Национальная академия наук Беларуси
advertisement
Национальная академия наук Беларуси РЕСПУБЛИКАНСКОЕ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЕ УНИТАРНОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ «ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИМ. С.Н. ВЫШЕЛЕССКОГО НАЦИОНАЛЬНОЙ АКАДЕМИИ НАУК БЕЛАРУСИ» УТВЕРЖДАЮ Директор РНИУП "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси" ___________________А.П. Лысенко «_____» _________________ 2007 г ОТЧЕТ О НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЕ Договор № 40 от «01» июня 2006 г «ПРОВЕДЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ИСПЫТАНИЙ ПРОБИОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ (PIP CTC для обработки вымени коров, PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота, PIP АНС для мойки стойл, боксов коров, PIP АНS для санации стойл, боксов, мест пребывания животных». Минск 2007 СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ Руководитель: Заведующая отделом, кандидат ветеринарных наук _________________________ «____» ______________ 2007 г. Т.Н. Каменская Исполнители: Главный научный сотрудник, доктор ветеринарных наук, профессор _________________________ «____» ______________ 2007 г. А.А. Богуш Ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук _______________________ «____» _____________ 2007 г. В.Е. Иванов Старший научный сотрудник, кандидат сельскохозяйствен-ных наук ________________________ «____» _____________ 2007 г. С.А. Лукьянчик Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук ______________________ «____» _____________ 2007 г. М.М. Бельмач ВВЕДЕНИЕ Пробиотики не только являются предметом всесторонних научных изысканий, но и представляют собой важный товар на мировом рынке. На сегодняшний день широкому кругу потребителей доступны сотни пробиотических продуктов питания и пищевых добавок, производители которых обещают решение самых разнообразных проблем со здоровьем. Пробиотики — живые микроорганизмы, которые при назначении в достаточном количестве оказывают положительное воздействие на здоровье не только людей, но и животных. Они оказывают воздействие на противоинфекционные защитные механизмы, являются иммунномодуляторами, усиливают барьерные функции организма и метаболические эффекты. Пробиотики, в основном, применяются в качестве профилактических средств и сопутствующей терапии. В будущем возможно расширение показаний для применения пробиотиков в качестве биотерапии с использованием антибиотикочувствительных бактерий для замещения резистентных, предотвращение транслокации патогенных бактерий с кожи и слизистых во внутреннюю среду организма, способствование более быстрому наращиванию массы тела, восстановление состава микрофлоры после лечения антибиотиками, подавление роста патогенных S.aureus и Clostridium difficile. Учитывая потенциальную опасность, связанную с применением живых микроорганизмов, в том числе развитие инфекции, перспективным шагом является замена живых микроорганизмов на отдельные компоненты микробных клеток и продукты обмена бактерий. Такой подход может оказаться более эффективным. Когда будут выявлены биоактивные молекулы, обеспечивающие действие эффективных пробиотиков, именно эти молекулы можно будет использовать в очищенном виде. К продуктам метаболизма, полученным из бактерий, входящих в состав пробиотиков, которые можно использовать с лечебной целью, относятся короткоцепочечные жирные кислоты, пептидогликан клеточной стенки и ДНК. Поиск микроорганизмов, которые можно использовать в качестве пробиотиков, представляет собой длительный и сложный процесс. Состав пробиотика должен быть, в первую очередь, безопасным, не патогенным. Бактерии в организме неизбежно взаимодействуют друг с другом, и это взаимодействие может играть решающую роль в поддержании здоровья. Способность пробиотиков вмешиваться в эти взаимодействия делает необходимым изучение разных типов нормальной микрофлоры. Пробиотические средства из серии PIP находят широкое применение за рубежом. В состав препаратов входят живые культуры пробиотиков, энзимы животного происхождения, моющая основа и очищенная вода, рН колеблется в пределах 6,5-8,5 ЕД. Срок годности препаратов 12 месяцев при температуре хранениея +10 - +200С. Препараты из серии PIP обладают антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов: эшерихиа коли, сальмонеллы, протей, стафилококки, стрептококки. Относятся к экологически безопасным веществам. При применении в присутствии животных не раздражают кожу, слизистые оболочки, не обладают аллергенными свойствами. Механизм действия препаратов основан на подавлении жизнедеятельности патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, связывании и обезвреживании токсических продуктов их жизнедеятельности. Цель работы: Провести испытания эффективности пробиотических средств из серии PIP в условиях производства Задачи: • Определить бактериостатическую и бактерицидную активность пробиотических средств из серии PIP на тесткультурах. • Изучить эффективность препарата PIP CTC для обработки вымени коров • Изучить эффективность препарата PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота. • Изучить эффективность препарата PIP АНS для санации стойл, боксов и мест пребывания животных после обработки моющим препаратом PIP АНС. 1 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ. 1.1 Методика, объем и место работы Работа выполнена в отделе экологии и ветеринарной санитарии РНИУП "Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси", РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области, СПК «Батчи» Кобринского района Брестской области. Испытания препаратов проводились согласно программам по проведению производственных испытаний, согласованных Начальником Главного управления ветеринарии МСХП РБ А.М. Аксеновым от 26.06.2006 г и Временных наставлений № 10-1-5/714 - 10-1-5/ 717 от 26.06.2006 г. Для испытаний использовались пробиотические средства из серии PIP, производства CRISAL (Бельгия). Для определения бактериостатической и бактерицидной активности препаратов были использованы тест-культуры Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida rubrum, Bacillus subtilis, при микробной нагрузке 500 млн.микробных клеток в 1 мл. В пробирку помещали препараты с тесткультурами в соотношении 1:1, выдерживали 1 час и после этого помещали 1 мл смеси в чашку Петри, которую сверху заливали питательной средой – МПА при температуре 400С. После застывания агара чашки помещали в термостат и выдерживали 24 часа при температуре 370С. При изучении эффективности препарата PIP CTC для обработки вымени коров на ферме «Дуличи» РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области были сформированы три группы лактирующих коров (опытная и две контрольные) по 48 голов в каждой. Соски вымени коров опытной группы после каждого доения обрабатывали препаратом PIP CTC путем нанесения на кожу вымени с помощью специальных стаканчиков. В контрольной группе применяли в качестве аналога препарат инкрасепт 10А согласно наставления по применению. В третьей группе препараты не применялись. На МТФ «Ластовки» СПК «Батчи» Кобринского района Брестской области были сформированы две группы лактирующих коров (опытная и контрольная) по 50 и 48 голов соответственно. Препарат «PIP CTC» наносили после доения, путем распыления на кожу сосков вымени в течение 5 сек. Для обработки сосков вымени коров использовали 4 % рабочий раствор препарата, приготовленного на подогретой до 37-400С водопроводной воде. В контрольной группе препарат не применялся. Всех животных в хозяйствах перед началом и по окончании опыта исследовали на субклинические маститы быстрым маститным тестом с беломастином на МКП-2. Продолжительность опыта 1 месяц. В каждой группе от 3 клинически здоровых коров с вымени отбирали смывы после подмывания вымени водой перед дойкой и после применения препаратов с последующим проведением бактериологических исследований. У коров, находившихся в опыте, учитывали качественные характеристики молка (плотность, кислотность, содержание жира, белка, микробная обсемененность, ингибирующие свойства) согласно СТБ 1598-2006 Молоко коровье. Требования при закупках. = Малако каровiна. Патрабованнi пры закупках. Для изучения эффективности профилактики и лечения пододерматитов фирмой ГЕРМЕС и К0 представлен препарат PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота производства CHRISAL. На МТФ «Дуличи» РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области были сформированы две группы больных пододерматитом животных по 10 голов в каждой. Коровам опытной группы применяли «PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота» согласно временного наставления. Препарат «PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота» наносили методом орошения в 2 % концентрации ( 20,0 см3 концентрата на 1000,0 см3 воды). Перед орошением копыта животных тщательно очищали от грязи, навоза, делали зачистку, обрезку и затем наносили препарат с помощью пульверизатора. Обработку копыт препаратом проводили у здоровых и больных пододерматитом животных в области копытного башмака, подошвы, межкопытной щели и венчика в течение 10 дней, 1 раз в день. Во второй группе животных (контрольной) с целью лечения заболеваний копыт проводили очистку от грязи, навоза, расчистку и обрезку копытного рога. Поврежденную область обильно орошали 1%-ым раствором перманганата калия и припудривали порошком, состоящим из перманганата калия и стрептоцида в соотношении 1:3 с наложением повязки. В ходе опыта в опытной группе исключали одновременное применение PIP CFC и дезинфицирующих, антимикробных средств, предназначенных для обработки копыт. У подопытных животных проводилось наблюдение за их клиническим состоянием, заболеваемостью копыт, при лечении учитывали эффективность, время и течение процесса заживления копытного рога. В начале и конце опыта все коровы были обследованы на маститы беломастиновой пробой. Кроме того, учитывали физико-химические свойства молока согласно СТБ РБ 1598-2006 Молоко коровье. Требования при закупках. = Малако каровiна. Патрабованнi пры закупках.. В СПК «Батчи» Кобринского района Брестской области для лечения бурситов у коров были сформированы 2 группы животных по 5 голов в каждой. Животным обеих групп вначале лечения в области бурсы выстригали шерсть, обрабатывали рану 0,5 % раствором йода, делали циркулярную блокаду 0,5 % раствором новокаина. После этого проводили разрез всех карманов бурсы и промывку раствором хлорида натрия. У животных опытной группы в последующем рану и окружающую поверхность обрабатывали 2 % раствором «PIP CFC для обработки копыт» 2 раза в день. Во избежание загрязнения раны в течение первых трех суток после обработки препаратом накладывалась фиксирующая повязка. В последующие 4-й, 5-й и 6-й дни после орошения раны препаратом «PIP CFC для обработки копыт» повязку не использовали. В ходе опыта исключали одновременное применение PIP CFC и дезинфицирующих, антимикробных средств. В контрольной группе для лечения в течение 10 дней в полость бурсы вводили антибиотики (пенициллин, стрептомицин), затем накладывали фиксирующую повязку с применением 10 % ихтиоловой мази. За подопытными животными проводились наблюдения по заболеваемости копыт и клиническим состоянием организма, при лечении учитывались эффективность, время и течение процесса заживления копытного рога. Изучение эффективности препарата PIP АНS для санации стойл, боксов и мест пребывания животных после обработки моющим препаратом PIP АНС проводили в РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области, где были подобраны два помещения. В стойлах для содержания опытной группы коров 1 раз в месяц проводили механическую очистку, используя гидросмыв. Средство PIP АНС применяли в качестве санирующего средства мест содержания животных (стойл, боксов) путем орошения 10 % раствором препарата c расходом 0,1 дм3/м2. После экспозиции 30 минут раствор PIP АНС смывали проточной водой. В последующем для заселения культуры пробиотиков проводили в течение 3-х дней обработку стойл 10 % раствором PIP АНS, а в дальнейшем еже-дневно после уборки навоза использовали 2 % рабочий раствор PIP АНS методом распыления. Расход рабочего раствора препарата составил 0,1 дм3/м2. Опыт по орошению помещений препаратом PIP АНS проводили в течение 1 месяца в присутствии животных. В стойлах для содержания контрольной группы животных 1 раз в месяц проводили механическую очистку, используя гидросмыв. Для орошения мест пребывания животных использовали 2 % раствор Инкрасепта 10 А, согласно наставления по применению. В ходе опыта одновременное применение PIP АНS и дезинфицирующих средств, не проводилось. В начале и конце опыта коровы в опытном и контрольном помещениях были обследованы на скрытые маститы беломастиновой пробой, отобраны смывы с пола, стен, кормушек, поилок и проведены бактериологические исследования. Кроме того учитывались качественные показатели молока (плотность, кислотность, содержание жира, белка, микробная обсемененность и ингибирующие свойства) согласно СТБ 1598-2006 Молоко коровье Требования при закупках.= Малако каровiна. Патрабованнi пры закупках. 1.2 Результаты исследований 1.2.1 Определить бактериостатическую и бактерицидную активность пробиотических средств из серии PIP на тест-культурах. При изучении антимикробной активности пробиотических средств из серии PIP установлено, что бактерицидной активностью по отношению к Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida rubrum и Bacillus subtilis, при микробной нагрузке 500 млн.микробных клеток в 1 мл обладал препарат PIP АНS, а препараты PIP CTC, PIP CFC и PIP АНС оказывали бактериостатическое действие на эти же тест-культуры - в чашках с пробиотиками наблюдалось снижение тест-микробов в 3-6 раз по сравнению с контрольными чашками (тест-культуры без обработки пробиотиками). 1.2.2 Изучить эффективность препарата PIP CTC для обработки вымени коров В ходе испытаний установлено, что после применения препарата «PIP CTC для обработки вымени коров после доения» кожа сосков вымени коров была мягкой, эластичной. Аллергических реакций, раздражения не наблюдалось. На ферме «Дуличи» РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области после окончания опыта при диагностических исследованиях на субклинический мастит быстрым маститным тестом было установлено, что заболеваемость маститами в опытной группе снижалась до 4,1% по сравнению с первоначальным результатом (14,5 %), а в первой контрольной до 8,3 % (с 12,5 %), второй контрольной – до 12,5% (с 14,5 %) (таблица 1). Заболевание животных клиническим маститом в подопытных группах не регистрировалось. Качественные показатели молока, получаемого на ферме и сдаваемого хозяйством на молокоперерабатывающие предприятия, за период наблюдения (август- сентябрь) соответствовали высшему сорту. Таблица 1 - Результаты испытания препарата «PIP CTC для обработки вымени коров после доения» в РУСПП « ППР Правда» Минского района Выявлено коров, больных субклиническим маститом № п/п Группа 1 Опытная 2 3 Всего голов Начало опыта Окончание опыта Голов % Голов % 48 7 14,5 2 4,1 Контрольная ( Инкрасепт) 48 6 12,5 4 8,3 Контрольная 48 7 14,5 6 12,5 Аналогичная картина наблюдалась в опытах на лактирующих коровах на МТФ «Ластовки» СПК «Батчи» Кобринского района Брестской области. Кожа сосков вымени коров при применении препарата PIP CTC была мягкой, эластичной. Аллергических реакций, раздражения не наблюдалось. В начале опыта заболеваемость коров маститами составила в опытной группе - 6,00 %, контрольной - 6,25. Клинический мастит не регистрировался. После окончания опыта при диагностических исследованиях на субклинический мастит быстрым маститным тестом заболеваемость маститами в опытной группе не регистрировалась, в контрольной – 4,16 % (таблица 2). Клинический мастит у животных не регистрировали. Качественные показатели молока, получаемого на ферме и сдаваемого хозяйством на молокоперерабатывающие предприятия, за период наблюдения соответствовали высшему сорту. Таблица 2 - Результаты испытания препарата «PIP CTC для обработки вымени коров после доения» в СПК «Батчи» Кобринского района Выявлено коров, больных субклиническим маститом № п/п Группа 1 Опытная 2 Контрольная Всего голов Начало опыта Окончание опыта Голов % Голов % 50 3 6,0 0 0 48 3 6,25 2 4,16 1.2.3. Изучить эффективность препарата PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота Молочно- товарная ферма “Дуличи” в РУСПП «ППР Правда» Минского района Минской области не благополучна по заболеванию коров пододерматитом копыт, в стаде наблюдалось поражение животных до 20 %. Заболевание протекало с клиническим проявлением хромоты опирающего типа, поражением межкопытной щели, мацерацией и разрушением копытного рога подошвы, копытный рог менял нормальную форму. В ходе испытаний установлено, что после применения препарата «PIP CFC для обработки копыт» с лечебной целью аллергических реакций и раздражения не наблюдалось. Лечебная эффективность в опытной группе составила 70,0 % (из 10 животных, находившихся в опыте, выздоровело 7 коров). После обработки «PIP CFC для обработки копыт» хромата у животных проходила на 4-6 день, отечность основы кожи в области венчика спадала на 3-5 день, заживление трещин, ран наблюдалось на 7-10 день, восстановление копытного рога – на 14-16 день. В контрольной группе лечебный эффект составил 40,0% (из 10 леченых животных выздоровело 4 коровы). Хромата у излеченных животных проходила через 10-15 дней, отечность основы кожи в области венчика – на10-12 день, заживление трещин, ран – на 1215 день, восстановление копытного рога – на 18-21 день. При обработке препаратом «PIP CFC для обработки копыт» здоровых конечностей у больных пододерматитомм животных новых случаев заболевания не регистрировалось. При профилактических обработках копыт препаратом «PIP CFC для обработки копыт» и 10 % раствором медного купороса (контрольная группа) аллергических реакций, раздражения и заболевания пододерматитом животных не наблюдалось. Копытный рог был блестящий, без сколов, гладкий, правильной формы, межкопытная щель гладкая, без видимых изменений. При лечении бурситов в опытной группе на 3 день с начала обработок происходило заживление раны, из 5 леченых выбраковки не было. В контрольной группе заживление раны происходило на 8 сутки. Из 5 леченых животных 1 корова выбракована из-за низкой эффективности терапии. В подопытных группах наблюдали потери молока, однако в опытной группе этот показатель фиксировали в течение лишь 1 дня (около 20 %), и к 3-му дню после начала лечения удой восстанавливался. В контрольной группе на протяжении всего лечения (10 дней) у коров наблюдали ежедневные потери молока, а к концу опыта лактационная способность коров снижалась в 1,2 раза. 1.2.4 Изучить эффективность препарата PIP АНS для санации стойл, боксов и мест пребывания животных после обработки моющим препаратом PIP АНС Установлено, что в начале опыта общая бактериальная обсемененность (КОЕ/ см 2) пола составила в опытном помещении в среднем 700 000, стен - 100 000, кормушек - 90 000, поилок – 36 000. В конце эксперимента после применения препарата PIP АНS для обработки стойл и боксов коров, общая бактериальная обсемененность (КОЕ/ см2) пола снизилась до 20 000 (в 35 раз), стен – до 6500 (в 15 раз), кормушек – до 6000 (в 15 раз), поилок – до 6500 (в 5,5 раз). В контрольной группе общая микробная обсемененность (КОЕ/см2) до обработки находилась на уровне: пола – 670 000, стен – 110 000, кормушек – 90 000, поилок – 48 000. После обработки стойл 2 % раствором Инкрасепта 10А и экспозиции 3 часа микробная обсемененность поверхностей (КОЕ/см2) снизилась: пола – до 3000 (в 220 раз), стен – до 200 (в 550 раз), кормушек – до 360 (в 250 раз), поилок – до 150 (в 320 раз). После окончания опыта при диагностических исследованиях на субклинический мастит быстрым маститным тестом было установлено, что заболеваемость маститами в опытной группе составила 6,1%, в контрольной 8,3 % (таблица 3). Заболевание животных клиническим маститом в опытной и контрольной группах не регистрировалось. Таблица 3 – Заболеваемость коров маститом при испытании препарата PIP АНS для обработки стойл коров в РУСПП «ППР Правда» Минского района № Группа Всего голов Выявлено коров, больных субклиническим маститом п/п Начало опыта Окончание опыта Голов % Голов % 1 Опытная 49 7 14,2 3 6,1 2 Контрольная 48 6 12,5 4 8,3 Качественные показатели молока, получаемого на ферме и сдаваемого хозяйством на молокоперерабатывающие предприятия, за период наблюдения (август- сентябрь) соответствовали высшему сорту. ВЫВОДЫ: 1. Пробиотическое средство PIP АНS для санации стойл, боксов, мест пребывания животных обладает бактерицидной активностью к тест-культурам Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida rubrum, Bacillus subtilis, при микробной нагрузке 500 млн.микробных клеток в 1 мл. Пробиотические средства PIP CTC для обработки вымени коров, PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота и средства PIP АНС для мойки стойл, боксов коров обладали бактериостатической активностью к этим тест-культурам. 2. При обработке коров после доения в течение 30 дней средством PIP CTC заболеваемость субклиническим маститом снижалась на 72 %, при обработке инкрасептом 10А - на 33,6 %, без обработки – на 14 %. Клинический мастит у животных не регистрировался. Качественные показатели молока соответствовали высшему сорту. 3. Леченая эффективность средства PIP CFC для обработки копыт у крупного рогатого скота составила 70,0 %. Хромата у животных проходила на 4-6 день, отечность основы кожи в области венчика спадала на 3-5 день, заживление трещин, ран наблюдалось на 7-10 день, восстановление копытного рога – на 14-16 день. В контрольной группе (общепринятые методы лечения пододерматитов) лечебный эффект составил 40,0%, хромата проходила через 10-15 дней, отечность основы кожи в области венчика – на10-12 день, заживление трещин, ран отмечалось на 12-15 день, восстановление копытного рога –на 18-21 день. При обработке средством «PIP CFC для обработки копыт» здоровых конечностей у больных пододерматитом животных новых случаев заболевания не регистрировалось. 4. При лечении бурситов у коров происходило заживление раны на 3 день с начала обработок средством PIP CFC, выбраковки животных не отмечали, тогда как в контрольной группе заживление раны происходило на 8-е сутки и выбраковано из-за низкой эффективности терапии 20 % животных. 5. Применение средства PIP АНS для обработки стойл, боксов коров, после тщательной механической чистки и мойки средством PIP АНС, способствовало снижению микробной обсемененности пола в 35 раз, стен - в 15 раз, кормушек – в 15 раз, поилок - в 5,5 раз ЗАКЛЮЧЕНИЕ Средство «PIP CTC для обработки вымени коров после доения» может быть рекомендован для применения в целях профилактики субклинических маститов у коров, средство «PIP CFC для обработки копыт» - для лечения и профилактики заболеваний пододерматита и бурситов у крупного рогатого скота, средство «PIP AHS для обработки стойл, боксов» может быть рекомендован для применения в качестве санирующего средства мест содержания животных, с предварительным однократным орошением мест пребывания раствором «PIP AHC» справочно: PIP CTC - COW TEAT CLEANER - очиститель вымени коров. PIP CFC - COW FEET CLEANER - очиститель копыт крупного рогатого скота. PIP AHS -ANIMAL HOUSE STABILIZER - продукт, применяемый для санации стойл, боксов и мест пребывания животных после обработки моющим препаратом PIP АНС - ANIMAL HOUSE CLEANER - очиститель животноводческих помещений.
