сверхмалые дозы антител: влияние на печень крыс с острым и

Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4
98
ÑÂÅÐÕÌÀËÛÅ ÄÎÇÛ ÀÍÒÈÒÅË: ÂËÈßÍÈÅ ÍÀ ÏÅ×ÅÍÜ ÊÐÛÑ
Ñ ÎÑÒÐÛÌ È ÕÐÎÍÈ×ÅÑÊÈÌ ÒÎÊÑÈ×ÅÑÊÈÌ ÃÅÏÀÒÈÒÎÌ
Ò.Â.Âåòîøêèíà, Ò.È.Ôîìèíà
ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ; Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííàÿ ôèðìà “Ìàòåðèà
Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà
Ñâåðõìàëûå äîçû àíòèòåë ê ôåíîáàðáèòàëó è èõ ñìåñü ñî ñâåðõìàëûìè äîçàìè àíòèòåë ê õîëåöèñòîêèíèíó (1:1) íà ôîíå îñòðîãî ÑÑl4-ãåïàòèòà óìåíüøàþò âûðàæåííîñòü
ñòðóêòóðíî-ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé â ïå÷åíè êðûñ. Ñìåñü ïðåïàðàòîâ íå âëèÿåò
íà òå÷åíèå õðîíè÷åñêîãî ÑÑl4-ãåïàòèòà.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñâåðõìàëûå äîçû, àíòèòåëà ê ôåíîáàðáèòàëó, àíòèòåëà ê õîëåöèñòîêèíèíó,
îñòðûé è õðîíè÷åñêèé ÑÑl4-ãåïàòèò
Ïðèìåíÿåìûå â íàñòîÿùåå âðåìÿ äëÿ ëå÷åíèÿ
îñòðûõ è õðîíè÷åñêèõ ãåïàòèòîâ ïðåïàðàòû ó
ðÿäà áîëüíûõ ïðîÿâëÿþò íåäîñòàòî÷íóþ òåðàïåâòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü è îáëàäàþò ðàçëè÷íûìè
ïîáî÷íûìè äåéñòâèÿìè [8], ïîýòîìó ïîèñê è
èçó÷åíèå âûñîêîýôôåêòèâíûõ è ìàëîòîêñè÷íûõ
ãåïàòîïðîòåêòîðîâ ïðåäñòàâëÿþòñÿ àêòóàëüíûìè.
 ñâÿçè ñ ýòèì áûëè èçó÷åíû ãåïàòîïðîòåêòîðíûå
ñâîéñòâà ãîìåîïàòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ, ïðåäñòàâëÿþùèõ ñîáîé àíòèòåëà ê õîëåöèñòîêèíèíó è ôåíîáàðáèòàëó, ðàçðàáîòàííûå ïðîèçâîäñòâåííîé
ôèðìîé “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã” (Ìîñêâà).
ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Ïðåïàðàò àíòèòåë ê ôåíîáàðáèòàëó (C12+C30+
C200; ÀÔ) è åãî ñìåñü (â ñîîòíîøåíèè 1:1) ñ
àíòèòåëàìè ê õîëåöèñòîêèíèíó (C12+C30+C200;
ÀÔÕ) èññëåäîâàëè íà 40 êðûñàõ Âèñòàð ìàññîé
170-200 ã. Æèâîòíûå áûëè ïîëó÷åíû èç Íàó÷íîèññëåäîâàòåëüñêîé ëàáîðàòîðèè ýêñïåðèìåíòàëüíî-áèîìåäèöèíñêîãî ìîäåëèðîâàíèÿ ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ (ñåðòèôèêàò èìååòñÿ). Êðûñ ñîäåðæàëè â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðàâèëàìè,
ïðèíÿòûìè Åâðîïåéñêîé êîíâåíöèåé ïî çàùèòå
ïîçâîíî÷íûõ æèâîòíûõ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ è èíûõ íàó÷íûõ öåëåé (Ñòðàñáóðã, 1986). Äî è â ïåðèîä ýêñïåðèìåíòà êðûñû
íàõîäèëèñü â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ âèâàðèÿ.
Îñòðûé ãåïàòèò (ÎÃ) ó êðûñ âûçûâàëè ââåäåíèåì 50% ÑÑl4 â îëèâêîâîì ìàñëå â äîçå 1.25
ìë/êã âíóòðèæåëóäî÷íî â òå÷åíèå 4 äíåé, õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò (ÕÃ) — ââåäåíèåì òàêîãî æå ðàñò-
âîðà ÑÑl4 â äîçå 2 ìë/êã 2 ðàçà â íåäåëþ â òå÷åíèå 3 íåä. ÀÔ èëè ÀÔÕ â äîçå 0.5 ìë/êðûñó
ââîäèëè âíóòðèæåëóäî÷íî ÷åðåç 1-2 ÷ ïîñëå ââåäåíèÿ ãåïàòîòîêñèíà â òå÷åíèå 10 äíåé ïðè ÎÃ
è 30 äíåé ïðè ÕÃ. Êîíòðîëüíûå æèâîòíûå ïîëó÷àëè âìåñòî ïðåïàðàòà àêòèâèðîâàííóþ äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (C12+C30+C200) â òîì æå
îáúåìå è â òå æå ñðîêè. Êðûñ äåêàïèòèðîâàëè
÷åðåç 1 ñóò ïîñëå ïîñëåäíåãî ââåäåíèÿ ïðåïàðàòà èëè âîäû.
 ñûâîðîòêå êðîâè îïðåäåëÿëè àêòèâíîñòü
ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû, àñïàðòàò- (ÀñÀÒ) è àëàíèíàìèíîòðàíñôåðàçû (ÀëÀÒ), èñïîëüçóÿ ñòàíäàðòíûå íàáîðû ôèðì “Lachema” è “Cormay”.
Ðàññ÷èòûâàëè òàêæå ìàññîâûé êîýôôèöèåíò ïå÷åíè (îòíîøåíèå ìàññû îðãàíà ê ìàññå æèâîòíîãî) — ïîêàçàòåëü, îïðåäåëÿåìûé äëÿ èíòåãðàëüíîé îöåíêè íàëè÷èÿ ãåïàòîòðîïíîãî âëèÿíèÿ
êñåíîáèîòèêîâ [7]. Äëÿ õàðàêòåðèñòèêè àíòèòîêñè÷åñêîé ôóíêöèè ïå÷åíè è àêòèâíîñòè ìèêðîñîìàëüíîé ñèñòåìû èñïîëüçîâàëè ãåêñåíàëîâûé
òåñò. Ãåêñåíàë ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî â âèäå
1% ðàñòâîðà â äîçå 80 ìã/êã. Âðåìÿ ñíà ðåãèñòðèðîâàëè ïî äëèòåëüíîñòè íàõîæäåíèÿ æèâîòíûõ â áîêîâîì ïîëîæåíèè è îòñóòñòâèÿ ðåôëåêñà
ïåðåâîðà÷èâàíèÿ.
Êóñî÷êè ïå÷åíè ôèêñèðîâàëè â æèäêîñòè
Êàðíóà, çàëèâàëè â ïàðàôèí. Äåïàðàôèíèðîâàííûå ñðåçû îêðàøèâàëè ãåìàòîêñèëèíîì è ýîçèíîì è ïèêðîôóêñèíîì ïî Âàí-Ãèçîíó íà ñîåäèíèòåëüíóþ òêàíü [5]. Íà ãèñòîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòàõ, îêðàøåííûõ ãåìàòîêñèëèíîì è ýîçèíîì, ïîäñ÷èòûâàëè êîëè÷åñòâî íåêðîòèçèðîâàí-
ФАРМАКОЛОГИЯ СВЕРХМАЛЫХ ДОЗ
99
íûõ ãåïàòîöèòîâ íà 1000 êëåòîê. Ñ ïîìîùüþ
îêóëÿðíîé ñåòêè Ã.Ã.Àâòàíäèëîâà [1] îïðåäåëÿëè
îòíîñèòåëüíóþ ïëîùàäü èíôèëüòðàöèè ïå÷åíî÷íîé ïàðåíõèìû ìàêðîôàãàìè è ëåéêîöèòàìè, à
íà ïðåïàðàòàõ, îêðàøåííûõ ïèêðîôóêñèíîì —
îòíîñèòåëüíóþ ïëîùàäü êîëëàãåíîâûõ âîëîêîí.
Äëÿ âûÿâëåíèÿ ëèïèäîâ èç íåôèêñèðîâàííûõ
êóñî÷êîâ ïå÷åíè ãîòîâèëè êðèîñòàòíûå ñðåçû
òîëùèíîé 10 ìêì. Ñðåçû ôèêñèðîâàëè 4% êàëüöèé-ôîðìîëîì è îêðàøèâàëè ñóäàíîì ÷åðíûì
Â. Ñòåïåíü æèðîâîé äèñòðîôèè îöåíèâàëè â
áàëëàõ [2].
Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ïîëó÷åííîãî ìàòåðèàëà ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì t êðèòåðèÿ
Ñòüþäåíòà.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Ó âñåõ êðûñ ñ Îà íà ãèñòîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòàõ
ïå÷åíè âûÿâëåíû ãèïåðåìèÿ, äèñêîìïëåêñàöèÿ,
óìåðåííàÿ æèðîâàÿ äèñòðîôèÿ è íåêðîç ãåïàòîöèòîâ, ðàñïîëîæåííûõ â öåíòðàëüíûõ îòäåëàõ
äîëüêè.  äîëüêàõ è âîêðóã ïå÷åíî÷íûõ òðèàä
îòìå÷àëîñü î÷àãîâîå ñêîïëåíèå ìàêðîôàãîâ è
ëèìôîöèòîâ. Ñòåïåíü æèðîâîé äèñòðîôèè è èíôèëüòðàöèè ïàðåíõèìû ïå÷åíè ó æèâîòíûõ, ïîëó÷àâøèõ ãîìåîïàòè÷åñêèå ïðåïàðàòû (ÀÔ èëè
ÀÔÕ) è âîäó, íå ðàçëè÷àëàñü. Ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÀÔÕ, êîëè÷åñòâî íåêðîòèçèðîâàííûõ ãåïàòîöèòîâ áûëî äîñòîâåðíî ìåíüøå, ÷åì â êîíòðîëå êðûñ (òàáë. 1).
Ïðè ìîðôîëîãè÷åñêîì èññëåäîâàíèè ïå÷åíè êðûñ ñ ÕÃ, ïîëó÷àâøèõ ÀÔÕ è äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó, îáíàðóæåíû äèñòðîôèÿ è íåêðîç îòäåëüíûõ ãåïàòîöèòîâ, ðàçâèòèå êîëëàãåíîâûõ âîëîêîí â ïîðòàëüíûõ è ïåðèïîðòàëüíûõ ïîëÿõ.
Ñêëåðîç ïîðòàëüíûõ òðàêòîâ ñî÷åòàëñÿ ñ èõ êëåòî÷íîé èíôèëüòðàöèåé (ïðåèìóùåñòâåííî ìàêðîôàãàìè è ëèìôîöèòàìè), ïðîíèêàþùåé âíóòðü
äîëüêè. Ïîäîáíàÿ ìîðôîëîãè÷åñêàÿ êàðòèíà ïå÷åíè ñîîòâåòñòâóåò õðîíè÷åñêîìó àêòèâíîìó ãåïàòèòó [6]. Ó êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ÀÔÕ, îòìå÷åíà
òåíäåíöèÿ ê óìåíüøåíèþ îòíîñèòåëüíîé ïëîùàäè êîëëàãåíîâûõ âîëîêîí ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì, íî ýòè ðàçëè÷èÿ íåäîñòîâåðíû (òàáë. 1).
Áèîõèìè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî
ïðè ÎÃ â ñûâîðîòêå êðîâè âîçðàñòàåò àêòèâíîñòü
ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû ïðè ñðàâíåíèè ñ òàêîâîé
ó èíòàêòíûõ æèâîòíûõ (òàáë. 2), ÷òî, âåðîÿòíî
îáóñëîâëåíî õîëåñòàçîì è óñèëåíèåì äèôôóçèè
ôåðìåíòà ÷åðåç ñèíóñîèäàëüíóþ ìåìáðàíó ãåïàòîöèòîâ [4]. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü òàêæå, ÷òî ó
êðûñ, ïîëó÷àâøèõ ãåïàòîòîêñèí, óâåëè÷èâàëîñü
âðåìÿ ãåêñåíàëîâîãî ñíà â ñâÿçè ñ èíãèáèðîâà-
Òàáëèöà 1. Ìîðôîìåòðè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ïå÷åíè êðûñ ñ Îà è ÕÃ, ïîëó÷àâøèõ ãîìåîïàòè÷åñêèå
—
ïðåïàðàòû (Õ±m)
ÎÃ+ÀÔ
Ïîêàçàòåëü
Степень жировой инфильтрации, баллы
Количество некротизированных гепатоцитов, %
ÎÃ+ÀÔÕ
ÕÃ+ÀÔÕ
êîíòðîëü
îïûò
êîíòðîëü
îïûò
êîíòðîëü
îïûò
2.7
2.0
2.7
1.8
1.5
1.4
1.00±0.13
0.68±0.14
1.00±0.13
0.65±0.09*
0.32±0.08
0.23±0.03
8.6±0.6
7.7±0.5
8.6±0.6
8.04±0.24
16.6±1.50
12.80±1.13
—
—
—
—
8.04±1.67
4.90±0.81
Относительная площадь, %
инфильтрации
соединительной ткани
Примечание. *p<0.05 по сравнению с контролем.
Òàáëèöà 2. Âëèÿíèå ãîìåîïàòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ íà ìàññîâûé êîýôôèöèåíò ïå÷åíè è áèîõèìè÷åñêèå
—
ïîêàçàòåëè ñûâîðîòêè êðîâè êðûñ ñ ÎÃ (Õ±m)
ÎÃ
Ïîêàçàòåëü
Èíòàêòíûå
êîíòðîëü
+ÀÔ
+ÀÔÕ
Массовый коэффициент печени
42.91±1.93
41.00±0.78
43.85±0.46
41.59±0.78
Активность АсАТ, мккат/л
0.67±0.02
0.66±0.02
0.62±0.01
0.60±0.03
Активность АлАТ, мккат/л
0.48±0.07
0.44±0.03
0.43±0.03
0.39±0.03
АсАТ/АлАТ
1.34±0.25
1.55±0.09
1.50±0.09
1.50±0.09
Активность щелочной фосфатазы, ЕД/л
66.0±3.6
87.0±6.08*
63.0±3.0
62.4±2.4
Примечание. Здесь и в табл. 3: *p<0.05 по сравнению с интактными.
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2002, Приложение № 4
100
Âëèÿíèå ãîìåîïàòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ íà âðåìÿ ãåêñåíàëîâîãî ñíà êðûñ ñ îñòðûì (à) è õðîíè÷åñêèì (á) òîêñè÷åñêèì ãåïàòèòîì.
1 — èíòàêòíûå æèâîòíûå, 2 — ãåïàòèò+Í2Î, 3 — ãåïàòèò+àíòèòåëà ê ôåíîáàðáèòàëó, 4 — ãåïàòèò+ñìåñü àíòèòåë ê ôåíîáàðáèòàëó è õîëåöèñòîêèíèíó.
*p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ ñ èíòàêòíûìè.
Òàáëèöà 3. Âëèÿíèå ãîìåîïàòè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ íà ìàññîâûé êîýôôèöèåíò ïå÷åíè è áèîõèìè÷åñêèå
—
ïîêàçàòåëè ñûâîðîòêè êðîâè êðûñ ñ ÕÃ (Õ±m)
ÕÃ
Ïîêàçàòåëü
Èíòàêòíûå
Массовый коэффициент печени
Активность АсАТ, мккат/л
êîíòðîëü
+ÀÔÕ
35.89±1.74
45.22±0.81*
45.66±1.76*
0.51±0.03
0.59±0.02
0.58±0.03
Активность АлАТ, мккат/л
0.46±0.06
0.56±0.07
0.56±0.06
АсАТ/АлАТ
1.19±0.14
1.09±0.11
0.94±0.10
Активность щелочной фосфатазы, ЕД/л
66.9±16.6
374.85±10.7*
316.7±31.2*
íèåì ôåðìåíòíûõ ñèñòåì, îòâåòñòâåííûõ çà àíòèòîêñè÷åñêóþ ôóíêöèþ ïå÷åíè (ðèñóíîê, à).
Ïðè ââåäåíèè ÀÔÕ íà ôîíå ÎÃ íàáëþäàëèñü
íîðìàëèçàöèÿ àêòèâíîñòè ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû
è ñòèìóëÿöèÿ áèîòðàíñôîðìàöèè ãåêñåíàëà ìîíîîêñèãåíàçíîé ñèñòåìîé ïå÷åíè.
Ïðè ÕÃ â ñûâîðîòêå êðîâè êðûñ âîçðàñòàëà
àêòèâíîñòü ùåëî÷íîé ôîñôàòàçû, óâåëè÷èâàëèñü
âðåìÿ ãåêñåíàëîâîãî ñíà è ìàññîâûé êîýôôèöèåíò ïå÷åíè (ðèñóíîê, á; òàáë. 3). Ïðåïàðàò ÀÔÕ
íå îñëàáëÿë òîêñè÷åñêèé ýôôåêò ìíîãîêðàòíîãî
ââåäåíèÿ CCl4 (òàáë. 3; ðèñóíîê, á).
Òàêèì îáðàçîì, â óñëîâèÿõ îñòðîãî ÑCl4-ãåïàòèòà ãîìåîïàòè÷åñêèå ïðåïàðàòû ÀÔ è ÀÔÕ
ïðåïÿòñòâóþò ðàçâèòèþ ñòðóêòóðíî-ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé â ïå÷åíè: óìåíüøàþò ñòåïåíü
íåêðîçà ãåïàòîöèòîâ, èíòåíñèôèöèðóþò àíòèòîêñè÷åñêóþ ôóíêöèþ ïå÷åíè, óêîðà÷èâàÿ ïðîäîëæèòåëüíîñòü ãåêñåíàëîâîãî ñíà, íîðìàëèçóþò àêòèâíîñòü ôåðìåíòà õîëåñòàçà — ùåëî÷íîé
ôîñôàòàçû.
Ïðåïàðàò ÀÔÕ íå âëèÿåò íà òå÷åíèå õðîíè÷åñêîãî ÑCl4-ãåïàòèòà.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Àâòàíäèëîâ Ã.Ã. Ìåäèöèíñêàÿ ìîðôîìåòðèÿ. Ì., 1990.
2. Âåíãåðîâñêèé À.È., Ìàðêîâà È.Â., Ñàðàòèêîâ À.Ñ. //
Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ.
Ì., 2000. Ñ. 228-231.
3. Äìèòðèåâà Ò.Á. // Ðîñ. ìåä. âåñòí. 1997. ¹ 3. Ñ. 15-26.
4. Ãðîìàøåâñêàÿ Ë.Ë., Òàòüÿíêî Ë.Â., Ðàäçåâè÷ È.Ì.
è äð. // Óñïåõè ãåïàòîëîãèè. Ðèãà, 1980. Âûï 8.
Ñ. 145-163.
5. Ìåðêóëîâ Ã.À. Êóðñ ïàòîãèñòîëîãè÷åñêîé òåõíèêè.
Ë., 1969.
6. Ìîðôîëîãè÷åñêàÿ äèàãíîñòèêà çàáîëåâàíèé ïå÷åíè
/ Ïîä ðåä. Â.Â.Ñåðîâà, Ê.Ëàïèøà. Ì., 1989.
7. Ïîêàçàòåëè íîðìû ó ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ â òîêñèêîëîãè÷åñêîì ýêñïåðèìåíòå / Ïîä ðåä. È.Ì. Òðàõòåíáåðãà è äð. Ì., 1978.
8. Ñêàêóí Í.Ï., Øìàíüêî Â.Â., Îõðèìîâè÷ Ë.Ë. Êëèíè÷åñêàÿ ôàðìàêîëîãèÿ ãåïàòîïðîòåêòîðîâ. Òåðíîïîëü, 1995.