Хромосомные анализы & флуоресцентная in situ гибридизация

Что
Чтотакое
такоефлуоресцентная
флуоресцентнаяininsitu
situгибридизация
гибридизация
(FISH)?
(FISH)?
●●Материал
Материалдля
дляисследования
исследования
3-5мл
млвенозной
венознойцельной
цельнойкрови
кровив в(NH4(NH4-или
илиLi-гепарин)
Li-гепарин)
3-5
Monovette
Monovette
Сочетание
Сочетаниецитогенетических
цитогенетическихметодов
методовсс
молекулярно-генетическими
молекулярно-генетическимиметодами
методаминазывается
называется
молекулярной
молекулярнойцитогенетикой.
цитогенетикой.Одним
Однимиз
изметодов
методов
является
являетсяфлуоресцентная
флуоресцентнаяininsitu
situгибридизация
гибридизация(FISH).
(FISH).
Он
Онпредставляет
представляетсобой
собойрасширение
расширение
цитогенетической
цитогенетическойдиагностики,
диагностики,так
таккак
какон
онявляется
является
более
болеечувствительным
чувствительнымииприменяется
применяетсякак
какна
на
метафазных
метафазныххромосомах,
хромосомах,так
такиив вклеточных
клеточныхядрах.
ядрах.
ССпомощью
помощьюфлюресцентно
флюресцентномаркированных
маркированных ДНКДНКзондов
зондовхромосомные
хромосомныесегменты
сегментыбудут
будутпоказаны
показаны
выборочно.
выборочно.ССтехникой
техникойFISH
FISHявляется
являетсявозможным,
возможным,
сделать
сделатьвидимым
видимымколичество
количествоопределенных
определенныхДНКДНКсегментов
сегментовв вотдельных
отдельныхклетках
клеткахииих
ихположение
положениев в
хромосомах.
хромосомах.
Отправление
●●Отправление
Черезслужбу
службуперевозок
перевозокили
илипо
пообычной
обычнойпочте
почте(при
(при
Через
комнатнойтемпературе)
температуре)
комнатной
FISH-исследования
FISH-исследованияцеленаправленно
целенаправленнопроводятся
проводятсяпри
при
определенных
определенныхпоказаниях
показанияхиине
непредставляют
представляютсобой
собой
метод
методскрининга
скринингав врамках
рамкахобычной
обычной
цитогенетической
цитогенетическойдиагностики.
диагностики.Диагностика
ДиагностикаFISH
FISH
может
можетосуществляться
осуществлятьсякак
какпренатально,
пренатально,так
такии
постнатально.
постнатально.
Примером
Примеромявляется
являетсяпренатальный
пренатальныйэкспресс-тест,
экспресс-тест,
который
которыйпозволяет
позволяетв втечение
течениеодного
одногодня
дня
исключить/обнаружить
исключить/обнаружитьтрисомии
трисомии13,
13,18
18ии21
21иитем
тем
самым
самымнамного
намногобыстрее
быстрееуспокоить,
успокоить,чем
чемпри
при
проведении
проведенииклассического
классическогоанализа
анализахромосом.
хромосом.
Показания
Показаниядля
дляFISH-диагностики
FISH-диагностики
 Пренатальное
Пренатальноеисключение/обнаружение
исключение/обнаружение
трисомий
трисомий13,
13,18
18ии21
21
 Синдром
Синдроммикроделеции,
микроделеции,аапосле
послеконсультации,
консультации,
делеции
делецииот
отопределенного
определенногоразмера
размера
 Транслокация
Транслокация(последующая
(последующаядиагностика)
диагностика)
 Дальнейшее
Дальнейшеепроведение
проведениеFISH-диагностики
FISH-диагностики
возможно
возможнопосле
послесогласования
согласования
Предродовой
Предродовойэкспресс-тест
экспресс-тест
(FISH)
(FISH)без
безособенностей.
особенностей.
Клеточное
Клеточноеядро
ядроклетки
клетки
околоплодных
околоплодныхвод.
вод.
Зеленые
Зеленыесигналы
сигналыпоказывают
показывают
Важная
Важнаяинформация
информациядля
длязапроса
запросаии
число
числохромосом
хромосом13,
13,
материала
материаладля
дляисследования
исследования
сигналы– –хромосом
хромосом21.
21.
красные
красныесигналы
Продолжительностьисследования
исследования
●●Продолжительность
зависимостиот
отпоказания
показанияот
от33до
до21
21дня
дня
ВВзависимости
●●Расходы
Расходы
Государственная
Государственнаябольничная
больничнаякасса:
касса:Направление
Направление
образец10
10(показание,
(показание,желаемое
желаемоеобследование)
обследование)в в
образец
идеалесснашей
нашейзаявкой
заявкой‚Генетика
‚Генетикачеловека’.
человека’.
идеале
Расходыза
загенетические
генетическиеисследования
исследованиячеловека
человека
Расходы
взымаютсяв всоответствии
соответствииссглавой
главой11/EBM
11/EBMиине
не
взымаются
обременяетбюджет
бюджетлаборатории
лабораториинаправившего
направившего
обременяет
врача(освобождение
(освобождениеРаздел
Раздел32010).
32010).
врача
Частнаябольничная
больничнаякасса:
касса:Заявление
Заявлениена
наобследование
обследование
Частная
произвольнойформе,
форме,например,
например,наша
нашазаявка
заявка
в впроизвольной
‚Генетикачеловека’.
человека’.Отчисление
Отчислениеосуществляется
осуществляетсяпо
по
‚Генетика
каталогуцен
ценна
намедицинское
медицинскоеобслуживание/Разделы
обслуживание/Разделы
каталогу
Мырекомендуем
рекомендуемсделать
сделатьзапрос
запроссогласия
согласия
MMииN.N.Мы
больничнойкассы
кассына
наоплату
оплатурасходов.
расходов.
больничной
Документы
●●Документы
Дополнительно,помимо
помимозаявки/направления
заявки/направлениянам
нам
Дополнительно,
необходимоподробное
подробноезаявление
заявлениеоосогласии,
согласии,
необходимо
согласноЗакону
Законупро
прогенетическую
генетическуюдиагностику
диагностику
согласно
(отдельноили
иликак
какчасть
частьзаявки
заявки‚Генетика
‚Генетикачеловека’).
человека’).
(отдельно
Формыможно
можнополучить
получитьуунашего
нашегообслуживающего
обслуживающего
Формы
персонала(тел.
(тел.030-77001-460)
030-77001-460)или
иличерез
черезнаш
нашсайт
сайт
персонала
www.imd-berlin.de.
www.imd-berlin.de.
Гарантиякачества
качества
●●Гарантия
Центрпренатальной
пренатальнойдиагностики
диагностикииигенетики
генетикичеловека
человекаии
Центр
Отделгенетики
генетикичеловека
человекаIMD
IMDследуют
следуютдирективам
директивамии
Отдел
положениямНемецкого
Немецкогообщества
обществагенетики
генетикичеловека
человека
положениям
(GfH),аатакже
такжерегулярно
регулярноииуспешно,
успешно,участвуют
участвуютв в
(GfH),
мероприятияхпо
поохране
охраневнешнего
внешнегокачества
качества(EMQN,
(EMQN,
мероприятиях
DGKL,BVDH).
BVDH).
DGKL,
Хромосомные
Хромосомные анализы
анализы
&& флуоресцентная
флуоресцентная in
in
situ
situ гибридизация
гибридизация
При
Присотрудничестве
сотрудничествесс
Institut für Medizinische Diagnostik
Berlin - Potsdam MVZ GbR
Nicolaistraße 22, 12247 Berlin (Steglitz)
Tel (030) 77 001 322, Fax (030) 77 001 332
[email protected], www.imd-berlin.de
Friedrich-Ebert-Straße 33, 14469 Potsdam
Tel (0331) 28095 0, Fax (0331) 28095 99
[email protected], www.medlab-pdm.de
Центр
Центрпренатальной
пренатальнойдиагностики
диагностикиииГенетики
Генетики
Kудамм-199
Kудамм-199
www.kudamm-199.de
www.kudamm-199.de
Zentrum
Zentrumfür
fürPränataldiagnostik
Pränataldiagnostikund
undHumangenetik
Humangenetik
Kurfürstendamm
Kurfürstendamm199,
199,10719
10719Berlin
Berlin
Tel
Tel(030)
(030)8804
88043177
3177
ССо ос ст о
: :о ок тк я
. .ВВ
о оз зммо о
жжн н
ыыи и
зм
ее
нн
ее
нн
ии
яя
т оя ян ни ие е
т яб бр рь ь2 20 01 12 2
зм
Лабораторная медицина • Микробиология • Генетика
Трансфузиология • Гигиена
Что такое хромосомные анализы?
Пренатальная диагностика хромосомных заболеваний
У человека есть 46 хромосом,
22 пары хромосом и половые хромосомы XX (женские)
или XY (мужские). Набор хромосом отдельного
индивидуума называется кариотипом.
Пренатальная диагностика хромосомных заболеваний
осуществляется по клеткам околоплодных вод после
амниоцентеза или по хорионическим ворсинкам
(позднее детское место).
Хромосомы находятся в активно делящихся клетках.
После культивирования этих клеток хромосомы можно
разделять, окрашивать и исследовать под оптическим
микроскопом. Хромосомы располагаются в
идиограмме, которая является основой каждого
анализа хромосом.
Подавляющее большинство детей рождается
здоровыми. Все-таки, независимо от возраста
родителей и истории семьи, существует риск
врожденных дефектов развития или заболеваний около
3–5% (основной риск) для всех новорожденных.
Тут можно обнаружить, например, хромосомные
аномалии, как трисомия 21 (синдром Дауна) или
структурные изменения части хромосомы (см.
идиограмму с транслокацией внизу).
Хромосомные исследования могут проводиться на
различных пролиферирующих тканях. Принципиально
отличается дородовая (пренатальная) хромосомная
диагностика и послеродовая (постнатальная). Кроме
того, также можно исследовать ткани выкидыша
(абортный материал).
Границы диагностики хромосом
Структурные изменения хромосом можно обнаружить
только классическим методом исследования, если они
превышают определенный размер (примерно 5-10
Мбит). Определенными молекулярноцитогенетическими исследованиями могут быть также
обнаружены мало выраженные изменения.
В некоторых случаях нарушение вызвано хромосомной
аномалией. Самое частое хромосомное нарушение
- это трисомия 21 (синдром Дауна), наличие которого в
настоящее время можно исключить только инвазивной
пренатальной диагностикой (амниоцентез или биопсия
хориона).
Продолжительность обследования для анализа
хорионических ворсинок от 24 часов (краткосрочные
культуры) до 18 дней (долгосрочные культуры).
Для анализа клеток околоплодных вод в среднем
необходимо 10 – 14 дней. Дополнительно есть
возможность проведения пренатального экспресстеста (см. также FISH-диагностика). Но этот тест в
течение 24 часов позволяет констатировать только
трисомии 13, 18 и 21. Расходы за пренатальный
экспресс-тест государственная больничная касса не
несет.
•
Информирование и согласие
Причины для проведения пренатального
исследования хромосом:

Информирование и согласие должны осуществляться
согласно Закону о генетической диагностике (GenDG).
Генетическую диагностику можно проводить только
после всестороннего документального
информирования пациента и подписания заявления о
согласии пациентом или его законным
представителем.




Положительный результат
эмбрионального/фетального ультразвукового
исследования
Положительный скрининг первого триместра
Возраст беременных старше 35 лет
Семейные хромосомные изменения
Хромосомные нарушения в предыдущей
беременности
Беременность вследствие искусственного
оплодотворения

Постнатальная диагностика хромосомных
заболеваний
Постнатальная диагностика хромосомных заболеваний
чаще всего осуществляется по клеткам крови
(лимфоцитам). Продолжительность обследования в
зависимости от показания составляет три дня до трех
недель.
•
Причины для проведения постнатального
исследования хромосом:
У взрослых








Бесплодие
Семейные верифицированные хромосомные
изменения при фертильности
Ребенок с хромосомными нарушениями
Умственно отсталые в семье
Выкидыши или мертворождения
Отсутствие менструации или ранее наступление
менопаузы
Задержка полового развития
Пренатальный диагноз структурных хромосомных
изменений у потомков
У детей и подростков








Нарушения в развитии неизвестного
происхождения
Умственная отсталость неизвестного
происхождения
Врожденные пороки развития органов или
конечностей
Две или больше аномалии лица
Нарушения роста (например, низкорослость,
высокорослость, очень маленькая голова)
Пороки сердца
Аномалии половых органов
Нарушения полового развития
Диагностика хромосомных заболеваний по абортному
материалу
Для определения причины выкидыша и чтобы лучше
оценить риск рецидива и рекомендуется анализ
хромосом абортного материала.
Кариограмма с транслокацией между хромосомой 7 и 13