удк 619:616-08 определение концентрации ципрофлоксацина

УДК 619:616-08
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА
МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
В. Н. ШАХОВА, В. А. БЕЛЯЕВ, Е. А. КИЦ, Е. В. САФОНОВСКАЯ
Ключевые слова: ципрофлоксацин, концентрация, биологические
жидкости, внутриглазная жидкость, сыворотка крови.
Аннотация: приведены результаты опытов по иммуноферментному
анализу с целью повышения терапевтического эффекта при введении
химиотерапевтических средств. Табл. _1_. Библ._5_. Рис._1_
Сведения об авторах:
Шахова Валерия Николаевна - аспирант кафедры терапии и фармакологии,
Ставропольский государственный аграрный университет.
Беляев Валерий Анатольевич - доктор ветеринарных наук, доцент, декан
факультета ветеринарной медицины, Ставропольский государственный
аграрный университет.
Киц Елена Александровна - кандидат биологических наук, Ставропольский
научно-исследовательский институт животноводства и кормопроизводства.
Сафоновская Евгения Вячеславовна, кандидат биологических наук, ассистент
кафедры терапии и фармакологии,
Ставропольский государственный
аграрный университет.
Адрес: г. Ставрополь, ул. Биологическая 10, кв. 107, Российская федерация,
355019. Телефон 89187685327, [email protected].
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для определения концентрации химиотерапевтических средств в
биологических жидкостях и продукции животноводства известно большое
количество
методов,
среди
которых
-
микробиологические,
хроматографические. В последнее десятилетие иммуноферментный анализ
(ИФА)
нашел
широкое
применение
для
экспрессного
определения
содержания
остаточных
количеств
препаратов,
обладающий
рядом
преимуществ [1, 2, 3, 4].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Методика
включает
пробоподготовку
и
измерение
содержания
фторхинолонов (ципрофлоксацинов) методом абсолютной калибровки в
условиях твердофазного конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА),
выполняемого в ячейках полистироловых планшетов.
Процедура ИФА включает нанесение твердофазного антигена на
поверхность ячеек планшета, конкурентное взаимодействие с участием
свободного антигена и специфичных к нему антител, далее реакцию мечения
антител, связавшихся с твердофазным антигеном, реакцию ферментативного
разложения перекиси водорода, реакцию окисления о-фенилендиамина в
окрашенный продукт и измерение оптической плотности полученных
растворов.
По
величинам
относительного
поглощения,
вычисленным
для
стандартных растворов, и соответствующим значениям концентрации
антибиотика в мкг/кг была построена калибровочная кривая.
Концентрация антибиотика в растворах исследуемых образцов в мкг/мг
определяется по калибровочной кривой соответственно относительному
поглощению, измеренному и вычисленному для этих растворов [5].
Через час после утренней инъекции ципрофлоксацина у лабораторных
животных (кроликов) брали внутриглазную жидкость путем центеза
роговицы стерильной иглой 26 G в количестве 0,10 мл. Одновременно из
вены Сафена брали кровь стерильным шприцем с иглой 23 G в объеме 0,5
мл, кровь центрифугировали, после отстаивания в течение 15 минут при
комнатной температуре (22-24 С), при скорости 2000 об/мин, отделяли
сыворотку. Полученные жидкости подвергались криоконсервации при
температуре -20С. Исследовали методом иммуноферментного анализа на
приборе Chemwell Combi V 1.03 (USA) с использованием тест-наборов для
определения
антибиотиков.
Исследование
всех
образцов
проводили
одномоментно.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Концентрация
в
сыворотке
крови
после
перорального
введения
таблетированной формы ципрофлоксацина первой (контрольной) группе
составила 3,87±0,19 мкг/мг. Второй (контрольной) группе антибиотик
вводился внутривенно, его концентрация – 5,6±0,28 мкг/мг. Третьей группе
(опытной)
вводили
внутривенно
ципрофлоксацин
и
внутримышечно
никотиновую кислоту в эритемной дозе, концентрация антибиотика –
4,65±0,23 мкг/мг. На 5-е сутки эксперимента показатель в первой группе
увеличился,
составив
4,53±0,23
мкг/мг;
во
второй
концентрация
ципрофлоксацина составила 4,07±0,2 мкг/мг; в третьей группе – 4,62±0,23
мкг/мг. Таким образом, концентрация антибиотика в сыворотке крови во всех
группах была терапевтическая (2,1 – 4,6 мкг/мг) на протяжении всего
исследования.
Концентрация во внутриглазной жидкости в первой контрольной
группе к началу опыта составила 0,14±0,01 мкг/мг и к пятому дню
эксперимента концентрация антибиотика не достигла терапевтической
(1,13±0,07 мкг/мг).
Во второй (контрольной) группе концентрация ципрофлоксацина
составила 1,1±0,06 мкг/мг, к окончанию эксперимента концентрация
увеличилась, но минимальной терапевтической не достигла, составив
1,67±0,08 мкг/мг.
Концентрация ципрофлоксацина в биологических жидкостях
лабораторных животных, мкг/мг
Таблица 1
Дни исследования
Группы животных
1
2
3
Сыворотка крови
1
3,87±0,19
5,6±0,28
4,65±0,23
2
4,16±0,21
5,06±0,25
5,45±0,27
3
4,14±0,21
5,64±0,28
4,36±0,22
4
4,44±0,22
5,55±0,28
4,28±0,21
5
4,53±0,23
4,07±0,2
4,62±0,23
Внутриглазная жидкость
1
0,14±0,01
1,1±0,06
0,87±0,04*
2
0,71±0,04
0,58±0,03
1,02±0,05*
3
0,77±0,04
1,37±0,08
1,67±0,07*
4
1,27±0,1
0,75±0,04
1,88±0,09*
5
1,13±0,07
1,67±0,08
2,46±0,12*
P<0,05, разница достоверна по отношению к контролю
В
третьей
(опытной)
группе,
помимо
антибиотика,
вводилась
никотиновая кислота в дозе 0,3 мл. В первый день исследования
концентрация ципрофлоксацина во внутриглазной жидкости составила
0,87±0,04 мкг/мг и в следующие дни опыта концентрация увеличивалась к
концу опыта достигнув 2,46±0,12 мкг/мг.
Таким
образом,
иммуноферментный
метод
для
определения
концентрации химиотерапевтических препаратов обладает следующим
набором достаточно трудно достигаемых свойств: высокая чувствительность;
возможность работать с малыми объемами проб; большая специфичность,
избирательность;
быстрота
выполнения
анализа;
универсальность
(пригодность для анализа многих лекарственных средств).
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Беляева Е.В., Беляев В. А. Количественная оценка антибиотиков в
жидкости передней камеры глаза кроликов // Актуальные проблемы
инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных, материалы
Международной научно-практической конференции, посвященной 100летию со дня рождения профессора С.Н.Никольского. 2003. С. 325-327.
2. Беляев В. А. Основные принципы антибиотикотерапии в ветеринарии //
Ветеринарная служба Ставрополья. 2001. №3 С. 35.
3. Беляев В. А., Сафоновская Е. В. Фармакологические аспекты в разработке
технологии приготовления химических консервантов // Молодые аграрииагропромышленному комплексу России. Ставрополь 2004. №1 С. 74.
4. Кальницкая, О. И. Ветеринарно-санитарная оценка продуктов животного
происхождения, содержащих антибиотики // Ветеринария. 2010. №2. С. 61-63.
5. Теория и практика иммуноферментного анализа / А. М. Егоров, А. П.
Осипов, Б. Б. Дзантиев, Е. М. Гаврилова. – М.: Высшая школа, 1991. – 288 с.
UDC 619:616-08
IDENTIFICATION OF CIPROFLOXACIN CONCENTRATION BY MEANS
OF ENZYMOIMMUNOASSAY
PEREVERZEVA, Valeria Nikolaevna, postgraduate at the chair of therapy and
pharmacology, Stavropol state agrarian university
BELYEV, Valery Anatolуevich, doctor veterinary of science, associate professor,
dean faculty of veterinary medicine, Stavropol state agrarian university
KITS Elena Aleksandrovna, candidate biological of science, Stavropol state agrarian
university
SAFONOVSKAYA Eugenia Vyacheslavovna, candidate biological of science,
assistant at the chair of therapy and pharmacology, Stavropol state agrarian university
Address: c. Stavropol, street Biological 10, flat 107, Russian Federation, 355019.
Telephone 89187685327.
Keywords: ciprofloxacin, concentration, biological fluids, intraocular fluid, blood
serum.
Summary: The results of experiments for identification of ciprofloxacin
concentration by means of enzymoimmunoassay are presented. Table_Figure
BIBLIOGRAPHIC REFERENCES
1. V. A. Belyev, E. V. Belyeva A quantitative estimation of antibiotics in a liquid
of the forward chamber of an eye of rabbits//Actual problems an infectious and
noncontagious pathology of animals, materials of the International scientificallypractical conference devoted to the 100 anniversary from the date of a birth of
professor S.N.Nikolskogo. 2003. P. 325-327.
2 V. A. Belyev Main principles therapy in veterinary science//Veterinary service of
Stavropol Territory. 2001. №3. P. 35.
3 V. A. Belyev, E. V.Safonovskaya Pharmacological aspects in working out of
technology of preparation of chemical preservatives//Young landowners - to
agriculture of Russia. Stavropol 2004. №1 P. 74.
4. O. I. Kalcinskaya, Veterinary and sanitary assessment of animal derived
materials contained antibiotic // Veterinary. 2010. №2. P.61-63.
5. Theory and practice of enzymoimmunoassay / А. М. Egorov, A. P. Osipov, B.B.
Dzantiev, E.M. Gavrilova. – М.: Higher school, 1991. – p. 288.