Набор реагентов “ EmbryoFreeze” ( Эмбриофриз )

EmbryoFreeze/Thaw kit with Propanediol
Набор сред для замораживания и оттаивания эмбрионов человека.
EmbryoFreeze/ Thaw kit with Propanediol стерилизована методом фильтрования.
Документ FP09I10 R01B.2 Дата издания 22/03/2011
Общая информация
EmbryoFreeze и EmbryoThaw представляют собой набор сред для замораживания (криоконсервации) и
оттаивания человеческих эмбрионов на стадии между 2PN – 4 клеток. Содержат пропандиол, неорганический
фосфатный буфер (PBS), сахарозу и человеческий альбумин (тестированный на ВИЧ и гепатит).
EmbryoFreeze/ Thaw не содержит антибиотики.
Материалы, включённые в набор
Код продукта EMF30_P – на 30 процедур
3фл х10 мл EmbryoFreeze
3фл х10 мл EmbryoThaw №1
3фл х10 мл EmbryoThaw №2
3фл х10 мл EmbryoThaw №3
Материалы, не включённые в набор
Стерильные микропипетки
Чашки Петри
Соломинки
Автоматический замораживатель
Ёмкость с жидким азотом (LN2)
Стол с подогревом
Микроскоп
Водяная баня
Таймер
EmbryoFreeze/Thaw with Propanediol и культуральные среды
EmbryoFreeze/ Thaw with Propanediol может быть использована в комбинации со средами FertiCult Flushing,
FertiCult IVF/FIV, FertiCult G3 medium как до замораживания, так и после оттаивания.
Спецификация продукта и контроль качества
EmbryoFreeze/ Thaw произведена в соответствии со сл. спецификацией
РН
7.2 – 7.4
Осмолярность EmbryoThaw 3 530-560 mOsm/kg
Стерильность
SAL 10ˉ³
Эндотоксины
< 0.25 EU/ml
Эмбрионы мыши (бластоцисты после 96 часов) ≥ 80%
Сертификат анализов
по запросу
Предварительные рекомендации
Не используйте продукт, если появилось помутнение или признаки микробной контаминации.
Не используйте продукт, в случае повреждения крышки флакона во время транспортировки.
Инструкция по хранению
- хранить при 2-8С
- не замораживать перед использованием
- хранить в темном месте, беречь от солнца
- после вскрытия контейнера не использовать продукт дольше 7 дней
- не использовать после даты, указанной на упаковке
Меры предосторожности
EmbryoFreeze/ Thaw with Propanediol содержит человеческий сывороточный альбумин. Источники материалов,
из которых эти компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела HIV и
HCV и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и сифилис. Известные на сегодняшний
день методы подтверждают, что продукты, полученные из
крови человека, не переносят какие-либо
инфекции. Тем не менее, работайте со всеми компонентами так, как если бы они были опасны на ВИЧ или
гепатит. Всегда надевайте защитную одежду. Всегда работайте с соблюдением строгих гигиенических условий
во избежание возможной контаминации.
Метод
Убедитесь, что растворы хорошо перемешаны и не содержат взвеси.
Замораживание
1. Используя стерильную пипетку, поместите 1мл замораживающей среды в центр лунки (при комнатной
температуре)
2. Поместите эмбрионы в стадии 2 PN в замораживающую среду и оставьте на 30 сек. Внимание! Из-за
разной плотности эмбрионы имеют тенденцию всплывать и сморщиваться.
3. Загрузите эмбрионы в соломинки, оставив приблизительно 1/5 часть воздуха в соломинке.
4. Запечатайте соломинки и промаркируйте именем, датой и кол-вом эмбрионов
5. Начинайте программу по замораживанию через 5-10 минут. Ниже в таблице приводится протокол
замораживания
Этап
Этап 1
Этап 2
Этап 3
Этап 4
Этап 5
Температурный режим
от комнатной темп. до +4оС
от +4оС до -6оС
-6оС (выдержка)
от -6оС до -30оС
от -30оС до -196оС
Скорость изменения температуры
-10оС/мин
-2оС/мин
0оС/мин
-0,3оС/мин
-199оС/мин
Время
2 минуты
5 минут
10 минут
80 минут
1 минута
Оттаивание
1. Поместите в 4-х луночную плашку по 1 мл каждого оттаивающего раствора №№ 1,2,3. Оставшаяся
пустая лунка необходима для эмбрионов.
2. Подготовьте водяную баню t 37ºС для оттаивания соломинок. Подготовьте 1-мл туберкулиновый
шприц, наполнив его 0,8 мл воздуха и затем 0,2 мл оттаивающей среды №1
3. Перенесите соломинки из жидкого азота и оставьте при комнатной температуре на 5 секунд
4. Погрузите соломинки в водяную баню на 5 секунд. (Убедитесь, что в соломинке не остались
замороженные частички)
5. Освободите соломинки, открыв оба конца, над пустой лункой и выдавите содержимое шприца через
соломинку со смесью
6. Используя микроскоп, соберите эмбрионы и переместите их в лунку с раствором №1
7. Переместите эмбрионы в оттаивающий раствор №2 через 3-5 мин
8. Через следующие 3-5 минут перенесите эмбрионы в оттаивающий раствор №3, оставьте их в растворе
на 3-5 минут перед дальнейшей процедурой.
9. На финальной стадии эмбрионы переносятся в культуральную среду FertiCult IVF/FIV (FertiPro) для
промывки и дальнейшего культивирования