Ïðèìåð 2. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå ýêñïåðèìåíòàëüíîãî èíôàðêòà ìèîêàðäà
ïðè ïåðåâ çêå êîðîíàðíîé àðòåðèè ó êðûñ.
Ýêñïåðèìåíò ïðîâåäåí íà 40 áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñàõ ìàññîé 180-200 ã. Æèâîòíûå
áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà äâå ãðóïïû ïî 20 æèâîòíûõ â êàæäîé. Èíôàðêò
ìèîêàðäà (ÈÌ) âîñïðîèçâîäèëè ïåðåâ çêîé ëåâîé êîðîíàðíîé àðòåðèè. Òåòðàïåïòèä À1àGlu-Asp-Arg ââîäèëè æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî â äîçå 0,05 ìêã/æèâîòíîå â ñòåðèëüíîì
0,9% ðàñòâîðå NaCl òðåõêðàòíî - ÷åðåç 1, 3, 5 ÷àñîâ ïîñëå êîðîíàðîîêêëþçèè. Êðûñ
äåêàïèòèðîâàëè ÷åðåç 6 è 24 ÷àñà ïîñëå îïåðàöèè. Êîíòðîëåì ñëóæèëè îïåðèðîâàííûå
æèâîòíûå, ïîëó÷àâøèå âíóòðèáðþøèííî 0,9% ðàñòâîð NaCl. Ðàçìåðû çîíû ÈÌ îïðåäåë ëè
ãðàâèìåòðè÷åñêè. Ôðàãìåíòû ìèîêàðäà ôèêñèðîâàëè äë ñâåòîâîé, ýëåêòðîííîé
ìèêðîñêîïèè, ÷àñòü ìàòåðèàëà çàìîðàæèâàëè â æèäêîì àçîòå äë áèîõèìè÷åñêèõ
èññëåäîâàíèé.
Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòà ïðèâåäåíû â Òàáëèöå 1. Ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-AspArg ïðèâîäèëî ê çíà÷èòåëüíîìó ñíèæåíèþ ëåòàëüíîñòè ó êðûñ â òå÷åíèå ïåðâûõ ñóòîê
ïîñëå èíôàðêòà (45% ñðåäè êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ è 15% â ãðóïïå êðûñ ïîñëå ïðèìåíåíè òåòðàïåïòèäà). Ãèñòîëîãè÷åñêè ýòî ïðî âë ëîñü â äîñòîâåðíîì óìåíüøåíèè çîí íåêðîçà ó
Ñòðàíèöà: 8
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
æèâîòíûõ ïîñëå ïðèìåíåíè òåòðàïåïòèäà óæå â ïåðâûå ÷àñû ðàçâèòè çàáîëåâàíè . Ïðè
àíàëèçå äèíàìèêè èçìåíåíè áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé âèäíî, ÷òî ïåïòèäíûé ïðåïàðàò
äîñòîâåðíî ñíèæàåò ïî÷òè â 1,5 ðàçà ñîäåðæàíèå â êðîâè ãëþêîçû, âûçâàííîå îñòðîé
èøåìèåé ìèîêàðäà. Ýòî ïðîèñõîäèò, ãëàâíûì îáðàçîì, çà ñ÷åò ñîõðàíåíè íîðìàëüíîé
àêòèâíîñòè ìàðêåðíûõ ôåðìåíòîâ - ëàêòàòäåãèäðîãåíàçû (ËÄÃ) è êðåàòèíôîñôîêèíàçû
(ÊÔÊ). Ïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà â äàííîé ìîäåëè ïðî âë åòñ òàêæå â
ñîõðàíåíèè ñîäåðæàíè ãëèêîãåíà â òêàíè ìèîêàðäà, êîòîðîå áåç ïðèìåíåíè ïðåïàðàòà
ñíèæàåòñ â 3 ðàçà.
Óëüòðàñòðóêòóðíûå èçìåíåíè ñîñòî íè êàðäèîìèîöèòîâ áûëè èçó÷åíû ñ ïîìîùüþ
ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè. Ïðè èçó÷åíèè 180 ýëåêòðîíîãðàìì áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî
îñîáåííî îò÷åòëèâî ïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà âû âë åòñ ïî ñîõðàííîñòè
ñòðóêòóð ìèòîõîíäðèé ÷åðåç 24 ÷àñà îò íà÷àëà ÈÌ. Ïîä äåéñòâèåì ïðåïàðàòà êîýôôèöèåíò
ýíåðãåòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ìèòîõîíäðèé (âûðàæåííîå â ïðîöåíòàõ îòíîøåíèå
ïðîèçâåäåíè ñðåäíåãî ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà êðèñò íà ñóììó ïëîùàäåé ìèòîõîíäðèé â
îäíîé ýëåêòðîíîãðàììå ïðè ïàòîëîãèè ê òåì æå ïîêàçàòåë ì íîðìàëüíîãî ñåðäöà)
äîñòîâåðíî âîçðàñòàåò ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëüíûì æèâîòíûì (93,2±2,3 è 41,5±2,4
ñîîòâåòñòâåííî ð<0,05).
Òàêèì îáðàçîì, òåòðàïåïòèä çíà÷èòåëüíî îñëàáë åò èøåìè÷åñêîå ïîâðåæäåíèå
îêîëîèíôàðêòíîãî ìèîêàðäà è ñòèìóëèðóåò â íåì ðåïàðàòèâíûå ïðîöåññû, ÷òî ïðèâîäèò ê
ñîõðàíåíèþ æèçíåñïîñîáíîñòè êàðäèîìèîöèòîâ è íîðìàëèçàöèè èõ óëüòðàñòðóêòóðû, â òî
âðåì êàê ó êîíòðîëüíûõ æèâîòíûõ ïðîèñõîäèò íàðàñòàíèå ò æåñòè èøåìè÷åñêîãî
ïîâðåæäåíè , çàêàí÷èâàþùååñ èõ ãèáåëüþ.
Ïðèìåð 3. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà ñîñòî íèå èçîëèðîâàííîãî ñåðäöà ïðè ïåðôóçèè è
èøåìèè.
Ýêñïåðèìåíò ïðîâåäåí ïðè ïåðôóçèè èçîëèðîâàííûõ ñåðäåö 60 ìîðñêèõ ñâèíîê ñàìöîâ,
ïî Ëàãåíäîðôó. Æèâîòíûå áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà ãðóïïû ïî 6 æèâîòíûõ â
êàæäîé. Òîòàëüíóþ èøåìèþ ñåðäöà ñîçäàâàëè ïóòåì ïîëíîãî ïåðåæàòè ïîäàþùåãî
ïåðôóçèîííûé ðàñòâîð øëàíãà íà 30 ìèí. Çàòåì íà÷èíàëè ðåïåðôóçèþ ïðè òåõ æå
óñëîâè õ, ÷òî è äî èøåìèè (êîíòðîëüíà ãðóïïà). Â ãðóïïå ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ
ïðîâîäèëè ïåðôóçèþ â ïðèñóòñòâèè òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg â êîíöåíòðàöè õ 0,0020,05 ìêã/ìë. Âåëè çàïèñü ìåõàíè÷åñêèõ ñîêðàùåíèé, â ïðîöåññå îïûòà íåñêîëüêî ðàç
ïðîèçâîäèëè çàáîð áèîïòàòîâ èç âåðõóøêè ñåðäöà ìàññîé îêîëî 10 ìã, â äàëüíåéøåì
îïðåäåë ëè â íèõ ñîäåðæàíèå ìàëîíîâîãî äèàëüäåãèäà (ÌÄÀ). Ñåðäöà â êîíöå îïûòà è
÷àñòü ñåðäåö äî èøåìèè çàìîðàæèâàëè â æèäêîì àçîòå äë îïðåäåëåíè ñîäåðæàíè ÀÒÔ,
ÀÄÔ è ÀÌÔ.
 äðóãîì ýêñïåðèìåíòå èññëåäîâàëè âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà âîññòàíîâëåíèå
ñîêðàòèòåëüíîé ñïîñîáíîñòè èçîëèðîâàííîãî ñåðäöà êðûñû ïîñëå ïåðèîäà èøåìèè.
Èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëè íà 3 ãðóïïàõ ïî 8 æèâîòíûõ â êàæäîé â áîëåå íàïð æåííîì
ðåæèìå ðàáîòû ñåðäå÷íîé ìûøöû ïðè íàâ çàííîì ðèòìå ñîêðàùåíèé è ïîâûøåíèè
òåìïåðàòóðû ïåðôóçèîííîãî ðàñòâîðà äî 37°Ñ.
Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòà ïðèâåäåíû â Òàáëèöàõ 2 è 3. Àíàëèç ïîëó÷åííûõ äàííûõ
ïîêàçûâàåò, ÷òî äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà íà íîðìàëüíîå è èøåìèçèðîâàííîå ñåðäöå
ðàçëè÷íî. Ïðèìåíåíèå òåòðàïåïòèäà íå âëè åò íà ñîñòî íèå íîðìàëüíîãî ñåðäöà, â òî
âðåì êàê ïðè èøåìèè íàëè÷èå ïðåïàðàòà â ïåðôóçàòå â ìàëûõ äîçàõ îò 0,002 äî 0,005
ìêã/ìë áëàãîïðè òíî ñêàçûâàåòñ íà ðàáîòå ñåðäöà â ñîñòî íèè èøåìèè. Îòìå÷åíî
óâåëè÷åíèå ñèëû è àìïëèòóäû ñåðäå÷íûõ ñîêðàùåíèé, äîñòîâåðíî ïîâûñèëîñü
ñîäåðæàíèå ìàêðîýðãè÷åñêèõ ôîñôàòîâ ïðè ñîäåðæàíèè ÌÄÀ, äîñòîâåðíî íå
îòëè÷àþùåìñ îò íîðìû. Äîáàâëåíèå òåòðàïåïòèäà â ïåðôóçèîííûé ðàñòâîð â
êîíöåíòðàöèè 0,005 ìêã/ìë ïðèâîäèëî ê çíà÷èòåëüíîìó óëó÷øåíèþ ñîêðàòèòåëüíîé
ôóíêöèè - âîçðàñòàëà àìïëèòóäà ñîêðàùåíèé (äî 75±12% îò èñõîäíîé ïðè óðîâíå ó
æèâîòíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû 43±7%). Ñêîðîñòè ñîêðàùåíè è ðàññëàáëåíè áûëè
äîñòîâåðíî âûøå ó æèâîòíûõ ïîäîïûòíîé ãðóïïû, êîðîíàðíûé ïðîòîê äîñòîâåðíî
óâåëè÷èëñ äî 10,8±1,6 ìë/ìèí ïî ñðàâíåíèþ ñ æèâîòíûìè êîíòðîëüíîé ãðóïïû (8,5±0,4
Ñòðàíèöà: 9
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
ìë/ìèí, ð<0,05).
 äðóãîé ñåðèè îïûòîâ íà 12 ñåðäöàõ êðûñ ïðîâåëè èññëåäîâàíèå ïðîòåêòîðíîãî
âëè íè òåòðàïåïòèäà ïðè åãî äîáàâëåíèè â ïåðôóçàò â êîíöåíòðàöèè 10 íã/ìë äî
ñîçäàíè èøåìèè. Çàòåì ïðîâîäèëè “æåñòêóþ” ñòèìóë öèþ (÷àñòîòà 5 Ãö) ñåðäöà è
îöåíèâàëè ñîêðàòèòåëüíóþ àêòèâíîñòü. Ïðè èçó÷åíèè ïðîòåêòîðíîãî äåéñòâè òåòðàïåïòèäà
ïðè åãî ââåäåíèè äî ñîçäàíè èøåìèè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî òåòðàïåïòèä â äîçå 0,005
ìêã/ìë ñäåðæèâàë ðîñò êîíòðàêòóðû â ïåðèîä èøåìèè è ñïîñîáñòâîâàë åå ñíèæåíèþ ïî
ìåðå ðåïåðôóçèè, â òî âðåì êàê â êîíòðîëüíûõ ñåðäöàõ ïîñëå ñòèìóë öèè íå ïðîèñõîäèëî
âîññòàíîâëåíè íîðìàëüíîé ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè ïðè ðåïåðôóçèè, ÷òî ïðèâîäèëî ê
ïîëíîé îñòàíîâêå ñîêðàùåíèé óæå ÷åðåç 5 ìèíóò ðåïåðôóçèè. Ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà â
î÷åíü ìàëîé äîçå 0,005 ìêã/ìë ïðåäîõðàí ëî ñåðäöå, íàõîä ùååñ íà ãðàíè îñòàíîâêè, îò
ôèáðèëë öèè è ñíèæåíè ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè, âîññòàíàâëèâà åå.
Ïðèìåð 4. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå àäðåíàëèíîâîé äèñòðîôèè ìèîêàðäà ó
êðûñ.
Ýêñïåðèìåíò ïðîâåäåí íà 30 áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñàõ ìàññîé 180-200 ã. Æèâîòíûå
áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà òðè ãðóïïû ïî 10 æèâîòíûõ â êàæäîé.
Àäðåíàëèíîâóþ äèñòðîôèþ ñîçäàâàëè ââåäåíèåì ñâåæåïðèãîòîâëåííîãî ðàñòâîðà
àäðåíàëèíà (“Ñåðâà”, ÑØÀ) âíóòðèáðþøèííî â äîçå 2 ìã/êã. Æèâîòíûì êîíòðîëüíîé ãðóïïû
ââîäèëè 0,9% ðàñòâîð NaCl. Çàòåì æèâîòíûì ïîäîïûòíîé ãðóïïû ÷åðåç 1 è 5 ÷àñîâ ââîäèëè
òåòðàïåïòèä Ala-Glu-Asp-Arg â äîçå 0,05 ìêã/æèâîòíîå â ñòåðèëüíîì 0,9% ðàñòâîðå NaCl.
×åðåç 4 ÷àñà îò íà÷àëà ýêñïåðèìåíòà ó æèâîòíûõ áûëè âç òû áèîïòàòû ñåðäå÷íîé ìûøöû
ìàññîé îêîëî 10 ìã äë îïðåäåëåíè àêòèâíîñòè ñåðäå÷íûõ äåãèäðîãåíàç è ñîäåðæàíè ãëèêîãåíà â ìèîêàðäå. ×åðåç 1 ñóòêè æèâîòíûõ çàáèâàëè îäíîìîìåíòíîé äåêàïèòàöèåé.
Êóñî÷êè ëåâîãî æåëóäî÷êà çàìîðàæèâàëè â æèäêîì àçîòå.  êðèîñòàòíûõ ñðåçàõ
ãèñòîõèìè÷åñêè îïðåäåë ëè àêòèâíîñòü ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçû (ÑÄÃ), ÍÀÄÍäåãèäðîãåíàçû (ÍÀÄÍ-ÄÃ), ëàêòàãäåãèäðîãåíàçû è ñîäåðæàíèå ãëèêîãåíà.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè ïðåäñòàâëåíû â òàáëèöàõ 4 è 5.
Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíè ïîêàçàëè, ÷òî ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà îäíîâðåìåííî ñ
ñèëüíîé àäðåíåðãè÷åñêîé ñòèìóë öèåé ìèîêàðäà çàìåòíî ñíèæàåò èíòåíñèâíîñòü ïðîöåññà
ÏÎË, êîòîðûé âë åòñ îäíèì èç ïîâðåæäàþùèõ ìèîêàðä ôàêòîðîâ â äàííîé ìîäåëè.
×åðåç 1 ñóòêè ïîñëå ñîçäàíè äèñòðîôèè ìèîêàðäà êîëè÷åñòâî äèåíîâûõ êîíúþãàòîâ â
ìèîêàðäå ó æèâîòíûõ ïîäîïûòíîé ãðóïïû äîñòîâåðíî ñíèçèëîñü äî íîðìàëüíûõ
ïîêàçàòåëåé ïî ñðàâíåíèþ ñ æèâîòíûìè êîíòðîëüíîé ãðóïïû (110±17 è 176±24 íìîëü/ã
òêàíè ñîîòâåòñòâåííî, ð<0,05).
Ãèñòîõèìè÷åñêîå èññëåäîâàíèå àêòèâíîñòè äåãèäðîãåíàç è ñîäåðæàíè ãëèêîãåíà â
òêàíè ìèîêàðäà â ïåðâûå ÷àñû ïîñëå ââåäåíè àäðåíàëèíà (Òàáëèöà 5) ïîêàçàëî, ÷òî
òåòðàïåïòèä äîñòîâåðíî ñíèæàåò àêòèâíîñòü ëàêòàãäåãèäðîãåíàçû, ÷òî ñïîñîáñòâóåò
óìåíüøåíèþ àöèäîçà è ëó÷øåé ñîõðàííîñòè ñåðäå÷íîé ìûøöû â óñëîâè õ êèñëîðîäíîãî
ãîëîäàíè . Ýòî ïîäòâåðæäàåòñ ñîõðàíåíèåì êîëè÷åñòâà ãëèêîãåíà â ñåðäöå êðûñ,
ïîëó÷àâøèõ òåòðàïåïòèä, ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè æèâîòíûìè (0,168±0,021 è
0,112 ±0,0,17 îòí. åä. îïòè÷. ïëîòíîñòè ñîîòâåòñòâåííî).
Òàêèì îáðàçîì, ïðèìåíåíèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg îêàçûâàåò ïðîòåêòîðíûé
ýôôåêò â îòíîøåíèè äåéñòâè àäðåíàëèíà íà ôåðìåíòíûå ñèñòåìû îðãàíèçìà, ÷òî
ïîçâîë åò ñíèçèòü èçáûòî÷íóþ èíòåíñèâíîñòü ïðîöåññîâ ëèïèäíîé ïåðîêñèäàöèè è
óìåíüøèòü ðàçâèòèå íåêðîáèîòè÷åñêîé ìåëêîî÷àãîâîé àäðåíàëèíîâîé äèñòðîôèè
ìèîêàðäà.
Ïðèìåð 5. Ïðîòåêòîðíîå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà ïðè ýêñïåðèìåíòàëüíîé
òîêñèêîõèìè÷åñêîé ìèîêàðäèîïàòèè ïðè îòðàâëåíèè òåòðàìåòèëòèóðàìäèñóëüôèäîì.
Ýêñïåðèìåíò ïðîâåäåí íà 40 áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñàõ ìàññîé 220-230 ã. Æèâîòíûå
áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà ÷åòûðå ãðóïïû. Çàòðàâëèâàíèå æèâîòíûõ
ïðîìûøëåííûì äîì òåòðàìåòèëóðàìäèñóëüôèäîì (ÒÌÒÄ) ïðîâîäèëè ââåäåíèåì â
òå÷åíèå 20 äíåé 5% ìàñë íîãî ðàñòâîðà ÒÌÒÄ â äîçå 25 ìã/êã âíóòðèæåëóäî÷íî.
Òåòðàïåïòèä ââîäèëè â òå÷åíèå ïîñëåäíèõ 10 äíåé ýêñïåðèìåíòà âíóòðèìûøå÷íî â äîçå
Ñòðàíèöà: 10
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0,05 ìêã/æèâîòíîå â ñòåðèëüíîì 0,9% ðàñòâîðå NaCl. Ïî èñòå÷åíèè óêàçàííûõ ñðîêîâ
êîíòðîëüíûõ è ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ çàáèâàëè îäíîìîìåíòíîé äåêàïèòàöèåé. Êóñî÷êè
ìèîêàðäà ôèêñèðîâàëè â 12% ðàñòâîðå ôîðìàëèíà. Ïàðàôèíîâûå ñðåçû îêðàøèâàëè
ãåìàòîêñèëèíîì-ýîçèíîì, à òàêæå ïî Âàí-Ãèçîíó, Áðàøå, Ñóäàíîì III, IV. Êîíòðîëåì
ñëóæèëè èíòàêòíûå æèâîòíûå.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè ïðåäñòàâëåíû â Òàáëèöå 6.
Ìîðôîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî êîððèãèðóþùåå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà ïðè
çàòðàâêå æèâîòíûõ ïðîìûøëåííûì äîì ÒÌÒÄ. Ðåçóëüòàòû ãèñòîëîãè÷åñêîãî è
ìîðôîìåòðè÷åñêîãî èçó÷åíè âû âèëè, ÷òî ïðè ââåäåíèè òåòðàïåïòèäà èíòàêòíûì
æèâîòíûì íåñêîëüêî óâåëè÷èâàëèñü íàïîëíåíèå ìèîêàðäà è îáúåì äåð êàðäèîìèîöèòîâ
(íà 11% è 14% ñîîòâåòñòâåííî). Íà ôîíå ïîðàæàþùåãî äåéñòâè ÒÌÒÄ èññëåäóåìûé
ïðåïàðàò äîñòîâåðíî ñïîñîáñòâîâàë âîññòàíîâëåíèþ äåðíî-öèòîïëàçìàòè÷åñêîãî
ñîîòíîøåíè (îò 0,16±0,02 ïðè çàòðàâêå äî 0,28±0.03), ñíèæàë îáúåì ñòðîìû (îò
0,218 ±0,01 ñì 3/ñì 3 ó çàòðàâëåííûõ æèâîòíûõ äî 0,180±0,02 ñì 3/ñì 3), óâåëè÷èâàë îáúåì
ïàðåíõèìû äî íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé.
Òàêèì îáðàçîì, ïðîâåäåííîå èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî ïîä äåéñòâèåì òåòðàïåïòèäà
ïðîèñõîä ò âîññòàíîâëåíèå ñòðóêòóðû ìèîêàðäà è íîðìàëèçàöè îñíîâíûõ îáúåìíûõ
ñîîòíîøåíèé â ñåðäå÷íîé ìûøöå çàòðàâëåííûõ æèâîòíûõ. Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î
ïîëîæèòåëüíîì âëè íèè ïðåïàðàòà íà óñêîðåííîå âîññòàíîâëåíèå ôóíêöèè ñåðäöà ïðè
îòðàâëåíèè ïðîìûøëåííûì äîì.
Ïðèìåð 6. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà òå÷åíèå è èñõîä õëîðêàëüöèåâîé àðèòìèè ó êðûñ.
Ýêñïåðèìåíò ïðîâåäåí íà 60 áåëûõ áåñïîðîäíûõ êðûñàõ ìàññîé 180-200 ã. Æèâîòíûå
áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà 6 ãðóïï ïî 10 æèâîòíûõ â êàæäîé. Êðûñ
íàðêîòèçèðîâàëè óðåòàíîì è ââîäèëè ïî 220 ìã/êã 10% ðàñòâîðà CaCl2. Òåòðàïåïòèä AlaGlu-Asp-Arg ââîäèëè æèâîòíûì âíóòðèáðþøèííî îäíîêðàòíî â äîçàõ 0,05-1,0 ìêã/êã â
ñòåðèëüíîì 0,9% ðàñòâîðå NaCl.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè , ïðåäñòàâëåííûå â Òàáëèöå 7, ïîêàçàëè, ÷òî íàèáîëåå
ýôôåêòèâíîé âë åòñ äîçà 0,2 ìêã/êã. Ïðè ââåäåíèè òåòðàïåïòèäà ñíèæàåòñ ëåòàëüíîñòü
æèâîòíûõ, äîñòîâåðíî óìåíüøàåòñ ÷àñòîòà ðàçâèòè ôèáðèëë öèè æåëóäî÷êîâ,
óâåëè÷èâàþòñ ÷àñòîòà âîññòàíîâëåíè ñèíóñîâîãî ðèòìà ïîñëå ïåðâîãî ââåäåíè CaCl 2 è ïåðåíîñèìà äîçà àðèòìîãåíà. Ïðåïàðàò â äîçèðîâêàõ 0,2 ìêã/êã è 0,5 ìêã/êã
ñïîñîáñòâîâàë íîðìàëèçàöèè ÷àñòîòû ñåðäå÷íûõ ñîêðàùåíèé (×ÑÑ): ïðè ýòîì ó êðûñ ñ
áðàäèêàðäèåé ×ÑÑ óâåëè÷èëàñü íà 12,3-48,6%, à ó êðûñ ñ èñõîäíîé òàõèêàðäèåé
òåòðàïåïòèä óìåíüøàë ×ÑÑ äî íîðìàëüíûõ ïîêàçàòåëåé.
Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg ñïîñîáñòâóåò íîðìàëèçàöèè
ñåðäå÷íîé äå òåëüíîñòè ïðè àðèòìèè.
Ïðèìåð 7. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà ðîñò ýêñïëàíòàòîâ îðãàíîòèïè÷åñêîé êóëüòóðû
ñåðäöà ïîëîâîçðåëûõ êðûñ.
Ýêñïëàíòàòû òêàíåé ñåðäöà (ëåâîãî è ïðàâîãî æåëóäî÷êîâ) ïîëîâîçðåëûõ êðûñ ëèíèè
Âèñòàð êóëüòèâèðîâàëè â ÷àøêàõ Ïåòðè ñ êîëëàãåíîâûì ïîêðûòèåì äíà. Ïèòàòåëüíà ñðåäà
ñîñòî ëà èç 35% ñðåäû Èãëà, 35% ðàñòâîðà Õåíêñà, 25% ôåòàëüíîé òåë ÷üåé ñûâîðîòêè è
5% êóðèíîãî ýìáðèîíàëüíîãî ýêñòðàêòà ñ äîáàâëåíèåì ãëþêîçû, èíñóëèíà, ãåíòàìèöèíà è
ãëþòàìèíà. Èññëåäóåìûé òåòðàïåïòèä Ala-Glu-Asp-Arg äîáàâë ëè â êóëüòóðàëüíóþ ñðåäó â
ôèêñèðîâàííîé êîíöåíòðàöèè îò 0,01 äî 20,0 íã/ìë ïèòàòåëüíîé ñðåäû. Ïîñëå
èíêóáèðîâàíè â òå÷åíèå 3 ñóò ïðè òåìïåðàòóðå 37°Ñ îöåíèâàëè óâåëè÷åíèå ïëîùàäè
ýêñïëàíòàòîâ ïîä ôàçîâî-êîíòðàñòíûì ìèêðîñêîïîì. Áèîëîãè÷åñêîå äåéñòâèå ïðåïàðàòà
âûðàæàëè â èçìåíåíèè èíäåêñà ïëîùàäè (ÈÏ) ýêñïëàíòàòîâ, âûðîñøèõ â ñðåäå ñ ïåïòèäîì,
ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè.
Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòà ïðèâåäåíû â Òàáëèöå 8, èç êîòîðîé ñëåäóåò, ÷òî òåòðàïåïòèä
Ala-Glu-Asp-Arg ñòèìóëèðóåò ðîñò ýêñïëàíòàòîâ îðãàíîòèïè÷åñêîé êóëüòóðû ñåðäöà â
øèðîêîì äèàïàçîíå êîíöåíòðàöèé. Â èíòåíñèâíîé çîíå ðîñòà ïîä âëè íèåì òåòðàïåïòèäà
áûëè âû âëåíû âûäåë þùèåñ ìèîêàðäèîöèòû ñ õàðàêòåðíûìè äë íåçðåëûõ êëåòîê
áîëüøèìè êðóãëûìè äðàìè, à òàêæå ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè è ôèáðîáëàñòû. Ñ ïîìîùüþ
Ñòðàíèöà: 11
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
èììóíîãèñòîõèìè÷åñêîãî ìåòîäà âû âëåíè ïðîëèôåðàòèâíîãî äåðíîãî àíòèãåíà (PCNA)
ñ ïîñëåäóþùèì êîìïüþòåðíûì àíàëèçîì ìèêðîñêîïè÷åñêèõ èçîáðàæåíèé óñòàíîâëåíî, ÷òî
âåäóùóþ ðîëü â ìåõàíèçìå äåéñòâè òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg èãðàåò óñèëåíèå
ïðîëèôåðàòèâíîãî ïîòåíöèàëà êëåòîê.
Òàêèì îáðàçîì, ïðèìåíåíèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg ñïîñîáñòâóåò óñêîðåííîìó
îáíîâëåíèþ êëåòî÷íîé ïîïóë öèè êàðäèîìèîöèòîâ ñ íîðìàëüíûìè ñâîéñòâàìè è, òàêèì
îáðàçîì, ñòèìóëèðóåò ôóíêöèþ òêàíè ìèîêàðäà.
Ïðèìåð 8. Âëè íèå òåòðàïåïòèäà íà áèîýíåðãåòèêó êàðäèîìèîöèòîâ.
Êàðäèîìèîöèòû âûäåë ëè èç ñåðäå÷íîé ìûøöû âçðîñëûõ êðûñ ïî ìåòîäó Vahouny.
Ïîòðåáëåíèå êèñëîðîäà èçîëèðîâàííûìè êàðäèîìèîöèòàìè ðåãèñòðèðîâàëè
ïîë ðîãðàôè÷åñêè ïðè òåìïåðàòóðå 30°Ñ. Îêñèãåíàöèþ ÷àñòè ñóñïåíçèè êàðäèîìèîöèòîâ
îñóùåñòâë ëè íàñûùåíèåì åå êàðáîãåíîì â òå÷åíèå 1-3 ÷àñîâ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå.
Äðóãóþ ÷àñòü ñóñïåíçèè íå îêñèãåíèðîâàëè (óñëîâè óìåðåííîé ãèïîêñèè). Ñóêöèíàò
äîáàâë ëè â êîíöåíòðàöèè 1×10 -4 Ì è ïî ñòåïåíè ñòèìóë öèè ïîòðåáëåíè êèñëîðîäà
îöåíèâàëè ïîâðåæäåíèå áèîýíåðãåòèêè êëåòêè â óñëîâè õ ãèïîêñèè. Òåòðàïåïòèä
äîáàâë ëè â ñðåäó â êîíöåíòðàöèè 10 íã/ìë.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíè ïîêàçàëè, ÷òî ïðè ââåäåíèè òåòðàïåïòèäà â ñðåäó
ïðîèñõîäèëà íîðìàëèçàöè ïðîöåññà îêèñëåíè ñóêöèíàòà. Òàê, â óñëîâè õ ãèïîêñèè
êîýôôèöèåíò ñòèìóë öèè äûõàíè (îòíîøåíèå ñêîðîñòè äûõàíè â ïðèñóòñòâèè ñóêöèíàòà
ê èñõîäíîé ñêîðîñòè äûõàíè ) áûë ðàâåí 7,35±0,26, à ïðè äîáàâëåíèè òåòðàïåïòèäà îí
ñíèçèëñ äî 1,97±0,26. Ïðè ýòîì ïîòðåáëåíèå êèñëîðîäà íå ìåí ëîñü, åñëè òåòðàïåïòèä
äîáàâë ëè ê ñóñïåíçèè îêñèãåíèðîâàííûõ êëåòîê. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïðè äîáàâëåíèè â
ñðåäó òåòðàïåïòèäà âîçðàñòàåò îêèñëåíèå ÍÀÄ⋅Í2 êàðäèîìèîöèòàìè. Òàêèì îáðàçîì,
òåòðàïåïòèä, èçáèðàòåëüíî èíãèáèðó îêèñëåíèå íòàðíîé êèñëîòû è ñïîñîáñòâó îêèñëåíèþ ÍÀÄ⋅Í2, íîðìàëèçóåò áèîýíåðãåòèêó êàðäèîìèîöèòîâ â óñëîâè õ êèñëîðîäíîé
íåäîñòàòî÷íîñòè.
Äîïîëíèòåëüíûå èññëåäîâàíè , ïðîâåäåííûå íà ñðåçàõ ìèîêàðäà ðàçëè÷íûõ æèâîòíûõ,
ïðîäåìîíñòðèðîâàëè èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà íà àêòèâíîñòü
ñóêöèíàòäåãèäðîãåíàçû, ÷òî è âë åòñ , ïî-âèäèìîìó, ìåõàíèçìîì çàùèòíîãî äåéñòâè òåòðàïåïòèäà íà ïðîöåññû äûõàíè â êëåòêàõ ìèîêàðäà ïðè ãèïîêñèè.
Ïðèìåð 9. Èçó÷åíèå îáùåòîêñè÷åñêîãî äåéñòâè òåòðàïåïòèäà
Îáùåòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg èññëåäîâàëè â ñîîòâåòñòâèè ñ
òðåáîâàíè ìè “Ðóêîâîäñòâà ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ
ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ” (2000): îñòðîé òîêñè÷íîñòè ïðè îäíîêðàòíîì ââåäåíèè
ïðåïàðàòà, à òàêæå ïîäîñòðîé è õðîíè÷åñêîé òîêñè÷íîñòè ïðè äëèòåëüíîì ââåäåíèè
òåòðàïåïòèäà.
Èññëåäîâàíèå ïî èçó÷åíèþ îñòðîé òîêñè÷íîñòè ïðîâåäåíî íà 66 áåëûõ áåñïîðîäíûõ
ìûøàõ-ñàìöàõ ìàññîé 20-23 ã. Æèâîòíûå áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà 6 ðàâíûõ
ãðóïï. Ïðåïàðàò ââîäèëè æèâîòíûì îäíîêðàòíî âíóòðèìûøå÷íî â îáúåìå 0,25 ìë â äîçàõ 1
ìã/êã, 2 ìã/êã, 3 ìã/êã, 4 ìã/êã, 5 ìã/êã â ñòåðèëüíîì 0,9% ðàñòâîðå NaCl. Æèâîòíûì
êîíòðîëüíîé ãðóïïû â òîì æå îáúåìå ââîäèëè 0,9% ðàñòâîð NaCl.
Èññëåäîâàíè ïî èçó÷åíèþ ïîäîñòðîé òîêñè÷íîñòè ïðîâåäåíî íà 60 áåëûõ áåñïîðîäíûõ
êðûñàõ-ñàìöàõ ìàññîé 160-240 ã. Åæåäíåâíî îäíîêðàòíî æèâîòíûì ïîäîïûòíûõ ãðóïï
ââîäèëè ïðåïàðàò âíóòðèìûøå÷íî â òå÷åíèå 90 äíåé â äîçàõ 1 ìêã/êã, 0,1 ìã/êã, 1 ìã/êã
â 0,5 ìë 0,9% ðàñòâîðà NaCl. Æèâîòíûì êîíòðîëüíîé ãðóïïû ââîäèëè â òîì æå îáúåìå
0,9% ðàñòâîð NaCl. Äî ââåäåíè ïðåïàðàòà, íà 30, 60 è 90 ñóòêè ïîñëå íà÷àëà ââåäåíè ïðåïàðàòà ó æèâîòíûõ èññëåäîâàëè ìîðôîëîãè÷åñêèé ñîñòàâ è ñâîéñòâà ïåðèôåðè÷åñêîé
êðîâè. Ïðè çàâåðøåíèè ýêñïåðèìåíòà èññëåäîâàëè áèîõèìè÷åñêèå è êîàãóëîëîãè÷åñêèå
ïîêàçàòåëè êðîâè.
Èññëåäîâàíè ïî èçó÷åíèþ õðîíè÷åñêîé òîêñè÷íîñòè ïðîâîäèëè â òå÷åíèè 6 ìåñ öåâ,
èñõîä èç äëèòåëüíîñòè ðåêîìåíäóåìîãî êëèíè÷åñêîãî íàçíà÷åíè ïðåïàðàòà, íà 96
ìîðñêèõ ñâèíêàõ-ñàìöàõ ìàññîé 300-340 ã. Æèâîòíûå îïûòíûõ ãðóïï ïîëó÷àëè åæåäíåâíî
îäíîêðàòíî âíóòðèìûøå÷íî òåòðàïåïòèä â òå÷åíèå 6 ìåñ öåâ â äîçàõ 1 ìêã/êã, 0,1 ìã/êã,
Ñòðàíèöà: 12
RU 2 255 756 C1
5
10
15
20
25
30
1 ìã/êã â 0,5 ìë 0,9% ðàñòâîðà NaCl. Â êîíòðîëüíîé ãðóïïå æèâîòíûõ ââîäèëè ïî
àíàëîãè÷íîé ñõåìå 0,9% ðàñòâîð NaCl â òîì æå îáúåìå. Ó æèâîòíûõ â ïåðèôåðè÷åñêîé
êðîâè îáùåïðèí òûìè ìåòîäàìè îïðåäåë ëè: êîëè÷åñòâî ýðèòðîöèòîâ, ãåìîãëîáèíà,
ðåòèêóëîöèòîâ, òðîìáîöèòîâ, ëåéêîöèòîâ, ëåéêîöèòàðíóþ ôîðìóëó, ñêîðîñòü îñåäàíè ýðèòðîöèòîâ (ÑÎÝ), ðåçèñòåíòíîñòü ýðèòðîöèòîâ. Íàð äó ñ ýòèì îïðåäåë ëè ñîäåðæàíèå â
ñûâîðîòêå êðîâè îáùåãî áåëêà ïî ìåòîäó Ëîóðè, êàëè è íàòðè ìåòîäîì ïëàçìåííîé
ñïåêòðîôîòîìåòðèè. Ïîñëå çàâåðøåíè ýêñïåðèìåíòà ïðîâîäèëè ïàòîìîðôîëîãè÷åñêîå
èññëåäîâàíèå ãîëîâíîãî è ñïèííîãî ìîçãà, ñïèííîìîçãîâûõ ãàíãëèåâ, ùèòîâèäíîé æåëåçû,
ïàðàùèòîâèäíûõ æåëåç, íàäïî÷å÷íèêîâ, ñåìåííèêîâ, ãèïîôèçà, ñåðäöà, ëåãêèõ, àîðòû,
ïå÷åíè, ïî÷åê, ìî÷åâîãî ïóçûð , ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû, æåëóäêà, òîíêîé êèøêè, òîëñòîé
êèøêè, òèìóñà, ñåëåçåíêè, ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ, êîñòíîãî ìîçãà.
Ïðè èçó÷åíèè îñòðîé òîêñè÷íîñòè óñòàíîâëåíî, ÷òî îäíîêðàòíîå ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà
æèâîòíûì â äîçå, ïðåâûøàþùåé òåðàïåâòè÷åñêóþ, ðåêîìåíäîâàííóþ äë êëèíè÷åñêîãî
ïðèìåíåíè , â 5000 ðàç, íå âûçûâàåò òîêñè÷åñêèõ ðåàêöèé, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î
áîëüøîé òåðàïåâòè÷åñêîé øèðîòå ïðåïàðàòà.
Èçó÷åíèå ïîäîñòðîé è õðîíè÷åñêîé òîêñè÷íîñòè òåòðàïåïòèäà ñâèäåòåëüñòâóåò îá
îòñóòñòâèè ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ ïðè äëèòåëüíîì ïðèìåíåíèè ïðåïàðàòà â äîçàõ,
ïðåâûøàþùèõ òåðàïåâòè÷åñêóþ â 100-1000 ðàç. Ïðè èññëåäîâàíèè âëè íè òåòðàïåïòèäà
íà ìîðôîëîãè÷åñêèé ñîñòàâ êðîâè ìîðñêèõ ñâèíîê óñòàíîâëåíî óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà
ëåéêîöèòîâ ÷åðåç 3 è 6 ìåñ öåâ ïîñëå íà÷àëà ââåäåíè ïðåïàðàòà (Òàáëèöà 9). Îñòàëüíûå
ïîêàçàòåëè ìîðôîëîãè÷åñêîãî ñîñòàâà êðîâè æèâîòíûõ ïðàêòè÷åñêè íå èçìåí ëèñü. Íå
îòìå÷åíî äîñòîâåðíîãî âëè íè ïðåïàðàòà íà ÑÎÝ, ðåçèñòåíòíîñòü ýðèòðîöèòîâ è
áèîõèìè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ñûâîðîòêè êðîâè.
Ïðè îöåíêå îáùåãî ñîñòî íè æèâîòíûõ, ìîðôîëîãè÷åñêèõ è áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé
ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ìîðôîëîãè÷åñêîãî ñîñòî íè âíóòðåííèõ îðãàíîâ, ñîñòî íè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé è äûõàòåëüíîé ñèñòåì, ôóíêöèè ïå÷åíè è ïî÷åê ïàòîëîãè÷åñêèå
èçìåíåíè â îðãàíèçìå íå îáíàðóæåíû.
Îòñóòñòâèå îáùåòîêñè÷åñêîãî äåéñòâè ïîçâîë åò ðåêîìåíäîâàòü ôàðìàêîëîãè÷åñêîå
ñðåäñòâî, ñîäåðæàùåå òåòðàïåïòèä, â êà÷åñòâå àêòèâíîãî ïåïòèäíîãî àãåíòà äë ïðîâåäåíè êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé.
Òàáëèöà 1.
Ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ ìèîêàðäà
Èçó÷åííûé ïîêàçàòåëü
Êîíòðîëü
6÷
35
Ðàçìåð çîíû íåêðîçà, % îò ìàññû æåëóäî÷êà 44,1±1,7 56,2±1,4
Ñìåðòíîñòü
7
Ñîäåðæàíèå â ñûâîðîòêå êðîâè:
- ãëþêîçû, ììîëü/ë
- ËÄÃ, íìîëü/ñ⋅ë
- ÊÔÊ, íìîëü/ñ⋅ë
40
Òåòðàïåïòèä
24 ÷
6÷
24 ÷
38,1±1,8*
49,6±1,6*
2
1
2
4,55±0,23 3,9±0,15 3,12±0,09 3,01±0,11
311±11
252±19 309±16
201±15*
1326±64 1073±24 961±52*
923±38
Ñîäåðæàíèå ãëèêîãåíà â ìèîêàðäå, ã/êã òêàíè 0,36±0,07 0,38±0,06 1,05±0,12* 1,18±0,12**
*ð<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì;
**ð<0,01 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì.
Òàáëèöà 2
Ïîêàçàòåëè è óñëîâè îïûòà
Äî èøåìèè
45
Àìïëèòóäà ñîêðàùåíèé, % îò èñõîäíîé:
- êîíòðîëü
- òåòðàïåïòèä (0,002 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,005 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,01 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,05 ìêã/ìë)
50
ÌÄÀ, íìîëü/ã òêàíè:
- êîíòðîëü
- òåòðàïåïòèä (0,002 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,005 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,01 ìêã/ìë)
- òåòðàïåïòèä (0,05 ìêã/ìë)
Ñòðàíèöà: 13
Ðåïåðôóçè 15 ìèí
30 ìèí
100
100
100
100
100
72±9
70±13
89±6*
61±4*
38±13*
75±8
81±16
93±5*
64±3*
32±9*
230±12
225±23
168±25*
203±18
156±28*
195±23
216±5
231±7
248±8
264±13*
201±19
220±12
186±10
220±9
252±11*
RU 2 255 756 C1
Ýíåðãåòè÷åñêèé çàð ä (ìêìîëü àäåíîçèíôîñôàòîâ /ã òêàíè):
- êîíòðîëü
7,56±0,25
- òåòðàïåïòèä (0,002-0,005 ìêã/ìë)
7,68±0,21
- òåòðàïåïòèä (0,05 ìêã/ìë)
7,78±0,14
-
3,32±0,16
6,01±0,23*
2,98±0,35
**ð<0,01 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì.
5
Òàáëèöà 3
Ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ ìèîêàðäà
Ãðóïïà æèâîòíûõ
Ïàðàìåòðû ñîêðàùåíèé ê 10 ìèí ðåïåðôóçèè
Àìïëèòóäà
Ñòåïåíü
Ìàêñ. ñêîðîñòü
Ìàêñ. ñêîðîñòü
Êîðîíàðíûé
ñîêðàùåíèé, % ê èñõ. êîíòðàêòóðû, ìì ñîêðàùåíè , % ê èñõ. ðàññëàáëåíè , % ê èñõ. ïðîòîê, ìë/ìèí
10
Êîíòðîëü
43±7
1,2±0,5
42±7
46±5
8,5±0,4
Òåòðàïåïòèä -0,005
ìêã/ìë -0,05 ìêã/ìë
75±12* 36±Þ*
1,3±0,4 2,5±0,3
5á±10* 28±7*
á9±8* 28±6*
10,8±1,6* 9,6±0,7
*ð<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì.
Òàáëèöà 4
15
20
Ãðóïïà æèâîòíûõ
Îðãàí
Ñîäåðæàíèå äèåíîâûõ êîíúþãàòîâ, íìîëü/ã òêàíè Ñîäåðæàíèå ìàëîíîâîãî äèàëüäåãèäà, íìîëü/ã òêàíè
Êîíòðîëü
ñåðäöå ïå÷åíü
112±21
125±18
169±19
186±27
Àäðåíàëèí
ñåðäöå ïå÷åíü
176±24*
146±34
153±14
356±54*
Àäðåíàëèí+òåòðàïåïòèä ñåðäöå ïå÷åíü
110±17**
92±11**
173±25
270±56*
*ð<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì;
**ð<0,01 ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîêàçàòåëåì ïîñëå ââåäåíè àäðåíàëèíà.
25
30
35
40
Òàáëèöà 6
Ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ ìèîêàðäà
Ïîêàçàòåëü
Îáúåì äåð êàðäèîìèîöèòîâ, ìêì 3
45
Îáúåì ñòðîìû, ñì 3/ñì 3
Îáúåì ñîñóäîâ, Vêàï/Vêìö
ÒÌÒÄ
ÒÌÒÄ+ òåòðàïåïòèä
386,2±2,1* 276,3±15,9*
365,4±13,8**
0,143±0,03 0,159±0,05 0,218±0,01*
0,180±0,02**
0,06±0,008 0,08±0,006*
0,07±0,02**
0,11±0,03*
0,81±0,03
0,82±0,04
0,76±0,02*
0,83±0,02**
ßäåðíî-öèòîïëàçìàòè÷åñêîå ñîîòíîøåíèå 0,29±0,02
0,40±0,04*
0,16±0,02*
0,28±0,03**
Îáúåì ïàðåíõèìû, cì 3/cì 3
50
Êîíòðîëü Òåòðàïåïòèä
336,2±5,4
*ð<0,01 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì;
**ð<0,01 ïî ñðàâíåíèþ ñ ïîêàçàòåëåì ó æèâîòíûõ áåç ïðèìåíåíè òåòðàïåïòèäà;
Vêàï/Vêìö - îáúåìíîå îòíîøåíèå êàïèëë ðîâ ê êàðäèîìèîöèòàì.
Ñòðàíèöà: 14
RU 2 255 756 C1
5
10
15
Òàáëèöà 8
Ïîêàçàòåëü
20
Êîíöåíòðàöè òåòðàïåïòèäà, íã/ìë
0,01 0,05 0,1 0,5 1,0 2,0 10,0 20,0
ÈÏ, % ïî îòí. ê êîíòðîëþ 10
20* 22* 20* 15* 20* 27*
8
* ð<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì.
Òàáëèöà 9
Ïåïòèäíîå ñîåäèíåíèå, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ ìèîêàðäà
25
Ïîêàçàòåëü
Ââåäåíèå òåòðàïåïòèäà (1 ìêã/êã)
3 ìåñ öà
6 ìåñ öåâ
Êîíòðîëü (n=24) Òåòðàïåïòèä (n=24) Êîíòðîëü (n=24) Òåòðàïåïòèä (n=24)
30
35
40
45
50
Ýðèòðîöèòû, × 10 12/ë
5,3+0,6
5,4±0,2
5,2±0,4
Ãåìîãëîáèí, ã/ë
14,2±1,4
13,8±1,2
14,5±1,3
14,2±0,á
Ðåòèêóëîöèòû, %
1,3±0,07
1,2±0,07
1,1±0,05
1,3±0,08
Òðîìáîöèòû, × 10 9ë
143,7±7,9
143,6±8,4
144,5±8,6
144,9±9,8
Ëåéêîöèòû, × l0%
9,4±0,5
11,2±0,8*
9,6±0,5
11,9±0,5*
Íåéòðîôèëû ïàëî÷êî äåðíûå, %
0,31±0,04
0,27±0,07
0,33±0,04
0,36±0,05
Íåéòðîôèëû ñåãìåíòî äåðíûå, %
45,8+2,1
44,9±2,5
46,2+3,5
43,4±3,2
Ýîçèíîôèëû, %
0,69±0,05
0,64±0,04
0,72±0,04
0,75±0,08
Áàçîôèëû, %
0,61±0,04
0,69±0,05
0,72±0,03
0,71±0,05
2,5+0,05
Ìîíîöèòû, %
2,5±0,02
2,4±0,03
2,á±0.06
Ëèìôîöèòû, %
48,9±2,5
50,7+2,4
51,3+2,7
52,7±2,2
ÑÎÝ, ìì/÷
1,69±0,05
1,87±0,07
2,01±0,05
2,05±0.04
Ðåçèñòåíòíîñòü ýðèòðîöèòîâ, % NaCl
- ìàêñèìàëüíà - ìèíèìàëüíà 0,41±0,02
0,32±0,05
0,430,04
0,33±0,02
0,42±0,04
0,34±0,04
0,44±0,04
0,35+0,05
Îáùèé áåëîê â ñûâîðîòêå êðîâè, ã/ë
72,9±3,1
72,6±3,3
73,1±3,4
73,1±3,6
Íàòðèé â ñûâîðîòêå êðîâè, ììîëü/ë
153,9±5,7
154,8±6,8
155,5±á,2
154,á±6,9
Êàëèé â ñûâîðîòêå êðîâè, ììîëü/ë
5,1±2,3
5,3±1,8
5,2±2,1
5,4±2,2
*- Ð<0,05 ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì.
Ôîðìóëà èçîáðåòåíè 1. Òåòðàïåïòèä àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg
ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1 [SEQ ID NO:1].
2. Òåòðàïåïòèä àëàíèë-ãëóòàìèë-àñïàðòèë-àðãèíèí îáùåé ôîðìóëû Ala-Glu-Asp-Arg
ïîñëåäîâàòåëüíîñòè 1 [SEQ ID NO:1], îáëàäàþùèé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ,
ïðî âë þùåéñ â âîññòàíîâëåíèè ôóíêöèè ìèîêàðäà.
3. Ôàðìàêîëîãè÷åñêîå ñðåäñòâî ïåïòèäíîé ïðèðîäû, âîññòàíàâëèâàþùåå ôóíêöèþ
Ñòðàíèöà: 15
CL
5,4±0,3
RU 2 255 756 C1
5
ìèîêàðäà, ñîäåðæàùåå àêòèâíûé ïåïòèäíûé àãåíò è ôàðìàöåâòè÷åñêè ïðèåìëåìûé
íîñèòåëü, îòëè÷àþùååñ òåì, ÷òî â êà÷åñòâå àêòèâíîãî ïåïòèäíîãî àãåíòà ñîäåðæèò
ýôôåêòèâíîå êîëè÷åñòâî òåòðàïåïòèäà Ala-Glu-Asp-Arg [SEQ ID N0:1].
4. Ñðåäñòâî ïî ï.3, îòëè÷àþùååñ òåì, ÷òî îíî ïðåäíàçíà÷åíî äë ïàðåíòåðàëüíîãî
ââåäåíè èëè ïåðîðàëüíîãî ïðèìåíåíè .
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Ñòðàíèöà: 16