иммуноморфологическое исследование клеток лангерганса в

70
Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2008, ïðèëîæåíèå ¹ 1
ÈÌÌÓÍÎÌÎÐÔÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÅ ÊËÅÒÎÊ ËÀÍÃÅÐÃÀÍÑÀ
 ÊÎÆÅ ÁÎËÜÍÛÕ ÀÒÎÏÈ×ÅÑÊÈÌ ÄÅÐÌÀÒÈÒÎÌ
Î.Â.Ïîòàïîâà, Í.Ã.Ëóçãèíà, Â.À.Øêóðóïèé
ÃÓ Íàó÷íûé öåíòð êëèíè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé ìåäèöèíû ÑÎ ÐÀÌÍ,
Íîâîñèáèðñê
 ðåçóëüòàòå èììóíîìîðôîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ êëåòîê Ëàíãåðãàíñà â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè ó áîëüíûõ àòîïè÷åñêèì äåðìàòèòîì â ñòàäèè óìåðåííî-âûðàæåííîãî
îáîñòðåíèÿ è ðåìèññèè âûÿâëåíî óâåëè÷åíèå ÷èñëåííîé ïëîòíîñòè êëåòîê Ëàíãåðãàíñà
ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâîé ó çäîðîâûõ ëþäåé (äîáðîâîëüöåâ), èçìåíåíèå èõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ è íàðóøåíèå òîïîãðàôè÷åñêîãî ðàñïîëîæåíèÿ.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: àòîïè÷åñêèé äåðìàòèò, êîæà, êëåòêè Ëàíãåðãàíñà, èììóíîìîðôîëîãè÷åñêîå
è ìîðôîìåòðè÷åñêîå èññëåäîâàíèÿ
Ðîëü ýïèäåðìàëüíûõ äåíäðèòíûõ êëåòîê — êëåòîê
Ëàíãåðãàíñà (ÊË) — â ïàòîãåíåçå àòîïè÷åñêîãî
äåðìàòèòà (ÀÄ), íåñìîòðÿ íà ìíîãî÷èñëåííûå
èññëåäîâàíèÿ, îñòàåòñÿ íåÿñíîé. Ïðè ÀÄ îñíîâíàÿ ôóíêöèÿ ÊË — çàõâàò àíòèãåíîâ è èõ ïðåäñòàâëåíèå Ò-ëèìôîöèòàì — ìîæåò ïðîèñõîäèòü
íå òîëüêî â Ò-çàâèñèìûõ çîíàõ ëèìôàòè÷åñêèõ
óçëîâ, íî è íåïîñðåäñòâåííî â ýïèäåðìèñå è äåðìå [7]. Íà èõ ïîâåðõíîñòè âûÿâëåíû Fcε-ðåöåïòîðû äëÿ IgE [8]. ÊË èìåþò âûñîêóþ ñåêðåòîðíóþ
àêòèâíîñòü, ïðîäóöèðóÿ ðÿä èíòåðëåéêèíîâ, êîëîíèåñòèìóëèðóþùèå ôàêòîðû, ÈÔÍ-γ [2,4,12],
àäãåçèâíûå ôàêòîðû [3,6,7], òåì ñàìûì îêàçûâàÿ
ðåãóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ðàçâèòèå âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ. Ðàçíîîáðàçèå ôóíêöèé ïðåäïîëàãàåò âîçìîæíîñòü èçìåíåíèÿ ðÿäà ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ÊË â ðàçëè÷íûå ñòàäèè ÀÄ.
Êðîìå òîãî, íå èçó÷åíà âçàèìîñâÿçü òèïè÷íûõ ëîêàëèçàöèé è ïðîÿâëåíèé ïàòîëîãè÷åñêèõ
âûñûïàíèé ïðè ÀÄ ñî ñòðóêòóðíî-ìîðôîëîãè÷åñêèìè îñîáåííîñòÿìè ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ.
Öåëü èññëåäîâàíèÿ — èçó÷èòü èììóíîìîðôîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà è êîëè÷åñòâåííóþ äèíàìèêó ÊË â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè ó áîëüíûõ ÀÄ.
ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
Îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ áûëè áîëüíûå ÀÄ â âîçðàñòå 14-36 ëåò ñ ýðèòåìàòî-ñêâàìîçíîé ôîðìîé
çàáîëåâàíèÿ ñ ëèõåíèôèêàöèÿìè ðàçëè÷íîé ñòåÀäðåñ äëÿ êîððåñïîíäåíöèè: [email protected]. Ëóçãèíà Í.Ã.
ïåíè âûðàæåííîñòè â ñòàäèÿõ óìåðåííî-âûðàæåííîãî îáîñòðåíèÿ (2-ÿ ãðóïïà; n=20) è ðåìèññèè (3-ÿ ãðóïïà; n=14). Êîíòðîëåì ñëóæèëè îáðàçöû êîæè çäîðîâûõ ïàöèåíòîâ (äîáðîâîëüöåâ)
1-é ãðóïïû (n=7).
Âñå ïàöèåíòû ïîëó÷àëè ïîäðîáíóþ èíôîðìàöèþ î ïðîâîäèìîì èññëåäîâàíèè è äàâàëè íà
íåãî èíôîðìèðîâàííîå ñîãëàñèå, êðîìå òîãî, ó
áîëüíûõ â âîçðàñòå äî 18 ëåò ñîãëàñèå íà ïðîâåäåíèå ìèêðîáèîïñèè êîæè ïîëó÷àëè ó ðîäèòåëåé.
Îáðàçöû òêàíè ïîëó÷àëè èç îáëàñòè ëîêòåâûõ ÿìîê — íàèáîëåå òèïè÷íîé ëîêàëèçàöèè
ïàòîëîãè÷åñêèõ ýëåìåíòîâ â êîæå ïðè ÀÄ. Äëÿ
ñâåòîîïòè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ïîëó÷åííûé ìàòåðèàë ïîñëå ôèêñàöèè â 10% âîäíîì ðàñòâîðå
íåéòðàëüíîãî ôîðìàëèíà è îáåçâîæèâàíèè â ñåðèè ñïèðòîâ âîçðàñòàþùåé êîíöåíòðàöèè îðèåíòèðîâàëè íà ïàðàôèíîâûõ áëîêàõ äëÿ ïîëó÷åíèÿ
ñðåçîâ, ïåðïåíäèêóëÿðíûõ ïîâåðõíîñòè êîæè.
Ñðåçû òîëùèíîé 5 ìì îêðàøèâàëè ãåìàòîêñèëèíîì è ýîçèíîì, ïî âàí Ãèçîíó. Äëÿ âèçóàëèçàöèè è èçó÷åíèÿ ÊË âûïîëíÿëè èììóíîãèñòîõèìè÷åñêîå èññëåäîâàíèå íà äåïàðàôèíèçèðîâàííûõ ñåðèéíûõ ñðåçàõ ñ ïîñëåäóþùåé äåìàñêèðîâêîé àíòèãåíîâ â ÑÂ×-ïå÷è.
Îïðåäåëÿëè ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèé ìàðêåð (“Novocastra”) Lag+ (Ñà2+-çàâèñèìûé ëåêòèí
II òèïà, ýêñïðåññèðóåìûé òîëüêî ÊË è ó÷àñòâóþùèé â ôîðìèðîâàíèè öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ ãðàíóë Áèðáåêà [11]). Äëÿ âèçóàëèçàöèè ïðèìåíÿëè
ñèñòåìó äåòåêöèè “Envision” (“Dako”). Âðåìÿ èíêóáàöèè ïðåïàðàòîâ êîæè ñ àíòèòåëîì ñîñòàâèëî
60 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå èíêó-
71
ÝÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜÍÛÅ ÌÅÒÎÄÛ — ÊËÈÍÈÊÅ
áèðîâàíèÿ ñðåçû äîêðàøèâàëè ãåìàòîêñèëèíîì.
Ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà Lag+ ïðîÿâëÿëàñü â
âèäå êîðè÷íåâîãî îêðàøèâàíèÿ öèòîïëàçìû ÊË.
Îïðåäåëÿëè ÷èñëåííóþ ïëîòíîñòü ÊË â 1 ìì2
ñðåçà êîæè [1], êîëè÷åñòâî öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ
îòðîñòêîâ, ïðèõîäÿùèõñÿ íà îäíó êëåòêó (ó÷èòûâàëè òîëüêî êëåòêè îòðîñò÷àòîé ôîðìû). Ðàçìåðû êëåòîê ñîîòâåòñòâîâàëè ñðåäíèì äèàìåòðàì
òåë ÊË (îòðîñò÷àòîé è îêðóãëîé ôîðìû) áåç ó÷åòà
äëèíû èõ îòðîñòêîâ. Îöåíèâàëè òîïîãðàôè÷åñêîå ïîëîæåíèå ÊË ïî îòíîøåíèþ ê áàçàëüíîé
ìåìáðàíå è ñëîÿì ýïèäåðìèñà.
Âåðîÿòíîñòü äîñòîâåðíîñòè ðàçëè÷èé ñðàâíèâàåìûõ ñðåäíèõ âåëè÷èí îöåíèâàëè ïî t êðèòåðèþ Ñòüþäåíòà, äîñòîâåðíûìè ñ÷èòàëè ðàçëè÷èÿ ïðè ð<0.05.
ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß
 ýïèäåðìèñå áîëüíûõ 2-é ãðóïïû âåëè÷èíà ïîêàçàòåëÿ ÷èñëåííîé ïëîòíîñòè ÊË áûëà íà 35.8%
âûøå, ÷åì âåëè÷èíà ñîîòâåòñòâóþùåãî ïàðàìåòðà
ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû (òàáëèöà). Â èññëåäîâàííûõ çîíàõ êîæè çäîðîâûõ ëþäåé ÊË ðàñïîëàãàëèñü îòíîñèòåëüíî ðàâíîìåðíî â áàçàëüíîì è
íèæíèõ ðÿäàõ øèïîâàòîãî ñëîåâ ìíîãîñëîéíîãî
ïëîñêîãî ýïèòåëèÿ ìåæäó ýïèòåëèîöèòàìè, íå
îáðàçóÿ ñ íèìè ìåæêëåòî÷íûõ ñîåäèíåíèé, â òî
âðåìÿ êàê ó áîëüíûõ ÀÄ â ñòàäèþ óìåðåííî
âûðàæåííîãî îáîñòðåíèÿ â ëîêóñàõ ïîðàæåíèÿ
êîæè íàáëþäàëè ñìåùåíèå ÊË â ïîâåðõíîñòíûå
ñëîè øèïîâàòîãî è çåðíèñòîãî ñëîåâ. ÊË ðàñïîëàãàëèñü íåðàâíîìåðíî, ãðóïïàìè îò 3 äî 12 â
ïîëå çðåíèÿ, ÷åðåäóÿñü ñ ó÷àñòêàìè, â êîòîðûõ
äàííûå êëåòêè îòñóòñòâîâàëè.
Ðàçìåðû ÊË â îáðàçöàõ êîæè áîëüíûõ 2-é
ãðóïïû áûëè ìåíüøèìè ïî ñðàâíåíèþ ñ òàêîâûìè ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû íà 18% (òàáëèöà)
è çíà÷èòåëüíî âàðüèðîâàëè â ïðåäåëàõ áèîïòàòà
ó êàæäîãî áîëüíîãî (15.6-20.8 ìêì). Ïðè ýòîì
22.6% êëåòîê îò îáùåãî ÷èñëà ÊË èìåëè íàèìåíüøèé ðàçìåð è îêðóãëóþ ôîðìó áåç õàðàêòåðíûõ
öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ. 77.4% ÊË èìåëè
îòðîñò÷àòóþ ôîðìó, îòðîñòêè áûëè íàïðàâëåíû
ïðåèìóùåñòâåííî âåðòèêàëüíî, ÷àñòü èç íèõ óõîäèëà ãëóáîêî â äåðìó, êîíòàêòèðóÿ ñî ñòåíêîé
ãåìîêàïèëëÿðîâ. Åäèíè÷íûå ëàòåðàëüíî íàïðàâëåííûå îòðîñòêè áûëè óêîðî÷åíû è íå àíàñòîìîçèðîâàëè äðóã ñ äðóãîì.  ýïèäåðìèñå ïàöèåíòîâ
1-é ãðóïïû 93.6% ÊË áûëè îòðîñò÷àòîé ôîðìû
ñ ëàòåðàëüíûì (áîêîâûì) íàïðàâëåíèåì öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ, êîíòàêòèðóþùèõ ìåæäó
ñîáîé. Êîëè÷åñòâî îòðîñòêîâ, ïðèõîäÿùèõñÿ íà
îäíó ÊË, â äàííîé ãðóïïå áûëî áîëüøèì, ÷åì
ó áîëüíûõ 2-é ãðóïïû (òàáëèöà).
Ó áîëüíûõ 3-é ãðóïïû ÷èñëåííàÿ ïëîòíîñòü
ÊË â ýïèäåðìèñå óìåíüøèëàñü ïî ñðàâíåíèþ ñ
âåëè÷èíîé òîãî æå ïîêàçàòåëÿ ó ïàöèåíòîâ 2-é
ãðóïïû íà 24.7%, íî áûëà íà 15% áîëüøåé, ÷åì
â 1-é ãðóïïå (òàáëèöà). Áîëüøàÿ ÷àñòü êëåòîê
(90.5%) èìåëè îòðîñò÷àòóþ ôîðìó è ðàñïîëàãàëèñü
â áàçàëüíîì, íèæíèõ è ñðåäíèõ ðÿäàõ øèïîâàòîãî ñëîåâ. Òàêèå ïàðàìåòðû, êàê ðàçìåðû ÊË è
êîëè÷åñòâî èõ îòðîñòêîâ, ó áîëüíûõ 3-é ãðóïïû
áûëè áëèçêè ê âåëè÷èíàì äàííûõ ïîêàçàòåëåé
ó ïàöèåíòîâ 1-é ãðóïïû (òàáëèöà).
Ó÷èòûâàÿ ïîëó÷åííûå äàííûå, ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî â êîæå áîëüíûõ ÀÄ ïðèñóòñòâóþò
ÊË, íàõîäÿùèåñÿ â äâóõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñîñòîÿíèÿõ, îáóñëîâëèâàþùèõ ðàçëè÷èÿ èõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ.
 ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ çàáîëåâàíèÿ ðåãèñòðèðîâàëè óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÊË, ðàñïîëîæåííûõ
â ïîâåðõíîñòíûõ ñëîÿõ ýïèäåðìèñà, êîòîðûõ îòëè÷àëè ìåíüøèå ðàçìåðû, îêðóãëàÿ ôîðìà, îòñóòñòâèå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ. Âåðîÿòíî, óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ÊË ïðè îáîñòðåíèè ÀÄ ñâÿçàíî ñ ðåêðóòèðîâàíèåì íîâûõ äåíäðèòíûõ êëåòîê
èç êîñòíîìîçãîâûõ ïðåäøåñòâåííèêîâ [3,5,9].
Äëÿ ÊË äðóãîãî ôóíêöèîíàëüíîãî òèïà, èììóíîôåíîòèïèðîâàííûõ â êîæå çäîðîâûõ ïàöèåíòîâ è ó áîëüíûõ ÀÄ (â ñòàäèÿõ îáîñòðåíèÿ è ðåìèññèè), áûëà õàðàêòåðíà îòðîñò÷àòàÿ ôîðìà
êëåòîê è íàëè÷èå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ,
íàïðàâëåíèå êîòîðûõ ìåíÿëîñü â ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ çàáîëåâàíèÿ ñ ëàòåðàëüíîãî íà âåðòèêàëüíîå.
Ðåçóëüòàòû ìîðôîìåòðè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ýïèäåðìàëüíûõ ÊË â êîæå ÷åëîâåêà â îáëàñòè ëîêòåâîé
ÿìêè (M±m)
Ãðóïïà
×èñëåííàÿ ïëîòíîñòü ÊË
â 1 ìì2 êîæè
Ðàçìåðû ÊË, ìêì
Êîëè÷åñòâî
öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ
îòðîñòêîâ íà 1 ÊË
1-ÿ
300.58±3.50
21.20±0.26
2.600±0.045
2-ÿ
468.26±6.20*
17.34±0.20*
2.100±0.062*
3-ÿ
352.63±4.1*+
20.58±0.18*+
2.530±0.035+
Ïðèìå÷àíèå. p<0.05 ïî ñðàâíåíèþ *ñ 1-é ãðóïïîé, +ñî 2-é ãðóïïîé.
72
Áþëëåòåíü ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíû, 2008, ïðèëîæåíèå ¹ 1
Òàêèå êëåòêè áûëè ðàñïîëîæåíû ïðåèìóùåñòâåííî â áàçàëüíîì è øèïîâàòîì ñëîÿõ ýïèäåðìèñà.
Ó÷èòûâàÿ, ÷òî íà âíåøíåé êëåòî÷íîé ìåìáðàíå
öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ ÊË ýêñïðåññèðóþòñÿ ìîëåêóëû II êëàññà ãëàâíîãî êîìïëåêñà
ãèñòîñîâìåñòèìîñòè (HLA-DR) [3,10], òî äàííûé
òèï ÊË, âîçìîæíî, âûïîëíÿåò ôóíêöèþ ïðåäñòàâëåíèÿ àíòèãåíîâ CD4+Ò-ëèìôîöèòàì [3].
Òàêèì îáðàçîì, â ëîêóñàõ ïîðàæåííîé êîæè
áîëüíûõ â ñòàäèþ îáîñòðåíèÿ ÀÄ ïîâûøåíà ÷èñëåííàÿ ïëîòíîñòü ÊË, êëåòêè ñìåùåíû â ïîâåðõíîñòíûå ñëîè ýïèäåðìèñà, ïðè ýòîì ÊË íàõîäÿòñÿ â ðàçíûõ ôóíêöèîíàëüíûõ ñîñòîÿíèÿõ, ÷òî
ñîïðÿæåíî ñ èçìåíåíèåì èììóíîôåíîòèïè÷åñêèõ
ñâîéñòâ, òàêèõ êàê ðàçìåð, ôîðìà, íàëè÷èå öèòîïëàçìàòè÷åñêèõ îòðîñòêîâ è èõ íàïðàâëåíèå.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1. Àâòàíäèëîâ Ã.Ã. Ìåäèöèíñêàÿ ìîðôîìåòðèÿ. Ì., 1990.
2. Êîçëîâà Í.Í., Ïðîêîïåíêî Â.Ä. // Èììóíîäåðìàòîëîãèÿ. 2006. ¹ 4. Ñ. 34-40.
3. Ìàêàðåíêîâà Â.Ï., Êîñò Í.Â., Ùóðèí Ì.Ð. // Èììóíîëîãèÿ. 2002. ¹ 2. Ñ. 68-76.
4. Mÿäåëåö Î.Ä., Ïîë÷àíèíîâà Â.Â., Ôåäîðåíêî È.È. //
Ìîðôîëîãèÿ. 1999. ¹ 6. Ñ. 58-63.
5. Inaba K., Inaba M., Naito M., Steinman R.M. // J. Exp.
Med. 1993. Vol. 178, N 2. P. 479-488.
6. Le Varlet B., Dezutter-Dambuyant C., Staquet M.J. et al.
// J. Invest. Dermatol. 1991. Vol. 96, N 4. P. 518-522.
7. Le Varlet B., Staquet M.J., Dezutter-Dambuyant C. et al.
// J. Leukoc. Biol. 1992. Vol. 51, N 4. P. 415-420.
8. Metzger H., Alcaraz G., Hohman R. åt al. // Annu. Rev.
Immunol. 1986. N 4. P. 419-470.
9. Sallusto F., Cella M., Danielli C., Lanzavecchia A. // J.
Exp. Med. 1995. Vol. 182, N 2. P. 389-400.
10. Trautmann A., Akids M., Kleemann D. et al. // J. Clin.
Invest. 2000. Vol. 106, N 1. P. 25-35.
11. Valladeau J., Ravel O., Dezutter-Dambuyant C. et al. //
Immunity. 2000. Vol. 12, N 1. P. 71-81.
12. Wollf K., Stingl G. // Triangle. 1987. Vol. 26, N 3-4.
P. 139-153.