2. клиническое значение

BIOHIT
Diagnostics
ООО «Мелон»
г. Санкт-Петербург,
тел. (812) 334-11-64,
факс (812) 334-11-64
Biohit Plc
Экспресс-тест для диагностики
лактазной недостаточности
Набор реагентов для экспресс-диагностики лактазной недостаточности
(интолерантности лактозы), гиполактазии тонкого кишечника по биоптату
Кат. № 602 012
Только для исследований in vitro
Хранить при температуре 2-8С
ИНСТРУКЦИЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ
Лактазная недостаточность
Экспресс-тест
Кат. № 602 012
СОДЕРЖАНИЕ
1. НАЗНАЧЕНИЕ
2. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
3. ПРИНЦИП ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРСС-ТЕСТА
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5. СБОР И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
6. СОСТАВ НАБОРА И ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Страница
6.1. Планшеты
6.2. Раствор субстрата
6.3. Раствор хромогена
6.4. Сигнальный реакционный раствор
6.5. Инструкция пользователя
7. ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛОВ, НЕ
ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ НАБОРА
8. ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
9. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
10. РЕЗУЛЬТАТЫ
11. ОГРАНИЧЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
12.ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
13. ЛИТЕРАТУРА
14. ДАТА ВЫПУСКА
15. ГАРАНТИИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
16. ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА
17. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ НА ЭТИКЕТКАХ
18. КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ПРОЦЕДУРЫ АНАЛИЗА
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Экспресс-тест для определения лактазной недостаточности основан на биохимической
реакции качественного определения активности фермента лактазы непосредственно в
биопсийном образце.
2. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Лактазная недостаточность (интолерантность лактозы, гиполактазия) обуславливает
невозможность употреблять большое количество лактозы, основного сахара молока. Это
является результатом недостаточности фермента лактазы, который синтезируется в
тонком кишечнике. Лактаза расщепляет молочный сахар (лактозу) на моносахариды
(глюкозу и галактозу), которые могут всасываться в кровь.
Активность лактазы начинает снижаться после прекращения грудного вскармливания.
Одна треть всего человечество сохраняет способность переваривать лактозу. Установлено,
что приблизительно 15-20% жителей Западной и Северной Европы и 90% жителей Азии,
Африки, а так же коренных американцев страдают лактазной недостаточностью. Часто
симптомы остаются не диагностированными и лактазная недостаточность не лечится
годами.
После употребления лактозы при лактазной недостаточности могут появляться
следующие гастроинтестинальные симптомы: тошнота, метеоризм, вздутие живота,
спазмы и боль в животе, а так же диарея.
Пациенты, с симптомами лактазной недостаточности, обращающиеся за медицинской
помощью, часто направляются на эндоскопическое исследование. Тем не менее,
недостаточность лактазы не может быть диагностирована, основываясь только на
гастроскопии или микроскопическом исследовании биоптатов. Лактазная недостаточность
может быть диагностирована при биохимическом исследовании гомогенизированного
биоптата или с помощью нагрузочного теста с лактозой или дыхательного водородного
теста. Все эти тесты неудобны для пациентов, их проведение требует много времени и они
дорогостоящи. Недавно для скрининговых исследований был разработан ДНК-тест. Этот
тест основан на том, что рядом с геном лактазы находится область, где у здоровых лиц
аминокислотная последовательность представлена цитозин/тимин или тимин/тимин, в то
время как у людей с недостаточностью лактазы имеется мутация цитозин/цитозин.
Следовательно, этот тест не выявляет мутацию гена лактазы и тем более не дает
представление о функции. До недавнего времени, перечисленные выше исследования
были единственными для диагностики этого расстройства. Тест компании Biohit,
проводимый вместе с эндоскопией, позволяет поставить быстрый диагноз пациентам,
страдающим лактазной недостаточностью.
3. ПРИНЦИП ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
Тест, разработанный компанией Biohit для быстрой диагностики лактазной
недостаточности (интолерантности лактозы), основан на активности фермента лактазы в
биоптате. Биоптат слизистой берется из верхнего отдела тонкого кишечника и сразу
подвергается исследованию. Цветовая реакция, развивающаяся через 20 минут, указывает
на наличие или отсутствие фермента лактазы в биоптате.
В случае нормального содержания лактазы цвет изменяется вследствие расщепления
лактазой биоптата молочного сахара, добавленного к буферу теста. Однако, при
отсутствии или незначительной цветовой реакции можно сделать заключение о том, что у
пациента имеется лактазная недостаточность.
Проведение процедуры основано на следующих реакциях:
1. На первом этапе фермент лактаза биоптата расщепляет лактозу субстрата (раствор
субстрата, флакон 1) до моносахаридов: глюкозы и галактозы.
2. На втором этапе, сигнальная реакция, содержание глюкозы устанавливается с помощью
хромогена (хромогенный раствор, флакон 2) и сигнального реакционного раствора
(флакон 3). В результате образуется окрашенное соединение.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Только для диагностики in vitro.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: обращайтесь с биоптатами как потенциально биоопасными
материалами.
Все образцы должны рассматриваться как потенциально инфицированные. Пожалуйста,
по этому вопросу обращайтесь к публикациям Департамента здоровья и медицинского
обслуживания США (Bethesda, MD., USA) по биобезопасности в микробиологических и
биомедицинских лабораториях, 1999, 4 (CDC/NIH) или на номер (CDC) 88-8395 по
лабораторной безопасности при различных заболеваниях или любой аналогичной местной
или национальной программе. В США только для исследовательских целей.





Прочтите инструкцию перед началом исследования.
Не используйте реагенты из разных наборов.
Не используйте реагенты с просроченной датой.
Обязательно ношение перчаток.
Хромогенный раствор (флакон 2) содержит 30% уксусную кислоту, которая обладает
коррозионным действием и может вызвать раздражение. При попадании на кожу


тщательно промойте водой. В случае попадания в глаза промывайте водой не менее 15
минут и обратись за медицинской помощью.
Пользуйтесь дозаторами, если дозируете не из флакона. Никогда не дозируйте
жидкости ртом.
Реагенты содержащие 0,002% тиомерзал должны уничтожаться согласно местному
или федеральному законадательству.
5. СБОР И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Рекомендуется брать биоптат 5 мм-выми щипцами из слизистой верхнего отдела тонкого
кишечника из любой части стенки постбульбарной части двенадцатиперстной кишки во
время гастроскопии. Не берется биоптат из бульбарной части, т.к. могут быть вторичные
изменения активности лактазы в слизистой, вызванные кислотно-зависимыми
заболеваниями у некоторых пациентов.
Содержание лактазы в биоптате может зависить от
его размера. Определить
рекомендуемый размер биоптата можно визуально, сравнив его с рисунком, где показаны
рекомендованные размеры образцов.
Рекомендуемые размеры биоптатов:
Диметр между: 2 мм
1,5 мм
Если размеры биоптата меньше рекомендуемого, то существует риск получить
ложноотрицательный
результат
(гиполактазия).
Если
биоптат
больше
–
ложноположительный (норма) результат.
Перед выполнением исследования удалите кровь из биоптата, поместив его на
стерильную марлевую салфетку. Рекомендуется проводить тест сразу. В противном
случае образцы должны храниться при температуре -70◦С до проведения исследования.
6. СОСТАВ НАБОРА И ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Набор расчитан на проведение 10 тестов. Храните набор до использования при
температуре 2…8С.
6.1. Планшеты
Состав: 10 планшет в пластиковом пакете. Каждый планшет имеет лунку для образца.
Подготовка: Готовы к использованию.
6.2. Раствор субстрата, флакон 1
Состав: 1 флакон содержит 6 мл ацетатного буфера и лактозы с 0,002% тиомерзала в
качестве консерванта.
Подготовка: Готов к использованию.
Стабильность: До истечения срока годности.
6.3. Раствор хромогена, флакон 2
Состав: 1 флакон содержит 1 мл раствора хромогена в уксусной кислоте с 0,002%
тиомерзала в качестве консерванта.
Подготовка: готов к использованию.
Стабильность: До истечения срока годности. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: уксусная кислота
обладает коррозионным действием и может вызвать раздражение.
6.4. Сигнальный реакционный раствор, флакон 3
Состав: 1 флакон содержит 6 мл фермента с 0,002% тиомерзалом в качестве консерванта.
Подготовка: готов к использованию.
Стабильность: До истечения срока годности.
6.5. Инструкция пользователя
1 шт.
7. ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛОВ, НЕ
ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ НАБОРА




Пинцет
Таймер
Стерильные марлевые салфетки
Перчатки
8. ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
Хранить набор необходимо при температуре 2...8 С. При хранении при этой температуре набор
стабилен до истечения срока годности, указанного на этикетке коробки набора и на этикетках
каждого флакона, входящего в набор. Не замораживать и не подвергать набор действию высокой
температуры, не хранить при температуре выше 8С. Не использованные реагенты и планшеты
хранить при 2…8С.
Не используйте реагенты после истечения срока годности, указанного на этикетке. Не используйте
реагенты из наборов с другими серийными номерами или реагенты из наборов других
производителей.
9. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Вся реакция занимает по времени 20 минут. Тест проводят в 2 этапа: 15 минут - лактазная
реакция, за которой через 5 минут следует сигнальная реакция. Пользуйтесь перчатками.
Прогрейте все реагенты до комнатной температуры (20-25С) не меньше, чем за 15 мин
перед проведением исследования. Перемешайте перед использованием все реагенты
встряхиванием флаконов.
ШАГ I
ЛАКТАЗНАЯ РЕАКЦИЯ
1. Откройте наклейку, закрывающую лунку планшета. Поместите биоптат в лунку. См.
рисунок 1.
2. Внесите 2 капли (80 мкл) раствора субстрата (флакон 1) в лунку. Закройте наклейку.
3. Интенсивно встряхните планшет 5-6 раз.
4. Инкубируйте 15 минут при комнатной температуре (20-25С).
Рисунок 1. Лактазная реакция.
ШАГ II
СИГНАЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ
1. Снова откройте этикетку. Добавьте 1 каплю (10 мкл) раствора хромогена (флакон 2) в
лунку. См. рисунок 2.
2. Сразу добавьте 2 капли (80 мкл) сигнального реакционного раствора (флакон 3).
Закройте наклейку.
3. Интенсивно встряхните планшет 5-6 раз.
4. Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре (20-25С).
Рисунок 2. Сигнальная реакция.
10. РЕЗУЛЬТАТЫ
Содержание лактазы образца может быть оценено по цветовой таблице, приведенной на
этикетке. См. пример:
Тяжелая гиполактазия
Гиполактазия
тяжести
(-)
средней (+)
Норма
(+ +)
У пациента выраженная
лактазная недостаточность
(активность лактазы меньше
2 U1/г протеин).
Гиполактазия
средней
тяжести
(активность
лактазы 2-10 U/г протеин).
Норма.
Лактазная
недостаточность
может
быть исключена (активность
лактазы >10 U/г протеин).
1 U – мкмоль/мин, 37С
11. ОГРАНИЧЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
Результаты, полученные с помощью экспресс-теста для диагностики лактазной
недостаточности, должны учитываться в сопоставлении с клинической картиной.
12.ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Корреляция с другими методами
Результаты исследования биоптатов, полученные с помощью экспресс-теста сравнивались
с результатами, полученные при биохимическом исследовании активности лактазы в
биоптатах, где результат ≥ 10 U/г рассматривался как норма и < 10 U/г как тяжелая или
средней тяжести гиполактазия. Более того, точность определения активности лактазы
была подтверждена исследованием соотношения лактаза/сахараза. Было обследовано 29
человек
Чувствительность = 91%
Специфичность = 94%
PPV = 91%
1
NPV = 94%
13. ЛИТЕРАТУРА
1. Enattah NS, Sahi T, Savilahti E, Terwilliger JD, Peltonen L, Jarvela I. Identification of a
variant associated with adukt-type hypolactasia. Nat Genet 2002 Feb; 30(2): 233-237.
14. ДАТА ВЫПУСКА
Экспресс-тест для определения лактазной недостаточности
Версия 01, Январь 12, 2004.
15. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
Производитель обязуется устранить за свой счет все дефекты, возникшие в результате
скрытого дефекта материалов или некачественного заводского изготовления изделия.
Любые гарантийные обязательства считаются недействительными, если дефекты
являются следствием неправильного обращения, использования, случайного повреждения,
неправильного хранения или использования набора не по назначению или отклонение от
инструкции.
Гарантийный срок на изделие установлен в инструкции и начинается с момента отгрузки
продукта производителем.
Все диагностические наборы с торговой маркой BIOHIT произведены согласно
требованиям ISO 9001 / ISO 13485 и прошли все необходимые испытания для этой
категории продукции.
16. ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА
Экспресс-тест для диагностики лактазной недостаточности
Кат. № 602 012
ООО «Мелон»
г. Санкт-Петербург,
тел. (812) 334-11-64,
факс (8120 334-11-64
Е-mail: [email protected]
По вопросам приобретения обращайтесь: Тел: +7(921) 561-66-32
17. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ НА ЭТИКЕТКАХ
Только для диагностики in vitro
Каталожный номер
Серийный номер
Использовать до
Воспользуйтесь инструкцией
+2…+8°C
Температурные ограничения. Хранить при температуре +2...+8 °C.
96 определений
Не использовать дважды
18. КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ПРОЦЕДУРЫ АНАЛИЗА
Прогрейте все реагенты до комнатной температуры (20С…25С) не меньше, чем за 15
мин по проведения исследования. Перемешайте все реагенты перед использованием
*
Поместите биоптат в лунку
*
В лунку добавьте 2 капли (80 мкл) раствора субстрата (флакон 1) в лунку. Закройте лунку
этикеткой
*
Интенсивно встряхните планшет 5-6 раз.
*
Инкубируйте 15 минут при комнатной температуре (20С…25С)
*
Добавьте 1 каплю (10мкл) хромогенного раствора (флакон 2) в лунку и сразу 2 капли (80
мкл) сигнального реакционного раствора (флакон 3). Закройте лунку этикеткой.
Интенсивно встряхните планшет 5-6 раз.
*
Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре (20С…25С)
*
Оцените содержание лактозы по интенсивности цветовой реакции
в сравнении с таблицей, приведенной в инструкции