ТОНЗИЛГОН®Н В КОМПЛЕКСНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ ЧАСТО И

ТОНЗИЛГОН®Н В КОМПЛЕКСНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ ЧАСТО И
ДЛИТЕЛЬНО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА
Жерносек В.Ф.*, Василевский И.В. *, Рубан А.П.*, Попова О.В.*, Юшко В.Д.*,
Русакович В.А.*, Данилович Л.К.*, Кострица С.А.**, Воскресова М.Л.**, Заяц
Т.П.**, Гирко И.Н.**
ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования»*,
Детский реабилитационно–оздоровительный центр «Ждановичи» **
Детей, подверженных частым респираторным инфекциям, принято называть часто болеющими (ЧДБ). Частые и особенно тяжело протекающие ОРИ
могут приводить к нарушению физического и нервно-психического развития
детей, а также способствовать дальнейшему снижению функциональной
активности
иммунитета,
формированию
хронических
воспалительных
процессов в органах дыхания.
Отечественные педиатры относят детей в группу ЧБД на основании
критериев, предложенных А.А.Барановым и В.Ю.Альбицким (табл. 1).
Таблица 1. Критерии включения в группу часто и длительно болеющих детей
(Баранов А.А., Альбицкий В.Ю., 1986) [4]
Возраст, годы
Часто эпизодов ОРИ в год
0 –– 1
более 4 раз
1 –– 3
6 и более *
4 –– 5
5 и более
старше 5
4 и более
* Высокая частота связана с началом посещения детских дошкольных учреждений.
Программа реабилитации часто и длительно болеющих детей включает:
коррекцию образа жизни, рациональное питание, контроль окружающей среды,
контроль теплового режима и закаливание, санацию хронических очагов
инфекции,
иммунореабилитацию
[1,5,6].
Сложной
для
реабилитации
1
возрастной категорией часто и длительно болеющих детей являются
школьники.
Из медикаментозных средств в реабилитации ЧДБ заслуживают
внимание препараты на основе трав, как средства наиболее «мягкого» действия.
Интересным представителем этой группы лекарственных средств является
Тонзилгон®Н (BIONORICA AG). Препарат включает компоненты корня алтея,
цветков ромашки, травы хвоща, листьев ореха грецкого, травы тысячелистника,
коры дуба, травы одуванчика. Оказывает местное противовоспалительное и
антисептическое действие. Активные компоненты входящих в его состав
ромашки, алтея и хвоща способствуют повышению неспецифических факторов
защиты организма. Школьникам назначается по 1 драже или 15 капель
экстракта 5–6 раз в день [3].
Цель исследования –– определить динамику показателей секреторного
иммунитета по результатам исследования слюны часто и длительно болеющих
школьников в ходе их комплексной реабилитации с включением фитопрепарата
Тонзилгон®Н в условия детского реабилитационно–оздоровительного центра и
определить целесообразность его использования в программе их реабилитации .
Материал и методы исследования
На
базе
Детского
реабилитационно–оздоровительного
центра
«Ждановичи» наблюдали 19 часто и длительно болеющих детей школьного
возраста (средний возраст –– ± лет), … мальчиков, …. девочек. Критерии
включения: школьный возраст, частота простудных заболеваний 4 и более раз в
году.
Дети проживали на загрязненных радионуклидами территориях. Все
пациенты при поступлении на реабилитацию
осмотру,
подвергнуты тщательному
проведен анализ сопроводительной медицинской документации.
Комплекс реабилитационных мероприятий включал стандартный набор
воздействий
(климатотерапия,
кинезотерапия,
диетотерапия,
физиотерапевтические методики и иглорефлексотерапия в зависимости от
наличия
показаний,
психолого–педагогические
мероприятия)
дополнительным включением в программу реабилитации
с
фитопрепарата
2
Тонзилгон®Н. Длительность реабилитации составила 21 день. Тонзилгон®Н
дети получали по 1 драже 6 раз в сутки в течение 2 недель. Исследование
секреторного иммунитета выполняли в динамике: на 2 день поступления в
центр и за 1 день перед выпиской. На каждого ребенка заполняли специальную
анкету.
Анализ секреторного иммунитета проводиди по исследованию слюны.
Слюну собирали утром натощак после предварительного трехкратного
полоскания полости рта дисциллированной водой комнатной температуры.
Образцы слюны замораживали и хранили при –20° С в морозильной камере.
Методом иммуноферментного анализа (ИФА) [1] в исследуемым образцах
слюны с помощью ИФА тест-систем, изготовленных ЗАО «Вектор-Бест»
(Россия, Новосибирск), определяли содержание 5 показателей местного
гуморального
иммунитета:
секреторного
иммуноглобулина
А
(IgAs),
иммуноглобулинов (Ig) классов А, М, G, интерлейкина-4 (IL-4). Все
исследования проводились согласно инструкции, прилагаемой производителем
к
каждому
набору
реагентов
для
ИФА
определения
концентрации
вышеназванных 5 компонентов гуморального иммунитета.
Иммунологические исследования проведены в ЦНИЛ БелМАПО с
детекцией результатов ИФА с помощью плашечного восьмиканального
анализатора – АИФ-340/М («Витязь», РБ), прошедшего метрологическую
поверку и ПК. Применяли плашечный шейкер-инкубатор ELMI (Латвия) при
различных
режимах
встряхивания
и
термостатитрования,
а
также
автоматическое отмывающее устройство МВ-350 (РБ) и центрифугу ОПН-3.
Готовили
рабочие
растворы
для
дезобработки
применяемой
посуды,
наконечников, дозаторов, приборов, опытных образцов. Для разведения
концентратов использовали деионизированную воду. Перед проведением ИФА
образцы слюны размораживали, перемешивали, центрифугировали при 1500
об./мин. Для исследования отбирали надосадочную часть слюны, которую
многоступенчато
разводили,
согласно
рекомендациям
прилагаемой
инструкции. Содержимое набора для определения отдельного показателя
3
выдерживали при комнатной температуре 30 мин. Проводили подготовку
аппаратуры к исследованию, одноканальных и многоканальных дозаторов
различных объемов, планшетов, ванночек, одноразовых наконечников. Затем
распаковывали набор и готовили рабочие разведения отмывающих буферов,
растворы для разведения исследуемых проб, восстановления калибровочных и
контрольных образцов, конъюгата. Предварительно проводили разметку
планшета
на
бумаге.
Вскрывали
фольгу
и
извлекали
планшет
с
иммобилизованными на поверхности ячеек антителами для определения
отдельного показателя. Заливали в ванночку разводящий буфер и вносили
нужный объем в лунки для стандартов и контроля, образцов слюны. После
этого отбирали нужный объем калибраторов, контрольных и разведенных
образцов и вносили в ячейки планшета.
Заклеивали адгезивной пленкой
поверхность планшета, который затем помещали в шейкер-инкубатор при 37°С
без
встряхивания
или
при
25°С,
устанавливая
режим
встряхивания.
Продолжительность инкубации следовала из инструкции к набору. Заливали
отмывающий буфер в бутыль вошера МВ-350 и устанавливали режим отмывки
(объем, отмачивание, количество стрипов и циклов). После завершения
инкубации планшет извлекали, пленку снимали и помещали в дезраствор.
Далее планшет устанавливали в отмывающее устройство и проводили отмывку
5 раз. Перед завершением инкубации готовили рабочий раствор конъюгата
согласно инструкции, который заливали в ванночку, хорошо перемешивая.
Планшет после отмывки извлекали и, поместив его на рабочий стол, вносили
конъюгат. Вновь закрывали адгезивной пленкой поверхность планшета и
ставили в шейкер-инкубатор. После завершения этапа конъюгации проводили
отмывку планшета очень тщательно, до 8 циклов. Непосредственно перед
внесением в ячейки планшета готовили субстратную смесь, состоящую из
концентрата
тетраметилбензидина
и
субстратного
буферного
раствора,
тщательно перемешивали в ванночке. Быстро вносили многоканальной
пипеткой нужные объемы субстрата в ячейки планшета. Ставили в темное
место для развития окраски при комнатной температуре на время, согласно
4
инструкции. Реакцию останавливали добавлением стоп реагента (раствором
серной кислотой) в такой же последовательности, как и субстрат. Время между
остановкой реакции и измерением составляло не более 5 минут. Планшет
помещали в держатель 8-канального анализатора, который предварительно, в
период 1-ой инкубации, включали для прогрева, тестирования фильтров и
установки режима готовности. Параллельно включали компьютер, проводили
подготовку программы измерения, разметку планшета и условий измерения,
сохраняли. Затем проводили измерение оптической плотности исследуемых
проб, размещенных в планшете в двухволновом режиме (при основном фильтре
450 нм и референс-фильтре 620 нм). Строили калибровочный график, по
которому рассчитывали концентрацию (мг/мл или пг/мл) исследуемых проб.
Конечную концентрацию исследуемого показателя рассчитывали с учетом
дополнительного
разведения
образцов
слюны.
Полученные
результаты
регистрировались в базе данных 5 показателей местного гуморального
иммунитета, значения которых сопоставлялись с клиническими данными с
проведением комплексного анализа.
Анализ соответствия вида распределения признаков закону нормального
распределения выполнен с использованием критерия Шапиро-Уилка; при
p<0,05 распределение признака считали отличающимся от нормального. В
зависимости
от
соответствия/несоответствия
вида
распределения
анализируемых признаков закону нормального распределения в расчётах
использованы параметрические (t-критерий Стьюдента, метод Пирсона) или
непараметрические (U–критерий Манна-Уитни, ранговая корреляция по
Спирмену) методы. Меры центральной тенденции и рассеяния данных
рассчитаны при помощи методов описательной статистики; количественные
параметры в зависимости от вида распределения представлены в виде среднего
значения (М) и среднего квадратического отклонения (s), либо в виде медианы
(Me) и интерквартильного размаха (LQ/UQ). Критическим уровнем значимости
при проверке статистических гипотез принят p<0,05.
5
Результаты и обсуждение
В таблице 2 приведены результаты тестирования величин изучаемых
показателей секреторного иммунитета
у детей на соответствие вида
распределения признаков закону нормального распределения, что использовано
для дальнейшего анализа.
Таблица 2. Критерий Шапиро–Уилка для величин исходных и заключительных
показателей секреторного иммунитета (n=19)
Показатель
W-тест
Р
Ig As - исх.
0,872960
0,016226
Ig As – закл.
0,898992
0,055183
Ig A – исх.
0,926996
0,171901
Ig A – закл.
0,955822
0,573412
Ig M – исх.
0,632278
0,000010
Ig M – закл.
0,454979
0,000000
Ig G – исх.
0,480337
0,000000
IgG – закл.
0,37694
0,000000
IL-4 – исх.
0,711118
0,000076
IL-4 – закл.
0,732330
0,000139
Результаты динамического наблюдения показали, что в процессе
реабилитации имела место положительная динамика показателей секреторного
иммунитета. Достоверно увеличивалась концентрация в слюне Ig А (табл. 3).
6
Таблица 3. Динамика показателей секреторного иммунитета у часто и
длительно болеющих детей в процессе оздоровления на фоне включения
Тонзилгона®H [ M (s), Me (LQ/UQ)] (n = 18)
Изучаемые параметры
Показатель
исходные
заключительные
Р
Ig As (мг/л)
185,26 (140,18/142,73)
202,78 (141,28/346,90)
0,1450
Ig A (мкг/мл)
54,50 (39,42/78,50)
78,00 (59,44/102,61)
0,031250
Ig M (мкг/мл)
5,59 (6,41)
7,55 (14,34)
0,91330
Ig G (мкг/мл)
44,07 (80,13)
54,74 (127,74)
0,71125
IL-4 (пг/мл)
22,93 (30,11)
12,92 (16,41)
0,4724
Динамическое наблюдение показало, что все дети хорошо переносили
Тонзилгон®Н. Не отмечено аллергических и прочих нежалательных реакций
на этот фитопрепарат.
Выводы
1. В процессе проведения комплексной реабилитации часто и длительно
болеющих
детей
школьного
возраста
в
условиях
детского
реабилитационно–оздоровительного центра удается достичь улучшения
показателей секреторного иммунитета.
2. В
динамике
в
ходе
комплексной
реабилитации
с
включением
Тонзилгона®Н наблюдается повышением концентрации в слюне Ig А,
одного из важных защитных факторов секреторного иммунитета
слизистых.
3. Часто и длительно болеющие дети школьного возраста хорошо переносят
Тонзилгон®Н в драже.
4. Тонзилгон®Н может быть рекомендован для включения в программы
реабилитации часто и длительно болеющих детей школьного возраста.
7
ЛИТЕРАТУРА
1. Василевский И.В. Реабилитация часто болеющих детей: учебнометодическое пособие). –– Минск: БелМАПО, 2006. –– 44 с.
2. Иммунологические методы / Под ред. Т. Фримеля. –– М.: Медицина. ––
1987. –– С.162– 170.
3. Лекарственные препараты в России: справочник видаль. –– М.:
АстраФармСервис, 2009. –– С. Б–1277– Б–1278.
4. Профилактика и лечение острых респираторных заболеваний у детей:
пособие для врачей. –– М.: Издательский дом «Династия». –– 43 с.
5. Реабилитация детей и подростков с заболеваниями органов дыхания,
пищеварения, почек, сердечно-сосудистой системы и аллергическими
болезнями в условиях поликлиники: учебно– методическое пособие/ Под
общей редакцией В.Ф.Жерносека. –– Минск: БелМАПО, 2007.- 199 с.
6. Современные подходы к лечению и реабилитации часто и длительно
болеющих
детей:
медицинская
технология.
––
М.:
Агенство
медицинского маркетинга, 2006. –– 46 с.
Жерносек В.Ф. –– доктор мед. наук, профессор, заведующий кафедрой
педиатрии ГУО БелМАПО (220116, Минск–116, а/я 136. Тел. раб.: 2655988,
2655969; тел. моб.: +375296289664).
Василевский
И.В.
––
доктор
мед
наук,
профессор
кафедры
поликлинической педиатрии ГУО БелМАПО.
Рубан А.П.—канд. мед. наук, ассистент кафедры поликлинической
педиатрии ГУО БелМАПО.
Попова О.В. –– канд мед. наук, доцент кафедры поликлинической
педиатрии ГУО БелМАПО.
Юшко В.Д. –– канд. мед. наук, доцент кафедры поликлинической
педиатрии ГУО БелМАПО.
8
Русакович В.А. –– канд. мед. наук, ведущий научный сотрудник ЦНИЛ
ГУО БелМАПО.
Данилович Л.К. –– клинический ординатор кафедры поликлинической
педиатрии ГУО БелМАПО.
Кострица С.А. –– зам. главного врача ДРОЦ «Ждановичи».
Воскресова М.Л. –– врач педиатр ДРОЦ «Ждановичи».
Заяц Т.П –– врач педиатр ДРОЦ «Ждановичи».
Гирко И.Н. –– врач педиатр ДРОЦ «Ждановичи».
9