AST (SGOT) Reagent Set Каталожный № А7560 Каталожные

AST (SGOT)
Reagent Set
Каталожный № А7560
Каталожные номера:
Подготовка реагентов
A7560-50
A7560-250
Растворить реагенты в объеме воды, указанном на
этикетке. Хорошо перемешать.
Набор
предназначен
для
количественного
определения аспартатаминотрансферазы (АСТ) в
сыворотке крови.
1.
2.
Хранение реагентов и стабильность
Назначение
История метода
Karmen и соавт. в 1955 году разработали
кинетический метод определения активности АСТ с
использованием малатдегидрогеназы и NADH. Henry
и соавт. в 1960 году, Amador и Wacker в 1962 году
модернизировали этот метод. В 1974 году комитет по
ферментам Скандинавского Общества Клинической
Химии и Клинической Физиологии рекомендовали
этот метод в оптимальной модификации. В 1976 году
Международная Федерация Клинической Химии
(IFCC) рекомендовала использование пиридоксаль-5фосфата в реакционной смеси, что позволило
увеличить активность фермента.
Принцип теста
L-аспартат + α-кетоглутарат
Оксалоацетат + NADH +
H+
АСТ Оксалоацетат + L-глутамат
МД
Непригодные для анализа реагенты
Не использовать реагент если:
1. Начальная абсорбция разведенного реагента против
воды при 340 нм больше 0,800.
2. Изменились свойства реагента.
Предостережения
Только для in vitro диагностики.
Сбор и хранение образцов
1. Использовать только свежие, негемолизированные
образцы сыворотки крови.
2. Концентрация фермента стабильна в течение 4 дней
при комнатной температуре (15-300С), 14 суток в
холодильнике при -200С.
Материалы, входящие в состав набора
1. Реагенты АСТ (SGOT), лиофлизированные.
2. Дистиллированная/деионизированная вода
L-малат + NAD+ + H2O
АСТ катализирует перенос аминогрупп с L-аспартата
на α-кетоглутарат с образованием оксалоацетата и Lглутамата. Оксалоацетат подвергается окислению,
при этом NADH окисляется до NAD. Катализатором
реакции является малатдегидрогеназа. Снижение
абсорбции при 340 нм прямо пропорционально
активности
АСТ
в
исследуемом
образце.
Лактатдегидрогеназа
используется
для
предупреждения влияния эндогенного пирувата,
который присутствует в сыворотке крови здорового
человека.
Реагенты
(концентрация в разведенных реагентах)
α-кетоглутарат 12 мМ, L-аспарагиновая кислота 200
мМ, NADH 0,2 мМ, Лактатдегидрогеназа 800 МЕ/мл,
Малатдегидрогеназа 600 МЕ/л, Трис-буфер рН
7,8+0,1. Стабилизаторы и наполнители.
Сухие реагенты хранить в холодильнике при 2-80С.
Неоткрытый набор можно использовать до
истечения срока годности, который указан на
этикетке набора. Растворенные реагенты стабильны
в течение 2 дней в холодильнике при 2-80С.
Материалы
необходимые,
поставляемые
но
не
1.
2.
3.
4.
Автоматические пипетки.
Пробирки
Таймер
Автоматический биохимический ридер, для измерения
абсорбции при длине волны 340 нм.
5. Термостатируемый блок / водяная баня (370С).
Автоматический метод определения
См. специальные инструкции к анализатору
Ручной метод определения
1. Приготовить рабочий реагент в соответствии с
инструкцией.
2. Внести по 1,0 мл реагента в каждую пробирку.
Инкубировать в течение 5 минут при 370С.
3. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при 340.
AST (SGOT)
Reagent Set
Каталожный № А7560
4. Внести по 100 мкл исследуемых образцов
сыворотки крови. Перемешать. Инкубировать в
течение 1 минуты при 370С.
5. После инкубации измерить абсорбцию. Прогреть
реакционную смесь до 370С. Повторить измерение
2 раза с интервалом в 1 минуту.
6. Определить изменение абсорбции в минуту
(∆А/мин)
7. Концентрация фермента в образце (МЕ/л)
определяется путем умножения ∆А/мин на фактор
- 1768. См. раздел «Подсчет результатов».
8. Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация фермента выше 500 МЕ/л, то
необходимо провести разведение: 1 объем
исследуемой плазмы на 1 объема изотонического
солевого раствора. Полученные результаты
необходимо умножить на 2.
0,10 – объем исследуемого образца, мл.
1,0 – длина светового пути, см.
Пример подсчета:
∆А/мин = 0.12
тогда, 0,12Х1768=212 МЕ/л
Международные
единицы:
для
перевода
в
международные единицы (nkat/l) умножить концентрацию
фермента в МЕ/л на 16,67.
Внимание: если объемы реакционной смеси изменены,
необходимо
сделать
пересчет
результатов
в
соответствии с формулой.
1. Если
используется
спектрофотометр
с
автоматическим
температурным
контролем
реакционной кюветы, считывание абсорбции
должно проводиться в отдельной кювете.
2. В мутных и сильно иктеричных образцах
начальная абсорбция может быть очень высокой.
Рекомендовано для анализа использовать 50 мкл
образца. Полученные результаты необходимо
умножить на 2.
Концентрация у практически здоровых лиц
Замечания к проведению процедуры
Калибровка
Процедура стандартизована по миллимолярной
абсорбции NADH (6,22 при 340 нм) при стандартных
условиях.
Подсчет результатов
Одна международная единица – это то количество
фермента, которое при определенных условиях
катализирует превращение 1 мкмоль субстрата за 1
минуту.
АСТ(МЕ/л)=(∆Аbs/минХ1,10Х1000)/(6,22Х0,10Х1,0)=
=∆А/минХ1768
Где:
∆А/мин – изменение абсорбции в минуту.
1,10 – общий объем реакционной смеси (мл)
1000 – перевод МЕ/мл в МЕ/л.
6,22 – миллимолярная абсорбция NADH
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии анализов
включать
коммерческие
контрольные
сыворотки
(патологические
и
нормальные)
с
известной
концентрацией АСТ. Рекомендовано в каждой
лаборатории устанавливать свою частоту проведения
контроля качества.
АСТ: до 28 МЕ/л при 300С, до 40 МЕ/мл при 370С. В
каждой лаборатории необходимо устанавливать свои
границы нормальных значений.
Характеристики теста
Линейность: 0-500 МЕ/л
Сравнение
Проведен
корреляционный
анализ
результатов,
полученных на данных тест-наборах и другого
коммерческого тест-набора. Коэффициент корреляции
составил 0,999, регрессионный анализ: у=1,00Х+1,6.
Точность
Внутри серии
S.D.
Среднее
31
2.2
156
3.2
C.V.%
7.1
2.1
От серии к серии
Среднее S.D.
31
2.5
160
4.0
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]
Rev. 5/03 P803-A7560-01
C.V.%
8.1
2.5