ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ – ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

Қазақстан Республикасының Бірінші Президенті күніне арналған «Сейфуллин оқулары – 9: Жоғарғы
білім және ғылым дамуындағы жаңа бағыт» атты Республикалық ғылыми-теориялық конференция
материалдары = Материалы Республиканской научно- теоретической конференции «Сейфуллинские
чтения – 9: Новый вектор развития высшего образования и науки» посвященная дню Первого
Президента Республики Казахстан. – 2013. – Т.2, ч.2 – С. 116
ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ – ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ МИКОЗОВ У ЖИВОТНЫХ
Брахнова А.М.
Плесневые грибы – различные микроскопические грибы, образующие
ветвящийся мицелий без крупных, легко заметных невооруженным глазом,
половых тел. Плесневые грибы распространены повсеместно. В основном
обширные колонии вырастают в теплых влажных местах, на питательных
средах. Многие плесневые грибы вырабатывают вторичные метаболиты –
антибиотики и микотоксины, токсично действующие на живые организмы [1].
Цель работы – выделение ДНК из плесневых грибов – возбудителей
оппортунистических микозов, выделенных из проб патологического материала
от сельскохозяйственных животных для проведения генетического типирования.
Материалы и методы: биомасса плесневых грибов, наборы для выделения
ДНК, жидкий азот, микропробирки. Выделение ДНК проводили по
предложенной ранее методике [2].
На первом этапе проводили выделение ДНК из плесневых грибов. Для
этих целей первоначально наращивали биомассу грибов в жидкой среде Сабуро,
отмывали от культуральной жидкости и помещали её в стеклянные пробирки.
Биомассу переносили в ступки, заливали жидким азотом и растирали для
разрушения стенок грибов. После этого сюда же добавляли ТЕ-буфер и
proteinase К для расщепления белков. Смесь оставляли на 12 часов при 37°С.
Затем добавляли раствор хлороформа с изоамиловым спиртом.
Выделяем ДНК из смеси с помощью 75% этанола. После
центрифугирования супернатант удаляем, чистую ДНК сушим в течение 10
минут. Храним ДНК в небольших аликвотах при 4°С до 24-28 часов. При
необходимости проведения более поздних исследований – при -20°С более
длительный период до 1-2 месяцев.
Таким образом нами была выделена ДНК плесневых грибов Penicillium
swiecickii, Aspergillus versicolor, Chaetomium globosum, которая в дальнейшем
была подвергнута генетической идентификации.
Научный руководитель Кухар Е.В., д.б.н., доцент